第 3 章 酵素触媒によるポリアスパラギン酸の合成と生分解性評価 43
3.2 試薬・機器
3.2 試薬・機器
3.2.1 試薬本章で用いた酵素を以下に記した。酵素は、五酸化二リン存在下、常温で6時間減圧乾燥し てから反応に用いた。
酵素 略号 製造会社
Bacillus subutilis由来プロテアーゼ BS 長瀬生化学工業(株) (840,000 U/g)
本章で用いた試薬を以下にまとめた。
Table 3.2: List of reagents.
試薬名 製造会社 等級
Albumin bovine Fraction V, Serva Feinbiochemica GmbH
pH 7.0（BSA） & Co.KG
炭酸ナトリウム 純正化学（株） 純正一級
酒石酸ナトリウム・二水和物 純正化学（株） 試薬特級 硫酸銅（ 供 ・五水和物 純正化学（株） 試薬特級 フォリンシオカルト- 片山化学工業（株）
フェノール試薬
Electrophoresis calibration kits Pharmacia Biotech
（HMW）
L-アスパラギン酸 東京化成工業（株） 東京化成特級
D-アスパラギン酸 東京化成工業（株） 東京化成特級
塩化チオニル 和光純薬工業（株） 試薬特級
エタノール（脱水） 和光純薬工業（株） 試薬特級
ジエチルエーテル 純正化学（株） 鹿一級
酢酸エチル ゴードー溶剤（株） 鹿一級
硫酸ナトリウム（無水） 純正化学（株） 純正一級 アセトニトリル（脱水） 和光純薬工業（株） 試薬特級 トルエン（脱水） 和光純薬工業（株） 試薬特級
試薬名 製造会社 等級 1,4-ジオキサン（脱水） 和光純薬工業（株） 試薬特級 N,N-ジメチルホルムアミド（脱水） 和光純薬工業（株） 試薬特級 テトラヒドロフラン（脱水） 和光純薬工業（株） 試薬特級
クロロホルム ゴードー溶剤（株）
トリフルオロ酢酸 東京化成工業（株） 東京化成特級 N,N-ジメチルホルムアミド 純正化学（株） HPLC用
クロロホルム 純正化学（株） HPLC用
メタノール 純正化学（株） HPLC用
臭化リチウム（無水） 関東化学（株） 鹿1級
水酸化ナトリウム 純正化学（株） 純正一級
二酸化マンガン（粉末） 和光純薬工業（株） 化学用
N / 10過マンガン酸カリウム標準液 和光純薬工業（株） 容量分析用
濃硫酸 純正化学（株） 純正一級
硫酸鉄（ 供縫▲鵐皀縫Ε燹ο賛縅楕 和光純薬工業（株） 試薬特級 三リン酸五ナトリウム 純正化学（株） 試薬特級
重水 Isotec INC.
重クロロホルム Isotec INC.
重ジメチルスルホキシド Isotec INC.
3.2 試薬・機器 51 3.2.2 機器
サイズ排除クロマトグラフィー(SEC) [ポリ（α-L-アスパラギン酸エチル）の分子量測定]
ポンプ : PU-1580 日本分光（株）
検出器 : RI-1530 日本分光（株）
デガッサー : DG-980-50 日本分光（株）
レコーダー : 807-IT 日本分光（株）
カラムオーブン : CO-1565 日本分光（株）
カラム : TSK-Gelα-3000 (7.8 mmø× 300 mm) 東ソー（株）
検量線用標準試料 : Polyethylene glycol standard 創和科学（株）
Mw = 18000, 6250, 1065
Hexaethylene glycol (F.W. 282.3) Aldric Chem. Co., Inc.
Diethylene glycol (F.W. 106.1) Aldric Chem. Co., Inc.
試料溶液 : 0.1% DMF溶液（10 mM LiBrを含む）
溶離液 : 10 mM LiBrを含むDMF
測定条件 : 温度= 40℃ : 流速= 0.8 mL/min : 注入量 = 100µL
サイズ排除クロマトグラフィー(SEC) [ポリ（アスパラギン酸ナトリウム）の分子量測定]
ポンプ : PU-980 日本分光（株）
検出器 : 875-UV 日本分光（株）
レコーダー : 807-IT 日本分光（株）
カラム : Asahipak GS-320 旭化成（株）
検量線用標準試料 : Poly(sodium acrylate) standard 創和科学（株）
Mw = 8,300, Mw = 1,930
Oligo(sodium acrylate) 当研究室にて合成
6量体M = 566.3 4量体 M = 378.2 2量体M = 190.1 試料溶液 : 0.1%中性リン酸緩衝液（pH 6.8）溶液
溶離液 : 中性リン酸緩衝液（pH 6.8）
(0.05 M K2HPO4, 0.05 M KH2PO4, 0.30 M NaCl) 測定条件 : 温度 =室温
: 流速 = 0.5 mL/min : 注入量 = 20µL : UV = 225 nm
その他の機器
FT-NMR : JOEL JNM-LA300 日本電子（株）
JOEL GSX300 日本電子（株）
MALDI-TOF MS : Bruker Proflex Bruker Daltonics Inc.
mass spectrometer
ガラス電極式水素イオン濃度計 : HM-20E 東亜電波工業（株）
オートクレーブ滅菌器 : SD-30N 東亜電波工業（株）
BODテスター : 100F タイテック（株）
クールユニット : CL-150 タイテック（株）
振とう培養機 : 江戸川理化学製作所（株）
分光光度計 : UV-160 （株）島津製作所
テストチューブミキサー : TM-251 岩城硝子（株）
遠心機 : H-103N （株）コクサン
小型微量遠心機 : HF-120 トミー精工(株)