試薬・機器

本章で用いた酵素を以下にまとめた。

Table 4.2: List of enzymes.

Enzyme Trade name Manufacturer

Immobilized lipase

from Candida antarctica Novozym 435 Novozymes Japan Ltd.

Activity = 10,000 PLU/g^a) Immobilized lipase

fromRizomucor miehei Lipozyme RM IM Novozymes Japan Ltd.

Activity = 5-6 BAUN/g ^b) Immobilized lipase

from Burkholderia cepacia Lipase PS-C ”Amano” Amano Enzyme Inc.

Activity = 10,00 PLU/g

a) The ester synthesis activity of Novozym 435 is expressed in propyl laurate units per gram (PLU/g). Novozym 435 is immobilized on a macroporous acrylic resin. The product has a water content of 1-2%.

b) The interesterification activity of Lipozyme RM IM is expressed in batch acidolysis units Novo (BUN/g). Lipozyme RM IM is immobilized on a macroporous anion-exchange resin.

各種酵素は、五酸化二リン存在下、常温で6時間減圧乾燥してから反応に用いた。

失活リパーゼCA（DA-lipase CA）は、50 mLナスフラスコにリパーゼCA 100 mgを取 り、これをオートクレーブで120℃、15分間蒸気により加熱及び加圧した。次いで、凍結乾燥 することによって失活リパーゼCAを調製した。

4.2 試薬・機器 107 本章で用いた試薬を以下にまとめた。

Table 4.3: List of reagents.

試薬名 製造会社 等級

1,3-プロパンジオール 関東化学（株） 鹿特級

クロロギ酸エチル 関東化学（株） 鹿特級

トリエチルアミン 関東化学（株） 鹿特級

テトラヒドロフラン 純正化学（株） 試薬特級

エチレンカーボネート 和光純薬工業（株） 特級 エチレンジアミン（無水） 関東化学（株） 鹿特級 1,3-プロパンジアミン 東京化成工業（株） 試薬特級 1,4-ブタンジアミン Across Organics CO., Inc. 99%

1,5-ペンタンジアミン Across Organics CO., Inc. 98%

1,6-ヘキサンジアミン 関東化学（株） 鹿特級

ジエチルカーボネート 関東化学（株） 鹿特級

アニソール（脱水） Aldrich Chem. Co., Inc. 99.7%

o-キシレン（脱水） 関東化学（株） Organics m-キシレン（脱水） 関東化学（株） Organics p-キシレン（脱水） 関東化学（株） Organics トルエン（脱水） 関東化学（株） Organics N,N-ジメチルホルムアミド（脱水） 関東化学（株） Organics N,N-ジメチルホルムアミド 関東化学（株） 一級 1,3-ジメチル-2-イミダゾリジノン 東京化成工業（株） 特級

メタノール ゴードー溶剤（株） 業務用

クロロホルム 信越化学工業（株） 業務用

酢酸エチル ゴードー溶剤（株） 業務用

ヘキサン ゴードー溶剤（株） 業務用

硫酸ナトリウム 関東化学（株） 鹿一級

モレキュラーシーブス4A 1/16 関東化学（株）

五酸化二リン 関東化学（株） 特級

海砂 関東化学（株）

シリカゲル60N (球状、中性) 関東化学（株）

試薬名 製造会社 等級 重クロロホルム Isotec Inc.

重ジメチルスルホキシド Isotec Inc.

Peptide calibration standard Bruker Daltonics Inc.

    (1000-4000 Da)

2-(4-hydroxyphenylazo)-benzoic acid Aldrich Chem. Co., Inc.

α-cyano-4-hydroxy-cinnamic acid Sigma Chem. Co., Inc.

コバルト

臭化ナトリウム 関東化学（株） 特級

トリフルオロ酢酸 東京化成工業（株） 特級

アセトニトリル 純正化学（株） HPLC用

メタノール 純正化学（株） HPLC用

クロロホルム 純正化学（株） HPLC用

アニリン 和光純薬工業（株） 試薬特級

リン酸二水素カリウム 和光純薬工業（株） 試薬特級 リン酸水素二カリウム 和光純薬工業（株） 試薬特級 リン酸水素二ナトリウム二水和物 Merk Ltd. 特級

塩化アンモニウム 純正化学（株） 試薬特級

無水塩化カルシウム 関東化学（株） 特級

硫酸マグネシウム七水和物 純正化学（株） 純正一級 塩化鉄( )六水和物 和光純薬工業（株） 試薬特級

水酸化カリウム 純正化学（株） 純正一級

塩化ナトリウム 関東化学（株） 試薬特級

硫酸鉄( )七水和物 小宗化学薬品（株） 試薬特級

塩酸チアミン 和光純薬工業（株） 試薬特級

硫酸銅( )五水和物 純正化学（株） 試薬特級

普通寒天培地 極東製薬工業（株）

D(+)-グルコース 純正化学（株） 試薬特級

寒天粉末 純正化学（株） 純正一級

4.2 試薬・機器 109 次の試薬は以下に示す方法により精製を行った後、実験に使用した。

1,3-ブタンジオール  

1,3-ブタンジオール25 gに対して炭酸カリウム（無水）をミクロスパーテル1杯分加え、

1日放置して予備乾燥後、濾別し、減圧蒸留 (87℃/4 mmHg)を行った。

ジエチルカーボネート  

ジエチルカーボネート25 gに対して塩化カルシウムをミクロスパーテル1杯分加え、約 2時間放置して予備乾燥後、濾別し、常圧蒸留 (120℃)を行った。

4.2.2 機器

サイズ排除クロマトグラフィー(SEC)

ポンプ : PU-1580 日本分光（株）

検出器 : RI-1530 日本分光（株）

デガッサー : DG-980-50 日本分光（株）

レコーダー : 807-IT 日本分光（株）

カラムオーブン : CO-1565 日本分光（株）

カラム : TSK-Gelα-3000 (7.8 mmø×300 mm) 東ソー（株）

検量線用標準試料 : Special Polystylene Standard ケムコ化学（株）

M_w = 5.00×10⁴ M_w = 1.75×10⁴ M_w = 9.00×10³ M_w = 4.00×10³ M_w = 2.20×10³ M_w = 9.06×10²

試料溶液 : 0.1% DMF溶液

溶離液 : N,N-ジメチルホルムアミド（特級） 関東化学（株）

測定条件 : 温度 = 40℃ : 流速 = 0.6 mL/min : 注入量 = 100µL その他の機器

FT-NMR : JOEL JNM-LA300 日本電子（株）

: Varian NMR300 Varian, Inc.

MALDI-TOF MS : Bruker Ultraflex mass spectrometer Bruker Daltonics Inc.

示差走査熱量計 : DSC-60 （株）島津製作所

: P/N 201-53090 (シールセル) （株）島津製作所

ガラス電極式水素イオン濃度計 : HM-20E 東亜電波工業（株）

オートクレーブ滅菌器 : SD-30N 東亜電波工業（株）

BODセンサーシステム : VELP Scientifica s.r.l.

振とう培養機 : 江戸川理化学製作所（株）

分光光度計 : UV-160 （株）島津製作所

テストチューブミキサー : TM-251 岩城硝子（株）

遠心機 : H-103N （株）コクサン

小型微量遠心機 : HF-120 トミー精工(株)