天然型 9 糖の合成

Benzyl O-(3,4,6-tri-O-acetyl-2-deoxy-2-phthalimido-β-D-glucopyranosyl)-(1→2)-O-(3,4,6-tri-O- acetyl-α-D-mannopyranosyl)-(1→3)-O-[(2,3,4,6-tetra-O-acetyl-α-D-mannopyranosyl)-(1→6)]- O-[(2,3,4-tri-O-acetyl-β-D-xylopyranosyl)-(1→2)]-(4-O-acetyl-β-D-mannopyranosyl)-(1→4)-O- (3,6-di-O-acetyl-2-deoxy-2-phthalimido-β-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O-[(3,4-di-O-acetyl-2-O- benzyl-α-L-fucopyranosyl)-(1→6)]-2-deoxy-3-O-p-methyoxybenzyl-2-phthalimido-β-D- glucopyranoside (59).

アルゴン雰囲気下、MS 4A 200 mgとフラグメントBb 56 23.5 mg(30.4 µmol)、フラグメ ントA 8 30.9 mg(15.2 µmol)をジクロロメタン2 mlに縣濁させ、−78 ˚Cで30分攪拌した。

これに対し、TMSOTf(0.05 Mジクロロメタン溶液)を61 µl(3.05 µmol)加え、−78 ˚C から

−40 ˚C へと昇温させて 4.5 時間攪拌した。TLC(ヘキサン:酢酸エチル = 1:3)でフラグメン トA 8の消失を確認した後、トリエチルアミンを50 µl加えて反応終了とした。混合物を 酢酸エチルで希釈した後にセライト濾過し、濾液を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液と飽和 食塩水で洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで乾燥後、溶媒を減圧下留去し、得られた 残渣をpTLC(トルエン:酢酸エチル = 1:3)で精製して8糖59を22.9 mg(56%)得た。同時に、

未反応のフラグメントBb 56を17.0 mg(回収率 : 72%)得た。

1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.84-6.81(m, 24 H, Ar), 6.22(d, J = 8.3 Hz, 2 H, Ar), 5.81(dd, J = 9.3, 10.8 Hz, 1 H), 5.66(dd, J = 9.3, 10.8 Hz, 1 H), 5.52(d, J = 8.3 Hz, 1 H), 5.29-4.85(m, 15 H), 4.76-4.22(m, 17 H), 4.15-3.62(m, 19 H), 3.55-3.29(m, 8 H), 2.23(s, 3 H, CH3CO), 2.11-1.84(m, 51 H, CH3CO), 1.03(d, J = 6.3 Hz, 3 H, 6-CH3Fuc)

13C NMR (100 MHz, CDCl3): δ 170.5, 170.4, 170.3, 170.2, 169.9, 169.8, 169.7, 169.6, 169.5, 169.4, 169.3, 169.1, 169.0, 168.8, 168.0, 167.1, 158.2, 138.0, 136.8, 134.6, 134.3, 133.1, 131.4, 131.2, 131.1, 130.8, 129.5, 128.3, 127.9, 127.6, 127.3, 127.2, 123.7, 123.4, 122.6, 113.0, 99.5, 98.6, 98.0, 97.4, 97.0, 96.9, 96.8, 96.5, 76.2, 75.6, 74.1, 73.9, 72.6, 72.3, 72.2, 72.1, 71.7, 70.7, 70.1, 70.0, 69.5, 69.3, 68.9, 68.7, 68.5, 67.9, 65.8, 65.6, 65.4, 64.2, 62.3, 62.1, 62.0, 61.9, 55.7, 55.1, 54.7, 54.4, 21.1, 21.0, 20.9, 20.8, 20.7, 20.6, 16.0

ESI-MS : 2734.82033 (C129H145O61N3Na⁺, [M+Na]⁺; calc. 2734.82341)

Benzyl O-(3,4,6-tri-O-acetyl-2-deoxy-2-phthalimido-β-D-glucopyranosyl)-(1→2)-O-(3,4,6-tri-O- acetyl-α-D-mannopyranosyl)-(1→3)-O-[(2,3,4,6-tetra-O-acetyl-α-D-mannopyranosyl)-(1→6)]- O-[(2,3,4-tri-O-acetyl-β-D-xylopyranosyl)-(1→2)]-(4-O-acetyl-β-D-mannopyranosyl)-(1→4)-O- (3,6-di-O-acetyl-2-deoxy-2-phthalimido-β-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O-[(3,4-di-O-acetyl-2-O- benzyl-α-L-fucopyranosyl)-(1→6)]-2-deoxy-2-phthalimido-β-D-glucopyranoside (55).

アルゴン雰囲気下、8 糖 59 13.9 mg(5.12 µmol)をジクロロメタン 1.5 ml に溶解させ、

Mn(OAc)3·2H2O 4.9 mg(18.4 µmol)とDDQ 1.4 mg(6.14 µmol)を順次加え、室温で24時間攪 拌した。MALDI-TOF MASS で8 糖 59 の消失を確認した後、飽和炭酸水素ナトリウム水 溶液、を 1 ml 加えて反応終了とした。反応溶液を酢酸エチルで希釈した後、有機相を分 離し、水と飽和食塩水で洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで乾燥後、溶媒を減圧下留 去し、得られた残渣を pTLC(トルエン:酢酸エチル = 1:3)で精製して 8 糖 55 を 10.0 mg(75%)得た。

1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.84-6.94(m, 22 H, Ar), 5.83-5.78(m, 1 H), 5.66(dd, J = 9.0, 10.7 Hz, 1 H), 5.38(d, J = 8.3 Hz, 1 H), 5.32-5.26(m, 3 H), 5.16-5.06(m, 6 H), 5.02(t, J = 5.4 Hz, 1 H), 4.98-4.92(m, 2 H), 4.87-4.85(m, 2 H), 4.79(d, J = 1.2 Hz, 1 H), 4.73-4.71(m, 2 H), 4.65-4.57(m, 4 H), 4.43-4.21(m, 10 H), 4.14-3.63(m, 17 H), 3.52-3.29(m, 7 H), 2.25(s, 3 H, CH3CO), 2.16(s, 3 H, CH3CO), 2.09-1.84(m, 48 H, CH3CO), 0.98(d, J = 6.3 Hz, 3 H, 6-CH3Fuc)

13C NMR (100 MHz, CDCl3): δ 170.5, 170.4, 170.3, 170.2, 170.0, 169.9, 169.8, 169.6, 169.4, 169.3, 169.1, 169.0, 168.7, 167.7, 138.1, 136.8, 134.6, 134.3, 133.7, 131.6, 131.2, 128.4, 128.0, 127.6, 127.4, 127.3, 127.2, 123.4, 98.7, 98.5, 98.2, 98.0, 97.3, 97.2, 97.0, 96.9, 77.1, 74.2, 73.0, 72.6, 72.3, 72.2, 72.1, 71.4, 70.7, 70.4, 69.9, 69.6, 69.5, 69.3, 69.1, 69.0, 68.8, 68.5, 68.4, 67.9, 67.7, 65.7, 65.5, 64.2, 62.4, 62.3, 62.2, 61.9, 55.9, 54.5, 54.4, 21.1, 21.0, 20.9, 20.8, 20.7, 20.6, 20.5, 16.0

ESI-MS : 2614.76628 (C121H137O60N3Na⁺, [M+Na]⁺; calc. 2614.76589)

Benzyl O-(3,4,6-tri-O-acetyl-2-deoxy-2-phthalimido-β-_D-glucopyranosyl)-(1→2)-O-(3,4,6-tri-O- acetyl-α-D-mannopyranosyl)-(1→3)-O-[(2,3,4,6-tetra-O-acetyl-α-D-mannopyranosyl)-(1→6)]- O-[(2,3,4-tri-O-acetyl-β- 2)]-(4-O-acetyl-β-

(3,6-di-O-acetyl-2-deoxy-2-phthalimido-β-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O-[(3,4-di-O-acetyl-2-O- benzyl-α-L-fucopyranosyl)-(1→6)]-O-[(3,4-di-O-acetyl-2-O-benzyl-α-L-fucopyranosyl)-(1→3)]- 2-deoxy-2-phthalimido-β-D-glucopyranoside (54).

アルゴン雰囲気下、MS 4A 200 mgと8糖55 10.1 mg(3.89 µmol)、フコシルドナー31 4.30 mg(11.7 µmol)、DTBMP 3.60 mg(17.5 µmol)をp-キシレン2 mlに縣濁させ、室温で30分攪 拌した。これに対し、MeOTfを3.3 µl(29.2 µmol)加えた後、反応容器を攪拌しながら液体 窒素に浸し、溶媒を凍結させた。つづいて、反応容器を冷蔵庫内(4 ˚C)に48時間静置した。

MALDI-TOF MASSで反応の進行を確認した後、トリエチルアミン0.1 mlを加えて反応終

了とした。混合物を酢酸エチルで希釈した後にセライト濾過し、濾液を飽和食塩水で洗浄 した。有機相を硫酸マグネシウムで乾燥後、溶媒を減圧下留去し、得られた残渣を

pTLC(トルエン:酢酸エチル = 1:3)で精製して8糖55と9糖54の混合物を得た。この混合

物に対して、MS 4A 200 mgとフコシルドナー31 4.30 mg(11.7 µmol)、DTBMP 3.60 mg(17.5 µmol)を加えてp-キシレンで懸濁させ、室温で30分攪拌した。これに対し、MeOTfを3.3 µl(29.2 µmol)加えた後、上記と同様の方法で凍結反応を行った。48時間冷蔵庫内で静置し

た後、MALDI-TOF MASSで8糖55の消失を確認した。トリエチルアミン0.1 mlを加え

て反応終了とし、混合物を酢酸エチルで希釈した後にセライト濾過して、濾液を飽和食塩 水で洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで乾燥後、溶媒を減圧下留去し、得られた残渣 をゲル濾過(SX-3、トルエン)とpTLC(トルエン:酢酸エチル = 1:3)で精製して9糖54を9.4 mg(83%)得た。

1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.83-6.85(m, 27 H, Ar), 5.76-5.71(m, 1 H), 5.68-5.63(m, 1 H), 5.59(d, J = 8.3 Hz, 1 H), 5.32-4.53(m, 26 H), 4.41-3.25(m, 35 H), 2.22-1.79(m, 60 H, CH3CO), 1.11(d, J = 6.3 Hz, 3 H, 6-CH3Fuc), 1.03(d, J = 6.3 Hz, 3 H, 6-CH3Fuc) 

13C NMR (100 MHz, CDCl3): δ 170.6, 170.5, 170.4, 170.3. 170.2, 169.9, 169.7, 169.6, 169.5, 169.4, 169.3, 169.1, 169.0, 168.8, 167.9, 166.8, 137.9, 137.8, 136.6, 134.4, 133.7, 131.5, 131.3, 131.2, 131.1, 128.3, 128.2, 128.0, 127.8, 127.7, 127.6, 127.4, 127.3, 127.2, 123.6, 123.4, 100.6, 98.8, 98.3, 98.0, 97.4, 96.9, 96.4, 96.3, 95.8, 77.6, 76.4, 74.2, 74.0, 73.8, 73.0, 72.6, 72.2, 72.1, 71.8, 71.7, 70.7, 70.5, 70.2, 70.0, 69.3, 69.1, 69.0, 68.9, 68.8, 68.7, 68.6, 68.3, 65.7, 65.6, 65.4, 64.6, 64.3, 62.6, 62.3,

62.1, 61.9, 60.0, 56.5, 55.1, 54.4, 21.1, 21.0, 20.9, 20.8, 20.7, 20.6, 20.5, 16.0 ESI-MS : 2934.88712 (C138H157O66N3Na⁺, [M+Na]⁺; calc. 2934.89188)

O-(2-Acetamido-2-deoxy-β-D-glucopyranosyl)-(1→2)-O-(α-D-mannopyranosyl)-(1→3)-O-[(α-D- mannopyranosyl)-(1→6)]-O-[(β-D-xylopyranosyl)-(1→2)]-(β-D-mannopyranosyl)-(1→4)-O-(2- acetamido-2-deoxy-β-D-glucopyranosyl)-(1→4)-O-[(α-L-fucopyranosyl)-(1→6)]-O-[(α-L- fucopyranosyl)-(1→3)]-2-acetamido-2-deoxy-β-D-glucopyranoside (7).

9糖54 9.4 mg(3.22 µmol)を1-ブタノールに溶解させ、エチレンジアミン50 µlを加えた 後85 ˚Cで12時間攪拌した。フタロイル基の脱保護をMALDI-TOF MASSで確認した後、

反応溶液を減圧下濃縮して、得られた残渣をピリジン 1 ml に溶解させ、氷浴で冷却しな がら無水酢酸を0.5 ml加え、6時間攪拌した。MALDI-TOF MASSでアセチル化の進行を 確認した後、氷浴で冷却しながらエタノールを 2 ml 加え、反応終了とした。反応混合物 を減圧下留去した後、得られた残渣をアルゴン雰囲気下、メタノール 1.5 ml に溶解させ た。これに対し、ナトリウムメトキシド5 mgを加えて室温で60時間攪拌した。MALDI-

TOF MASS でアセチル基の脱保護を確認した後、Amberlyst-15 を加えて中和した。

Amberlyst-15 を濾別した後、濾液を減圧下留去して得られた残渣を Sep-Pak^®(C18、0%

MeOHaq.〜50% MeOHaq.)で精製した。精製後、MeOH と水の混合溶媒に生成物を溶解さ

せ、20% 水酸化パラジウム 5 mg を加え、水素雰囲気下 12 時間攪拌した。MALDI-TOF MASSでベンジル基の脱保護を確認した後、反応混合物をセライト濾過した。濾液を減圧 下濃縮し、得られた残渣を限外濾過により精製した。濾液を凍結乾燥し、得られた残渣を ゲル濾過(Super Peptide、水、0.5ml/min)で精製して9糖7を4.3 mg(87%)得た。

1H NMR (400 MHz, D2O, Acetone at δ 2.22): δ 5.14(br, 1 H, 1-H^αMan), 5.11(d, J = 3.9 Hz, 1 H, 1- H^α1→3Fuc), 5.06(d, J = 3.4 Hz, 0.6 H, 1-H^αGlc), 4.92(d, J = 3.9 Hz, 1 H, 1-H^α1→6Fuc), 4.91(br, 1 H, 1- H^αMan), 4.85(br, 1 H, 1-H^βMan), 4.71-4.66(m, 1.4 H, 1-H^βGlc×2), 4.51(d, J = 8.5 Hz, 1 H, 1-H^βGlc), 4.45(d, J = 7.6 Hz, 1 H, 1-H^βXyl), 4.25(br, 1 H, 2-H^βMan), 3.26(t, J = 11.0 Hz, 1 H), 2.05-2.02(m, 9 H, CH3CO), 1.27(d, J = 6.6 Hz, 3 H, 6-CH3Fuc), 1.22(d, J = 6.6 Hz, 1.2 H, 6-CH3Fuc), 1.20(d, J = 6.6 Hz,

Fuc

13C NMR (125 MHz, D2O, Acetone at δ 30.89): δ 175.4×2, 175.1, 174.9, 105.9, 101.2, 100.7, 100.3, 100.0, 99.8, 99.7×2, 81.6, 80.1×2, 78.8, 77.8, 77.7, 77.2, 76.5, 75.9, 75.0, 74.3, 74.0, 73.9, 73.4, 73.1, 72.7, 72.5, 71.1, 70.9, 70.6, 70.5, 70.2, 70.1, 69.9×2, 69.2, 68.8, 68.4, 67.9, 67.5, 67.3, 67.2, 66.1×2, 62.4, 61.6, 61.3, 56.0, 55.7, 54.6, 23.9, 23.0, 22.9, 22.7, 20.7, 16.2, 16.0

ESI-MS : 1560.55120 (C59H99O43N3Na⁺, [M+Na]⁺; calc. 1560.55499)

1H NMR

1-H^αMan 1-H^αMan

1-H^βMan

1-H^αGlc

1-H^βGlc 1-H^βXyl 1-H^βGlc×2

1-H^α1→3Fuc

1-H^α1→6Fuc

HOD