フラグメント Aa の合成

Benzyl O-(2-O-acetyl-3-O-tert-butyldiphenylsilyl-4,6-O-cyclohexyliden-β-D-mannopyranosyl)- (1→4)-3,6-di-O-benzyl-2-deoxy-2-phthalimido-β-D-glucopyranoside (68).

アルゴン雰囲気下、MS 4A 6 gとDDQ 851 mg(3.75 mmol)をジクロロメタン24 mlに懸 濁させ、反応容器を氷浴で冷却しながら攪拌し、マンノシルドナー13 2.34 g(3.6 mmol)と グルコサミン誘導体14 1.74 g(3.0 mmol)のジクロロメタン溶液36 mlを加えた。氷浴中で 30分間攪拌した後に室温に昇温し、さらに3 時間攪拌した。TLC(ヘキサン:酢酸エチル =

2:1)でマンノシルドナー13 が概ね消失したことを確認した後、アスコルビン酸緩衝溶液を

120 ml 加え、5 分間室温で攪拌した(溶液が黄色に変化)。続いて、反応混合物をセライト

濾過し、濾液を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液と飽和食塩水で洗浄した。有機相を硫酸マ グネシウムで乾燥後、溶媒を減圧下留去し、得られた残渣(混合アセタール 15)に対して MS 4A 10 gとDTBMP 2.46 g(12.0 mmol)を加えて、1,2-ジクロロエタン420 mlに懸濁させ た。氷浴中で30分攪拌した後、MeOTf 1.2 ml(10.5 mmol)を加えて氷浴中でさらに30分攪 拌した。続いて、45 ˚C まで昇温し、24 時間攪拌した。TLC(トルエン:酢酸エチル = 9:1) で混合アセタール15の消失を確認した後、トリエチルアミンを5 ml加えて反応終了とし、

反応混合物を空冷後、炭酸水素ナトリウムと氷を加えて、室温で 15 分攪拌した。攪拌後、

ジクロロメタンで希釈した後、セライト濾過し、濾液を水と飽和食塩水で洗浄した。有機 相を硫酸マグネシウムで乾燥後、溶媒を減圧下留去し、得られた残渣をシリカゲルカラム クロマトグラフィー(トルエン:酢酸エチル = 25:1〜18:1)で精製して、2 糖 16 を粗生成物 として得た。この2糖をピリジン10 mlに溶解させ、氷浴で冷却しながら無水酢酸を5 ml

とDMAP 37 mg(0.3 mmol)を加え、室温で12時間攪拌した。TLC(トルエン:酢酸エチル =

9:1)で2糖16の消失を確認した後、氷浴で冷却しながらエタノールを10 ml加え、反応終 了とした。反応混合物を減圧下留去した後、残渣を酢酸エチルで溶解させ、飽和塩化アン モニウム水溶液と飽和食塩水で洗浄した。有機相を硫酸マグネシウムで乾燥後、溶媒を減 圧下留去し、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(トルエン:酢酸エチル

= 25:1〜18:1)で精製して2糖68を2.12 g(68%、3段階)得た。

1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.73-6.81(m, 29 H, Ar), 5.01-4.99(m, 1 H, 1-H^Glc), 4.94(d, J = 3.4

Hz, 1 H, 2-H^Man), 4.73(d, J = 12.2 Hz, 1 H, PhCHH), 4.72(d, J = 12.2 Hz, 1 H, PhCHH), 4.58(d, J = 12.0 Hz, 1 H, PhCHH), 4.42(d, J = 12.2 Hz, 1 H, PhCHH), 4.38(s, 1 H, 1-H^Man), 4.29(d, J = 12.2 Hz, 1 H, PhCHH), 4.23(d, J = 12.0 Hz, 1 H, PhCHH), 4.14-4.07(m, 2 H, 2,3-H^Glc), 3.98-3.86(m, 1 H, 4- H^Glc), 3.89(t, J = 9.6 Hz, 1 H, 4-H^Man), 3.69-3.6o(m, 3 H, 3,6a-H^Man, 6a-H^Glc), 3.52-3.44(m, 2 H, 6b- H^Man, 6b-H^Glc), 3.40-3.38(br, 1 H, 5-H^Glc), 2.81-2.75(m, 1 H, 5-H^Man), 2.13(s, 3 H, CH3CO), 1.96- 1.33(m, 10 H, cyclohexyl), 1.04(s, 9 H, C(CH3)3) 

13C NMR (100 MHz, CDCl3): δ 169.6, 167.5, 138.5, 137.8, 137.0, 136.2, 133.7, 133.4, 133.3, 131.5, 129.8, 129.4, 128.3, 128.0, 127.8, 127.7, 127.6, 127.5, 127.4, 127.1, 126.9, 123.0, 99.7, 99.1, 97.2, 78.8, 76.7, 74.4, 73.3, 72.1, 71.6, 70.7, 70.1, 68.1, 67.7, 61.1, 55.6, 37.8, 27.7, 26.8, 25.6, 22.6, 22.4, 21.2, 19.3 

[α] = −3.74 (c 1.0, CHCl3) 

ESI-MS : 1124.46041 (C65H71O13NSiNa⁺, [M+Na]⁺; calc. 1124.45924)

Benzyl O-(2-O-acetyl-4,6-O-cyclohexyliden-β-D-mannopyranosyl)-(1→4)-3,6-di-O-benzyl-2- deoxy-2-phthalimido-β-D-glucopyranoside (69).

3糖19を2糖68に置き換えて、フラグメントA-1 11と同様の方法で合成した。2糖68 2.05 g(1.86 mmol)から2糖69を1.43 g(89%)得た。

精製 : シリカゲルカラムクロマトグラフィー(トルエン:酢酸エチル = 7:3〜3:2)

1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.63-6.80(m, 19 H, Ar), 5.21(d, J = 3.4 Hz, 1 H, 2-H^Man), 5.08- 5.02(m, 1 H, 1-H^Glc), 4.78-4.74(m, 3 H, PhCH2), 4.64(s, 1 H, 1-H^Man), 4.49-4.44(m, 2 H, PhCH2), 4.34(d, J = 12.2 Hz, 1 H, PhCHH), 4.20-4.14(m, 2 H, 2,3-H^Glc), 4.09-4.05(m, 1 H, 4-H^Glc), 3.81(dd, J = 3.1, 11.1 Hz, 1 H, 6a-H^Glc), 3.74-3.67(m, 3 H, 4,6a-H^Man, 6b-H^Glc), 3.51-3.46(m, 3 H, 3,6b-H^Man, 5-H^Glc), 3.00-2.94(m, 1 H, 5-H^Man), 2.14(s, 3 H, CH3CO), 2.09(d, J = 3.7 Hz, 1 H, 3-OH^Man), 1.98- 1.36(m, 10 H, cyclohexyl) 

13C NMR (100 MHz, CDCl3): δ 170.3, 167.4, 138.4, 137.6, 136.9, 133.4, 131.4, 128.4, 127.9, 127.8, 127.7, 127.5, 127.4, 126.9, 123.0, 99.9, 99.3, 97.2, 79.3, 77.2, 76.8, 74.5, 74.4, 73.5, 71.2,

[α] = −3.82 (c 1.0, CHCl3) 

ESI-MS : 886.33992 (C49H53O13NNa⁺, [M+Na]⁺; calc. 886.34146)

Benzyl O-(3,4,6-tri-O-benzyl-2-deoxy-2-phthalimido-β-D-glucopyranosyl)-(1→2)-O-(3,4,6-tri- O-benzyl-α-D-mannopyranosyl)-(1→3)-O-(2-O-acetyl-4,6-O-cyclohexyliden-β-D-

mannopyranosyl)-(1→4)-3,6-di-O-benzyl-2-deoxy-2-phthalimido-β-D-glucopyranoside (70).

フラグメントA-1 11を2糖69に置き換えて、5糖24と同様の方法で合成した。2糖69 1.12 g(1.30 mmol)から4糖70を1.91 g(79%)得た。

精製 : シリカゲルカラムクロマトグラフィー(ヘキサン:酢酸エチル = 4:1〜2:1 thenトルエ ン:酢酸エチル = 9:1〜8:1)

1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.62-6.81(m, 53 H, Ar), 5.23(d, J = 7.6 Hz, 1 H, 1-H^Glc2), 5.04(d, J

= 3.4 Hz, 1 H, 2-H^Man1), 4.99(d, J = 7.8 Hz, 1 H, 1-H^Glc1), 4.84-4.68(m, 6 H, 1-H^Man2, PhCH2), 4.65- 4.31(m, 11 H, 2,3-H^Glc2, PhCH2), 4.25(d, J = 12.2 Hz, 1 H, PhCHH), 4.19(s, 1 H, 1-H^Man1), 4.14- 3.98(m, 6 H, 2-H^Man2, 2,3-H^Glc1, PhCH2), 3.92(t, J = 8.9 Hz, 1 H, 4-H^Glc1), 3.76-3.72(m, 3 H, 4,6a,6b-H^Glc2), 3.70-3.58(m. 4 H, 6a-H^Man1, 3,5-H^Man2, 5-H^Glc2), 3.56-3.39(m, 5 H, 4,6b-H^Man1, 4- H^Man2, 6a,6b-H^Glc1), 3.35-3.27(m, 3 H, 3-H^Man1, 6a-H^Man2, 5-H^Glc1), 2.72(dd, J = 6.6, 11.0 Hz, 1 H, 6b-H^Man2), 2.64-2.58(m, 1 H, 5-H^Man1), 1.86(s, 3 H, CH3CO), 1.75-1.23(m, 10 H, cyclohexyl) 

13C NMR (100 MHz, CDCl3): δ 169.3, 167.4, 138.7, 138.4, 138.3, 137.9, 137.8, 137.7, 137.6, 136.9, 133.3, 131.6, 131.4, 128.7, 128.6, 128.3, 128.2, 128.1, 128.0, 127.9, 127.8, 127.7, 127.6, 127.5, 127.4, 127.3, 127.1, 127.0, 126.9, 123.0, 99.5, 98.7, 97.7, 97.2, 96.0, 79.6, 79.4, 78.2, 77.2, 76.6, 75.3, 75.0, 74.8, 74.3, 74.0, 73.6, 73.2, 72.5, 72.2, 71.6, 70.8, 70.7, 70.2, 70.1, 69.4, 67.8, 67.2, 61.2, 55.8, 55.6, 53.5, 38.0, 31.0, 28.1, 25.7, 23.3, 22.8, 20.9 

[α] = −11.7 (c 1.0, CHCl3)

Anal. Calcd for C111H112N2O24 : C, 71.75; H, 6.08; N, 1.51. Found : C, 71.78; H, 6.07; N, 1.51 

Benzyl O-(3,4,6-tri-O-benzyl-2-deoxy-2-phthalimido-β-D-glucopyranosyl)-(1→2)-O-(3,4,6-tri- O-benzyl-α-D-mannopyranosyl)-(1→3)-O-(2-O-acetyl-β-D-mannopyranosyl)-(1→4)-3,6-di-O- benzyl-2-deoxy-2-phthalimido-β-D-glucopyranoside (71).

5 糖 24 を 4 糖 70 に置き換えて、ジオール 25 と同様の方法で合成した。4 糖 70 1.85 g(996 µmol)からジオール71を1.52 g(86%)得た。

精製 : シリカゲルカラムクロマトグラフィー(トルエン:酢酸エチル = 3:1)

1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.64-6.77(m, 53 H, Ar), 5.27(d, J = 7.8 Hz, 1 H, 1-H^Glc2), 5.12(d, J

= 3.2 Hz, 1 H, 2-H^Man1), 5.04(d, J = 8.3 Hz, 1 H, 1-H^Glc1), 4.96(d, J = 2.7 Hz, 1 H, 1-H^Man2), 4.84- 4.74(m, 4 H, PhCH2), 4.71-4.40(m, 10 H, 1-H^Man1, PhCH2), 4.36-4.25(m, 5 H, 2,3-H^Glc2, PhCH2), 4.17-3.98(m, 6 H, 2-H^Man2, 2,3,4-H^Glc1, PhCH2), 3.77-3.75(br, 1 H, 6a-H^Glc2), 3.71-3.62(m, 8 H, 6a- H^Man1, 3,5-H^Man2, 6a,6b-H^Glc1, 4,5,6b-H^Glc2), 3.55-3.40(m, 4 H, 4,6b-H^Man1, 4-H^Man2, 5-H^Glc1), 3.37- 3.33(m, 2 H, 3-H^Man1, 6a-H^Man2), 3.18(d, J = 4.9 Hz, 1 H, 4-OH^Man1), 2.91-2.87(m, 2 H, 5-H^Man1, 6b- H^Man2), 1.99(br, 1 H, 6-OH^Man1), 1.60(s, 3 H, CH3CO)

13C NMR (100 MHz, CDCl3): δ 169.4, 167.4, 138.2, 138.1, 137.9, 137.7, 137.5, 137.0, 133.5, 131.4, 128.5, 128.3, 128.1, 128.0, 127.9, 127.8, 127.7, 127.6, 127.5, 127.4, 127.3, 127.2, 127.1, 123.1, 98.1, 97.2, 96.8, 96.4, 79.6, 79.3, 78.0, 77.9, 77.2, 76.8, 75.4, 75.2, 75.1, 74.8, 74.7, 74.4, 74.3, 74.0, 73.9, 73.6, 73.4, 72.8, 71.4, 71.2, 70.8, 70.7, 69.9, 69.2, 67.9, 66.4, 62.3, 55.8, 55.6, 21.2

[α] = +4.60 (c 1.0, CHCl3) 

Anal. Calcd for C105H104N2O24 : C, 70.93; H, 5.90; N, 1.58. Found : C, 70.95; H, 5.86; N, 1.45 

Benzyl O-(3,4,6-tri-O-benzyl-2-deoxy-2-phthalimido-β-D-glucopyranosyl)-(1→2)-O-(3,4,6-tri- O-benzyl-α-D-mannopyranosyl)-(1→3)-O-[(2-O-acetyl-3,4,6-tri-O-benzyl-α-D-

mannopyranosyl)-(1→6)]-(2-O-acetyl-β-D-mannopyranosyl)-(1→4)-3,6-di-O-benzyl-2-deoxy-2- phthalimido-β-D-glucopyranoside (72).

ジオール25 をジオール 71 に置き換えて、6 糖 26 と同様の方法で合成した。ジオール 71 1.48 g(832 µmol)から5糖72を1.67 g(89%)得た。

1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.65-6.69(m, 68 H, Ar), 5.30-5.29(m, 1 H, 2-H^Man3), 5.27(d, J = 7.8 Hz, 1 H, 1-H^Glc2), 5.13(d, J = 3.2 Hz, 1 H, 2-H^Man1), 4.98(d, J = 8.3 Hz, 1 H, 1-H^Glc1), 4.95(d, J = 2.0 Hz, 1 H, 1-H^Man2), 4.84(d, J = 1.7 Hz, 1 H,1-H^Man3), 4.82-4.70(m, 7 H, PhCH2), 4.64-4.57(m, 3 H, PhCH2), 4.52-4.25(m, 14 H, 1-H^Man1, 2,3-H^Glc2, PhCH2), 4.22(d, J = 11.0 Hz, 1 H, PhCHH), 4.16(br, 1 H, 2-H^Man2), 4.13-4.03(m, 4 H, 2,3-H^Glc1, PhCH2), 3.93(br, 1 H, 4-H^Glc1), 3.83-3.77(m, 4 H, 5- H^Man2, 3,4,6a-H^Man3), 3.71-3.55(m, 12 H, 4,6a-H^Man1, 3,4,5-H^Man2, 5,6b-H^Man3, 6a,6b-H^Glc1, 4,5,6a- H^Glc2), 3.47(br, 1 H, 6b-H^Glc2), 3.38-3.30(m, 3 H, 5-H^Glc1, 3,6b-H^Man1), 3.17(d, J = 5.1 Hz, 1 H, 4- OH^Man1), 2.94-2.89(m, 2 H, 5-H^Man1, 6b-H^Man2), 1.95(s, 3 H, CH3CO), 1.94(s, 3 H, CH3CO)

13C NMR (100 MHz, CDCl3): δ 169.8, 169.5, 167.2, 138.4, 138.3, 138.2, 138.1, 138.0, 137.8, 137.7, 133.3, 131.5, 128.5, 128.3, 128.2, 128.1, 128.0, 127.9, 127.8, 127.7, 127.5, 127.4, 127.3, 127.2, 127.1, 126.9, 122.9, 98.7, 97.9, 97.8, 97.1, 96.5, 79.6, 79.3, 78.6, 78.3, 77.2, 76.4, 75.2, 75.1, 74.9, 74.7, 74.3, 74.2, 73.5, 73.4, 73.2, 72.7, 71.7, 71.6, 71.1, 70.6, 69.9, 69.1, 68.8, 68.4, 68.1, 67.2, 66.6, 55.8, 55.7, 21.0 

[α] = +14.6 (c 1.0, CHCl3) 

ESI-MS : 2273.89419 (C134H134O30N2Na⁺, [M+Na]⁺; calc. 2273.89191)

Acetyl O-(3,4,6-tri-O-acetyl-2-deoxy-2-phthalimido-β-D-glucopyranosyl)-(1→2)-O-(3,4,6-tri-O- acetyl-α-_D-mannopyranosyl)-(1→3)-O-[(2,3,4,6-tetra-O-acetyl-α-_D-mannopyranosyl)-(1→6)]- (2,4-di-O-acetyl-β-D-mannopyranosyl)-(1→4)-3,6-di-O-acetyl-2-deoxy-2-phthalimido-β-D- glucopyranoside (73).

6糖26を5糖72に置き換えて、6糖28aと同様の方法で合成した。5糖72 226 mg(100 µmol)から5糖73を166 mg(97%)得た。

精製 : pTLC(ヘキサン:酢酸エチル = 1:5)

1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.82-7.70(m, 8 H, Ar), 6.41(d, J = 8.8 Hz, 1 H), 5.87(dd, J = 8.3, 10.7 Hz, 1 H), 5.64(t, J = 9.8 Hz, 1 H), 5.40-5.22(m, 5 H), 5.14-5.09(m, 2 H), 5.02(t, J = 9.5 Hz, 1 H), 4.82(br, 1 H), 4.75(dd, J = 3.4, 10.5 Hz, 1 H), 4.59-4.57(m, 2 H), 4.40-4.28(m, 6 H), 4.17- 4.02(m, 4 H), 3.97-3.90(m, 2 H), 3.86-3.71(m, 6 H), 3.58-3.47(m, 2 H), 2.30(s, 3 H, CH3CO), 2.17-

1.92(m, 39 H, CH3CO), 1.66(s, 3 H, CH3CO)

13C NMR (100 MHz, CDCl3): δ 170.5×2, 170.2, 170.0×2, 169.9, 169.6×2, 169.2, 169.1, 168.2, 167.1, 134.3, 131.1, 123.4, 98.3, 97.5, 97.0, 96.7, 89.7, 74.0, 73.9×2, 73.1, 72.8, 72.1, 69.3, 69.2×3, 69.0, 68.8, 68.6, 67.6, 65.7, 64.9, 62.3, 62.1, 62.0, 61.8, 54.3, 53.4, 21.0, 20.9, 20.8, 20.7×3, 20.6, 20.5, 20.4×2

[α] = +5.48 (c 1.0, CHCl3) 

ESI-MS : 1739.47052 (C76H88O43N2Na⁺, [M+Na]⁺; calc. 1739.46585)

O-(3,4,6-Tri-O-acetyl-2-deoxy-2-phthalimido-β-D-glucopyranosyl)-(1→2)-O-(3,4,6-tri-O-acetyl- α-D-mannopyranosyl)-(1→3)-O-[(2,3,4,6-tetra-O-acetyl-α-D-mannopyranosyl)-(1→6)]-(2,4-di- O-acetyl-β-D-mannopyranosyl)-(1→4)-3,6-di-O-acetyl-2-deoxy-2-phthalimido-β-D-

glucopyranosyl trichloroacetimidate (74).

6糖28aを5糖73に置き換えて、フラグメント A 8と同様の方法で合成と精製を行っ た。5糖73 56.9 mg(33.1 µmol)からフラグメントAa 74を44.6 mg(74%)得た。

1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 8.62(s, 1 H, NH), 7.81-7.66(m, 8 H, Ar), 6.53(d, J = 9.0 Hz, 1 H), 5.89(dd, J = 9.0, 10.7 Hz, 1 H), 5.63(t, J = 9.5 Hz, 1 H), 5.39(t, J =10.0 Hz, 1 H), 5.31(dd, J = 3.2, 10.0 Hz, 1 H), 5.24-5.22(m, 3 H), 5.13-5.07(m, 2 H), 5.00(t, J = 9.5 Hz, 1 H), 4.81(br, 1 H), 4.74(dd, J = 3.2, 10.0 Hz, 1 H), 4.59-4.57(m, 2 H), 4.46-4.26(m, 6 H), 4.18-3.92(m, 6 H), 3.85-3.70(m, 6 H), 3.56-3.47(m, 2 H), 2.29(s, 3 H, CH3CO), 2.15-1.93(m, 36 H, CH3CO), 1.82(s, 3 H, CH3CO)

13C NMR (100 MHz, CDCl3): δ 170.5×2, 170.2, 170.0×2, 169.9, 169.8, 169.7, 169.6, 169.2×2, 160.2, 134.4, 134.3, 131.2, 131.0, 123.6, 123.5, 98.4, 97.5, 97.0, 96.8, 93.6, 90.1, 74.1, 73.8, 73.4, 73.0, 72.1, 70.6, 69.3×2, 69.2×2, 69.1×2, 68.8, 68.6, 67.6, 65.6, 65.0, 62.3, 62.2, 61.9, 61.8, 54.3, 53.4, 21.1, 21.0, 20.9, 20.8×2, 20.7×2, 20.6, 20.5×2, 20.4

[α] = +10.4 (c 1.0, CHCl3) 

ESI-MS : 1840.36317 (C76H86O42N3Cl3Na⁺, [M+Na]⁺; calc. 1840.36491)