博 士 （ 獣 医 学 ） 高 木 道 浩
学位論文題名
Analysis of tumor suppressor gene p53
in chicken lymphoblastoid tumor cell lines and field tumors
（ ニ ワ ト リ リ ン パ 腫 細 胞 株 お よ び 野 外 腫 瘍 に お け る
癌抑制遺伝子p53 の解析）
学 位 論 文 内 容 の 要 旨
人や動物の腫瘍発生の分子メカニズムには不明な点が多い。分子メカニズムとし て、細 胞内に存在 する様々な 癌遺伝子の 異常、あるいはDNA やRNA 腫瘍ウイルス のウイルス蛋白質と細胞内癌関連遺伝子との相互作用等が考えられている。ニワトり における腫瘍ウイルスには、マレック病
(MD)ウイルス、ニワトリ白血病ウイルス、
細網内皮症ウイルスが知られているが、それらの腫瘍化機序についても解明されてい ない。癌抑制遺伝子
p53が発見されて以来、
p53遺伝子の様々な変異や欠損が人や動 物の多くの腫瘍から検出され、p53 遺伝子の異常が腫瘍化に重要な役割を担っている ことが示されてきた。本論文では、ニワトりのMD 、自血病、細網内皮症由来のりン パ腫細胞株を用いてこれらの原因ウイルスによる腫瘍化機序においてp53 遺伝子の 役割を明らかにすることを目的とした。
ニワトリリンパ腫細胞株と野外から分離された腫瘍において、p53 遺伝子に幾っか の点突然変異を見いだしたが、これらの変異は、人を含む哺乳類で腫瘍化に重要とさ れている変異箇所である ホットスポット とは一致していなかった。しかし、これ らの腫瘍細胞株では、様々に欠損したp53 転写物が存在しており、それら転写物の多 くでオープンリーディングフレームにフレームシフトが起こっていることが予想さ れた。これら欠損型のp お転写物は、細胞周期に依存せずに発現し、薬剤処理による アポトーシス誘導時にも発現し続けていた。欠損型p 弼転写物やその蛋白質はRNA の転写、あるいはプロセッシングでのウイルス蛋白質と細胞内蛋白質との相互作用に よ って 引 き起 こ され る 選択 的 なスプライ シングの結 果であるか もしれない 。
腫瘍細胞の腫瘍形成におけるp53 の役割を調べる目的で、ニワトリへの可移植性が 異なる
MD由来腫瘍細 胞株
MSBlのサブク ローンの
pお遺伝 子発現を解 析した。そ の結果、p 弼転写物やその蛋白質発現パターンは細胞間で違いが認められた。これは 欠損型p53 が、これら細胞の移植性や体内転移などの生物性状に関与していることを 示唆している。
欠損型p53 が、アポトーシスあるいは細胞の増殖を調節していることが報告されて
いる。今回の研究で、薬剤処理によルニワトリ腫瘍細胞株にアポトーシスを誘導した
際、欠損型p53 の発現が増加するが、アポトーシスを抑制すると変化しないことが示
された。これは、野生型と欠損型
p53の発現において量的・質的なバランスが、ニワ
ト リ 腫 瘍 細 胞 株 で の
p53の 機 能 を 制 御 し て い る こ と を 示 唆 し て い る 。
これらの成績から、欠損型p53 が野生型p53 の腫瘍化抑制活性を不活化し、それに
より腫瘍ウイルスの腫瘍化に関与していることが示唆された。ニワトりのウイルス腫 瘍の機序解明には欠損型
p53の機能をより明らかにすることが必要であると考えら れた。
―238ー
学 位 論 文 審 査 の要 旨 主 査
副 査 副 査 副 査
教授 教授 助教授 助教授
小沼 安居院 大橋 前田
操 高志 和彦 秋彦
学、位論文題名
Analysis of tumor suppressor gene p53
in chicken lymphoblastoid tumor cell lines and field tumors
（ ニ ワ ト リ リ ン パ 腫 細 胞 株 お よ び 野 外 腫 瘍 に お け る 癌 抑 制 遺 伝 子p53の 解 析 ）
人や動物の腫瘍発生の分子メカニズムと．して、細胞内に存在する様々な癌遺伝子の異 常 、 あ る い はDNAやRNA腫 瘍 ウ イ ル ス の ウ イ ル ス蛋 白 質 と細 胞 内 癌関 連 遺 伝子 と の 相互 作 用 等 が考 えられて いる。 ニワトり における 腫瘍ウ イルスに は、マ レック病(MD) ウイル ス、ニワ トリ白 血病ウイ ルス、細 網内皮 症ウイルスが知られているが、それらの 腫瘍 化 機 序 につ いても解 明され ていない 。癌抑制 遺伝子p53が発 見され て以来、p53遺 伝子の 様々な変 異や欠 損が人や 動物の多 くの腫 瘍から検 出され 、p53遺 伝子の異常が腫 瘍化 に 重 要 な役 割を担っ ている ことが示 されてき た。本 論文では 、ニワ トりのMD、 自 血病、 細網内皮 症由来 のりンパ 腫細胞株 を用い てこれらの原因ウイルスによる腫瘍化機 序においてp53遺伝子の役割を検討した。
ニワト リリンパ 腫細胞 株と野外の腫瘍′において、p53遺伝子に幾っかの点突然変異を 見いだ したが、 これら の変異は 、人を 含む哺乳 類で腫瘍化に重要とされている変異箇所 である ホットスポット， とはー致していなかった。しかし、これらの腫瘍細胞株で、
様々に 欠損したp53転 写物が存 在して おり、そ れら転写 物の多 くはフレ ームシフトして いるこ とが予想 された 。これら 欠損型 のp53転 写物は、 細胞周 期に依存 せずに発現し、
薬剤処 理による アポト ーシス誘 導時に も発現し 続けてい た。
次に腫 瘍細胞の 腫瘍形 成におけ るp53の役割を 調べる 目的で、 ニワトリ への可移植性 が 異 な るMD由 来 腫 瘍 細胞 株MSB1の サ ブク ロ ー ンのp53遺 伝 子 発現 を 解 析し た 。 そ の 結果、p53転写 物やそ の蛋白質 発現パ ターンは 細胞株問で違いが認められた。これはp53 欠損型 が、これ ら細胞 の移植性 や体内 転移など の生物性状に関与していることを示唆し ている 。これま でp53欠損型が 、アポ トーシス あるいは 細胞の 増殖を調 節していること が知ら れている 。今回 の研究で 、ニワ トリ腫瘍 細胞株を薬剤処理により人工的にアポト ーシス を誘導し た際、p53欠損 型の発 現が増加 するが、 アポト ーシスを 抑制すると、変 化は見 られなか った。 これは、p53野 生型と欠 損型の発 現にお いて量的 ・質的なバラン ス が 、 ニ ワ ト リ 腫 瘍 細 胞 株 で のp53機 能 を 制 御 し て い る こ と を 示 唆 し て い る 。
‑ 239―
本研究により、ニワトりのウイルス性腫瘍における新規p53欠損型の存在を明らかに し、p53欠損型が腫瘍ウイルスの腫瘍化に関与していることが明らかとなった。よって 審査員一同は、上記学位論文提出者高木道浩氏が博士（獣医学）の学位を授与される に十分な資格を有するものと認めた。
ー240―
