響 剤 影 性 溶連菌製 抗腫瘍 作 よ す 用 腫瘍細胞増殖抑制 担 牌細胞

金沢 大学 十 全 医 学 会雑 誌 第9 3巻 第5 号 6 73m^{6 7日 り9 84う}

担^{が んマ} ウ^ス牌 細 胞 ^の腫 瘍 細 胞 増 殖 抑 制

作

す

性

剤

響

金沢 大 学 医 学 部 薬理 学 講 座

川 尻 博

久 河 西 高 小 正

野 照

村 保 印

敬

く昭和5 9年⁹ 月³ 日受 付ン

男 茂 也

一

6 73

抗腫瘍 性連 鎖 球 菌 製 剤の O K⁻4 31 と O K⁻4 32 が宿 主 介 在 性の作用 を もつ こと が報 告さ れ て^いる た め，担が んマ ウ ス牌 細胞^の腫 瘍細 胞 増殖 抑制 作用^へ のO K⁻4 3 1 の影 響^に つい て検 討し た^{． エ ー ル}リッヒが ん 細 胞を腹 腔 内^に移 植し た^マ ウスま た は P 3 8 8 白血病 細 胞を皮 下に移 植し たマ ウス に， 移 植2 4時 間後か ら O K⁻4 31 ま た は生理食 塩 水 くP SI を連 続7 日間， 7 回腹 腔 内^に注 射し た． 腫 瘍 細胞 移 植か ら 1 0 日後^に， 脾 細 胞を O K ⁻4 31 で処 置し た担が ん^マウ スくO K⁻431 脾細 胞うま た は 生 理食 塩 水で処 置し た担が ん^マ ウスくP S 脾 細胞うよ り採取し， 10％牛 胎 児血清 加^ハ ン ク ス掛^こ浮遊させた^{． エ ー ル}リッヒが ん細 胞あ る^いは P 3 8 8 白 血病細 胞を O K ^．43 1脾細 胞ま た は P S 脾 細 胞と 1こ1 0 0 の細 胞比^で混合し，3 7⁰C に2時 間イ^ンキ^{エ ペ ー} 卜 し た． イ^ンキ^{エペ ー} ト後が ん細胞を^マ ウス側 腹 部の皮下に移植し た． 脾 細 胞と 混合せずにインキ^ュべ⁻ _{ト し} た が ん細 胞も対照 と して移 植し た． 固型 腫瘍^の大き さ を長径 くLうと短 径 くSう^で測 定し， 腫瘍の増殖をくい Sけ2 で表示 し た． 移 植⁴ 過後のエ ^ー ルリッヒが んの大_{き さ は 次}のと^おり で あった二O K⁻43 1 牌 細胞 処理腫 瘍細 胞， 10．0士0^．7 m 町 P S 脾細 胞 処理腫 瘍細 胞， 1 3−3士0．7 m m こ対照腫 瘍細 胞， 2 0^．0 士0^．8 m m ． 移 植 1 2 日後^の P 38 8白血病細 胞では， そ れ ぞ れ 9−8士0．3 m m ， 1 3^．8士0^．4 m m ， 1 1^．2士0^．3 m m であった． こ の

結果^から，O K⁻4 31脾 細 胞^で処理 し た細 胞の固型腰 瘍^の大き さ は P S 脾 細 胞^で処理 し た細 胞 ま た は対照腫 瘍 細 胞^の固型 腫瘍よ り も小さ かった． し た が って，O K^．4 3 1 は担が んマウス脾 細胞の腰 瘍細 胞 増殖 抑 制作用 を増 強す ること が明ら^{か に}なった．

K ey ^{w o r}ds O K⁻431， m O_uS e Sple en c ell，tum Or g^{r O W}th inhibito ry ^{a c}tivit y

スト^レプ ト リ ジンS 産生 酒 遵 薗Su 株が 腫瘍 細 胞を 傷害^．．破 壊し， その移 植 性を阻 害す ること を Ko sh i^．

m u r a ら^{1 J}は実 証し，O ka m oto ら^{2 1}は同 溶適 菌を^{ペニ シ} リンG 加Be r nheim e r

，

s ba s al m ed iu m 中^で加温処理 す ることで_， スト^レプ ト リ ジ^ンS 産 生が消 失し， 抗腫 瘍効 果が増 強し た P じ B^．45くO K ⁻43い を開発し た0 さ らに， 0 王く^．431 に凍 結 乾 燥な どの処 置^を行な うことに よってO K^．432^{3 1}が製剤 化さ れ る^に至った^． O K⁻431 お よ び O K ⁻4 32 製剤^の抗腫瘍 効果 は， 腰 瘍細 胞 傷 害^の直

接作_用のほか

， 宿主介在 作^{用にも よ ること が Saku r ai}

ら⁴りこよ^って示唆さ れ， や がて_， O K ^．4 3 2 は抗腫瘍 性 製 剤と して臨 床 的^に用^いら れ る^に至^った^{． こ}れ と共に，

宿主介 在作用 あ るいは免疫 賦 活 剤と し ての研 究も盛ん に行な わ jL， マ クロ フ_ァ ^ー ジ^{5 プ6 1}， 各 種リン パ球⁷や

n atu r alk ille r細 胞^の賦 清 化^{8 J}， およ び イ^ンタ ^{ー フ ェロ}

ン誘 起作用^{9−1 2 1}な どについ て多くの成 果が 発表さ れて

る． しかし， 免疫 賦 活の作用機構^{な どに つtlて}は ま だ 不 明の点が多い ことから，本 論文^では，O K⁻43 1 の担が ん^{マ ウ ス}脾 細 胞に対す る 影響^{に つ い}て検 討を行な^っ た．

A b bre viat io n s 二F B S，fetal bo vin e s e ru m ， K E， K l inishe Einheit， P S ，ph_ysiologi^{c al s alin e．}

ti7−^{l 川 尻 一河 野 ． 西い 高トい小 久保}

． 汗榔

材料^およ び方法 工^． 実験 動物

実 験^には，d d Y ^マウ^ス， D B A，

J2 ^マ ウ ス およ び B D Fl

マウス の雌， 6 ^了−8 遇令を 用^いた^．

工^工． がん細胞浮遊液^の調製

エ ^ー ルリッヒが ん細 胞 腹腔 内 移植1 0 日目^の d d Y ^マ ウ^スよ り が ん細 胞を採 取し，

ハン ク ス液くpH 7．2I にて 3 回温L灘 溶く1 0 0 0rp^{m ，} 7 分 間I 後， 10 ％牛 胎 児血清 加^ハ ン ク ス液 げB S ^ハ ン ク ス掛 に浮遊させて， 1 X l O⁶細 胞ノ^mlの細 胞 浮遊 液を作 製し た．

D B A1^{2 マ}ウ^スで継 代 培 養し た P 3 8 8 白 血 病 細 胞^に

っ いても同様^にし て 5 ^X lO⁵細 胞ノ皿1 ^の細 胞 浮 遊 液を 作 製し た．

工I王． O K⁻⁴31 の作成

O K⁻⁴31 は O ka moto らの方 法^{2 Iに}よ^って作 製し た^． す な わ ち， 教 室 保存^の溶 連 菌Su 株 くA T C C 2 1 0 6 0，Su

壱削 を普 通ブ イ^{ヨ ン}1 00 ml くpH 7^．21 ^で3 7⁰C，2 0 時 間 培養し， 菌 体を冷生 理食塩 水で 2 回洗 溜し た弓乳 洗 源 菌 体を 5 ml ^のBe r nheim e r

，

早 b^{a s a}l m ed iu m 亡^{マ ル} ト^{ー ス}67 5 m g^，2 ％硫 酸^マグ ネ^シウ^ム． 7 水塩1 2n −1，

2 0％リン酸⁻カ リ ウ^ムく水 酸 化ナ ト リ ウムでpR 7^．0に

調 勤 6 ml， 蒸 溜水6 6 mり^に浮遊^{す る． こ の}薗 浮 遊 液 5 mlに2 Xl O⁵Uハ^．2 5 ml^{ペ ニ シ}リ^ンG 生 理食 塩 水1

ml を加えて_，3 アC 2 0 分 乳 続^いて 貯 C 3 0 分 間の加 温 処置を行な^っ て O K ^．431 を作 製し た． こ のO K⁻⁴31 の

薗 畳は 5 0 K EI^mlくK Eこ菌畳^の単位^で，1 K E は乾 燥菌 0．1 m g に相 当す るI で あ^った． O K⁻43 1 は低 温 下に保 存し， 1週 間 以 内^に実 験^に用^いた． 実 験 使用時^には 2 K Eノ^mlに稀 釈し て 用^いた．

I V． 牌 細胞 浮 遊液^の調製

エ ^ー ルリッ ヒが ん細 胞 浮遊 破 く7 X lO⁶細 胞ノ^mlうを 40 匹のd d Y ^マ ウス腹 腔 内^に0．51 nl ず^つ移 植し た^の ち， マ ウスを 20 匹ずつ2群に分け た^． 1群^のマ ウス に は， が ん細 胞 移植2 4 時 間後^から O K ⁻4 3 1 を 1 K Eノ頭ノ 日，連 続7 日間腹 腔 内投 与し，これ を O K⁻⁴31 投与 群と し た． 他の1群^には， 同じ く移 植24 時 間後^から 生 理食 塩水を 0．5 mll 頭ノ日， 連 続7 日間 投 与し， これ を P S

投与 群と し た． ま た， P 3 3 8白 血病 細 胞 く^{1 X l}O⁷細胞ノ

mll を 2 0 匹のB D Fl マウ^ス皮 下^に0．5 ml ず^つ移 植し たのち， マウ^スを 1 0 匹ず^つ 2 群^にわ け， 同 様の処 置を 行な^い， そ れ ぞ れ，O K ⁻4 3 1 投与 群^およ び P S 投与 群と し た．が ん細 胞 移植 後¹0 日目^に各 群^のマウスよ り脾 臓 を摘 出し，これ をシ ャ ^ー レ上で^ハサミを 用^いて細切 し，

細 挫 組織を^ハ ン ク ス液に浮 遊さ せ て渡 拝後ガ ^ー ゼでろ 過し た^． ろ液の細 胞 浮遊 液を遠心く1 5 0 0rpm ，10分 間1 し た の ち， 沈漆を 0^．8 3％塩 化アン モ ^ニ ウ^ム液に浮 遊さ

せ室温 下^{で 7} 分間 静 置して赤血球を溶血 させ て除い

た． つ いで， こ の処置 細 胞を^{ハ ン ク ス}液^で3 回 洗催し たのち， F B S ^{ハ ン ク ス}液^に浮 遊させて1 X lO⁸細 胞ノ

n ll， 5 ^x lO⁷細 胞ノ^ml ま た は 3 ^{X l}O⁷細胞ノ王mlの各細 胞 浮遊 液を作 製し た．

V ． 牌 細胞^によるin

．^{viv o 中和試 験}

担が ん^マ ウ ス肺 細 胞^について， エ ^ー ルリッ ヒが ん細 胞あ る^い は P 3 8 8 白血病 細 胞^に対す る増 殖 抑 制 作用 を， W i王I n の方法^用によ り調^べた． す な わ ち， 腫瘍 細胞 と肺 細 胞^の混合比1こ1 くj O にし た^{エ ー ル}リッヒが ん細 胞 浮 遊 液く^{1 X}l O⁶細胞ノ^mり 5 ^ml と脾 細 胞 浮遊 液く1 x

l O⁸細 胞ノmlう 5 ml の混合 液， 細 胞混合比 を^1ニ3 0 にし た^{エ ー ル}リッヒが ん細 胞 浮 遊 液く^{1 X l}O⁶細 胞ハnl1 5 ml と脾紺 胞 浮遊 液く3 ^{X l}O⁷細胞ノ^ml1 51111^の混合 粗 相 胞混合比 を1こ1 0 0 にし た P 3 8 8 白血病 細 胞 浮 遊 液

く5 ^Xl O⁵細 胞ノm り^{1 0} ml と脾 細 胞 浮遊 液 く5 ^X lO⁷細 胞ノ^mり¹0 ml の各混合 液を作 製し，3 7^PC ^に2時 間振 返 し な が ら イ^ンキ^{エペ ー} 卜 し た， ついで遠心洗 備 後， ハ

ンク^ス液^に再 浮遊さ せ， 5 X lO⁶腫 瘍細 胞ノml の浮遊 液 を作 製し， こ の腫 瘍 細胞と肺 細胞の混液0．2 mi を d d Y ま た は B D Flマ ウス の側 腹 部 皮 下^に移 植し， 腰 痛^の増 殖を⁴週 間あ る^いは12 日間観 察し た．腫 瘍の大き さ は 長 径 くL m ml と短 径 くS m ml ^の平 均 値 くくL ^＋Sユノ2

m mユで表示 し た．

成 績

エ ^ー ルリッ ヒが ん細 胞 移 植¹0 日目のマ ウ^スよ り脾 臓 摘 出を行^っ た際， O K⁻⁴3 1投 与 群^{の マ}ウス には腹 水

の貯留は^みと め ら れ な^かっ た が， P S 投 与 群のマ ウス には著 明な腹 水^の貯 留がみと め ら れ た^．

エ ^ー ルリッ ヒが ん細 胞と脾 細 胞を 1^こ3 0 の混合比に 混 じ て処理 し た が ん細 胞を移植して 4 週間そ^の増 殖を 観 察し た成 績は表1 に示 し た如く^であ る^． す な わ ち，

牌 細 胞で 処 理^せず^にが ん細 胞く対照 が ん細 胞1 の みを 接 種し た^マウスで は， 腫瘍 径は 日時の経過 と共^に増 大 し， 特^に3 退 か ら⁴ 過^{に か}け て増 大は著 明^で20^．0^士 0^．8 m m を 示 し た． これに対し，O K^，4 3 1投 与群^マウス

脾細 胞お よ び P S 投 与群^マ ウ^ス脾 細 胞^で処理 し た が ん 細 胞^の増 殖は時 間と共^に直線 的^に増大し た が， 対照 が ん細胞^の増 殖^に比 し て 小 さか った^． ま た，O K^，431投与 群^およ び P S 投与 群^マ ウ^ス脾 細 胞 処理 が ん細 胞 間^{に お}

いて は， 両が ん細 胞^の増 殖 度は ほ と ん ど同じ で， 4過 後^の腫瘍^の大き さ は13^．0士0 ^．7 ^m m と 1 3 ^．5士0．71T 皿 であ り， 両が ん細 胞 間^には差はみと め ら れ なかった．

これ^に対し，が ん細 胞と脾細 胞を1ニ10 0 ^の混 合比^で混 しこ処理 し た が ん細 胞の増 殖は表2 に示 し た如く^であ る． 対照 が ん細月払 O K⁻43 1 投 与 群な ら びにP S 授与 群