ド イ 処 骨肉腫培養細胞 増殖 動 態 薬剤感受性

22 2

金 沢大 学 十 全 医学 会 雑誌 第

9 5

巻 第

1

号

2 2 2

⁻

2 3 5

く

1 98

射

アドリ ア^マイ ^シン処^理骨 肉腫 培養細 胞^の増殖動態^と薬剤 感 受性

金

沢

大 学 医学 部

整 形

外科 学 講 座

く

主 任^二

野

村 進 数

授I

紺 谷 悌

く

昭

和^{6 1}年²

月

⁸

日

受

付

う

本研 究

は

ヒ

ト

骨 肉腫 由 来

の

培 養 株 く

O S T

牽制 ^の

ア ド リ ア

^マ

イ

シ ン 仏

D R

う 投 与後の推移^の観 察

と

，

こ の

A D R

投 与後 生

き

残っ

た

細 胞 群 く

A D R

⁻r e S

i

sta nt c e

11

sl

と

，

も と

の細 胞群

と

の間^の各 種 制 癌 剤^に対

す る

態度

の

比 較^{に つ い}

て

の検 討

を

行^っ

た も

の

で あ る

^．

O S T

株

を 4 8

時 間 静 置培 養 後，

A D R を 4 0

時 間作

用 さ せ

て除 去

し

， 以後

^の

推 移

を D N A

^{ヒ ス}

ト

グ

ラ

ム， 生 細胞 数及

び

細 胞 像に

よ り

観 察

を

^つ

づ け た と

^こ

ろ

，

A D R

投 も 除去 後

6

週 間目^に再

び 正

常^の細胞

回

転に復帰

し て く る

生 細 胞^の存 在

を

観 察

し た

^．こ の

A D R

^．r e s

i

st_{a n}t c e

ll

s

と

，

も と の

細 胞 群^に対

し て

， 骨 肉腫 治療^に頻 用

さ れ て

^い

る A D R

，メ ソ

ト

^レ

キ

^{セ ー}

トくM T X

l，

ビ

ン

ク リ

^ス

チ

ンく

V C R

l，

ア ク ラ

^ル

ビ

シ ン 仏

C R

l， シ ス

プ ラ チ

^ンく

C D D P

l

を

各

々4 0

時 間作

用 さ せ

，

以

後の増殖 動 態

の

推 移

を

同様^に観 察

し た

．

そ の

結 果

A D R

投 与に対

し

て

は A D R

^{−r e S}

i

sta nt c e

ll

s

で は も と

の細 胞 群^に比

べ

て

感 受 性

の

低 下

を

認

め

， 更に

上

記 操 作

を

繰

り

返

し て

^い

く

に連

れ て

感 受 性の低 下

は

著 明

と な

っ

た

． こ の

A D R

^．r e s

i

stan t C e

ll

s

は M T X

，

V C R

，

A C R

に対

し て も

同様^に感

受

性^の低 下

を

認

め た

．

し

か

し C D D P

^に対

し て は A D R

^{rr e s}

i

sta nt c e

ll

s

は む し ろ

高^い感 受性

を 示 し た

．

以 上

に

よ り O S T

株^に

は A D R

^に対

し て

^一 部 遺 伝 的耐 性 細胞

が

含

ま れ て

^お

り

^， 更^{に こ の}細 胞 群

は M T X

，

V C R

に対

し

て交

叉

耐 性

を

，

C D D P

に対

し て は

随 伴 感受 性

を

有

して

^い

る

こ

と が 示

唆

さ れ た

^． 次^い

で

^こ

れ ら

の制 癌 剤^に耐 性

を

得

た

細 胞 群^に対

し て

， 細 胞 内^へ

の

制 癌 剤取

り 込 み を

補 助

す る と さ れ て

^い

る C

8指 抗 剤 く^べ

ラ

^バ

ミ

^{ー ル}l

を A D R と

併

用

投 与

し

，

A D R

単 独投 与 後 群

と 比

較

し た

^．

そ の

結 果 併

用

投 与 群^で細 胞増 殖 抑 制 効 果

が よ り

強

く

現

れ た

． こ

れ ら

の結 果

は

制 癌 剤耐 性

の

克 服

の

^一方法

と し て

， 随伴 感 受 性

を

有

す る

制 癌剤^への変 更

や

， 耐 性 株

の

感 受 性 増 強法

の

有効 性

を 示

唆

す る も の で

あ

る と

考

え ら れ た

．

K e

y

^{w o r}ds D N A h is

t

o

g

^{r a m ， O S}

t

e O S a r C O m a， A D R^{−r e S}is

t

an

t

C e11s_， C r O S S r e sis

t

a n c e， C Olla

t

e r al s e n si

t

ivi

t y

骨 肉腫

は 悪

性 骨腫 瘍

の な

^{か で}

も

，

き わ め て 悪

性 度の

高^い骨 腫 瘍^であ

り

，

そ

の

5

年 生存 率

は

必 ず

し も

満 足

す

べ

き も の で は な く

， 従来

1 0

％ 程度^に

と ど ま

^っ

て

い

た

．

こ

の よ う な

背 景

に お

い

て

， 潜 在 性転 移

も

含

め て

骨 肉腫

に対

す る

有 効

か

つ合

理

的

な

a

d

j^{u v a nt c}

h

e m ot

h

e r ap y

の

必 要性

が

指 摘

さ れ る よ う

^に

な

^っ

て き た

．

金沢 大学 医学部附属病院 整形 外 科 学 教室

で も

1

9 77

年

以

来， 骨 肉腫 患 者

に

対

し

， メ

ソ ト

^レ

キ

^{セ ー}

ト

く

M T X

l ^に

ア ド リ ア

^マ

イ

^{シ ン}く

A D R

l 及

び ビ

ン

ク リ

^ス

チ

ンく

V C R

l

を

併

用 す る

多剤 併

用

療 法

を

適

用 し

， 従 来

^の

成 績に

比

較

し て

良好

な

成 績

を

収

め

つ つ

あ る

^{り2 I．}

し か し

長 期 間^の維 持療 法^の適

用

に

も か

^か

わ ら ず

， 結

果

的^に

は

肺 転 移

な ど

の致 死 的要 因

が

問題 視

さ れ

て い

る

．

そ

の要 因^{の 一 つ}

と し て

考

え ら れ る

の

は

， 肉 腰細 胞

が

制 癌 剤^に対

し

， 耐性

を

獲 得

^{す る}

^こ

^と

^で

^{あ り}

^， 薬 剤 耐性

を も

考慮

し た

治療手 段^の開 発

が

望

ま れ

て い

る

こ

と で あ る

．

一 方，

V

a n

D ill

a

ら

³¹

が

開発

し た Fl

^{o w c}y t^{o m e}te r

く

D N A

瞬 間 自 動測 定 装 掛 ^の

登

場^に

よ り

細 胞周

期

^の解 析

が

迅 速^かつ容易

と な り

， 制 癌 剤の細 胞 周 期^に

及 ぼ す

影 響 ^{につ い て}多

く

^の 検 討

が な さ れ る よ う

に

な

^っ

A b br e via

t

io n s こA C R ， a Cla r ubicin

i

A D R ， adr

i

a m

y

^cin

ニ

C D D P ，Cis⁻dichlo r odia m min e

p

la

t

i⁻

n u

町

D N A，de o x

y

^ribo n u cleic a cid

_ニ

F B S，fe

t

al bo vin e s e r u

町

M T X ， m e

t

ho

t

r ex a

t

^e

i

O S T

s

t

r ain_， O S

t

e O

g

^{e n}ic s a r c o m a T aka s e s

t

r ain

s

P B S，

p

ho s

p

ha

t

e buffe r ed s alin e

三

R P M I

1

6

4 0

，

ア ド リ ア

^マ

イ

シ ン耐 性 骨 肉腫 細胞

の

増殖 動 態

た

^{刷 ．} 当 教 室^{に お い}

て も

現 在

ま で

に骨 肉 腫^に対

す る

効果的

^な

化 学 療法^のあ

り か た を

細 胞

回

転の面

か ら

検 討

し

， 臨 床 的^に

も

応 用

し う る

新

し

^い知 見

が

開 発

さ れ て

^い

る

^． 林^l叫

は S

r⁻

8 9

骨 肉

腫 を 対

象

と す る i

n v

i

v o実 験 系

で，平井

ら

^川

は

^と

卜

骨 肉腫 由来^の培 養 細 胞 株く

O S T

掛

を

対 象

と す る i

^{n v}

i

tr o で

と そ れ ぞ れ の

実験^モ

デ

ル

に お

い

て

従来 骨 肉

腫

に対

す る

化 学 療 法剤

と し て 用

^い

ら れ て

い

る M T X

，

A D R

及

び V C R の

細 胞 周 期^に及

ぼ す

影響

を

精細^に検 討

し

，

ま た

，

三

平

ら

^1釘

は O S T

株^に対

す る

こ

れ ら 3

剤

の

交 代 併

用

療 法^に閲

し

， 薬剤

の

投 与 順 序

が

細 胞周 期^に

ど

の

よ う

^に影 響

す る か を

精査

し

， こ

れ が

治 療 効果

を

左 右

す る

要 因^{の 一 つ で}あ

る

^こ

と を

報 告

し た

．

そ し

^て， こ

れ ら 3

剤の中

で も

，

A D R が

最

も

強^い増殖 抑制 効果

を 示 す

成 績

を え て

^い

る

．

し

か

し

，

A D R

の長 期 間連

用 は

， 薬 剤 耐性 細 胞

の

出現^{に つ}

な が る

^こ

と が

懸 念

さ れ る

^．

今 臥 著 者

は O S T

培 養細 胞 株

を

対 象

と し

，

A D R と

接触

し た

細胞 集 団

の

増 殖 動 態^{に つ い}

^て

^，

^{D N A}

^{ヒ ス}

^ト グ ラ

^ム， 生細 胞 数 及

び

細 胞

を

指標

と し て

検 討

し た

^．

と く

^に従来 行

わ れ

^{て い}

る

比 較 的短 時 間 内

で

の解 析

で な く

，

A D R と

接触 後 数 週 間^に

わ た

っ

て

継 代 細 胞

を

観 察

し

，

さ ら

^に，頻

回

^に

A D R と

接 触

せ し め た

細 胞^の増 殖 動 態及

び

薬 剤感 受 性

な ど を

検討

し た

の で報 告

す る

．

材 料^お

よ び

方

法 I

^． 実験 材料

1

^． 骨 肉腫細 胞 株

1

9 6 4 年

， 当教 室

の

高瀬

ら

^1別に

よ

^っ

て

樹

立 さ れ

， 継托

さ れ

て い

る

^ヒ

ト

骨 肉腫 由来^の培 養細 胞 株 く

O S T

株う

を

使

用 し た

．

O S T

株

は

，

大

多 数

が

紡 錘形の細 胞 集 団^か

ら

成

り

，

一 部^に巨細 胞

が

存 在

す る

単 層増 殖^の培 養細 胞 株

であ

る

^．

ま た そ

の g^{e n e r a}t

i

o n t

i

m e

は

， a utO r⁻ a

di

og^{r a}p

h

_y に

よ る

解 析

で

4

0

時 間

と さ れ て

^い

る

^川．

2

． 細 胞 培 養 い 培養 液

市

販

の合 成 培 地

R P M I

¹

6 4

⁰く^ニ ッ ス

イ

ブ^に

ウ

シ胎 児

血

清 げ

C S

，

5 6

⁰

C

，

3 0

分 間 非勤 化

う を

2

0

％ 濃度^に加

え

た

培地 くp

H 7

^．

0

−

⁷

^．

^{4つ を用}

^い

^た

^．

2

1 培 養瓶

2

5c m ²

di

sp^{o s a}

b l

e t

i

s s u ec u

l

tu r e

fl

a s

k

く^{コ ー ニ ン}

グ

裾

を

使

用 し た

^．

3 う

細 胞 浮遊 液の調 整

培 養

^{O S T}

株 細 胞

は

^いっ

た ん C

aT．^H お

よ び M

g

竹

を

22 3

含

ま な

い

リ

^ン酸 緩 衝塩 類 溶 液 く

^{P B S}

う 仁^ニ ッ ス

イ

1

で

洗 浄後，

0

^．

2 5

％

ト リ プ

シ ン溶 液

で

処

理 し た

^． 器 壁

か ら

剥 離

さ れ た

細 胞

は

，

1 0 0 0

^rp^m ，

5

分間^の遠

心

後，

た だ ち

に前 記 培 養 液 中^に再 浮遊

せ し め た の ち

， 細 胞 数

が 1

．

5

^句

2

^．

O

X

l O

⁵個ノ^m

l と な る よ う

^に調 整

し た

．

4

1 培 養 方法

3 7

⁰

C

下

で

閉鎖 的^に培 養

し

， 以後

1

週 間

ご と

^に同 培 地 中^で継 代 培 養

し た

．

3

． 使 用 制癌 剤 い 種類

代謝 桔 抗 剤

^{は メ ソ ト}

^レ

^キ

^{セ ー}

^ト

く

M T X

ニ

メ ソ ト

^レ

キ

^セー

ト

，

日

本^レダ

リ

^ー，

を

，

ア

^ル

カ

^ロ

イ ド

剤

は ビ

^ン

ク リ

ス

チ

^ン く

V C R

^こ

オ

ンコ

ピ

ン， 塩 野義製 射

を

， 抗 癌性 抗 生物 質

は ア ド リ ア

^マ

イ

^{シ ン} く

A D R

ニ

ア ド リ ア

シ ン， 協 和 発 酵

工 芸

削 及

び ア ク ラ

^ル

ビ

シ ンく

A C R

こ

ア ク ラ

シ

ノ

ン， 山

之

内 製 剰

を

使

用 し た

．

ま た

白 金 錯 体

は

，シ ス

プ ラ チ

ンく

C D D P

^こ

プ リ プ ラ チ

^ン，

ブ リ

^ス

ト

^ル

マ

イ ヤ

^ー

ズ

う

を

倶 用

し た

．

2

1 作

用

濃 度

薬 剤

の

作 用 濃 度投 与^{に つ い}

^{て は}

^， 細胞 増 殖抑 制

が

認

め られ る

各 薬剤

の

最少有効 濃 度

を

低 濃度^，

そ

^の

10

倍 量

を

高濃 度

と す る 2

^{つ の}作

用

群

を

設定

し た

懐

1

うー

4

．

O S T

株細 胞

の A D R

^に

よ る

反復 処

理

実 験 前 記

O S T

株 細 胞浮 遊 液く

1

^．

5

^句

2

⁻

O

^X

l O

⁵個Im

l

1

5

m

l

宛培 養 瓶^に分 粗 密 栓

し

，

3 7

⁰

C

下

4 8

時間静 置 前培 養

し た

後， こ

れ

に

A D R

く南 濃 齢

を

添加

し

，ge n e r at

i

o nt

i

m e

を カ

^{バ ー}

しう る

時 間，

す な わ ち 4 0

時 間^の培 養

を

行っ

た

．

そ の

後 薬剤

を

除去

し

， 細胞

をP B S で

洗 浄

し た

後，同 条件 下

で

培 養

を

継続

し た

．細胞 増 殖^の動 態^につい

て は

，

薬 剤除 去 後

¹

週 間

ご と

に継代 培養

す る と と も

^に

そ

の都 度

D N A

^{ヒ ス}

ト

グ

ラ

^ム

の

作 製，生細 胞 数

^の

測定

を

行^い，

ま た

塗沫 標 本

の

細 胞 像^{につい て}

も

検 討

し た

．

一方， 薬 剤 除 去後

6

週 間目^の細胞 群，

す な わ ち

高 濃 度^に

A D R を

作

用 さ せ た

^に

も

か

か わ ら

ず 生存

し た

細 胞 集 団

を A D R

^{ィ e s}

i

eta nt c e

ll

s

I

く

A D R

⁻

R I

l

^{と し}

^{， こ}

れ を P B S

^で洗 浄 後^{， 1．}

5

^へ

2

^．

O

^X

l O

⁵個ノm

l

濃 度^の細胞 浮 遊 液

と し た

^． こ の浮 遊 液

5

m

l

宛

を

培 養 掛^こ分注

し

，

37

⁰

C

下

4 8

時 間， 静 置 前培 養

し た

後， 再度

A D R

高潰 度

ま た は

低 濃度

を

加

え

て 4

0

時間 培 養

し た

^．

そ

の後， 薬剤

を

洗浄， 除 去

し

，

さ ら

に培 養

を

継続

し た

．

そ し

て

6

週 間後^の増 殖 細胞

を

集

め

， こ

れ を A D R

⁻

R H と し た

．

以

後

こ の操作

を

反 復

し

，

そ れ ぞ れ A D R

⁻

R m

，

A D R

⁻

R I V

及

び A D R

⁻

R V

の

A D R

耐 性 化

O S T

株 細 胞

を

得

た が

，

R。S W ell Pa rk M e m o rial In s

t

i

t

u

t

e m ediu m

1

6

4

0

_i

V C R ， Vin c ris

t

in e

三 2

C，2 c o n

t

e n

t

く^di

p

loid h 3 C，3 c on

t

e n

t

く

^t

^ri

p

loidl

妄 4

C_，

4

c o n

t

e n

t

く

^t

^e

^t

^{r a}

p

loidl

i

Gl，

g

^a

p

l

_i

G₂，

g

^a

p

2

_ニ

M ，mi

_t

o

t

ic s

t

a

g

^e

ニ

S ，

D N A s

y

ⁿtも^e

t

ic s

t

a

g

^e．

2 2 4

こ

れ ら の A D R

耐性 細 胞

の

増 殖 動 態

は

， 前 述

の

事 項^に

つ い

て

経

目

的^に測 定

し た

^．

5

^．

A D R

耐 性 骨 肉

腫

細胞

の

諸 制 癌 剤^に対

す る

感

受

性試 験

前項

の

方 法

で

得

た A D R

耐 性 細 胞 く

A D R

⁻

R V

l の

2 0

％

F C S

加

R P M l 1 6

4

0

培 地 浮 遊 液 く

1

．

5

^句

2

．

O

X l

O

⁵ 個ノm

l

1

5

m

l を

培 養 瓶^に分 注

し

，

4 8

時 間

の

前 培 養

を

行っ

た

^． 次^い

で

こ

れ

に各制 癌 剤

^を

所 定濃 度^に加

え

，

以

下 前述

の

方 法^に準

じ て

細 胞

の

増 殖 動 態

を

調^べ

た

．

6

．

fl

o w cy to metry

増殖 過 程の細 胞 群

は

，常 法^に従っ

て ま

ず薬 剤 除去 後，

P B S

^で細 胞

を

洗浄

し

，

0

^．

2 5

％

ト リ プ

^{シ ン}溶 液^で処

理

後， 剥 離

さ れ た

細 胞 浮 遊液

を

遠

心 し

， 沈 査^に

5 0

％

メ タ ノ

^ー ル 1^．

O

m

l を

加

え て

固 定

し た

．

こ

れ を K

^r

i

s

h

a n

ら

^{1 51}の方法^に従^い，

5

倍 量

の

螢 光 染 色 液 くp^{r o}p

id i

u m

谷

i

o

d id

e

を 0

^．

1

％^{クエ ン}酸^ソー

ダ

液^に

0

^．

0 5

m gl ^m

l

濃度

に溶 解

せ し め た も

のう

を

加

え て O S T

細 胞 核

を

染 色

し

，

Fl

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O

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I

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5 0

印 ^に

よ

っ

て

細 胞 数

1 5

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l O

偶に つ い て の ヒ

ス

ト グ ラ

^ム

を

求

め た

^．

D N A

^{ヒ ス}

ト

グ

ラ

ム

は

横 軸^に

D N A 量

， 縦 軸^に

そ

の

細 胞 数

を 示 し た も

^{の で}

あ り

，

2 C

く

^di

p

l

o

id

り

ま G

l期

ま た は G

。期 く休 止 射

の

細 胞 群

を 示 し

，

4 C

く^tetr ap

l

o

id

l

は G

2期 け ^{ン バ}

ク

，

R N A

合 成 期1

及 び M

期 く分裂 掛

の

細 胞群

を 示 し て お り

，

そ の

中 間

は

便 宜

上 3 C と さ れ

て

^い

る S

期 く

D N A

合 成期フ細 胞 群

を

表 現

し て

^い

る

． 一

般^に増 殖 期^に

あ る

細 胞 集 団^で

^は

一

2 C

に

d

o m

i

n a nt

な ピ

^ー

ク を

，

そ し て 4 C

^に小

さ な ピ

^ー

ク を も

^つ

2

峰 性^パ

タ

^{ー ン}

を 呈 し て

^い

る

く図 い，

7

． 生 細胞 数の測 定

と

細 胞 像

の

観 察

T

a

b l

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l

^，

A

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i

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碧呈憲^e

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．

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．

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．

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．

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M

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0 2 0

^．

2 0

A D R

，

A d

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V C R

，

V i

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，

A

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l

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，

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V

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七

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M I T OSIS

C E L LS

ア ド リ ア

^マ

イ

^{シ ン}耐性 骨 肉腫 細胞^の増 殖 動態

自動

血

球

ア ナ ラ イ ザ

^ーく

C

o u

l

te r

El

^{e ctr o n}

i

c slに

よ

っ て総細胞 数

^を

求

め た

後，

別

^に

0

■1％

ト リ

^{バ ン}

プ

ル ^ー 溶 液^に

^て

生細 胞 数

と 死

細 胞 数^の割合

を

算 定

し

， 総

生

細 胞 数

を

決 定

し た

．

ま た

^こ

れ ら

の細胞 像 所 見^{に つ い}

て は

， 前 記 培養 瓶

を

通

し て

， 倒

立

位 相 差顕 微 鏡^に

よ る

観 察

を

行^い，

O S T

細 胞

の

経 時的 形態 変 化

を

検 索

し た

^．

成

績

1 ．

O S T

株 細 胞^の増殖 動 態

か ら み た A D R

感

受

性

A D R を

高濃 度

で

作

用 さ せ た O S T

株 細 胞 群^お

よ び

非処

理

細 胞 群^の増殖 経 過

を

図

2

に

示 し た

．

1

フ 生 細 胞数

A D R

非 処

理 O S T

細 胞，

す な わ ち

対 照 群

で は

， 培養

48

時間 頃

よ り

指 数関 数 的^に細 胞増 殖

が

観 察

さ れ

， 約

2

週 間後に p

l

ate a u に達

し た

^{． 一} 方，

4 8

時 間 前培 養

し た

o s T

細胞

を

高 濃度

の A D R で

処

理 す る と

， 薬 剤 除去 後

1

週 間

ま で は

徐

々 に

生細 胞 数

の

減 少

が み ら れ

，

そ の

後 急速^に減 少

し

， 約

3

週 間後^に最少 値

を 示 し た

．

3

週 間 以後， 生細 胞 数

は

徐

々

に増 加 傾 向

を 示 し

，

5

週 目

か ら

再

び

指 数 関数 的^に増 殖

が み ら れ

，

6

過 後^に

は

対 照 群

の そ れ と ほ ぼ

同^一 値に達

し た

． 図

3 は

，

O S T

細 胞

を

， 高

の 一 一 0 0 h O J 心 q

E n と

2 2 5

濃 度及

び

低 濃度^で

A D R

に接触^せ

し め た

場合の増 殖 経 過

を し め し た も

^の

で あ る

^．

O S T

細 胞

を

高 濃度^の

A D R で

処

理 し た

細 胞群^で

は

， 薬 剤 除去

2

退か

ら 4

週 目^{に か}

け

^て生 細胞 数^の著

し

^い減少

が

み

ら れ

，

3

週 間目^に最

小

値

を 示 し た が

，

そ

の後

は

， 図

2

に お

け る が ご と く

増殖

は

活発

と な り

，

6

週 間後^に

は ほ ぼ

， 対 照群

の

生細 胞 数

に近似

し

て い

た

．

A D R を

低濃 度^で作

用 せ し め た

場 合に

は

， 薬剤 除 去

5

週 間 後

ま

で

は

対 照 群^{に お}

け る

生細 胞 数

よ り

低 値

を し め し た も

の の， 増 殖 抑 制 効 果

は

微 弱

で あ

っ

た

．

2

う

D N A

ヒ ス

ト グ

ラ ム

A D R

非 処

理

細胞 群^で

は

， 当初

2 C

^に急 峻

な ピ

^ー

ク を も

^つ単 峰 性^パ

タ

^{ー ン}

で

あ^っ

た が

，

4 8

時 間頃

か ら

増 殖期 細 胞^に見

る

定 型 的

な 2

峰 性^パ

タ

^{ー ン}

と な り

，

そ の

後継 代

2

週 間目で再

び 2 C

単 峰性^{の パ}

タ

^ー ン

を示 す

^に

至

っ

た

．

一 九 高 濃 度^に

A D R を

作

用

せ

し め た

細 胞 群^の

D N A

ヒ ス

ト グ ラ

ム で

は

，薬剤 除 去直 後

で は 3 C

の急 増

が み ら れ

，

そ

の後 時 間^の経過

と と も

に

4 C

に

ピ

^ー

ク が

移 行

し た が

，

以

後 徐

々

に減 少

を 示 し

，

2

週 間後^に

は 2 C

単 峰性

の

^パ

タ

^{ー ン}

を 示 し た

．

そ し

て

6

週 間後車^こ

は

定

型

的

な 2

峰 性^パ

タ

^ー ン に復

元 し た

．

3

1 細 胞 像 所見

F i

g^．

2

^．

G

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