群 溶連菌 影響 対す 牌細胞 イ 誘起

金 沢大 学 十全 医 学 会雑 誌 第

9 2

巻 第

3

号

4 2 3

^‑

4 3 3

(

1 98 3

)

_{42 3}

マ ウ ス 牌 細 胞 ^{で の}イ ^ン タ ^{ー フ ェ ロ ン}誘 起 に対 す^る

A 群 溶 連 菌 ^の 影 響

金

沢

大 学 医学 部整

^形

外 科学 教 室

(

主 任^:

野

村 進 教授)

池 田 周 紹

( 昭

和^{5 8}年³

月

^{2 5}

日

受 付)

本 研 究

は

溶 連 菌^{に お}

け る

ス

ト

^レ

プ ト リ ジ

^ン

S

(

S

t

r e

p t

o l

y

s i n S

,

S L S

) 産 生能

と イ

^ン

タ

^ー フ ェ

ロ

ン

(1

I F N

) 誘起 能

と

の関連 性

を

調^べ

る た め

に行

っ た

.

用

^い

た

菌 株

は

抗 腫瘍 性

で S L S

塵 生 能

を

有

す る C 2 0 3 S

株,

B l a c k m o r e

株

と S u

株,

な ら び

^に抗 腫 瘍 能

と S L S

産 生 能

を

欠

_{く C 20 3 U}

株

で

あ

っ た

. こ

れ ら の

溶 連 薗

の

凍 結 乾 燥 標

品 は O K

^‑

4 3 2 の

作 製 過程^に

よ っ て

得

ら れ た

. 即

ち

^ペ

^ニ

^シ

リ

ン

G

含 有

B e r n h e i m e r

^,

s b a s a l

m e di u m

に各 菌

を

浮 遊

さ せ て 3 7

⁰

C 2 0

分 間, つ い

で 4 5

⁰

C 30

分 間静 置

し た

後 凍 結 乾 燥

し た

. こ

れ ら

標 品

の B A L B

/

c マ ウ

ス脾 細 胞^{に お}

け る I F N

誘 起 活性 測 定

は L 9 29

細 胞

と v e s i c u l a r s

t

o m a

t

i

t

i s v i r u s を

用^い

て

行

っ

た

^.

そ の

結 果,

C 2 03 S

,

C 2 0 3 U

,

B l a c k m o r e

薗

の

各棟 晶

^は

何

れ も I F N を S u

菌標 晶

で

あ

る O K

^‑

4 3 2 と

同様^に誘 起

し た

.

ま た

各 誘 起

I F N の

活 性 間^に

^は

善

が み ら れ な か っ た

^. 加 熱 死 薗

を

用^い

る と

,

S u

菌以 外

の

加 熱 死 菌^に

は I F N

誘起 作

用 は な

^か

っ た

^. 最

も

活 性の強^い

I F N は 1

×

1 0

⁷個/

^m l の

牌 細 胞 浮遊 液

^{1 m l と}

,

0

.

5 ま た は 0

^･

1 K E

/

^m l

濃度

の

薗標 品浮 遊 液

0

^･

1 m l の

混 合 液

を 5

%

C O

2培 養 器^に

3 7

⁰

C で 2 4

時 間

か ら 48

時 間培 養

す る

^こ

と

^で得

ら れ た

.

な お 1 K E は

乾 燥 菌

0

･

1 m

g に相 当

す る

^. 誘起

I F N を

p

H 2

下^に

3

時間 置

く と I F N

活性

は

完 全^に失 活

し た が

,

O E

^‑

4 3 2

誘 起

I F N の み は

低 活 性(

1 0 U

/

^m l

)

を

保 持

し て

^い

た

.

しか し

, 誘 起

I F N

活性

は

抗

I F N

^‑α･β

血

清に

よ る

中和 試 験^に

よ り

部 分 的に中和

さ れ

,

6 0

% 以

上 の

活 性

が

残 存

し て

^い

た

^. こ

の

こ

と よ り

菌標

品

^に

よ る

誘 起

I F N は I F N

‑^α, β^お

よ び

γ

よ り

成

る と

考

え ら れ た

.

Ke

y

^{w o}

^r

ds H e m ol

_{y t}

ic s

t

r e

p t

^{o c o c c}i_, O K^‑43 2,In

t

e rfe r o n, A n

t

i in

t

e r^‑

fe r o n

_α

^･β^{s e r u m .}

酵母

リ ボ

核 酸^に

よ る

溶 連 薗溶 血 毒 素^の増 産 効 果 ( 核 酸効果)

^り

^{2 )の}研 究^に端

を

発

し て

行

わ れ た

溶 連 菌^の制

が ん

に関

す る

実 験 的 研 究³

⁾

^か

ら

, 岡 本

ら は

溶 連 菌

S u

株 (

以

下

S u

菌

と

略

記

) ^{に ペ ニ シ}

リ

ン

G を

加

え て

温 度処

理 す る

こ

と

^で

P C

‑

^B

‑

^{4 5}

⁴

⁾

⁵

⁾

⁽

^{O K}

‑

^{4 3 1}

)

を

開発

し

,

そ

^の 凍結乾 燥 標 晶

O K

‑

^{4 3 2}

⁸

⁾ は

制

が ん

剤

と し て

臨床に_, 研 究

に

用

^い

ら れ て

^い

る

.

O K

‑⁴

^{3 2}

^の制

が ん

作

用

機 序^に関

し て は

直 接作

用 と し て

の

腫

瘍 細 胞 傷 害 作

用

⁷

⁾

^の

ほ

か, 宿

主

介 在作

用 と し て イ

^ン

タ

^{ー フェ}

^ロ

^ン8

⁾

^{‑1 0}

⁾

(

I n

t

e r f e r

p

n

,

以

下

I F N と

略 記) 誘 嵐

^{マ ク ロ}

^フ

ァ

^ー

ジ

^{1 1}

⁾

^{1 2}

⁾

,

N a

t

u r a l k ill e r

細 胞^の活 性 化^{1 3}

^〉 な ど が

報 告

さ れ て

い

る

.

一方こ

れ ま で

の実 験^か

ら

溶連 菌に

よ る

制

が ん

効 果

は

, ス

ト ^レ プ ト リ ジ

ン

S

(

S

t

r e

p t

^o l

_y

s i n S

,

以

下

S L S と

略記) 慮 生 能

を

有

す る

清 適薗^の

み

に認

め ら れ

, ス

ト

レ プ ト リ ジ

ン

0

(

S

t

r e

p t

o l

y

s i n O

,

以

下

S L O と

略 記)

を

産 生

し て も S L S を産

生

し な

い溶 連 菌^に

は

認

め ら れ な

^{い こ}

と が

実証^{1 4}

⁾ さ れ

^{て い}

る

. こ

れ ら の

こ

と よ り

本 論 文

で は

各種 溶 連 菌

を 用

い

て I F N

誘 起^に対

す る

影 響^に

つ い

て

検 討

を

行

う と

共に,誘 起

I F N の

性 状^に

^つ

^い

て も

検 討

を

行

^っ た

.

材 料お

よ び

方

法 1

^. 溶連 菌株

金 沢 大 学 医学 部 薬

理

学 教 室 保存^の薗株

を 用

^い

た

^.

1

) 溶 連 菌

C 2 0 3 S

株(

T

_{y p}

e 3

,

S L S と S L O を

産 生,

以

下

C 2 0 3 S

薗

と

略記)

2

) 溶 連 菌

C 2 0 3 U

株(

C 2 0 3 S

菌の変 異株,

S L O

の み

を

産 生,

以

下

C 2 0 3 U

薗

と

略 記)

3

) 溶連 菌

B l a c k m o r e

株 (

T

y p

e l l

,

S L S の

み

を

産 生,

以 下 Bl a c k m o r e

菌

と

略 記)

E ffe c

t

of he m ol

_{y t}

ic s

t

r e

p t

^{o c o c c}i o n ind u c

t

io n of in

t

e rfe r o n in m o u s e s

p

le e n c ells. S hu^･ Sho I keda, De

p

^{a r}

t

m e n

t

of Or

t

h o

p

^edic S u r

g

^{e r}

y

,(^{D ir e c}

^t

^{o r : Pr of. S. N o m u r a})^{, S ch o ol of} M edicin e, K a n a z a w a U niv e r si

_{t y}

.

4 24

4) 溶 遵 薗

S u

株(

T

y p

e 3

,

A T C C 2 10 6 0

,

S L S

^お

よ び S L O を

産 生,

以

下

S ^u

菌

と

略 記)

上 記 各 菌

^の

継 代 培 養^に

は

普 通

ブ イ

^{ヨ ン}培 地 (p

E 7

.

4

)

を

用^い

た

^.

2

^. 溶 連 菌標 晶

の

作製

S u

菌

の O K

^‑

43 2 は O k a m o

t

o ら

⁴

⁾

^〜6

⁾ の

方 法^に

よ

^っ

て

作 製

し た

.

.

す な わ ち

,

S u

菌^の

2 0

時 間 普通

ブ イ

^{ヨ ン}培 養 液

1 m l を 1 0 0 m l

普 通

ブ イ

ヨ ン に接 種

し

,

3 7

⁰

C 2 0

時 間 培 養

し た

後 低温 下

で

遠 心

し

, 沈 殿

し た

生 菌体

を

冷 生

理

食 塩 水 (

以

下

P S S と

略 記) ⁴

0 m l

で

2

回 洗 浄

し た

･

つ い

で

洗 浄 菌 体

を 5 ^m l B e r n h e i m e r

^'

s b a s a l m e

^‑

d i u r n

^{1 5}

)

〔

M a l

t

o s e 6 7 5 m

g^,

2 0

%

K H

2

P O

4(

N a O H で

p

H 7

^に調 製)

6 m l

,

2

%

M

_g

S O

4^･

7 H

2

0 1 2 m l

, 蒸 留 水

6 6 m l

〕^に浮 遊

し た

. 次^{い で}菌浮 遊 液^に

¹

^･

⁶

^×

^{1 0}

⁵

^U

/

m l の

^{ペ ニシ}

リ

^ン

G

( 明 治製 菓) 生

理

食 塩 水

1 m l を

加

え

,

3 7

^｡

C 2 0

分 間に続^い

て 4 5

⁰

C 30

分 間静 置

し

, 同処

理

液^に

さ ら

に

1

%

D L

^‑

メ チ オ ^ニ

^{ン ー ペ}

^ニ

^シ

リ

ン

G

(

1

･

08

^×

1 0

⁵

U

/

m l

) 液

6 m l を

添 加

し て

凍 結乾 燥

を

行

っ て S u

薗 標 品

O K

^‑

4 3 2 を

作 製

し た

.

C 2 0 3 S

嵐

C 20 3 U

薗

お よ び B l ^{a c} k m o r e

菌^{に つ い}

て も

同 様

な

処

理 を

行^い, 得

ら れ た

標 品

を そ れ ぞ れ C 2 0 3 S

横 臥

C 2 0 3 U

標 品

お よ

び

Bl a c k m o r e

標 品

と し た

. こ

れ ら

各 標 品

は

使 用 直 前に p

h o s

p

h a

t

e

‑

^{b u f f e r e d}

s a li n e

(

N a C1 8

^.

O

g^,

K Cl O

^.

2

g,

C a C 1

2

0

^･

1

g,

N a

2

H f

^〉

0

⁴

1

.

1 5

_g,

K H

2

P O

｡

0

.

2

g

を

蒸 留 水^に溶 解

し 1 1 と す る

. p

H 7

^.

3

, 以下

P B S と

略記)^に溶 解

し て 用

^い

た

. 各 菌標 品^の濃度

は K E

( 菌 量

の

単位

で

,

1 K E は

乾 燥 菌

0

･1

m

g

に

相 当)

で

表

示 し た

. 因

み

^に

1 0 0 m l の ブ イ

ヨ ン培 養 液

よ り

得

ら れ る S u

菌 量

は 1 0 0 E E で あ っ た

.

3

^. 加 熱 死 菌

の

作 製

各 菌 液

0

.

5 m l を

普 通

ブ イ

^{ヨ ン}

5 0 m l

に接 種

し て 3 7

⁰

C で 20

時間 培養

し た

後, 低 温 下

で

遠 心(

5

,

0 0 0 ^r

p

^m

^,

15

分間)

し

, 生

じ た

沈殿 生 菌 体

を P S S

^で

2

回 洗浄

し た

後, 洗 浄 菌体^に

3 m l

の

P S S を

加

え て 1 0 0

⁰

C 6 0

分 間加 熱 処

理 を

行

^っ た

^{. こ}

の

加 熱 処

理

浮 遊 液

^の

菌 体 量

は 5 0 K E

/

3 m l で

あ

り

, 実験

に は

使

用

直 前^に

P B S で

希 釈

し

て

用^い

た

.

4 ^. 実験 動 物

B A L B

/

^c お よ び B A L B

/

c

(

n u

/

n u

)

^マ ウ

ス( 雄,

6

週 齢)

を

使 用

し た

.

5

^.

^マ ウ

ス脾 細胞^の作 製

脾 細 胞 浮 遊 液

の

作 製

は S hi ^{r a} h a

t

a ら

^{1 6}

⁾ の

方 法に準

じ て

行

っ た

.

す な わ ち

,

マ ウ

ス

5

匹

を

^一群

と し て

屠 殺

し た

後 無 菌 的

に

摘 出

し た

肺 臓

を プ ラ

^ス

チ

ッ

ク

シ

ャ

^ー レ

中

の ミ ^{ニ マ}

^{ム ･}

^エ

ッ セ ン シ ャ ル ^･

メ デ

ィ

ウ

ム (

日

水製 薬, 以下

M E M と

略記) 液

3 m l

に置

き

,

1 m l

^{ツ ベ ル}

ク リ

^ン注 射 筒 先 端

を

用^い

て

破 砕

し た

後, 新

た

に

7

m l M E M

液

を

加

え て

牌細 胞 浮 遊 液

を

作 製

し た

. こ の細 胞 浮 遊 液

を

金 属^メ

ッ

シ ュで濾過

し

結 合 織

を

除 去

_{し た}

後,遠

心 (9 0 0 ^r

p

^m

^,

5

分間)

し

,沈殿 物

を

1

0 m l

の

M E M

液

を 用

^い

て 2 回

洗 浄

し た

. 洗浄 沈

殿

物

を 2 m l

の

M E M

液

と R e d c e l1 1

_y

s i n

g

b u ff e r

(

N H

.

C l O

･

8 2 9

_g,

K H C O

3

0

^.

1

g,

E D T A O

^.

3 6 7

g,1

N N a O H 2

^‑

5 m l

,蒸 留 水

1 00

m l

, p

H 7

.

4

)

4 m l

の混 合 液^に浮 遊

さ

^{せ て}充

分

捜拝

し

,

約

3

分間 静 置

す る

こ

と

に

よ り

赤血 球

を

溶

血 さ

せ

た

乱

さ ら

に

M E M

液

8 m l を

添 加

し

, 遠

心

(

9 0 0 r

p

m

,

5

分 間) 後

上

浦 液

を

吸 引 除 去

し た

.

生 じ た

沈 漆

を 8 m l

の

M E M

液^で

3 回

洗浄^･遠

心 し た

後,適

量

の

5 %

牛 胎

児

血 清 (

G I B C O

,

以

下

F C S と

略 記) 加

R P M I 1 6 4 0 ( 日

水 製 薬) ^に浮遊

さ

^せ, 生 存 牌細 胞^の数

を 0

^.

4

%

ト リ

バ ン

プ

ル^ー (

M e r k

) ^に

よ る d

y

e

^‑

e X C l u s i o n

t

e s

t に

よ り

判 定

し た

後,

さ ら

に

5

%

F C S

加

R P M I 1 6 4 0

液

を

加

え

て 1

×

1 0

⁷個/

m l の

牌 細 胞 浮 遊 液

を

作 製

し た

. 実 験^に

は 5

%

F C S

加

R P M I 1 6

4

0

液

で

希 釈

し た

脾 細 胞 浮遊 液

を 用 い

た

^.

6

^. 酢 酸^ハ

イ ド ^{ロ コ}

^ル

チ ゾ

ン前 処

理 B A L B

/

^{c マ} ウ

ス肺 細 胞^の作 製

酢 酸^ハ

イ ド ^{ロ コ}

^ル

チ ゾ

^ン(

日

本

メ

ル ク寓 有

) 6

^.

2 5

,

1 2

^.

5

,

2 5 m

g/

匹 を

各

B A L B

/

^{c マ} ウ

ス に皮 下 接種

し

,4

日

目^に屠殺 後 無 菌 的^に牌 臓

を

摘 出

し て

, 前 述

し た

方法

に従っ

て

牌 細 胞

を

調 整

し た

^.

7

^. 担

が ん B A L B

/

^{c マ} ウ

ス肺 細胞^の作 製

エ

^ー

リ

ッ ヒ腹 水

が ん

細胞 浮 遊 液 (

1

^×

1 0

⁷個/

m l

)

0

^.

2

m l を ^マ ウ

^ス腹 腔 内^に接 種

し

,

1 0 日

目^に屠 殺

し

て無菌 的^に摘 出

し た

脾臓

を

,

P B S で

洗 浄

し て が ん

細 胞

を

除

去 し た

後_, 前 述

し た

方法に従^っ

て

脾 細 胞 浮遊 液

を

作製

し た

^.

8

^. 培 養

^マ ウ

ス牌 細 胞

か ら

の

I F N

誘 起 実 験 各 濃度の牌 細胞 浮遊 液に各種 濃 度の各 薗 浮遊 液

を

加

え て

,

3 7

⁰

C

下 炭 酸

ガ

ス培 養 液 ( 炭 酸

ガ

ス濃 度

5

% ) ^で 培 養

し

, 経 時 的^に培 養

上

溝液

を

採 取

し

,

I F N

測定 暗

ま で

‑

^{2 0}

⁰

^C

^{に冷 凍 保 存}

^{し た}

^.

9

.

I F N

の測 定 法

東 北 大 学 医学 部 細 菌 学 教室

よ り

供与

さ れ た L 9 2 9

細 胞

お よ び v e s i c u l a r s

t

o m a

t

i

t

i s v i r u s

(

イ

^ン

デ

ィ

ア ナ

株^,

以

下

V S V と

略 記)

を 用

^い,

B r o d e u r

^{1 7}

) お よ び K o i ら

^{1 8 )} の方法^に従^い前記 培 養

上

清 中の

I F N

活 性

を

測 定

し た

^.

す な わ ち

,

7

.

5

% 仔 牛

血

清 (

G I B C O

) 加

M E M

液

を用

い

て

倍

々

稀 釈

し た

培 養

上

清 液

の

各 稀 釈 液

5 0

〟

1 を ^マ イ

ク ロ プ ^レ

^ー

ト

(

9 6

穴,

C o r n i n

g) の各

ウ

^{ェ ル に}注

入 し

,

こ

れ

に

L 9 2 9

細 胞 浮遊 液 (

1

^.

5

×

10

⁶個/

^m l

)

5 0

〃

l を

加

え て 3 7

⁰

C の

炭 酸

ガ

ス培 養 器 ( 炭酸

ガ

ス濃 度

⁵

%

) で 2

4

時 間培 養

し た

. 培 養 後

上

清 液

を

パ ス ツ ^ー ル

ピ

^ペ

ッ ト で

吸

引 除去

し た

後,各

ウ

^ェル

の L 9 2 9

朝

]

胞

を P B S O

^.

3 ^m l

イ

^ン

タ

^ー フェ

ロ

ン誘 起^に対

す る A

群 溶 連 菌の影 響

で

洗 浄

し

, こ

れ

に

V S V

溶 液 (

M E M

液 ^で稀 釈, 4

0

p

l a

q

^{u e} f o r m i n

g

u n i

t

s

/

50

_p

l

)

を

添 加

し

, こ

れ を

炭 酸

ガ

ス培 養

署

削^こ静 置

し た

.

1

時 間 後

V S V

培 養 液

^を

吸 引 除去

^{し た}

衡 ^1.

5

% ^メ

チ

ル セ ル

ロ

^ー ス ( 半井 化 学) 加

1.

5

%

F C S

加

M E M

液

5 0

J^L

l を

重 層

し

, 炭 酸

ガ

ス培 養 器^で

2 4

時 間培 養

し た

.培 養後

重

層培 地

を 吸

引 除 去

し た

マ イ ク ^ロ プ レ

^ー

ト を

,

1

%

ク

^ー

｣

ス

タ

ル

バ イ オ ^レ ッ ト

(

M e r c k )

加

^エ チ

ル

ア

^ル

^コ

^ー ル に浸

し

,

1 5

分 間 染色 固

定

し た

.

つ

い で水洗

を

行

^い プ ラ

^ー ク数

を

求

め た

. 対 照

と し て

菌標

品

無添 加

L 9 2 9

細胞^の

プ ラ

^ー

ク

数

を 用

^い,

5 0 % プ ラ

^ー

ク 阻 止

法^に

よ り I F N

活 性 値

を

算 出

し た

.

な

^お測 定^に際

し

,

N I H

標 準

^マ ウ

ス

I F N

(

N o

.

0 22

^‑

9 0 4

^‑

5 11 ) も

同時に測定

し

,本 実験 系^に

^{よ り}

求

め た I F N

活 性

値

を

国 際単 位

と 比

較

し た

^.

そ

の結果 本 実 験 系に お

け る 1

単位

は

約

1

単位^の国 際単 位^に相 当

し た

.

1 0

. 誘 起

I F N

の p

H 2

に お

け る

安 定 性 試験

W e l s h

^{1 9}

⁾

^の手 技^に準

じ て

行 ^っ

た

^. 誘 起

I F N

溶 液

(

p

H 7

^.1)¹

^m l

に

0

^･

1 N H Cl を

加

え て

p

H 2

^,

0

に調 整

し

,

37

⁰

C

で

3

時 間 静 置

^{し た}

^. 静 置 後 誘 起

I F N

溶 液^の

p

H を 0

^.1

N N a O H

に

よ り

p

H 7

^.

0

^に修

正 し た

後, メ ン

ブ ラ

ン フ ィ ル

タ

^ー ( 孔 径

0

^.4

5

_〟

m

,

M illi

p

o r e

) ^に

よ

4

2 5

り

除 菌

し

, 炉 液^に

^つ

^{い て}

I F N

測 定

を

行

っ た

.

1 1

^∴誘起

^{王F N の}

中和 試験

被 験 誘 起

I F N

溶 液

5 0

〟

1

に抗

I F N

^‑

α

^･β 血 清 (

N I H N o

.

G O 24

^‑

5 0 ト 5 68

, 中和 力 価

^{25 0 U}

/

m l

に稀 釈, 東北 大 学 医 学部 細 菌 学教 室

よ り

供 与)

5

叫

1 を

添加

し

,4⁰

C

下

で 6 0 分

間 静置 後,残存

I F N

活性

を

測 定

し た

.

な

お p

H 2

に お

け る

安 定性 試験^お

よ び

中 和試 験^に

^は

対 照

I F N と し

て

コ

ン

カ ナ

^バ

リ

ン(

C o n A

,

S i

g

m a

)

を

脾 細 胞 培 養 液^に添 加

す る

事に

よ り

得

ら れ た I F N

溶 液

(

I F N

^‑γ)

を 用

^い

た

.

成 績

Ⅰ

.

I F N

誘 起 実験

1

^･ 各 種 菌標 品に

よ る B A L B

/

c マ ウ

ス牌 細 胞

で

の

I F N

誘 起 実 験

4

^×

1 0

⁵,

2

^×

1 0

⁸,

5

^×

1 0

⁶

お よ び

1 ×

1 0

⁷個/

^m l の

各 肺細 胞 浮 遊 液

1 m l

に

そ れ ぞ れ 0

^.

1

,

0

^.

5

,

2

^.

5

^お

よ び 12

^.

5 K E

/

m l の

各 種 薗標 品

を 0

^.

1 m l

添 加

し

,

4

,

8

,

1 2

,

2 4

,

4 8

時 間培 養後

上

清 液 中

の I F N

活性

を

測 定

し た

^.

そ の

結 果, 肺 細 胞 数

が

4 ×

1 0

⁵個/

^m l

の浮遊 液^に菌標 品

を

加

え て も

各 菌標 品

の

いず

れ の

濃度^お

よ び

培 養 時 間^に

お

^い

T a bl e l

^･

E 汗 e c

t

o f

p

r e

p

a r a

t

i o n s

^*

o f di f f e r e n

t

h e m o l

_{y t}

i c s

t

_{r e}

p t

o c o c c u s s

t

r a i n s o n

t

h e i n d u c

t

i o n o f I F N i n 2 ×

1

0 ⁶ B A L B

/

c m o u s e s

p

l e e n c e ll s

p

e r m l

C o c c a l

p

r e

p

a r a

t

i o n

C o n c e n

t

r a

t

i o n o f c o c c a l

p

^{r e}

p

a r a

t

i o n i n t h e m i x

t

u r e

(

K E

^**/

^{m l}

)

A c

t

i v i

_{t y}

o f I F N

(

U

/

m l

)

i n d u c e d d u r i n

g

i n c u b a

t

i o n

t

i m e o f

4

8

1

2 2

4 4

8 h ^r

C 2 0 3 S

C 2 0 3 U

B l a c k m o r e

S u

(

O K

‑⁴

^{3 2}

⁾

P B S

(

C o n

t

r o l

)

1 5 5 5

1

5 5

5 1

5 5 5 1 1 5 5 0 0 2 2 0 0 2 2 0 0

2 2

0 0 2 2 0 0 0

1

0 0 0 1 0 0

0

1

0

0 0

1

0

**♯

一

一

一

一

一

1 9

一

一

2 2 2

1

▲ 一

1 8 26

鵬 一 一

4 2 3 9 2 〇

一

2 9 3 7

2

〇

一

8 0

7

2

4

5

一

4

0

4

8 1 8

山

5

2

4

2 2

4

一

3 0 3

4

26

一

70 7

⁴

4〇

一

36 39 2

4

一

A m i x

t

u r e o f l m l o f s

p

l e e n c e ll s u s

p

e n s i o n

(

2 × 1 0

⁶

c e ll s

/

^{m l}

)

a n d O

^･1

m l o f s u s

p

e n s

i

o n o f c o c c a l

_p

r e

^‑ p

a r a

t

i o n w a s i n c u b a

t

_e d i n 5

%

C O

2

i n c u b a

t

o r a

t

37

⁰

C

.

A f

t

e r i n c u b a

t

i o n

,

a C

t

i v i

_{t y}

o f i n d u c e d I F N

W a S a S S a

y

e d

^.

*

P r e

p

a r a

t

i o n o f h e m o l

y t

i c s

t

r e

p t

^{o c o c c} i : C O C C a l s u s

p

e n s i o n o f C 2 0 3 S

,

C 2 0 3 U a n d B l a c k m o r e i n

B e r n h e i m e r

^'

s b a s a l m e di u m c o n

t

a i n i n g

^p

^{e n} i c illi n G

(

2

^.

7 ^×

¹

0

⁴

U

/

r n 1

)

w a s i n c u b a

t

e d a

t

3 7

⁸

C f o r 2 0

m i n u

t

e s f o ll o w e d b

y

i n c u b a

t

i o n a

t 4

5 ℃ f ^{o r} 3 0 m l n u

t

e S a n d

_{l y}

o

p

hili z e d

^.

**

K E ‥ O n e K E c o r r e s

p

^{o n} d s

t

_o O

^.

1 m

g

d ^r

ⁱ

e

d

c o c c l

.

***

: L e s s

t

h a n 1 6 U

/

m l

.

4 2 6

て

も

I F N

活性

は

認

め ら れ な か っ た

.

し か し

, 脾 細 胞

が 2

×

1 0

⁸個/

^m l の

浮 遊 液に菌 標 品

を

作

用 さ せ る と I F N が

認

め ら れ

,

そ の

成 績

は

表

1

に

示 し た

如

く で

あ

る

^.

す な わ ち

,

8

時 間以 内

の

培 養

で は

全

て の

薗 標 晶^に

お

^い

て I F N

活 性

は

認

め ら れ な か っ た が

,培養

2 4

,

4 8

時 間

で は

全

て の

菌標 晶^{に お い}

^{て I F N}

活 性

は

認

め ら れ

, か つ

そ の

作 用 濃 度

が 0

.

0 1 お よ び 0

.

0 5 K E

/

m l の

低 濃 度

ほ ど I F N

の活 性

は

強

く

,

1

^.

2 5 K E

/

m l の

高濃 度

で は I F N

活 性

は

認

め ら れ な か ^っ た

.各 菌 標 晶^に

よ る I F N

活 性

の

最 高値

は C 2 0 3 S

標 晶

で 5 2 U

/

m l

,

C 2 0 3 U

標 品

で 3 7 U

/

m l

,

B l a c k m o r e

標 品

で 8 0 U

/

m l

,

お よ び O K

^‑

4 32

で

4 8 U

/

m l と

^一般^に低

か っ た

.

脾 細 胞 数

5

^×

1 0

⁶個/

m l の

浮 遊 液

に

薗 標 晶

を

作 用

さ せ た

実験 成 績

は

表

2

に

示 し た

^.菌 標 品 濃度

が 1

.

2 5 E E

/

m l で I F N

誘 起

が

認

め ら れ

ぬ

の は

先

の

実 験

と

同

じ で あ

っ た が

, 低 濃 度

で は

全

て の

菌標 晶^{に お い}

て 8

時 間 以

上

の培 養

で I F N

誘起

が

認

め ら れ

,殊^に

2 4

お

よ び 4 8

時 間 培 養

で I F N

活性

は

強

か っ た

^.

ま た

各 標 品の最 高値

は C 2 0 3 S

樺 品

で 1 0 7 U

/

m l

,

C 2 0 3 U

標 晶

で 1 07 U

/

^m l

,

B l ^{a c} k m o r e

標 品^で

1 1 1 U

/

m l

,

O K

^‑

4 32 で は 1 3 7 U

/

^m l

であ

り

, 何

れ も 2

^×

1 0

⁶個/

^m l

脾 細 胞 浮 遊液

に

対

す る よ り も I F N

誘 起

は

高

ま っ て

^い

た

.

し か し

, 各 菌標 品 間^に

お

い

て は

著

し

^い差異

は

認

め ら れ な か っ た

.

脾 細 胞 数

¹

^X

^{l O}

⁷個/

^m l の

浮 遊 液

を

用^い

た

場 合^の実 験 成績

は

表

3 に 示 し た

如

く

^であ

る

.

1 F N

誘 起

は

薗標

晶

作

用

濃 度

^{が 1}

^.

^{2 5 K E}

/

m l で は

認

め ら れ

ず, 低 濃度

で

強

く

認

め ら れ る

こ

と は

先

の

実 験

と

同様

で

あ

っ た

^.

ま た

,

I F N

括 性

は

培養 時間

が 2 4

,

4 8

時 間

で

最

も

韓

く

,各 菌棲 品

の

活 性 最高 値

は C 2 0 3 S

標 品

で 1 4 0 U

/

m l

,

C 20 3 U

標 品

で 1 5 8 U

/

^m l

,

B l a c k m o r e

標

晶

で

2 3 0 U

/

m l

,

お よ

び O K

‑

4 3 2 で 2 03 U

/

^m l で

あ

り

,

B l a c k m o r e

標

品 お よ

び

O K

^‑

4 3 2

^に強

く み ら れ た

^.

ま た

,.^先

^の

^実験

^{と 比}

^較

^し

て

,肺 細 胞

の

数

が

多^い

ほ ど I F N

活 性

が

強^{い こ}

と も

認

め ら れ た

.

以

上 の

成 績

か ら

誘 起

I F N

活 性

を

菌標 晶

ご と

に

示 し た の が

図

1

,

2

,

3 お よ び 4 で あ る

^{. こ}

れ よ り み ら れ る

如

く

, 活 性 値

が

最

も

高^い

の は

脾 細 胞 数

が 1

×

1 0

⁷個/

^m l で

あ

り

, 標 晶 作 用濃 度

が 0

.

0 5 K E

/

m l で

あ

る

こ

と か ら

(

Bl a c k m o r e

標 晶

の み 0

^.

0 1 K E

/

m l

), 以

下 の

実験

は

こ

の

条 件^に

よ

っ

て

行

っ た

.

2

^. 加 熱 死 菌^に

よ る B A L B

/

c マ ウ

ス脾 細 胞

^{で の} I F N

誘 起 実 験

B A L B

/

c マ ウ

ス脾 細 胞 浮 遊 液(

¹

^×

^{1 0}

⁷個/

^m l

)

1 m l

に

C 2 0 3 S

,

C 2 0 3 U

,

B l a c k ^{m o r e}

,

S u

菌

の

加 熱 処

理

死菌 浮 遊 液

を

作 用 濃 度

0

^.

0 5 K E

/

m l

に

な る

様^に添 加

し て 3 7

⁰

C

下^に培 養

し

,

1 2

,

2 4

,

4 8

時 間後^に

I F N

活 性

を

測 定

し た

^.

そ の

成 績

は

表

4 に 示 し た

^.

I F N

活 性

は S ^u

薗^の加 熱死 菌

を

添 加

し た

場 合^に

の み

認

め ら れ

,

I F N

活性

も

先

の実験

と

同様^に

2 4

時 間培 養

で

最 高値

を 示 し た が

,

そ の

活 性

は 5 2 U

/

m l と O K

^‑

4 3 2 よ り

か

な り

低

か

^っ

た

.

T a bl e 2

.

E fE e c

t

o f c o c c a l

p

r e

p

a

t

i o n s

^*

o n

t

h e i n d u c

t

i o n o f I F N i n 5 × 1 0 ⁶ B A L B

/

c m o u s e s

p

l e e n c e ll s

p

e r m l

C o c c a l

p

^{r e}

p

^{a r a}

t

i o n

C o n c e n

t

r a

t

i o n o f c o c c a l

p

r e

p

a r a

t

i o n i n

t

h e m i x

t

u r e

(

K E

^*ソ

^{m l}

)

A c

t

i v i

t y

o f I F N

(

U

/

^m l

)

i

h

d u c e d d u r i n

g

i n c u b a

t

i o n

t

i m e o f

4 8

1

2 2

4 4

8 h ^r

C 2 03 S

C 2 0 3 U

B l a c k m o r e

S u

(

O E

^･

43 2

)

P B S

(

C o n

t

r o l

)

1 5 5 5 1 5 5 5 1 5 5 5 1 5 5 5 0 0 2 2 0 0 2 2

(

U

O 2 2 0 0 2 2 0

0 0

1

0 0 0 1 0 0 0 1 0 0 0 1 0

* ■*

一

一¶ 一 一 一 一

一

一

一

一

一

一

一

2 8 6 3 1 1

一

2

1

2 8 1 7

9 0 9 3 3

1

岬

2 8 2 2 2 4

一

一

0 2 0 4 3 2

一

4 7 5 0 2 4

一

0 6

4

6 5 2

4 0 3 6 2 6

一

一

7 9 7 5 3 2

一

84 7 9 3 9

一

l 1

7 1 9 3 1

一

9 7 3 7 4 7

一

一

l

0

7

74

4

2

一

8 7 0 7 5 〇

一

l

l

4

9 5 0 6 4 1

1

4

7 1 3 3 1 1

*

.

* *

.

* =

: R e f e r

t

o f o o

t

n o

t

e s o f T a bl e l

.