博 士 （ 獣 医 学 ） 今 井 邦 俊
学 位 論 文 題 名
Etiological studiese on Marek's disease vaccine breaks
（マ レ ッ ク 病 ワク チン ブレイ クに 関す る病 原学的 研究 ）
学 位 論 文 内 容 の 要 旨
マ レ ッ ク 病(MD)は ，MDウ イ ル ス(MDV)に 起 因 す る 家 禽 の 腫 瘍 性 疾 病 で あ っ て ， こ れ ま で 我 が国 の 養 鶏 産 業に 大 き な 被 害 をも た ら し て きた。1970年代 入り， 弱毒化MDV， 七面 鳥ヘ ル ペ ス ウ イ ル ス(HVT)， 野 外 分 離 弱 毒 お よ び 非 腫 瘍 原 性MDVを 用 い た 生 ワ ク チ ン が 開 発さ れ ， 同 時に こ れ ら の ワク チ ン の 普 及 によ っ てMDの 発 生 は 激 減 した 。 し かし ，日 本を始 め世界 各 国 で 鶏群 に 対 し てMDワ ク チ ン が適 切 に 接 種 され て い た に も かか わ ら ず通 常の 損耗率 を越え るMDの発 生 が し ば しば 観 察 さ れ ，養 鶏 産 業 上 の大 き な 問 題 と なっ て き た。 現在 このよ うな現 象 は ， ワク チ ン ブ レ イク(vccine breaks)と 呼 ば れ， その 発生原 因の解 明と早 急な対 策が 求め られ てい る。
我 が国 で は 養 鶏 と並 ん で 養 鶉 産業 も 発 達 し てい る が ， 最 近 ，各 地 で 日本 ウズ ラ群に もMDの 発 生 が 報 告 さ れ た 。 ウ ズ ラ に おけ るMDの流 行 はMDワク チ ン の 投 与に よ っ て 抑 制 され て は い るが ，し ばしば 鶏と同 様にワ クチン ブレ イクが 観察さ れ，こ れの 予防対 策も養 鶉産業分野の緊急 な課 題と なって いる。
ワ ク チ ン ブ レ イ ク の 要 因 に 関 し て 欧 米で は ， 病 原 性 の極 め て 強 いMDV（ 超 強毒 株 ） がHVT ワク チン 接種鶏 から分 離され たこと から ，ワク チンに よって 防御 しきれ ないほ どの超強毒株の存 在が ヮク チンブ レイク の主要 因であ ると 考えら れた。 しかし ，こ れまで 日本で はこのような超強 毒株 の存 在は全 く知ら れてい ない。
一 方 ，1979年 湯 浅 ら は 鶏 か ら 正 二 十 面 体 ウ イ ル ス で あ る 鶏 貧 血 因 子(chicken anemla agent，CAA)を 分 離 し ， 世 界 最初 に 報 告 し た。CAAは， 鶏 の 造 血 お よび り ン パ 系 に強 い 傷 害 を与 える ことか ら，こ の感染 によっ て鶏 が日和 見感染 症の誘 発や ワクチ ン効果 の阻害など様々な 影響 を受 けてい ること が推測 された 。
本 論文で は，ワクチンブレイクの原因を病原学的に解明する目的で以下のことを実施した。（1） 鶏 お よ び日 本 ウ ズ ラ から のMDVの分 離 と そ の 病原 性 の確 認。特 に超強 毒分離 株の 性状の 検討。
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(2)MDV分 離 株 に 対 す る 異 な っ た 鶏 品 種 の 感 受 性 の 検 討 。(3)鶏 で のMDV感 染 に 対 す るMDワ ク チ ン の効 果 判 定 。 （4） 鶏 に お け るMDワ ク チン 接 種 とCAA感 染 の 関 係。(5)MDワ ク チ ン ウイ ルス の毒カ の再検 討。
得ら れた結 果は ，以下 のよう に要約 される 。
1． 12群のHVTワク チ ン 接 種 およ び 未 接 種 の ホワイ トレ グホー ン鶏群 で発見 され た61羽の マ レッ ク病罹 患鶏か ら採材 し， それら の皮膚 乳剤あ るい は血液 を培養 細胞（ 鶏胚あるいはアヒル胚 線 維 芽 細 胞 お よ び 鶏 腎 細 胞 ） に 接 種 し て13株 のMDV様 ウイ ル ス を 分 離し た 。 同 様 に ，MDの 発 生 が疑 わ れ た8群のHVTウイ ル ス 接 種 お よび 未 接 種 の 日本 ウ ズ ラ か ら得 られた61羽分の 皮膚 乳 剤 あ るい は 血 液 に っ いてMDVの分 離 を 試 み た。 細 胞 培 養 系 で拭 ワ ク チ ン 接種 の 有 無 に かか わ ら ず ウズ ラ か らMDVを 分 離 で きな か っ た が ，鶏 雛 に ウ ズ ラ 血液 を 接 種 す るこ と に よ ル ヮク チ ン 接 種 群 か ら2株 と 未 接 種 群 か ら2株 計4株 のMDV様 ウ イ ル ス が 分 離 さ れ た 。 鶏 お よ び ウ ズ ラ由 来 の 新鮮 分離株 は，い ずれも 鶏胚 線維芽 細胞で 円形の 変性 細胞か らなる プ ラ ーク を形成 した。 また ，各株 の感染 細胞は 間接 螢光抗 体法を 用いた 血清型 別試 験で1型の 特異 抗 原を 認識す る単ク ロー ン抗体 と反応 し，さ らに 鶏にお ける接 種実験 では供 試分 離株の 全部が1 型 に 特 徴 的 なMDリ ン パ 腫 を 形 成 し た こ と か ら ， こ れ ら は1型 のMDVと 同 定 さ れ た。 こ れ ら の成 績のう ちウズ ラから のMDV分離 は，我 が国で は最初 であ る。
形 質 の 異 な る2系 統 の 鶏(P‑とPDL−1)を 用 い て 分 離MDVの 病 原 性 を 調 べ た 結 果 ， 分 離 株の 毒カの 程度は 様々 であっ て，死 亡率は 分離 ウイル ス株毎 にO−100％の幅 で変動 した 。P・ 2鶏 に お け る 死 亡 率 は ，PDL・1鶏 に お け る よ り も や や 高か っ た が ， 両者 の 間 でMD病 変 の 出 現 率 に有 意 差 は 認 めら れ なか った 。これ までWitterらは， 超強 毒株に 感染し た鶏雛 でファ ブリ キ ウス 嚢と胸 腺の高 度の 萎縮を 伴った 早期死 亡例 が高率 に見ら れるこ とを報 告し た。本 実験でH 分 離 株の 中 に 早 期 死亡 を 引 き 起 こす 株 が8株 含ま れ て い た が ，早 期 死 亡例 の発生 率は，PDL ‑ 1鶏 よ り もP−2鶏 で 明 ら か に 高 か っ た 。 鶏 由 来 株 の う ち の2株(MSlとMS 2)は ， 鶏 雛 で 早 期 死 亡を 惹 起 す る とと も にMDによる 高率ナ よ死亡 例の 発生を 引き起 こした 。一 方，ウ ズラ由 来 株で は，QM3株が 最も高 い致 命率を 示した 。゛
MD高 感 受 性 のP−2鶏 をHVTワ ク チ ン で 免 疫 し た 後 に ， 鶏 で 高い 致 命 率 を 示 した 鶏 由 来 株 (MSlとMS 2)と ウ ズ ラ 由 来 株(QM 3)の 計3株 を 用 い て 各 々 免 疫 鶏 に 攻 撃 接 種 し た と こ ろ ， 免 疫 鶏 は 鶏 由 来 株 に 対 し て 十 分なMD防 御能 を 示 さ な か った が ，PDL―1鶏 で はワ ク チ ン 接 種 後， 鶏 由 来 株 の攻 撃 に 対 し て十 分 な 防 御 能 を示し た。こ のよう に高感 受性 鶏にお いてHVT ワク チンの 防御効果を低下させる現象ならびに鶏雛に対する高い病原性（高致ムロn率と早期死亡の
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惹 起） から ，MS1株 とMS2株 はと もに 欧 米で 報告 され てい る と同様の超強毒株型MDVであ る こ と が 判 明 し た 。P−2鶏 に ，HVTと2型MDVの2価 ワ ク チ ン お よ び1型MDVのCV19 88ワクチンをそ れぞれ接種したところ，こ れらのワクチンは鶏由来株（MS1とMS2）の攻撃 に対してHVTワクチン単独より高いMD防御能を示した。
2．一 日 齢の 鶏雛 にHVTワ クチ ンを 接 種後 ，4日 齢 でCAAを 接種し，さらに8日齢で強毒 MDVを 攻 撃 接 種 し た と こ ろ ，CAA接 種 群 で はCAA未 接 種 鶏 群 に 比 べ てMD発 生 率が 有意 に高く（pく0． 05)，CAA感染がMDワクチン の効果を減弱させることが判明した。しかし，
鶏の品種間でこ の抑制効果に差は認められ なかった。また，CAA感染鶏 でのMDVの攻撃時期 を18日 齢に 遅らせた場合，MDワ クチン効果の減弱は認められ なかった。鶏に対するCAAの 病 原性 は，MDワ クチ ン 株と の重 感染 に より 増強 され たが ，CAA感 染 はMDVの病 原 性を増 強Lなか っ た。 さら に，CAA感染 は， 鶏におけるMDのワクチ ンウイルスの増殖に顕著な影 響を与えなかっ た。CAA感染鶏におけるMDワ クチン免疫の抑制の機序は明らかにできなかっ た が， この 免疫抑制効果はCAAとMDワクチンとの重感染によ って引き起こされるりンパ組 織の傷害に起因すると推測される。
3．MD生 ワ ク チ ン ウ イ ル ス 株 と し て 用 い ら れ て い るMDV CV1988株 ，MDV SBl株 およ びFIVT FC126株 の病 原 性を 形質 の異 な る3系 統の 鶏 （PDL→1，Pー2とL151）を用いて調 べたところ，CV1988株を接種されたPDL・1鶏で低率ながら脚弱を伴う末 梢神経病変が認め られた。
以上のように，欧米において，ワクチンブレイクの主要因と考えられている超強毒株が日本の 鶏から初めて分離されたことから，HVTワクチンで免疫された鶏群におけるワクチンブレイク の一因として，これらの超強毒株の関与が示唆された。また，現行ワクチンの中に超強毒株に対 して強い免疫効果を現わすものも認められ，さらにこれらのワクチンによる防御効果が，鶏の品 種と関連していることも明らかにされた。また，常在的に広く分布するCAAによる孵化後早期 の鶏雛群の感染もまた，ワクチン接種鶏群におけるワクチンブレイクの一因となり得ることが示 された。さらに ，MDワクチン株の中には， 稀ながら鶏にMD病変を引き起 こすもののあるこ とも判明した。すなわち，ワクチンウイルス自体がいまだ鶏に対して完全には弱毒化されていな いために，高感 受性鶏ではワクチンブレイクによるMDの発生する可能性のあることも明らか となった。
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学位論文審査の要旨 主査
副査 副査 副査
教 授 教 授 教 授 助 教授
橋本 板倉 小沼 高島
信 夫 智 敏 操 郁 夫
養 鶏 産 業に 甚 大 な 被 害を も た ら した マレ ック病 （MD）は 生ウ イルス ワクチ ンの開 発とそ の広 範 な使 用によ って激 減した 。 し かし最 近ワク チン を接種 したに もかか わらず 発病 するいわゆる ワ ク チ ン ブ レ イ ク 現 象 が 各 地 で 観 察 さ れ ， そ の 原 因 の 解 明 が 急 が れ て い た 。 申 請 者 はマ レ ッ ク 病 鶏か ら マ レ ッ ク 病ウ イ ル ス （MDV） の超 強毒株 を分離 して生 ワクチ ン免 疫 鶏に 接種し ，実験 的にワ クチ ンブレ イクを 検証す るとと もに ，鶏に 免疫抑 制を起 こすウイルス 性 の 鶏 貧 血 因 子 （CAA） の 感 染とMDワ クチ ン 効 果 と の 関連 を 検 討 し ，ワ ク チ ン プ レイ ク 現 象 の 解明 を試み た。本 論文は これ らをま とめた もので 英文79頁から なり， 参考論 文12編 を付してい る 。
ま ず ， わ が 国 のMD罹 患 鶏 か ら 分 離 さ れ た 多 数 のMDVに っ い て鶏 に 対 す る 病 原性 を 調 べ た と ころ ，ほと んどが 強毒型 に属 し，ま た潜伏 期が短 くて内 蔵病 変の程度が著しく強く，致命率100
％ に 達 す る 超 強 毒 株 も2株 検 出 さ れ た 。 そ こ でMD高 感 受 性 鶏 を 用 い ，MDワ ク チ ンで 免 疫 し た 後 に 超 強 毒 株を 攻 撃 接 種 した と こ ろ ， 高率 にMDの 発生 が 認 め ら れた 。 す な わ ち従来 のワク チ ン で 防 御 し 切れ な い よ う な超 強 毒 株の感 染がワ クチ ンブレ イクの 原因と なる ことが 明らか と な っ た 。 さ ら に各 種 生 ワ ク チン 株 に っいて3系 統の鶏 を用い て毒 カを検 定して ところ1系 統で低 率 な が らMDを 起 こ す も のが 認 め ら れ ， 弱毒 化 の 不 完 全な 生 ワ ク チ ンの あ る こ と が判明 した。
ま た わ が 国 に 広 く 常 在 性 に 分 布 す るCAAを 孵 化 早 期 にMDワ ク チ ン 投与 を 受 け た 鶏に 感 染 さ せ た 後 ，MDV強毒 株 で 攻 撃 接 種し た と こ ろ ．MDの 高 率 な発 生 が 認 め られ た 。 す な わち 鶏 雛 で のCAA感 染 が 免 疫 抑 制 を 引 き 起 こ し てMDワ ウ チ ン の 効 果 を 減 弱 さ せ， ワ ク チ ン ブレ イ ク の 一 因と なり得 ること が示唆 され た。
これら の知見 は養鶏 産業 上大き な問題 とナょっているマレック病の予防対策を確立する上で貢献 す ると ころ大 である 。よっ て審 査員一 同は今 井邦俊 氏が博 士（ 獣医学 ）の学 位を受 ける資格を有 す るも のと認 めた。
