ふ り が な
氏 名
なみかわ だいすけ
並河 大裕
学 位 の 種 類 博士（歯学）
学 位 記 番 号 甲 第 902 号 学 位 授 与 の 日 付 令和 3 年 3 月 5 日
学 位 授 与 の 要 件 学位規則第 4 条第 1 項に該当
学 位 論 文 題 目 Species-specific growth inhibitory effect of propolis
（プロポリスが示す細菌種特異的な増殖抑制効果）
学 位 論 文 掲 載 誌 Journal of Osaka Dental University 第 55 巻 第 1 号 令和 3 年 4 月
論 文 調 査 委 員 主 査 髙橋 一也 教授 副 査 岡崎 定司 教授 副 査 沖永 敏則 教授
論文内容要旨
歯科医療では、口腔環境の改善により、歯科疾患のみならず全身的疾患を予防していくことを目指 している。そのような中で、口腔細菌叢の改善に注目し、研究展開をしている。天然の抗菌物質であ るプロポリスは、健康食品や歯周病の民間薬などに用いられ、様々な効果が報告されている。そこで 本研究では、次世代シーケンサーを用いてプロポリスの口腔細菌叢へ与える影響について検証した。
大阪歯科大学附属病院高齢者歯科の患者
3名（男性
2名、女性
1名）の
4 mm以上の歯周ポケット からペリオペーパーにて歯肉溝滲出液を採取し、SHI 培地で培養して口腔細菌叢サンプルとした。サ ンプルにエタノール抽出プロポリス（EEP； 0,50,100 µg/mL ;(株)山田養蜂場より提供）を添加し、
嫌気条件下で
24時間
37℃振盪培養しDNA抽出した。
PCRにより増幅した
16S rRNAの
V3-V4領域 の塩基配列を次世代シーケンサーMiseq で解読し、細菌叢の変化を解析した。次に歯周病細菌
Porphyromonas gingivalis (P.g.)、Fusobacterium nucleatum (F.n.)にプロポリスを作用させた際の増殖への影響を、培養液の吸光度（OD）、固形培地上でのコロニー形成単位（CFU）により測定した。
培養口腔細菌叢に対する
EEPの影響を解析したところ、菌叢の割合や多様性に有意な変化は見られ なかった。そこで、歯周病細菌
P.g.、
F.n.に対する
EEPの影響を解析したところ、OD 測定を用いた 実験において、EEP は用量依存的に
P.g.の増殖を阻害していた。一方、
F.n.の増殖に対しては、大き な影響は見られなかった。さらに、
P.g.の
CFU数は
100 µg/mLの
EEPにより減少したが、
F.n.の
CFU数の減少は観察されなかった。
以上の結果から、
EEPは細菌叢を大きく変えることなく、歯周病細菌
P.g.に対して顕著な増殖抑制
を示すことが示唆された。
論文審査結果要旨
本研究は、高齢者に対する口腔健康を細菌学的観点から検証するため、次世代シーケンサーを用い てプロポリスの口腔細菌叢へ与える影響を解析したものである。
研究方法として、大阪歯科大学附属病院高齢者歯科の患者
3名の
4 mm以上の歯周ポケットからペ リオペーパーにて歯肉溝滲出液を採取して口腔細菌叢サンプルを作製した。サンプルにエタノール抽 出プロポリスを添加し、嫌気条件下で
24時間
37℃振盪培養し
DNA抽出し、
PCRにより増幅した
16S rRNAの塩基配列を次世代シーケンサー
Miseqで解読し、細菌叢の変化を解析している。歯周病細菌
Porphyromonas gingivalis (P. gingivalis)、
Fusobacterium nucleatum (F. nucleatum)にプロポリスを 作用させた際の増殖への影響を、培養液の吸光度（OD）、固形培地上でのコロニー形成単位（CFU）
により測定している。
採取方法として、培養口腔細菌叢に対するプロポリスの影響として、菌叢の割合や多様性に有意な 変化はなく、歯周病細菌
P. gingivalis、
F. nucleatumに対しては、プロポリスは用量依存的に
P.gingivalis
