Fig．4．2．3．脂肪酸メチルエステル試薬（上）と、MCFを用いて誘導体化した脂肪酸（下）のクロ マトグラムの比較
脂肪酸メチルエステル試薬のクロマトグラムから、1410（ミリスチン酸）から、24：O（リグノセリ ン酸）までの脂肪酸メチルエステルが、炭素鎖の短い順に溶出し、クロマトグラム上で完全に 分離されることがわかった。すなわち、Tab1e．4．1．5．の測定条件が、少なくともピーク分離上 は問題ないことがわかる。さらに、脂肪酸メチルエステル試薬のリチンションタイムが、MCF を用いて誘導体化した脂肪酸のそれと一致していることがわかる。これより、MCFを用いた 誘導体化反応で得られる化合物が、脂肪酸メチルエステルであることが確認された。
4．2．4．脂肪酸エチルエステルのクロマトグラム
脂肪酸エチルエステル試薬と、MCFを用いて誘導体化した脂肪酸のクロマトグラムを、Fig．
4．2．4．に示す。
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Fig．4．2．4．脂肪酸エチルエステル試薬（上）と、ECFを用いて誘導体化した脂肪酸（下）のクロ マトグラムの比較
脂肪酸エチルエステル試薬のクロマトグラムから、1410（ミリスチン酸）から、2410（リグノセリ ン酸）までの脂肪酸エチルエステルが、炭素鎖の短い順に溶出し、クロマトグラム上で完全に 分離されることがわかった。すなわち、Table．4．1．5．の測定条件が、少なくともピーク分離上 は問題ないことがわかる。さらに、脂肪酸エチルエステル試薬のリチンションタイムが、ECF を用いて誘導体化した脂肪酸のそれと一致していることがわかる。これより、ECFを用いた誘 導体化反応で得られる化合物が、脂肪酸エチルエステルであることが確認された。
4．3，MCF−ECFを用いた脂肪酸の誘導体化反応の収率の算出
4．3．1．GC−1RMS（炭素同位体比測定モード）を用いた導入物質量の算出
4．1．4．で述べたように、炭素同位体比測定モードのGC−1RMSでは、GCによって分離され た分子は、燃焼炉でC02に分解され、1RMSへと運ばれる。このとき、測定によって得られる 面積強度（area all intenSity）は、分子の種類ごとに、導入劃こ比例する。これを利用すれば、
サンプルの導入量を計算することができる。
まず、物質量のわかっている試薬の濃度を数段階に振り分けて導入し、面積強度を求める ことで、導入量と面積強度のプロットを作成し、回帰直線を得る。次に、物質量未知のサンプ ルの面積強度を測定し、プロットの回帰直線に代入することで、サンプルの導入物質量を求 めることができる。
ただし、本研究で用いているGC−1RMSの注入口は、スプリット1スプリットレス法を採用して おり、気化室においてディスクリミネーション（分子の種類によって、GCへ導入される量が変 化してしまう現象）が発生するため、分子の種類によって回帰直線の成分は異なる。そのため、
導入物質量を算出したい分子の種類（本研究では脂肪酸メチル・エチルエステル＝計18種類）
毎に、導入量と面積強度のプロットを作成し、回帰直線を求める必要がある。
4．3．21誘導体化によって得られた脂肪酸メチル・エチルエステルの導入物質量の算出
本研究では、まず、脂肪酸メチルエステル試薬9種と、脂肪酸エチルエステル試薬9種の それぞれの濃度を3段階に振り分け、GC−lRMSに導入して面積強度を得た。これらのデータ から、脂肪酸メチルおよびエチルエステル試薬の導入量（濃度）と面積強度のプロットを作成し、
回帰直線を得た。次に、MCF・ECFを用いた誘導体化によって得られた脂肪酸メチル・エチ ルエステルの面積強度を測定し、プロットの回帰直線に代入することで、誘導体化によって得 られた脂肪酸メチル・エチルエステルの導入物質量を求めた。
4．3．3．誘導体化1こよって得られた脂肪酸メチル・エチルエステルの収率の算出
4．3．2．において求められた、MCF・ECFを用いた誘導体化によって得られた脂肪酸メチル・
エチルエステルの導入物質量を、エステル化による炭素数の変化（メチルエステルであれば 炭素数は十1、エチルエステルであれば炭素数は十2）に注意しながら、誘導体化前の物質量と 比較することで、MCF・ECFを用いた誘導体化法の収率を算出することができる。
4，3．4．脂肪酸メチルエステル試薬の導入量と面積強度のプロット
脂肪酸メチルエステル試薬9種の導入量と面積強度のプロットはFig．4−3．4．のようになっ た。回帰直線は、例として14二0のみを示した。