閉塞性 黄 関す 痘 実験的研究

閉塞 性黄^痘に関 す^る実 験 的研 究

一 黄痘 遷延因子の追求^, と く^に胆 道感染^{に つい て}

金沢大 学医学 部 第二外科 学 教 室 ( 指導 : 宮 崎逸 夫 教 捜)

浅 野 栄

(昭和5 3年⁷月^{2 0}日受付)

( 本論 文^の要 旨は第1 0 臥 な ら び^に第1 1 回日本 消 化 器 外 科学 会 給 金^{に て}発 表し た)

閉 塞 性 黄痘は そ^の経過申^にお^{い て}重 篤な腎 障害^, 出

血, 肝不 全な どの合併 症^{1 卜 5}壕 伴うこと が あ る^. と く^に

高度 黄 痘は そ れに伴うこれ らの重 篤な合 併 症を惹起 す る準 備状 態であ る と考え ら れ, 刷旦道 系悪 性 腫 瘍^の根 治 手 術が ますます 拡 大さ れ る傾 向^にあ る現 在^, な ん ら かの減資 術を行なって のち 二期 的^に根治 術を行な う必 要 性が強く な^っ てきて いる^{6 I.} し か し, こ のよ う^に行な

っ てきても今な お, 治 療 上^の大き な問 題と して黄 痘 遷 延^の問題 が あ げ ら れ る^. す な わ ち^. 閉 塞 性黄 痘 患者^に 対し何ら かの減 黄 処置が な さ れ^, 月旦汁 路は十 分^に確 保 さ れ て^いる と思わ れ る^にもか か わ ら ず, 十分^な排 出胆 汁量 が得ら れ な かっ た り^, あ るい は ま た, 胆 汁^が十 分

に排 出して いる と思わ れ るの に黄 痘 軽 減効 果^が悪く^. これ ら^の合 併 症^のた め^に不 幸な転 帰を と る症 例^にし ば し ば通過す る.

し か し,こ のよ う な症 例の病 態生 理に関 する実 験 的^, 臨 床的 研 究はノJ^ヽ沢 ら^の報 告な ど に 2, 3 が散 見さ れ る のみ^で7卜川t そのは と ん ど が まった く不 明^であ る と^い

って過言^でない. 教室^の永 川^{1 21}ら は, 悪性 閉 塞 性 黄 痘 2 5 0症 例の検 討か ら,黄痘が 遷延し た症 例 68例( 2 6^.0

%) 申^, と く^に胆 道 感 染が原因し^{て い}る と思わ れ る も のが 43 ^.1 % を占め た と報告して いる^.

そこ で著者は, こ のよ う な黄 痘遷 延例^におい てt 胆 道感 染が 肝^に対し如何な る影 響を あ た え^{て い}る かにつ い て検 討す る た め^, 雑 種成 犬を用^{い て.} 単 純胆道完 全 閉塞 犬と 胆道 完全 閉塞 ^･胆道 感 染 犬^の両 群^を作 成し,

これ ら^の閉 塞 解 除前 後^にお け る肝^の病 態^の変 化につい て検 索を行な^った^. す な わ ち, ま ず^. 閉塞4 過にわ た り^, (1) ^一 般 生 化 学 的 検 査を, ( 2) Ind^{o c}ya nin e

G^{r e e n} を用い て どリ^{ル ビ ン}代 謝を色 素 移 送^の面か

ら,(3) ^ビタ^ミン K 負 荷Hepapla stin Te st を用い て 肝細胞^{にお け る}蛋白 合 成 能^の変 化を. ( 4) 肝^の組織 像 と血 清M o n o a min e Oxi da s e 値か ら 胆汁う ^っ 滞^によ る 肝^の線 維 化^{に つい て}そ れ ぞ れ検討をカロえ. さ ら^に閉 塞解 除^によって こ のよ う な因 子^の回 復過 程を経 時的^に 追 求し た^. その結 果^, 閉塞 性 黄 痘^にお け る減 黄 後^の責 痘 遷 延因子お よ び予 後な どにつ い て , と くに胆道感染

の面か ら興 味あ る知 見を 2. 3 え たの で報 告す る^.

〔Ⅰ〕 閉 塞 胆道 感 染 犬にお ける 肝の病 態 生理学的 研究

Ⅰ^. 実 験 方 法 1^. 実 験 動物

10kg 前 後^の雑種 成 犬を使 用し た.対 照 群と して43 頭^, 胆道感 染 群と して3 0頭^の総数73 頭を作 成し た^.

2^. 対 照 群

雑 種 成 犬 (10kg前 後) を使 用し た. 麻酔は. 初回塩 酸 ケ タ^ミンを 1 2^.5m g /kg 筋 注して背 臥位^に固 定し,

以後T h iope ntal S^od iu m を25m g / 回 静注し^て深 度 を ^一 定^に維 持し た^. 上 腹 部 正 中切 開に て開腹し, 十二 指腸近 傍^{に て}総 胆 管を約5^{m m} 切 除し た^.

3 . 胆道 感染 群

対 照 群と同様^の方 法で開 腹し, 十二指腸 近傍^{に て}絶 胆管 内^へ十二指腸液を 0.5 ^m⊥注 入後, 対 照 群と同様方 法^で総胆管 結染 切 除術を施 行し た.

Ⅱ. 検 索方 法 なら^{び に そ の}方 法 1^. 白血 球 数

2^. 血奨 生 化 学 的 検 査

E^xp^{e r}im e ntal Stud_y o n t he Inn u e n c e of Bilia ry Infe ctio n in O bstr ucti^{v e} J^au nd ic e^･

Ei ich i As a n o_, Dep^{a r}tm e nt of S u rg^{e r}y (^{ⅠⅠ) (Dir e cto r : Pr of･ Ⅰ･ Miyazak i), Scho ol of} M ed icin e, Ka n a z a w a U niv e r sit y.

閉 塞 性 糞痘に関する実 験 的研 究

胆管結染^{後, 両 群と も 4 題目まで毎 週 股静 脈よ りヘ}

パリ^ン処 理 し た注 射 器^{に て}採血し. 以 下^の諸検 査を行 な^っ た^.

1) 責痘 指 数(^{M e ule ngr aht}値^｡ 以下M G と略す) 2) 血清総ビリ^{ル ピ ン}値 (D ia z o 反 応^, 以 下 血 清 総

｢ ^ビ｣ 値と略 す)

3) 血 清 ^{A l kalin e P ho sphata s e} 活 性 値 (Kind^‑ K ing 法. 以下A トP 値と略 す)

4) 血 清 γ^･G luta m yl tr a nspep ti da s e 値 (^{Orlo w sk i} 氏 変 法^, 以下γG T P値と略 す) 5) 血 清^{G luta mic o x alo a c etic tr am s a min a s e}

活 性 値 (^u ‑ ^{Ⅴ 法, 以 下S G O T 値と略す)}

6) 血清 G l^uta mic p y^{r u v}ic tr a n s a min a s e 活 性 値 (u ^‑ Ⅴ法^. 以 下S G P T 値と略 す) 7) La ctate dehydr oge n a s e 活 性 値 (^{テ ト ラ ゾ リ}

ウ ム塩 比 色 法, 以下L D H 値と略す) 8) 血 清絵コ レ ス テ^{ロ ー} ル値 ( 酵 素法)

9 ) T hym ol 混 瀦 反 応値 (^{チ モ ー ル ｡ ト}リ^ス法, 以 下T.T.T 値と略 す)

10 ) 硫 酸亜 鉛 温 海 試 験( 硫酸 塩^{パル ビ}タ ^{ー ル}法. 以 下Z T T 値と略 す)

1 1) 血 清 総 蛋 白量 ( ^{ピュ ー レッ ト}法)

1 2) 血清^アル ブミンと血 清グ^ロブ リン比( 算 出法^. 以下A^/G 比と略す)

3^. lndo cya nin e Gr e e n Te st(以下I C G テ ス トと 略す)

肝^にお け る色 素 移 送の動態を推 測 する目 的^で, 両 群

につ垂手 術 後4 週 目ま で毎週 行なった.

1) 採 血 方法

一 側の股 静脈に 19G の Hak ko ェ ラ スタ ^ー 針を留

置. 他側^の肘 静脈よ り^{ジ ア}グ^ノダリ ^ー ンを 1.Om g /kg

注 入後^, 5,1 0, 1 5, 2 0^,3 0^,4 0^, 5 0^, 6 0 分^の各 時 期

に^ヘパリ^ン処理 し た注 射 器に て約2汀11採 血し た^. 2) 測定 方 法

採血し た血 液を遠 沈 (1 500 回^/1 0分) して各 血 奨 8^.5 扉 を分 離^し. 滅 菌生理食 塩 水2.5 山で稀 釈し^てよ く混和 する^. 注 人 前 採 血 血欒を同 様に処理 し ブ^{ラ ン ク} と してBe ck m a n D V 分 光 光度 計を用^{い て} 810n m に お け る吸光 度を測 定 する. あ ら か じ め作成し た検 量 線

によ り血 中I C G 感 度を求め た^. さ ら に片対 数グラ フを 用い て,経 時 的な血 中I C G 消失 曲線を作 図し た^.次^に,

こ の血 中I C G 消 失 曲線を解 析し^て, 血 焚と 肝^の2 っの

コン パ ^ー ト メン トを設 置す る^こと によ り数 式Ct ⁼

Ae K lt + Be

‑K 2t

が成 立し,

次式^a 皇室

A 十B b ⁼ 姐 ら _b =(K^,+ K2卜

a

4 9 9

(a + h ) よ り血 祭か ら肝^への移 行率^a,肝から血 焚^へ

の移 行 率b, 肝か ら胆 汁^への移 行率h を算 出し た^. Ct : t 時^の血 中 濃度

K. ; K2 : 各Fr a ctio n にお け る消 失 率 A : K一にお け る 理論 的な零 時^の血 中濃 度 B : K2 にお け る理 論 的な零 時^の血 中濃 度

e : 自 然 対数^の底

t : 任 意^の時 間

消 失率 (K) は片 対数グ^{ラ フ}に I C G 注射 後5 分お よ び 1 5 分 後^の血 中濃 度を プ^{ロ ット}し, こ の2 点^を結び,

作 図 的^に零 時^にお け る血 中I C G 濃 度(^Co)^, お よ び濃 度^の半 減 時 間 (^tl′2) を求め次 式に よ^っ て計算し た^.

K ^ニリ^･

㌣

4. ビタミ ン K 負 荷Hepapla stin te st ( 以 下 K H P T と略 す)

肝^にお け る蛋 白 合 成能を み る目 的で. 肝 疾 患^の予後 判 定^に有 効と さ れて いる Hepapla stin Te st は. 閉 塞 性 黄 痘^{に て}は V itami n K ^の吸 収 障害が存在 する た め 真^の活 性 値を表現して いない ので, ビタミン K を負荷 して^t 4過 日ま^で毎 週 測 定し た.

あ ら か じ め調 整さ れ た Hepapla stin Te st用 試 薬を 37⁰c恒 温 槽 内^で約5 分 間 加 温 後^, 採 血し た静 聴 血 0^.0 1 m ほ ^. H^ep^apla stin 測 定用^メラ^{ン ジュ ール で}正 確

にと りt ガ^{ラ ス}試 験 管 ( 内径8^{m m} , 長さ6^{c m}) ^に入れ た 0^.2 5 mエの試 薬 申^に一 気^に吹善込み,試 験 管を ひ と ふ り し た後^.37⁰c 恒 温 槽 中^に20 秒静 置^, 凝固 時 間を測 定し た. つい で. 各^ロ ッ ト毎に添付さ れて いる標 準 曲 線か ら対 応 する活 性 値を読み.

ヘ マ トク リ^ット備^によ

る補正を行な^っ た^.

5. 血 清Mo n o a min e O^xi da s e値 (以下M A O 値と 略 す)

同 ^一犬^につき, 手 術後 毎 週 股静 脈か ら^{ヘ パ}リ^ン処 理 し た注射 器に て約 2 mlの血 液を採 取し.遠 沈 ( 1500 回

/1 0分) し^て血 清を分離し^,測 定^に供し た. M A O 値^の 測定^には P^･be n zyla min o^･a Z O^･β^{･n aPhtol を}基 質に用

いた^. その測 定 操作は蓑1^{. の}如くであ り^, 酵 素活 性は 活 性単 位⁼

題 諾 箆

よ り求め た.

6^. 肝^の病理組 織学 的 検索 法

各 種 実験 犬^の再 開腹 時^. 死亡ま た は屠 殺 直後^に. 肝 臓^の生 検ま た は摘 出を行な^い.た だ ちに10 % ^{ホ ルマ} リ

ン液^で固定 後^{パ ラ フ}ィ ン切 片を作 製し, アザ^ン染色な

ら びに^へ マ トキシ^Ij ^{ン･ エ} オ ジ^ン染 色を行な^い, 組 織 学 的 検 索^に供し た^.

Ⅲ. 実験 成 績 1^. 白血 球 数^の変 動 ( 図1)

結教後4週 日ま で毎週 白血 球を測 定_{し え た 8}頭 を 対 照 群と し た･ 対 照群の白 血球 数^の経 時 的 推 移は, 結繋 前 値を ^一定^に保^って変 動 を 示^{さ な かっ た.} し か し^. 感 ^{札 ㈹} 染 群^では結 染 後¹ 週 目よ り著 明な白 血 球 増 多を認 め･ 2過^でさ らに増 加し以 後 高値を保っ た. 各 時 期^で

の対顔 群と感 染 群^の白 血 球 数は,結染前 値で1 1,90 0 ± ^{t O･輌} 1･000 と 1 1.000 ^±500 (^{n =} 19 ) 結染後1 過で は 1 2 ^･3 0 0 ±1 ,500 _{と 1}9,400 ±2,200 (n ⁼ 9 ^, P <

0^･0₅). 2 過 後^で は 12.300 ±1,400 と22 ^,600 ^± 3･60 0 (n ⁼⁼ 1 1, P < 0 .0₅) , 3濁では 12 ,1 0 0 ± 2_,4 0 0 と2₁,600 ±2 .200 (^{n =} 5^, P < 0.05 )^であ り感 染 群 ^に有 意^の 白血 球 増 多を 認 め た が. 4 過^で はt 13 ･5 00 ± 3.3 0 0 と 23 ^,300 ±5 ,7 0 0(n ⁼ 4)と高 値を み た が有意^の差は み ら れ な かった^.

2. 血 祭生 化 学 的 換 査

○ 書

i) 黄痘指 数 ( 図 2 )

血 発 生 化学 的検 査 会 般^を結数後4過まで経 時 的^に追 跡し え た 10 頭を対 照群と し た^.対 照 群^の黄痘 指 数^の経 ^坤 時 的 推 移は, 結集後3 週 目まで漸 時 増 加し, 3 週 間 後

に Peak を 認 め, 4過^では や や低 下し た^.感染 群^でほ結 的

染後1 過 日で対 照 群に此し急 峻な上 昇を認め, そ れ以 後は高 値 を保^っ た ま ま で あった. 各 時期^{で の}対 照 群と 感 染 群の黄痘 指 数は結染前 値で2 ^.5 ±0 .1 9 と 2.2 ±

t 0

0 ^･20 (^{n ==} 20 ) ^, 結染後1 週で は, 19 ^.9 ± 2.35 と 26 ^･8 ±3^.0 (^{n = 1 1})^, 2 過 後で は.24^.8 ± 1^.7 4 と 2 5‑5 ±3.06 (^{n =} 1 2) ^, 3 過^で は29.8 ±3.1 と 26 ^･0 ± 5^.1 (^{n =} 6 ), 4過では 2 8.1 ±3^.7 と27^.4

t t 暮 ■ ■●●l■

l l l I ● ( )^一弘 p^.H.

図1 ^･ 胆 管 閉塞後^の白 血球 数の変動

H ら

t t ■ ● ■_●■■

岬 O I 仰 II I ( I 咄 .札

図2･ 過 管 閉 塞後の黄 痘 指数

表1 M A O 測 定 法

2

2 3.0

閉塞 性 黄 晴に関する実 験 的研 究

± 4^.3(^{n =} 5) ^であ り,結教後1過^で感 染群^の黄 痘 指 数は対 顔群^に比し高値を認め た が両 群 間^の推計 学 的有 意差は得ら れ な か^った^･

2 ) 血 清総 ｢^ビ｣ 値 ( 図3)

対照群^の血清 総 ｢ ^ビ｣ 値^の推 移は. 結繁4週まで漸 時増加^を続け た. しか し,感 染群で は結集後1週で急 峻 な上昇な ら び^にPe ak を 認 め^, 2 週 以後は や や低 下し て平坦 化を示し た^. 各 時 期で の対 照群と感 染群^の血 清 総 ｢ ^ビ｣値は,結熟^{前 値で0･1 1 ±0 ･01m g /別 と0 ･1 2}

±8^.01m g /別 (n ⁼ 1 9)^, 結染後1 過^では3 ^･16 ± 0^.35^m g /d L と 4^.87 ^±0^.66^m g /d L (^{n =} 1 1, P ^<

0^.05)^, 2過 後^で は 4^･07 ±0.2 7m g /朗 と 4･31 ±

= 3^m g/ d ヱ(^{n =} 1 4) ^.3 過では 4^.56 ± 0^.7 1^m g /山 と 4^.7 3 ±0.9 7^m g /別 (n ⁼ 6 ) ^{,4 過 で は 4.87 ±}

S^.T ■■ ■絹r 血

t t ● ■ ■●■l●

ll t 暮 ♭ l ( )叫 む ■.札

図3 . 胆 管閉塞 後^の総 ｢ ^ビ｣ 値

量 ● ■ ■‑●

一叩 叩 q l l l l l ll ( ^:〉叫 む ■^.札

図4^･ 胆管閉 塞 後^の直 ｢ ^ビ_｣ 値^/ 総｢ ^ビ｣ 値 比

50 1

0^.66m g /d L と 4^.49 ±0.70 m g /d L(^{n =} 5 ) ^であ り.

結繋 後1 過^で感 染群^の血 清総 ｢ ^ビ_｣ 値は, 対 照 群に比 し有 意^の差で高 値を示し, 結染後^の急 峻な上 昇 を 認め た^.

血 清 直 ｢ ^ビ｣ 値と血清 絵 ｢ ^ビ_｣ 値^の比は, 結 染 前^の 0.4 5 ± 0.07 と0.40 ±0 ^.04(n ⁼ 16 )^に比^べ結染後 1過で は0.78 ± 0^.02 と0 .7 4 ±0.02 (^{n =} 12 ) と両 群と も急激^に上 昇 する が, 4過まで0 .76 前 後^{と は ば}

一定^に保た れ両 群 間に は全 経 過を通じて有 意^の差は み ら れ な か^った^.( 図4)

3) ^{A l‑}P 値 ( 図⁵)

対照 群^の閉塞 期 間によ る A トP 慮^の推移は. 結繋後 2 凋 ま^で上 昇を^つづ け, 4過ま で は横 道い を示し た が, 感染 群^で は結染後1 週^にて対照 群^に比^べ高値を示

‡ ^{‑ ‑ ‑ ■ ‑● 一}

間 椚 ㈱ 仲 川 ( I 伽札

図5^. 胆管 閉塞 後^の A トP

t ■ ● ■ ■‑▲●

柑l 桐 仙 ( I) ( ) 叫 .札

図 6 ^. 胆管 閉塞 後の γ^･G T P