特 核 代 ) 酸黄白 謝 黄 痘肝 除 後 肝 再 関す 実験的研究( 生

38 2 金沢 大 学十 全 医 学 会 雑誌 第8 9巻 第3号 3 8 2 ^叫40 2 (19 80)

黄痘 肝^切除後^の肝再生 に関 す^る実 験 的研 究 ( 特^に核酸 黄 白代謝 ^{に つ い て})

金沢大 学 第二外 科 教 室(主 任^: 宮 崎逸 未教 授)

楊 伯 仁

( 昭和^{5 5}年⁵ 月^{2 9}日受 付)

本論 文^の要 旨は, 第1 5回 日本消化器外科 学 全 総 合に於いて発表 し た｡

近 年, 肝 切 除^の手 術 手 技 並びに術 後 管理技 術^の向上

によって_,広 範 肝 切 除 術が広く行な わ れ る よ うにな りt

胆嚢 癌, 肝 門 郡 癌な どの黄 痘を伴う患 者^に対し^ても肝 切 除を必 要とする機 会が増えつ つあ る^{= 引. こ の}よ う な 閉塞 性黄 痘肝^{に対 する肝 切 除 限 界に関しては未 解 決の} 問 題が多 く, 残 存 肝^の機 能を解 明 すること は重 要な課 題^であ る^.

肝 切除 後^の病 態に関しては先 ず 19 31･^{年H igg in s 及}

び A nde r s o n⁸⁾が簡 易なラッ ト肝 大量 切 除 法を紹 介し

た以後. 数 多^くの研 究 結 果が報 告さ れ^{て い} る. す な わ ち肝 葉^{の 一} 部を切除す る と残 存 肝^では肝 細 胞増 殖 促 進 物 質と抑 制物 質^{の バ ラ ン ス}が失わ れ,D N A 合成^,R N A 合 成, 蛋 白合 成な ど が盛ん と な りt 肝 細 胞^の分 裂が著

し く冗進し^{4 1}. ミ トコ ン ドリア の機能 冗 進が関 与して い る^こと が判 明し た^{印. 一} 方, 胆 汁 う^っ滞に よ る黄 痘 肝 で は, どリ^{ル ビン}又 は胆 汁 酸^によ り, 肝ミ ト^{コ ン} ドリ ア膜が強く障 害さ れ, 肝^ミトコ ン ド リ^ア機 能は低 下す る と報 告さ れて いる^{T 卜 川.} し か しこ の よ う な黄 痘 肝^に 肝 切 除を加え た際^の残 存 肝^の再 生^に つ い て は, いま だ 不 明な点が多く,特^に残 存 肝^にお け る核 酸,蛋白合 成 能

と肝 機能^の経 時 的推 移^に関す る報 告は み ら れ ない.

そこ で著 者は閉塞 性 黄 痘 肝 切 除 後^の残 存 肝^にお け る 再 生 状 態, 肝 細 胞機 能^を把 握 する た め, 閉 塞 性 黄痘ラ ットを作 成し, 70 % 肝切 除を行^い, 肝 再 生^の急 性 期^川

にお け る残 存 肝^の肝 内核 酸, 蛋 白 含量 を経 時 的に測 定 し.ま た³ H ^‑ T hymi d in e .

3H q ^{Le u c}in eを 用い て.

肝D N A 合 成 活 性,肝 蛋 白 合 成 活 性を測 定し た.更^に黄 痘 肝 切 除 前 後^の肝 組織 標 本を作 成し, 肝 細 胞 再 生^の状 態を検 討し た^. 又. 血液 ^一 般 肝 機 能 検 査及 び^どタミン

Kl 負 荷^{へ パ} プラ ス チ ンテ ス トな どの臨 床 的 検 査^に よ

り, 肝 切 除 後^の残 存 肝 機 能を検 討す る と ともに, 更^に 血 清^{ミ トコ ン} ド リア G O T を測 定し, 肝ミ ト^{コ ン} ド リ ア機 能と^の関連 性を検討し た^. そ^の結 果, 閉 塞性 黄垣 肝 切 除 後^の残 存 肝にお け る核 酸. 蛋 白 合 成 能 及び肝細 胞 機 能 面で興 味あ る知 見を得たの で報 告す る^.

材 料お よ び方 法 1 ^. 実 験 動 物

実 験 動 物と して_, 体 重230 ^〜330g の雄性^ウイ スタ

ー 系^ラッ トを 用^い. 室 温2 5 ^±1 ℃, 湿 度5 5 ^±5 % ^の

環境 下^に自 動 給 水^, C R F ‑ ¹ 固型 飼 料^で飼育し た. 実 験 動 物 群^の作 成は術 前約2 4時 間^の絶 食 後,

エ ー テル麻

酔^によ り, 表1 の如く, 次^の実 験 動 物 群を作 成し た^. 1) 正 常 肝 切 群^: まず 単 開 腹を行^い. 単 開腹 後7 日目 迄を術 前, 7 日目^に肝 切 除を行ないその後を術 後 と し た^. 肝 切 除は H ig gin s^･Ande r s o n の方 法^によ り,

約7 0 % ^の肝 切 除を行な^った^.

2 ) 黄 痕 群: ま ず総 胆 管を 2 垂 結 賀し. 総 胆 管及 び肝 十二指 腸 間 膜を切 離す る^ことによ り閉 塞 性黄痕 を 作 成し. 作 成 後7 日目^に単 開 腹を行な^っ た^. 単開 腹前 を術 前と し^, 単 開 腹 後を術 後と し た.

3) 黄 痘肝 切 群^: 以上と同 様^に閉 塞 性 竜也 を作成 し, 作 成後7 日目^に肝 切 除を行なっ た. 肝 切 除 前を術 前と し, 肝 切 除 後を術 後と し た^.

以上3群^の何れ も感 染及 び癒 着^を予防す る た^め, 術 中^に A m picillinl O Omgを腹腔 内に注 入し た.実 験 動物 群 作 成 後^, 以下^の検 索を行な^っ た.

2^. 血 液 ^一般肝機 能検 査

無 処 置群と正 常 肝 切 軋 黄 垣 群^. 黄 痘 肝 切 群^の術前 及び術 後^の1 臥 3 日^, 7 日目^に, 前日 か ら約2 4時間

A Stud_y of L iv e r R eg^{e n e r a}tio n afte rPa rtial Hep^ate cto myinJ^{a u ndic ed Rats}, With S_pe cial Refe r e n c e to N u cleic Acid a nd Pr otein S_ynthe sis. P o R e n Y a ng^, D ep^{a r}tm e ntof Su rg^{e r}y I I^,

(^{D ir e cto r :Pr of.I. M i}y^{a z a}ki),S ch o ol of M edicin e, K a n a z aふa u niv e r si_{t y}^.

貴 痘肝 切 除後の肝再 生

表1 実験 動 物作 成

正 常 肝 切 群 単 開 腹･一 ･･ ^{7 0 %}肝 切 除 ･･ ^{1 日} ････^{2【 ト}･^3【l ‑▲^7日

黄 匡 群 胆 管結繋 ^{‑ ‑ ‑ ‑ ‑ ‑ 一} 単 開 腹^‑一一1 日^{‑‑ ‑}2r トー^ー3【▲l ^{‑ 一 ‑ ‑ ‑ ‑ ‑ ‑} 7日 黄掩 肝 切群 胆管結 繋 ^{‑ ‑ ‑ ‑ 一 一 ‑} 7 0% 肝 切除 ^{‑ 1} 日 ^{‑ 2} 日 ^̲ 3 日

0 7日目 8日日 9用1 こ抑 酎 I 14日目

絶食後^{, エ ー テル}麻 酔 下で開腹し, 速や かに腹 大 動 脈 よ り採 血を行^い, 以下^の検 査^に供し た^.

1) 血 清絵^ビリ^ル ビン値 (J^{e n}dr a s si k^,C legho r n

法)

2) 血 清 総 蛋白 量 (B iu r et法)

3) 蛋白 分 画 ( 電 気 泳 動 法^{, セ ル ロ ー} ズ ア セ テ ^ー ト膜)

4) 血 清G lutami c o xalo a c etic tr a n s amin a s e 活 性 値 (U V 法): 以下G O T と略 す^.

5) 血 清G lut_ami c p yr u vic tr a n s a min a s e 活 性 値 (U V 法)^: 以下G P T と略す^.

6) 血 清A l kalin e pho sphata s e 活 性 値(K ind ^‑ K ing 法): 以下A L P 値と略す^.

3. 肝^の組 織 学 的 検 査

採血を行な^っ た後^, 肝^{の 一}部を取り, 1 0 % ホル マリ

ン液^で固 定し^, Maye rの へ マ トキシリン液^によ り,

へ

マトキ^シリ^{ン ･ エ} オジン染 色を行^い, 組 織 学 的 検 討^に 供し た･ 更^に肝^{の 一}部を取り^, 凍 結 切 片を作 成し,

Suda n Ⅲによ り, 脂 肪 染色を行なっ た.

4^･ 肝の核酸 お よ び蛋 白^の化 学 的 定量

残^っ た肝 臓を冷 生 食 水^{に て} よ く洗 醸し, ろ紙^で十 分

に水分を吸^い取り, 手 早く温 室量^の4 倍量^の冷 生 食水 を加え,テフ ロ ン ホ モ ジ ナ イ ザ ^ー で20 % 肝ホ モ ジネ ^ー

トを作 成す る. Schmi dt^‑T ha n nha u s e r^‑Schn ei de r

法^{1 2 卜川}に若干^の変 更を加えて, 表2 ^の如く, 核 酸^, 蛋

白を抽 出し^･Bu rto n 法^{1 5 ,}, Or cin ol 法^{1 6 }},Lo w ry^{1 7)}法

によ り De o xyri bo n u cleic a ci d ( 以下D N A と略す) ,

R i bo n u cleic a ci d (以下R N A と略す) と蛋 白^の含量 を測定し た.

5･ 肝 I) N A ^への⁹ H^･T hymidin e の取 込 畳 及び肝 蛋 白^への³ H^‑k u cin e の取 込 畳測 定

3 8 3

表2 Sch mi dt^‑T ha n nha tlS e r^‑Schn eide r 法に よ る 肝 核 酸 蛋 白の抽 出

冷 生 食20 %肝ホモジネ^ート 1∬J 冷1 0 % P C A 3.0鱒J 水 冷1 0分 後

℃ 遠 心 ( 川.0 0 0 ^rp^t¶.1 0分 )

上 帝 ( 戯 可 溶性 分 顔 )

上帝

(Or 亡in ol法lこよ るR N A定 塁 )

0.5N K U Ii 4.0書J 37℃で 1 6^､ 訟 時 間 放置 水 冷

coれ C^･R C lO.2∬J lO% P C A 4.0■J 混和 後､ 氷蘭で 10 分 間 放 置

Oc藩 心 (I O.0 0 0^rpm.10 分)

3.5 % P C A 3.伽J

沸と う水中 1 5 分 間放置 水冷

上㌃ + 沈ヰ^釦

(1 0,000rp 叫 川分)

(8ur t o n勤こよ るD N A定盤) (^Lowry法によ ろ 鮮自定 量 )

新たに無 処 置 群と正常 肝 切 群^. 黄 痕 群∴黄痕 肝 切 群

の術 前及 び術 後1 日, 2 日, 3 日目^に前日 か ら約2 4 時 間^の絶 食を行な^い, 屠 殺2 時 間 前^に 股 静 脈 よ り

〔M eth_yト³H〕T h_ymi d in e( 4 8 Cu ries/_{m m o}l) 又 は L^‑

〔4.5^･3H 〕Le u cin e(5 2 Cu rie s/ m m ol) を 8F^LC i/1 0 0g

体 重 注 射し^, 2 時 間 後, 肝 臓を採 取し た. 表 3 ^の如く,

D N A ,蛋 白を抽 出し, グラス フ ィ ルタ ^ー 上に補 集して アロ カL S C^‑67 1 の液 体^{シンチレショ ン カ ウ ン} タ ^ー で

測 定し. 肝D N A ,蛋 白^への取 込み放射 活 性を肝 湿 重量

3 8 4

1g あ た り^で示し た. 更^に,正 常 肝 切 群及 び黄 虹 肝 切 群

の術 後1 日目^の肝 切片を用^{い て}Auto r ad iogr aphy に よ り. T hymi d in e取 込^の状 態を検 討し た.

6^. ビ タ ミン K^l 負 荷^ヘパブラ^スチ^ンテ^スト及 び 血 清ミ ト^{コ ン}ド リア G O T ^の測 定

更^に無 処 置 群と 正常 肝 切 群^, 黄 痘 群, 黄 痘 肝 切 群^の 術前 及び術後^{1 日,} 3 日. 7 日目^に前日 か ら約 24 時 間

の絶 食を行な^い, 屠殺 8 時 間前^{に ど}タミン K11 mg筋 注

表3 ⁸H^‑T h ym idin e 又 は^‑Le u cin e の肝 ^{D N A} 又 は蛋白への取込量 測 定法

冷 生食2 0 % 肝 ホ^{モ ジ}ネ^ート 1■′ 冷10% T C A 3.0耳J

氷冷10 分後

O

c遠 心 ( 1 0.0 0 0^rp 叫 10 分 )

上 槽 沈 織

(酸可溶 性 分 繭 ) 0.5 N K O H 4.0■J 3 7^●c でほ^〜2 0 時 間 放 頗

水 冷

e o n e,H Cゼ0^.2■J lO% T C A 4.0^∫J 混 和

‑^{20̀c で 1日併 存}

i 室 温で融静 後^､ 氷 冷

1

24 仰 W もatman グ ラ^スロ紙で炉過

冷5 % T C Aで 3回洗 職

乾燥 後､5∫′ トルエン､ シンテレタ^一 に て放 射 楢 性 軸足

し,8 時 間 後, エ ^ー テル麻 酔 下^で開腹し,以下^の検 査を 行なっ た.

1) ^{ビ タ ミ ン} Kl 負荷^{へ パ}ブラ ス チ ン テ ス ト(以 下 K H P T と略す):

あ ら か じ め 1 容 量^の抗 凝 固 剤 (3^.8 % ク^エ ン酸ナ ト リウム)を入れ た^シリ^{コ ン}処理 ガラ ス真 空 管を用^い.

下 大 静 脈よ り9 容 量^の血 液を採 取し,測 定^に供し た.

測 定は あ ら か じ め調 整さ れ た^{へ パ} ブラ ス テ ンテ ス ト

用 試 薬 ( ^{エ ー ザ イ}) 0^.2 5 山 を ガラ ス試 験 管 (0.8 ^× 6 c Ⅲ) に入れ,37 ℃恒 温 槽 内で約5分 間 加 温後, 採 血し た静 脈 血^の血 栄0^.0 1 0 mエを加え,混 和 後 37 ℃で 2 0秒 静 置 後, 室 温で凝 固 時 間を測 定し た. っい で各

ロ ッ ト毎に添 付さ れ^{て い}る標 準 曲 線か ら対 応す る活 性 値を読み, ヘマ ト クリッ ト値^によ る補正を行なっ

た^.

2 ) 血 清^{ミ トコ ン ド}リアG O T (以下 ^{m ‑}G O T と略 す) ^の測 定:

腹 大 動 脈よ り血 液を採 取し, 血 清を分 離して, 測定

に供し た. 測 定は G O T is o zym e che mipha r(カラ ム法) ^によ り^,S‑G O T を 吸着さ せ,未 吸 着 分 画^の m ^･

G O T を溶 出し, m ^･G O T 活 性を測 定し た. 別に通常

の方 法^によ り総G O T 活 性を測 定し,m ^‑G O T 活性 値 を差し引き. s^‑G O T 活 性 値を求め更^{に m ･}G O T ,S^‑

G O T 比を算 出し た^.

成 梼

1 . 血液 ^一般肝機 能^: ( 表4)

表4 術 前, 術 後にお け る血 紫 蛋 白及び肝 機 能の変 動

R it in山言Il rrtItt^､i】l A l lIl ll l liil αl + ♂2 β r

A/ G ^{0 0 T 0 Ⅰ}

>T A I‑ ^P

呼/′甘｢ ^′l^､o L 81 乳♂ ダ//ガ/ タ/〃J タ /祝 タ/〃J Ⅹ U K U K A

附

前

無 処 設 群 ^{0 2 6 6 4 0 3.8 8 0.9 3 0}

.4 4 1.1 4 1,5 6 9 5.0 0 1 3.0 0 2 0

.^{4 2}

土江0 9 三0:3 2 士0^.1 8 土0.0 8 土0.0 6 土0.2 4 1 0.24 ±29.7 3 ± 2.^{0 0 ± 5}.^{4 1}

単 開 腹7 日 目 ^{0 2 4 8 Ⅰ6 3.4 0 l.0 9 0.5 0 1.1 6 1}

.2 3 8 2.6 0 1 Ⅰ.2 0 1 3,9 4

±0二0 9 土0:2 4 土0.25 工0^.1 1 ±0^.0 6 土0.0 8 土0.1 3 士21.7 0 エ 3^.1 1 ユ 1.83 董痘 作 成7 日 日 ^{1 2 1}4 5.8 2 2.78 0.81 0.4 5 1.78 0,9 1 3 5 l.20 40^.4 3 1.2 8

±1:2 1 ±0.^{Ⅰ6 土0}.^{0 7 ±0.1 1 土0.1 3 ±0}.^{1 6 ±0.0 6 ±1 8 8}.^{42 ±2 1.4 7 ± 7.18}

的

後 正 常

1 L】 と･^{l 0 5 4 5 2 6 28 7 0.9 9 0}.^{3 7 1.02 1}.^{2 0 5 0 l.4 0 1 4 5.2 0 2 3.6 0}

士0:0 9 土0:^{0 6} 土0:03 t O.0 4 ±0.0 4 土0.0 5 ±0^.0 3 ± 80.8 6 ±27.6 2 ± 4,92

3 Ⅰ】 H ⁰28 5 2 8 292 0 7 0 0.4 7 1.1 2 1.2 3 1 9 5.6 0 1 7.4 0 4 0.9 4

肝

切 ^{1 0}:⁰8 ±0二22 土0二1 9 土0二1 7 ±0.2 0 ±0.3 9 士0.1 3 ± 92.81 土 7.5 0 J l O^.6 7

7 1 ｣ 臼 ^{0 3 4 5 6 9} 3 24 0 6 6 0.39 1.3 8 1

.^{3 3 1 4 0,8 0 21}.^{8 0 2 6.4 0}

群 _{土 0}ニ1 1 王0:1 6 ニ0:2 0 土0こ08 _⊥0.1 2 ±0,21 士0.1 5 ± 5 7.6 4 ヱ1 1^.5 0 ± g.6 5 董

同

1 L】 臼 ₊97 8 4 6 8 2.3 l 0.7 1 0.39 1.2 6 0.^{98 485.6 0 4 5.6 0 2 8.5 4}

豆7 0 ±0:45 土0.^{2 1 士0.1 0 ±0.0 6 ±0}.^{1 6 士0.09 ±33.3 2}.^{ナ1 5.5 2 ± 6.60}

3 Ll = ^{9 0 7 4 4 6} 21 7 0 6 0 037 1^.31 ●^●● 134 1.6 0 8 2.2 0 3 8.^{9 6}

即

切 ^±夏5 7 士0:71 土0:4 0 ま0:1 4 ±0コ2 土0.3 3 土0,1 9 ±74 7.3_{1 土}3 8.1 6 土 7.3 8

7 L 】 ‖ ^{8 7}2 5 1 6 21 9 0 75 0 43 1 7 9 0.7 5 1 1 4 9.^{60 1 2 3.4 0 3 7,4 4}

即 薫 痘 群

ちL 6 3 ±0二4 2 10:^{30 士0}:12 土0:08 土0:2 9 士0.1 7 士2 2 8.83 土7 5.35 ± 7.5 7 1 日 f 】 ^{1 0}_!2二3₄4_{a ±0}5.6 6 2.3了 1.1 2 0.5 5 1.60 0.^{72 576.6 0 6 6.20 34.1 4}

,2 8 ±0.18 ^】0.0 7 ^{● ●●} 土0.1 3 土0.0 4 三20(),4 6 土35.0 2 土13.4 9

3 日 H ^{1 1 4 4 5 T 8} 2.5 4 0.91 0^.5 4 1.7 7 0.7 9 5 6 3

.^{6 0 52.20 2 9.84}

土3:2 l･ ^{土0二6 1 土0.26 †0.1 5 ±0.1 2 ±0.31 二!0.07 ±2 4 1.58 ±31}.^{7 8}･ ^{± 7,0 7}

7 【1 日 ¹_±12 2_:1T6･ _士0^{5 5 6}_二49 土0^a.^{4 1}2 T t O^0..^{9 5}15 ±0^0..⁴1 1² ±8^{1.7 7}.17･ ^{士00.7 6.0 8 ±4 06 6 08,2 0.88 二±14 58.4 0,9 7 土1 328.,21 01}

n =

5. M e a n ^† S D