閉塞性黄痘 白 合成 関す 実験的研究 肝蛋

金沢大学 十全 医学^会雑誌 第91巻 第1号 2 03‑2 1 8 (1 98 2)

閉塞 性 黄 痘 ^{に お ける} 肝 蛋白合 成 ^に関 す^る実 験 的研 究

2 0 3

･

‥

･｢

.

■ .

金 沢 大学 医 学 部 外 科学 第二講種 ( 主 任: 宮崎逸大数 授)

磯 部 芳 彰

( 岬聞昭⁷年¹ =^{2 1}日受付 )

閉塞 性 黄痘の ア^ルブミ ン およ び肝 蛋 白 合成に およ ぽ す影 響^を, ラット を 用^い実 験 的^に検 討し た. 体 重約2 0 0g のウイ スタ ^ー 系 雄^ラットの総胆 管を結 紫し た ものを閉 塞性 発症 瓢 単 開腹 術を行^った も の を対照 群と し た^. 術 後1 週 目に, 両 群のラット腹 腔 内にⅧ ト ^ロイ^{シ ン}(1 00 〟Ci) を投与^し, 1 0 分か ら 1 2 0 分の間

に経時 的^にラッ ト を屠 殺し, 肝を採 取し た. ホ モ ジ ナ イ ズ し た肝^の蛋 白お よ ぴ P C A 可溶 性 分 画お よ び不溶 性分画^{の3Ⅰト ロイシ ン の}測 定を行^っ た. 次^に細胞 分 画を行^い, 核, ミ ト^コ ンド リ ア, マイ ク^ロゾ^ー ム_, 上 清 分画を子乳 各分 画^{に つ い}て蛋 白お よ び³Ⅰト ^ロイシ ン の放射 活 性 を測 定し た.

3Ⅰト ^ロイシ ンの放射 溶 性はマイ ク^ロゾ^ーム分画^に最も多く み ら れ た^.肝ホ^モジ ネ ^ー ト蛋 白 中^の3H ^一口イ^{シ ン}放 射 活 性は 3 0分で ピ^ー クに達 する が, ピ^ー ク時^の放 射 活性は閉 塞 性 爵痘 群で は対 照 群に比し有意^に低 値を 示 し た^. 同様^の傾 向は^マイ ク

ロゾ^ー ムお よ び ミ ト^コンド リ ア分 画で著 明^に認め ら れ た. し か し,j乳 上清 分画で は 3 0分^{で の}ピ^ー ク は認 め られず, ま た,

3H一^{口イシ ン の取り込みにも}両 群^に羞は認め ら れ な^かった. これによ り, 閉塞 性 発症 群^に お^いて は^マイ^クロ ゾ^ー ムで の分泌蛋 白 合 成が障 害さ れ ていること が 示唆さ れ た. マイ ク^ロ ゾ^ー ム の いか な る蛋白中^に3日一^{口イシ ンが}取り込ま れ て^いる か を分 析す る た め に,マイ ク^ロゾ^ー ムD O C 可溶 性 分 画を U ltr o

‑gel AcA 5 4 で ゲ^ルカ ラムク^{ロ マ} トグラフ ィ ^ー を行^い, 4 つ の放射 活 性の ピ^ー ク が得ら れ た. 第1 のピ^ー ク は^マイ^クロ ゾ^ー ム の膜 蛋 白と考え ら れ, 第2 のピ^ー ク は S D S 電 気泳 動で確認さ れ た が, マイ ク^ロゾ^ーム ア^ルブ ミン に取り込ま れ た 唱 放 射 活性で あ^っ た^. 第3 の ピ^ー ク は分子量1 8,0 0 0, 等 電 点5 ^.5 の蛋白(18 K pr otein) の³H 放 射活 性であ^った. 第4 のピ^ー ク は遊 離の³H ^‑ロイシ ンに よ る も の であった.

マイ ク^ロゾ^ー

ムア^ルブ ミン に取り 込 ま れ た³H ^一口イシ ンは, 閉 塞性 黄 痘 群で は対 照群に比し低 値を 示 し, 1 8 K _pr otein の唱 放 射活 性は閉 塞 性 黄痘 群で は認め ら れ な か^った. ま た, 血清アルブミ ン^ヘの 唱‑^{ロイシ ン の取り 込 み}

は, 閉塞 性黄痘 群^では対 照群^に比^べ低 下し て^いた. 以 上の結 果^によ り, 閉塞 性 発 癌肝で は, 肝 構 成蛋白の

合成能は比 較 的保 持^{さ れ ている が}, アルブ ミンの合 成能は障 害さ れ て^いる と結 論さ れ た.

Ⅸey ^{w or}ds Pr otein syⁿthe sis, O bstr uctiv ej^{a u ndic e}, Rat liv e r_,

A lbu mi n syⁿthe sis.

従来, 閉塞性 黄痘^にお け る肝 障 害^の重 症 度は, ト ラ

ンスア ミ ナ ^ー ゼ値な どの経 時 的な測定を指 標と し て判 定され て き た が¹⁾,閉塞 性 黄 痘 時にはこれ らⅥ^一般 的な肝 細胞機能検 査で は 正常も しくは軽度 異 常^にと ど ま る も のが多^い, し か し, 手術 侵 襲によ り容 易に肝 不 全^に陥 る症例も稀で は な く, 単な る肝機 能 検 査で は手 術を前 程とし た閉塞性 黄痘 時^の肝予備 能の把 握には不 充 分で ある^{2 】}. そこで 近年, 閉塞 性 黄 痘にお け る肝^の機 能 的予 備力の判定^には, 多くめ斬ら しい工夫が な さ れ て^いる が^肘),肝の持^つ最も重 要な機 能の ひ と^つで あ る アルブ

ミ ン合成^についての知 見は, いま な^お充分と は^いえ な

し^ゝ.血 清アルブミ ンは肝で合 成^{さ れ8卜1 2)},し か も血 清 蛋 白^のう ち で 量的にも機 能 的^にも重 要な蛋白 質で, 閉 塞 性 黄痘にお^いて その合 成 能を知る^こと は, 閉 塞性 糞 痘 肝^の機 能 的予備 力の判 定にき わ め て有用 と考え ら れ る が, 閉 塞 性 黄痘 肝^にお け る ア^ルブ ミ^ン合成 能は, 種^々

の要因^によって影 響を 受 け る た め^{1 3卜3 1)}, その動 態^に関 し^ては‑^一定の見 解^が侍ら え ていな^い. そ^こで著 者は,

これ ら諸種^の要 因を で き る だ け除 外^し, 食 餌摂 取 乱 血 中遊 離ア ミ^ノ酸 濃度な どが対 照と ほ ぼ同^一 な実験 系

S_ynthe sis in R at L iv er･ Y o shiak i Is obe,

Influ e n c e of O bstr u ctiv eJa n nd ic e o n Pr ｡tein

Dep^{a r}tm e nt of Su rg^{e r}y(^II),(^{D ir e cto r ‥Pr of･ Ⅰ･}M i_ya z aki)^{, S cho ol of M e}d icin e_, Ka n aza^･ W a Univ ersi_{t y}.

2 0 4 磯

を作 製し, 閉 塞性 黄 症 肝^のア^ルブ ミン合 成 能を細胞^レ

ベ ルで検 討し, 二

, 三 の興 味^{あ る}知 見を得た の で報 告 す る.

材料お よ び方 法 1^. 実 験 動物と実験 群の作 製

実験 動 物に は オ リ^エ ンタル固形 飼 料お よ び水道 水^を 自 律摂 取 飼 育した体 重2 0 0g 前 後の ウイ スタ^ー系雄ラッ ト を用^いた. 閉塞 性 黄 痘は, ラット を^{エ ー} テ^ル麻酔 下 で開腹し,総 胆管を 6 ^‑0 ブレ^ー ド^{シ ル}ク で結勢後切 離 し, 両 断 端 を約0^.5c m 離し て作 製し た. 対 照と し て は 同 時に単 開腹し た も のを用^いた.

2^. 測 定 項 目 1) 食 事 摂 取 量 2) 体 重増 加 率 3) 血 清総ビ リ^ルビン値 4) 血 清ア^ルブ ミン値

5) 血 清お よ び肝 内遊 離ア ミ ノ酸

6) 肝ホモジ ネ^ー ト の⁸ロ ^ーロイシ ンの取り 込 み^. 7) 肝各細 胞 成 分に お け る R N A 含 量お よ び N A D^･

P H チ ト ク^{ロ ー ム} C 還元 酵 素 活 性.

8) 肝 各 細胞 成 分^への³H ^一口イ^{シ ン}の取 り込 み 9) ^マイ ク^ロ ゾ^{ー ム}D O C 可溶 性分 画のゲ^ルク^{ロ マ} ト

グ ラフ ィ ^ー 溶 出液 中の³H 放 射 活 性

1 0) ^マイ ク^ロ ゾ^ー ムD O C 可溶 性 分 画の S D S 電 気泳 動 ゲ^ルの³H 放 射 活 性

1 1) 血 清ア^ルブ ミ^ン中の³H ‑^ロイ^{シ ン}取り込み 3^. 試薬

1) 標識ア ミ ノ酸^: L ^‑〔⁴,5 ^{‑ 3}H〕^{ロイシ ン(4 0 ‑60}

C i/m m ol, T he Rad io che mic al c e ntr e :

Am e r sha m , 以 下³H ^一口イ^{ン ン}) 2) 細胞 分画に用^いら れ た溶 媒

i) M ed iu m A ^:0^.2 5 M 薦 糖, 1m M E D T A , 5

m M ト リ^ス塩 酸緩 衝 液 (pH 7^.5).

ii) M ed iu m B:0.3 5 M 蕉 糖, 3 5 m M K H C O3,

2 5 m M K C l, 4 m M M gC 12, 2 0 m M K2H P O4

(pH 7^.4).

iii) M edi^{u m} C^:0.1 M M _gC 12.

iv) M ed iu m D :3% デ オ キシコ ^ー ル酸ナ ト リ ウム

(D ifc o Labo r ato rie s製).

3) ゲ^ルク^{ロ マ} トグラフ ィ ^ー の綬 衝 液^:0.0 5 M リ^ン 敢緩 衝 液 (pH 7^.0).

4^{. a}F ^一口イシ ンの投 与 方 法

約1 6時 間絶食^{し た ラッ ト の腹 腔 内に生理食塩 水で 3} 倍に希 釈した^きH ^一口イ^{シ ン}1 0 0 _〝C i を0^.3ml 注入 し た.

採血は ^一定 時 間後, エ ^ー テ^ル麻 酔 下に開腹し, 腹 部 大 動脈よ り^エラ^スタ^ー 針^にて行^っ た^.

5. 細 胞 分 画 法

1) 肝^{ホ モ}ジ ネ^ー ト の作 製 法

in situ で冷 生理食 塩液3 0 ml で湾 流し た後 摘出した 肝を, 水 冷し た生理食塩 液を含む^{ビ ー} カ^ー に入れ, さ らに数 臥 同じ生理食塩 液で洗 浄し水冷 保存した. ホ モジ ナ イ ゼ ^{ー ション に}先 立^って･ まず 充分に水分を拭

って か ら肝組 織 全 体を鋏で細 切し, そ の う ち から湿重 量で 2^.5 g相 当を採 取し た^{. こ}の紙 切 片をまずポッタ^ー 塾の テ^フロンホモジ ナ イ ザ^ー で ホモジ ナイ ズし,Mediu m

A を加え, ホ モ ジ ネ^ー ト(H) を調 整し た.

Rat

1･p･ 1… ^{c七山 t hl O}り^{C l o￡}

J甘‑1色 u亡1n 抑 3 雨 ね1 1n e セ￠ rfロ g 8 Wl t h 8且1 1n￠

山v8r 2‑5 9

Ho 】 Ⅶge n止2e ln 7.5ml丁場d lⅧ lÅvまt b qlas8andtef lo n ho moqe nlz町

H_omog8nat￠ 【椚

centrl fu甲 a仁一O Oxq ねr l Oml_ロ･ a七 4^■亡

:

ニ

8up

Centrl fn9eat 叩 0)【9 fo r l (lmln.at 4^‑c

F ig^.1^. Fr a ctio n atio n of r at liv e r ho m og^{e n a}t_e labeled with ³H ^‑1e u cin e.M ediu m A c o ntain ed O.

2 5 M s u c r o s e,5 m M Tris H Cl pH 7,5 a nd lmM E D T A . H :ho m og^{e n ate,} N : n u Cle a r fr a ctio n,

Mt: mito cho ndrial fr a ctio n, M s : mic r o s o m al fr a ctio n,S : S upe r n ata ntfr a ctio n

川

手

も

D O C s 0lubi l iz ed mic r os o m al p^{r Ote}in

F i_g^.2^. Solub iliz atio n ofmic r o s om al pr otein swith

s od iu m de o xycholate(D O C)^{. M ediu m B c o ntain･}

ed O^.3 5 M s u c r o s e,3 5 ^m M K H C O3,2 5 m M K Cl･4 m M M gC 12 a nd 20 m M K2H P O4 pH 7^･4^･ M ed iu m C c o ntain ed O.1 M MgC 12･ Mediu m D

c o ntain ed 3 % D O C.

.=:

.. ..∴