汁分泌能 及 す影 響 染 閉塞性黄痘 関す 実験的 究 胆道感

金沢大 学十 全医 学 会 雑誌 第9 2巻 第2 号 2 3 7 ^‑25 1 (¹9 8 3) 23 7

閉塞 性 黄 痘^に関 す^る 実 験 的研究 ^とく ^に, 胆 道 感染^の

胆汁分 泌 能 ^に及^ぼす影響^{に つ い て}

金 沢 大学 医学部第2 外 科学 講座

東 野 義 信

( 昭和^{5 8} 年² 月1 4日受付 )

胆道 感 染が閉塞 性 黄痘 解 除 後の胆 汁 分泌 能^に及 ぼ す影響を雑種 成犬 を 用^いて検 討し た. 胆 道感 染 犬 は 胆嚢摘 除と胆 管 結勢 施 行後, 自 家十^二指 腸液を胆 管 内^に注入 す る^ことによ り作 成し た. こ の胆 道 感染 犬 は 屠殺 時 肉眼的に肝膿瘍がみら れ るか どう かによって, 軽 症お よ び重症 感 染 群^に分け た^. 対 照群には胆 嚢 摘除と胆 管結 染を行^い, 十^二指 腸 液の胆 管 内 注入 は行わ なかっ た^. m a n nitoI cle a r a n c e, bilir ubin U D P‑

glu c u r o nyltr a n sfe r a s e(以下U D P^‑G T と略) 活 性お よ び血 清^ビリ^ル ビン濃 度^を胆 管 結 熱後7 日 お よ び 1 4

日目に測 定し た. 肝組 織は m a n nitoI cle a r a n c e 測定 後^{た だ ちに}屠殺^し採 取し た. 重症 感 染 群^の m a n nitoI

cle a r a n c e は閉塞 後7 日^およ び 1 4 日目と も^に対 照 群と 比較し て解 除後6 時 間で は有 意^に低 値^であった. 閉

塞後1 4 日目で は軽 症感 染群^のU D P‑^{G T} 括性は対 照群と 比較し て解除 後6時 間で は高 値^であ^っ た が, 重症 感染 群で は低 値で あ^った. さ ら^に, 閉塞 期 間2週の犬 を用^いて解 除 後12 時間お よ び 24 時 間^にも同様の測 定を行^った. 軽 症 感 染群^{の m a n nitoIcl}e a r a n c e は対 照 群と 比較し^て低^い傾 向にあ^った が, そ の U D P ^‑G T 活性は高^い傾 向^にあ^った^. ま た, 重 症 感染 群の m a n nitoI cle a r a n c e は対照 群よ り有 意^に低 値^であ^った.

そのU D P‑^{G T} 活 性は対照群^に比較し^て解 除後1 2 時 間で は低かった が, 24 時間^では羞 意^{は なかった. こ の} 閉塞 解除 後2 4時 間ま で の感染 群^の減 黄率を対照群と 比較す る と, 軽 症感 染群で は 1 2時 間ま で, 重 症 感 染 群で は 2 4 時 間ま^で有 意に不良であ^った^. 以 上の結 果から, 閉塞 性 黄痘^に胆 道感 染が加わった場 合, 閉 塞 解 除後の胆 汁 分泌能, ことに毛 細 胆 管 胆 汁分 泌^に及 ぼ す影響は大き く, さ らにそのた めに黄痘が遷延す るこ と が 示唆さ れ た.

Key ^{w or}ds O bstructiv ej^{a undic e}, B iliary t^{r a c}t infe ction , B ile s e c r etio n,

B ilia ry ^{m a nn}itoI cle aranc e, B ilirub in U D P ^‑_{g l}u c u r o nyl tr ansfera s e a ctivi_{t y},

最近, 膵胆 道 系悪性 腫 瘍に対し て は広 範な リン パ節 郭清を伴な う根 治術 式が施 行さ れ る よ う^にな^った が¹⁾²⁾,

これ らの疾 患を有す る患者^の中^には閉 塞性 黄 痘を 呈 す る も^のが多い. こ のよ う な症例では術 前に十 分 減 黄を 計ること が術後 合 併症^の防止^に極め て有 効で あ り, 手

術成績の向上に直 結して いる^{3 ) 4 )}. しかし, 中^には ド }

ナ^ー ジのた めの確 実な胆 汁 路が得ら れ て^いるにもか か わら ず減黄 効果 が 悪 く, 黄 桓^の遷 延す る症例^にし ば し ば遭遇す る. こ のよ う な 症例の黄 痘 遷延因子につい て は永川 ら^{5 】}清水ら⁶⁾が胆道 感 染の重要な^こと を報 告して

いる が, Ha wtho r n e ら⁷⁾も白 色胆 汁を有し た症 例^で胆

道感 染が合 併し て^いた^こと を認めて いる.

胆 道感 染^の中^で, 急 性 閉塞 性 化膿性胆 管 炎は その代 表 的な疾 患で_, 肝に重篤な影 響^{を 及 ぼ し}, その予後は 不良で あ る^こと が知ら れ ている^8)9). し た が^って, 胆 道 感 染が閉 塞 性 黄痘 解 除 後^の減 黄効 果^に影響を 及 ぼ す可 能 性は当然予想さ れ る ところ で あ る. しかし, こ の病 態^につ いての研 究は新し く, な^お不明な点が少な く な

い. 教 室では胆 道 感染が閉 塞性 黄痘^に与え る影 響^につ

いて種々 の実 験を行^い, 胆 道感 染が加わった場 合の黄 垣 遷延 因 子^{の 1} つと して肝細 胞 内^の障 害と胆 汁 排泄 路

の障 害を指摘し た^川.

と^ころ^で, 胆 汁は その生成 部 位から 毛細 胆 管 胆 汁 (c a n alic ula rb ile) と胆 管 ( 細 胆 管) 胆 汁 (du ctal &

Influ e n c e of B ilia ry Tra ct Infe ctio n o n B ile S e c r etio n in Dog ^af_te r Rele a s ef^ro m O bs^‑ tr u ctiv e J^{aundic e. Yo shin ob11 H i}g^{a s}hin o_, Dep^{a r}tm e nt of Su rg^{e r}y (II)^{, Scho ol of M edi‑}

Cin e

, K a n aza w a U niv e r si t y^.

du ctula rbile) とに分け て考え ら れ て^いる^{1 1)1 2)}. 近年,

閉塞 性 貴痘 解 除 後^の胆 汁 分 泌能^{につ い}て も臨 床 的^に胆 汁 分析を行^い検 討し た報 告が散見さ れ る が^{1 3 ト 1 6)},胆 汁 分 泌機 構に言及 し て^いる も の は ほ と ん ど な く, 胆 道 感 染^の与え る影響^{に つ いて}の追 求は皆 無と^{い っ}て も過 言 で は な^い.

そ^こで, 著 者は黄 痘遷 延 因子 と し ての胆 道 感 染が胆 汁 分 泌 能^に及ぼ す影 響を知る目 的で, 実験 的^に感 染付 加 胆 道 結 染犬^を作成し, 胆 汁 分泌 能を知る指標と し て 毛 細胆 管 胆 汁 量を み る^こと のでき る m a n nitoI cle a^‑

r a n c e ( 以下 ^{m a n n.c}l^.と略) と ど リ^ルビン代謝^に重要

な Bilir ub in U D P^‑glu c u r o nyltr a n sfe r a s e(以下U D P

‑G T と略) 活性と を測定し,

一 般 生化 学 的 肝機 能 検 査

の推 移と も 比較検 討し, 若 干の興 味あ る知 見を得たの で報 告す る.

対 象^およ び方法

Ⅰ. 実験 動 物^およ び作 成法

体 重1 0 kg 前後^の雑 種 成犬 を使用 し た.麻 酔は初回塩 酸ケ タミ ン(keta min e H C l) を 1 2^.5 m g/kg皮 下 注し てから背 臥位^に固 定し, 以後チ オ^{ペ ン}タ^{ー ル}ナ ト リ ウ ム (^thiope nthals odiu m) 2 5 m g/ 回を静 注し て維 持し た^.

1 ^. 単純 胆 道 結染 犬の作 成 法

上腹 部正中切 開にて開腹し た. まず後 述す る m a n n.

cl^.測 定の 正確を期す た め胆 嚢 摘 除 術を行^い, つぎに十

二指腸 近 傍^にて総 胆管を切 開し て胆 汁 採 取 用^のア トム

静 脈カ テ^ー テ^ル(6 Fr e n ch siz e) を挿入 し た. そ の先

端を総 肝 管の位 置^で固定し た後,総 胆 管^を二重 結 致し,

そ の間を約5 m m 切除し た ものを対 照群と し た. 挿入 し た カ テ ^ー テ^ルは皮 下を通し て前 頸 部^に固 定し た^.

2 . 感 染 付加 胆 道 結熟 犬^の作 成 法

以 上の操作^に加え,自家 十^二指 腸 液0 .0 5 ml を その カ テ^ー テ^ルよ り注入 し た も^のを感 染 群と し た^. さ ら^に屠 殺時 肝^の各 実^に割を 入 れ, 肉眼 的^にそ^の割 面^に小膿瘍 が観 察さ れ た ものを重 症 感 染群, そ れ が観 察さ れ なか った も^の を軽症 感 染群と し た.

3 . 胆 道 閉塞^の解 除 方 法

前記の方 法で胆 管 内^に挿入固 定し て あった カ テ ^ー テ ルを解放し外痩と す ることによ り行^った^.

ⅠⅠ. 検 査項 目およ び方法 1 ^{. 一}般 血 液生 化 学 的検 査 法

胆 管 結 勢 前^およ び結 繁後1過, 2週 目に股 静 脈よ り 採血 し, ま た閉塞 解 除後^では 6 , 1 2, 2 4時 間目^に同様

に採血し て 以下^の測 定を行^った.

1) 血清総ビ リ^ルビン値 J^{e ndr a s sik}‑Clegh o r n 法^{2 5)} ( 以 下血 清 総 ^｢ ビ｣ 億と略)

2) 血 清alkalin e pho sphata s e 活 性値 K ing‑^{K in}g

法^Ⅰ7) (以下 血 清A L P 値と略)

3) 血清gluta mic o x alo a c etic tr a n s a min a s e活性

値 K a r me n 法^{1 8)}(以 下 血清G O T 値と略)

4) 血 清gluta mic p y^{r u v}ic tr a n s a min a s e惰性値 Ka r me n 法^{1 8)} (以下 血 清G P T 値と略)

2 . 胆 汁分泌能

胆 汁 分 泌能^の指 標と し て ^{m a n n. c}l.の測 定と U D P^‑ G T 活 性^の測 定を行^っ た. なお, これ らの測 定^に際して は･,胆 道 閉 塞後¹遇^およ び 2 過日^に1 2時 間^の絶食後前 記^の方 法で閉 塞解 除を行^い, 胆 管 内^の胆 汁を十分^に吸 引し生理食 塩 水で洗 浄し た. その後, 胆 汁流量 が安定 す る 6 時 間後^に測定し, これ を胆 道 閉塞1遇お よ び 2 週 目の実験犬^にお け る胆 汁 分 泌能と し た. ま た, これ

ら^の閉 塞解 除 後^の経 時 的推 移を み る た め, 閉塞2 週目

にお け る解 除犬について解 除 後1 2 時間^およ び 24 時間

にも同 様の測 定を行^った.

1) ^{m a n n.c}l^.の測 定

閉塞 解 除犬 を右側 臥 位^にし て硫 酸ア ト^ロピン(^{atr o･}

pin es ul_phate)0.5 m g 皮 下 注後, 少 量のチ オ^{ペ ン}タ^ー ルナ ト リ ウ^ムを 用^いて浅 麻 酔し, 2 0% ^{マ ニ} ト^ー ル(D^‑

m a n nitol)3 ml/k_g を右 肘 静 脈よ りo n eshot で静注し た^. 以後右 股 静 脈か ら 1 0, 20, 3 0, 3 5, 4 0, 45, 50,

5 5, 6 0 分^の各 時期^にヘパリ^ン処理 し た注 射 器^にて約2

ml 採 血し,胆 汁は^{マ ニ} ト^{ー ル}静 注 後30 分までは 2 分間 隔で, 3 0 分か ら は 5 分 間 隔^{で 6 0} 分ま^で採 取し た.

血 祭^およ び胆 汁 中^のマニト^{ー ル}濃 度^の測 定は斎 藤^{ら1 5)} が臨 床例で 用^いた T ib bliⁿg 法^{1 9 )に}従^っ た^. す な わ ち,

血奨^およ び胆 汁^の除 蛋 白を行^った後^に過^ヨウ素 酸カ リ ウム(pota s siu m pe riodate) ^にて酸化し, 生 じ たフ ォ ル ムア^ルデ^ヒド を ク^ロモト^ロ ピン酸 (⁴.5r^{d ihydr o xy}

2,7‑^{n a}phtale n e‑^{d is ulfo nic a cid}, dis odiu m s alt) ^に て発 色さ せ分 光 光 度 計を 用^いて 5 7 0 n m の波長^で吸光 度を測 定し た. そ して, あ ら^かじめ作 成し た検基線^に ょ り^{マ ニ} ト^{ー ル}濃度を求め た. 盲 検^には^{マ ニ}ト^ール投 与 前の血祭ま た は胆 汁を同 様^に処理 し た ものを 軌^､た.

マ ニ ト^{ー ル}漉 度 (^m g/dl) を縦 軸^に, 時 間( mi n) を 横 軸^にプ^ロ ッ ト す る と Boye r ら^{2 O )}が[^{1 J}C] ^{マ こ}ト^{ー ′[} を 用^いた場合と同様^の曲線が得ら れ た (図¹‑^{A, B ).} 胆 管^の死 腔を B^{a r}be r‑^{R iley2 1 )の方 法にて補正 し,補正} 胆 汁 量 (c o r r e cted bileflo w , 以下C B F と略) およ び 胆 汁/血祭マ ^ニ ト^{ー ル}濃 度比 (b il^e/pla s ma m a n nitol

r atio, 以下B/P 比 と略) を求め た^. 値は式^: C B F ^XB / P によ り求め ら れ,単 位は屠 殺 時測 定し た肝重̲^{釦) 1 0 0}

g あた りの分 時胆 汁量 す な わ ちJ^Ll/ mi n/1 0 0 gliv e rで 表示 し た.

2) b ilir ub in U P D ^‑glu c u r o nyl tr a n sfe r a s e活性^の

胆 道 感 染の胆 汁 分 泌能^に及ぼ す影響^{に つ い}て

( 一 勺

､ 鴎

∈

)

∈

〇 一

■ d ト } 已 じ り 亡 O U

一

〇

■ 両 仁 亡 霊エ 0

0

L■⁸

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20

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40 ( T 勺

､ 鴎 一

三 仁

○ 可 } 再 レ l

仁 む じ 仁 O U

t O } { 亡 じ 再

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J n m 八

2∪ 0

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4 0 5 0

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二 ＼

̀0

二 1 ^二

㍉

10 2 0 30 4 0 5 0 60

Fig^,1^. T he 8u ctu atio r^l C u r V e S Of m a n nitoI c o n^･ C e ntr atio n in pla s m a(⁰‑‑‑‑一^{･ ･つ}) a nd bile (^●‑‑‑‑‑‑^･4),

afte r intr a v e n o u s inje ctio n of 2 0 % m a n nitol (3ml/kg body w eigh ^t)follo wih g r ele a s e fr o m 2

W e ek b ilia ry obstr u ctio n.M a n nitoI c o n c e ntr atio n W a S m e a S u r ed a c c o rd ing to the m ethod of Tib bling^. A fte r the b ilia ry ^{m a n n}itol r e a ched t_o the pe ak c o n c e ntr atio n,it de clin ed in p^{a r a}llel

With pla s m a c o n c e ntr atio n.T he r atio of b ile^‑tO^‑ pla s m a m a n nitoI c o n c e ntr atio n (B/P r atio) ^{w a s}

C alc ulat_ed ^whe n both c u r v e s w e r e pa r allel^. A,

dogin the c o ntr ol _gr o up,B/P r atio I A 4_; B_,dog

2 3 9

測 定

Ga rdn e rら^{2 2)}B la ck ら^{2 3)}の方 法を改 良し た本 山^{2 4)}の 方 法を m od ify し て以下の よ うに行った.

i) 4 0 mg/dl ビ リ^ルビン^ー5 % 牛血 清ア^ルブ ミン液 の調 整

1 0m g の ど リ^ルビンを 1.O ml の･^{0.1 N N aO H に}溶 解し,そ の 1 50Jバ と 3^.Oml の 5 % 牛血 清ア^ルブ ミン液 と混合し た ものをa 液と し た. そ し てa 液の ど リ^ルビ ンを定 量す る た め, その ^一 部を と りJe ndr a s si k^‑Cle^･ gho m

2 5)の変 法^によ り 5 3 5 n m の波 長で分光 光度 計で測 定し た^. この後, a 液の ど リルビン量を 4 0 mg/dl に補 正 し た.

ii) 肝ho m oge n ate の作 成

標本は m a n n. cl^.測 定 直後 屠 殺し た実験 犬の外 側 左葉

か ら採 取し た. そ の肝 湿重 量 (8 0^〜1 0 0 m g) の 1 0倍 量

の 0.1 5 M K Cl 加1 % ジ キ ト^{ニ ン}液を加え てteao n

ho m oge niz e r にて ic e w ate r bath 内^でho m og^{e n a}te

し た. 蛋 白定 量は Lo wry 法^{2 6)}にて行った.

iii) U D P^‑G T 活 性の測

a s s ay ^mixtu r e は表1 の構 成と し た^{. こ}のa s s ay m

i xtu r e を 3 7⁰C 4 0 分 間in c ubatio n し, 1 8 0_J^Ll の M cIIv ain e

'

sbuffe r^{2 7})を加え て反応を中止 し, た だ ちに

水 冷し た. この後, 総ビ リ^ル ビン値と直 接ビ リ^ルビン

値を測 定し た. 対 照と し て は U D P^‑_glu c u r o nic a cid を 除^いた も の を 用^いた.

iv) ど リ^ルビン測 定法 ( 表2)

肝 組 織を 用^いた Ha rgr e a v e s^{2 8})の方法^に従^い,表2 に

記し た手順で測 定し た.酵 素 活性 値はJ^L m Ole/min/kg pr otein す な わ ち I^.U./k_{g p}r ot_ein で表示 し た^.

成 績

Ⅰ. 総胆管 完全閉塞 後^に月旦道 感 染が 肝^に及^ぼす影響 i

nthe s e v e r ｡infe ｡ti｡ n g^{r ｡ ｡}p,占フ示1よtf云b云^.占^{.▼▼■くフ 1 ･ 般血液生}化 学 的検 査 成 績

T ab le 2. M e a s u r e me nt of bilir ub inin the r e a ctio n mixtu r esho w nin Table l.

わ ぬ/ ∂ダJオァ〟占才乃

Re a ctio n mixt_{u r e} 150J^Ll

ad d etha n o1 4 5 0 _JLl

ad d dia z o r e age nt 7 5J^Ll

ad d s atu r ated(N H4)²S O4 15 J^Jl

ad d distilled w ate r 1 5J^Jl

√/J

■

れ^‑(

′､ 占/ 仏7JかJJ

R 邑a ctio n mixtu r e ad d dia z o r e age nt

150 〟1 75 _/Jl

sta nd at r o o m te mpe r atu r efo r3 0 min.

ad d 5% a s c o rb ic a cid 1 5 _JJI

Sta nd at r o o m te rnPe r atu r efo r5 m in.

ad d s at_{u r a}ted(N H4)²S O4 1 5 J^Ll

ad d etha n o1 450

Sta nd at ‑^{200C fo r atle a st30 min}

Ce ntrifugelat4 5 0 0 rpm fo r lO min

l

A bs o rba n c e ofthe s upe r n ata nt at52 5 n m