第2編
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全文
(2) 620. 中. 川. 被 検 溶 血 液 の 調 製 は氷 室 に保 存 した 血 液 よ り滴 定 法 とUV法. の 何 れ の 場 合 も測 定 の 度 毎 に メ ラ ン ジ ュ. ールを用 いて採取 し. ,蒸 溜 水 で 稀 釈 し た.溶 血 液 の. 嘉. 人. 計 上 のCat. kに 相 当す る検 量 線 は 以 下 の原 理 に よつ. て作 製 した.即 をToと. ち式(1)に. お い てt=0に. す れ ば 多 数 の血 液 カ タ ラ ー ゼ実 測 値 よ り外. 活 性 度 の低 下 を さけ るた め に 同一 溶 血 液 を続 い て実. 挿 して得 た 値 よ りxo=0.49でTo=33%. 験 に用 い る こ とは 行 な わ な か つ た.. 率)と. 基 質 溶 液 と し て は0.01 (pH 6.8)にH202を. Mol phosphate. 終 濃 度0,0125. Molと. お ける 鋤. (Tは 透 過. な る.. buffer. b=0.1. な るよ う. t=60秒. (O. D.)で. 一 定 と考 え る.. に お い てk=1.5に. お け るxtは. 式(1)よ. に 調 製 し た溶 液 を 用 い た. この 基 質 溶 液2.5mlに1,000倍. 溶 血 液0.5mlを. 加. え て 反 応 を行 な わせ た.. ち. よ りx60. を 求 め る とx60=0,41(O.. 以上 の 実 験 結 果 をchartに (Transmittance)よ. り求 め得 る.即. 記 録 され た 透 過 率. り吸 収 度(O.. D.)に. 換 算 し, 1. 次 反応 式 に従 つ て カ タ ラー ゼ 活 性 値 を求 め た .. =38.9%を. D.)で. あ り,従 つ てT60. 得 る .同 様 に してk=2以. 上 の場 合 もk. よ り逆 算 してTを 求 め て記 録 紙 上 にPlotす 宜 上0と60秒. る.便. の 間 のTの 変 化 を直 線 で あ る と仮 定 し. てToとTを. 結 ぶ 直 線 がt=0〜60秒. に お け るkの. •¬ (1). そ れ ぞ れ を 表 わす の で これ を 透 明 な セル ロ イ ド板 に x1:t=0. (sec)に. 於 け るO.. x2:t=60. (sec)に. 於 け る0. t:60 b:溶. D.の. 読 み(外. . D.の. 挿 値). 読 み. D ,の 読 み,便. 宜 上 仮 り に0.1. と一 定 と し た.. の で 記 録(chart)よ. と に よ る両 者 の測. 定 成 績 を 比 較 検 討 し た.. り簡 便 に 活性 値 を 得 る た め に分. 度 器 様 の尺 度 計(Fig.. UV法. 以 上 の 如 くして 正 常 人 血 液18例,低. in. Hemolysate. 0,01. P. B.. 「カ 」血 液7. 例 に つ い て 求 め た カ タ ラー ゼ 活 性 値(k. に よ る 簡 易 定 量 用 尺 度 計. H2O2. Ⅲ. 実 験 成 績. 1)を 工 夫 作 製 した.尺 度 計. の 作 り方 は 次 の 如 くで あ る.. Plus×1000. で あ る こ と以 外 には温 度. 及 び 反 応 系 な ど滴 定 法 と殆 ど同 一 条 件 下 に同 一検 体 を 用 い て 行 な い,滴 定 法 とUV法. な お,実 際 に は 常 に既 述 の実 験 条 件 下 に測 定 す る. 0,0125M. に よ る測 定 を基 質 のH2O2濃. 度 が 滴 定 法 の場 合 の2.5倍. 血 液 に よ るO.. 1. 1に 示 す如 き尺 度 計 で あ る.. この よ う に してUV法. (sec). Fig.. うつ した も のがFig.. れ ぞ れTable. 2.5cc. な おk. 0.5cc. cat)は そ. 1, 2に 示 す 如 くで あ る.. catは14g/dl. HbのCat. kと. して修 正 を. 行 な つ た 値 を 用 い た. Fig. 2は 正 常 人 血 液, Fig. 3 は 低 「カ 」 血 症 血 液 の実 際 の 測 定 を 行 なつ たchart を 示 す.何. れ も同 一 標 本 につ い て 引続 き3回 測定 を. 行 な い,算 術平 均 を 求 め て そ の 個 体 の 測 定 値 と した. 1標 本 の 検 査 に お け る3つ のk. Catは お おむ ね一. 致 して い る が,か か る測 定 値10組(正 「カ」 血 症5例)を 果,. 常 人5例,低. 任 意 抽 出 して解 析 を行 な つた結. 3回 測 定 値 に 対 す る標 準 偏 差 の 算 術 平 均 は正 常. 人 及 び低 「カ」血 症 に つ い て それ ぞ れ0.098,. 0.056. k cat単 位 で あ つ た.亦 変 異 係 数 の 算 術 平 均 は 同 じ くそ れ ぞ れ0.027,. 0.035で. あ っ た.. Fig. 4は 正 常 血 液18例,低 つ い て 滴 定 法 とUV法. 「カ 」 血 症 血 液7例 に. とに よ つ て 測 定 し た値 を 両方. 法 に 関 して 比 較 し相 関 関 係 を示 し た も の で あ る. UV法. に よ る各 測 定 値 は 滴 定 法 に よ る値 の 約90%を. 示 した, UV法. 測定値 を滴定法 測 定 値 で 際 した値. (UV/Tit.)は な おchart. speedは1cm/minに. 固 定 し た,尺. 度. 正 常 人 血 液18例 の 場 合 は. 0.91.
(3) 分 光光 度 法 に よ る人 血 液 カ タ ラー ゼ 活 性 の 定 量 お よ び 低 「カ 」血 液 症 の ス ク リー ニ ン グ法 に つ いて Table. 1. 正 常 人 血 液 カ タ ラ ー ゼ 活 性 の 測 定 値,. Table. 2. 37℃. 621. 低 「力 」血 症 血 液 カ タ ラ ー ゼ 活 性 の 測 定 値,. 37℃. 低 「カ 」 血 症 血 液7例. の場 合. 合 計25例 の 場合 は. 0.78 0.87. で あ り相 関係 数 は 同 じ くそ れ ぞ れ 正 常 人 血 液18例 の 場 合. 0.92. 低 「カ」 血 症 血 液7例 の 場 合. 0.73. 合 計25例 の 場 合. 0.96. で あ り,何 れ の 場 合 の 相 関 も危 険 率0.1%で あ つ た.亦,. X:滴. 定 法, Y:UV法. に 対 す る 回帰 方 程 式 は それ ぞ れ Y=1.04X‑0.51. Fig.. 2. UV法. に よ る 正 常 血 カ タ ラ ー ゼ 活 性 測 定 例,. 37℃. 有意 で. と してYのX.
(4) 622. 中. Fig. 3. Fig. 4. 滴 定 法 な らび にUV法. UV法. に よ る低. 川. 人. 「力 」 血 カ タ ラ ー ゼ 活 性 測 定 例,37℃. に よ る 血 液 カ タ ラー. ゼ 活 性 測 定 値 の 相 関 々係 回帰方程式. 嘉. の そ れ の80%よ. り高 い 活 性 度 を示 した.. 滴 定 法 の場 合1回. y=1.05%‑0.56. に つ い て,一 0.11 k. の 検 査 に お け る4つ のk. cat値. つ 一 つ の 測 定 値 に対 す る 標 準 偏 差 は. at単 位 で あ る とい わ れ て い る5).. な お 比 較 の た め 著 者 等 の 滴 定 法 に よ る測 定 成 績 よ り10例 を 任 意 抽 出 した 場 合,変 異 係 数 の 平 均 値 は 0.02で あ つ た.こ れ を前 述 したUV法 正 常 人 の 変 異 係 数0.027,低. に よ る成 績,. 「カ」血 の変 異 係 数0.035. と比 較 す る と変 異 係 数 は僅 か に大 で あつ た.従 つ て 現 在 の と こ ろ正 確 さはUV法. は滴 定 法 よ りやや 低 い. が 比 較 的 正 確 な 方 法 と いえ る で あ ろ う. Table 3. 滴 定法 及 びUV法. に よる 測 定成 績 の変. 異 係数. Y=0.78X‑0.01 Y=1.05%‑0.56 で あ つ た.. Ⅴ. 結. Ⅳ.総 括 並 び に 考 按. 論. 著 者 は 恒 温 な らび に 自記 記 録 装 置 を 装 備 して正 常. 本 編 に於 い て 著 者 は 同 一 検 体 を 滴 定 法 お よ びUV 法 で 比 較 測定 す る に 際 して,正 確 に 同一 温 度(37℃). 血18例,低. の下 に 測 定 を行 な つ た.従 つ て 両 測 定 法 はUV法. 定 法 を 用 いて 血 液 カ タ ラ ー ゼ 活性 値 を 測 定 し以下 の. お い てH2O2の. 濃 度 が 滴 定 法 の 場 合 の2.5倍. に. で ある. こ と以 外 に は 同 一 条 件 下 に 行 な わ れ た.両 測 定 値 を 比 較 す る にUV法 に よ る 値 の約90%の. に よ る正 常 者 の各 測 定 値 は 滴 定 法 値 を示 し, UV法. と して は 前 報. 「カ 」 血 症 血 液7例. に つ い てUV法. と滴. 成 績 を 得 た. 1) 滴 定 法 及 びUV法. に よ る測 定 値 の 相 関 係 数 は. 0.96で あ り,両 者 は よ い 相 関 を 示 し た. 2) UV法. に よ る測 定 値 は正 常 人 の場 合 滴定 法 の ぞ.
(5) 分 光 光 度 法 に よ る人 血 液 カ タ ラー ゼ 活 性 の定 量 お よ び 低 「カ」血 液 症 の ス ク リー ニ ン グ法 につ い て. れ の平 均0.91,低. 「カ」 血 症 の 場合0.78と. 623. と して の 使 用 に 充 分 堪 え う る もの と考 え られ る.. い う値. を示 し両 者 の間 に差 の み られ る点 が 注 目 され た. 3) UV法 の正 確 度 を 知 る た め 同 一 標 本 の3回 測 定. 本 論 文 の 要 旨は 第8回. 血症 血 液 につ いて そ れ ぞれ0.027及. び0.035で. 日本 人 類 遺 伝 学 会 総 会 お よ. び第34回 日本 衛 生 学 会 総 会 に お い て 発 表 した.. 値 に対 す る変 異 係 数 を求 め る と,正 常 血 及 び低 「カ」 あつ. 擱 筆 す る に 当 り御 懇 篤 な る御 指 導 御 校 閲 を 賜 わ つ. た.こ れ は滴 定 法 の 場 合 に比 して僅 か に 高 い が,測. た 恩 師 緒 方 正 名 教 授 並 び に高 原 滋夫 教 授 に 深 甚 の 謝. 定成 績 の再 現 性 は殆 ん ど同 じと考 え られ る.. 意 を 表 し ます.又. 4) 以上 の 成 績 よ り本UV法. は人 血 液 カ タ ラー ゼ 活. 小 倉 義 郎 助 教 授,広. 文. 献. Assay of catalases. bin in acatalasemic hemolysate.. and peroxidases. In Colowick & Kaplan (ed.) "Methods in Enzymology" 2 , 64-773, Academic. Genet. 7, 4, 163-189. 7, 2, 37-56.. Pinsent, J.:. Crystalline. erythrocyte catalase., Biochem. Jour.. Jap. J. Hum.. 1962. 4) Takahara, S.: Acatalasemia. Jap. J. Hum. Genet.. Press N. Y. 1955 2) Herbert, D.,. 島 日赤 病 院 武 内元 成 博士 に,更. に 教 室 の 諸 先 輩 諸 兄 に 感 謝 致 し ます.. 性 値 の測 定 法,亦 低 「カ」 血 症 の ス ク リー ニ ン グ法. 1) Chance, B, Maehly, A. C.:. 終 始 御 好 誼,御 鞭 撻 を い た だ い た. 1962. human. 5) Takahara, S., et al.:. 43, 203,. genetic carrier state. 05 59., 3, 1959. 1948. Hypocatalasemia;. A new. ABCC Technical Report. 3) Orita, Y.: On the degradation of oxyhemoglo. Studies the. on. the. Measurement. Screening Part. Method. 2.. of of. Human. Catalase. Hypocatalasemia. by. of human. catalase. Measurement. spectrophotometry. with. cell. Blood. blood. and. and. Spectrophotometry. a temperature. chamber. Activity. activity. by. controlled. autorecorder. By. Yoshito. NAKAGAWA. Department of Public Health Okayama University Medical School, Okayama, Japan (Director:. Prof. Masana Ogata). Author's For constant. the. spectrophotometry. temperature The. a. cell. measurements. H2O2. 0.0125. tions. with. a. chamber were. Mol. in. and. conducted. 0.01. exception. Hitachi. Mol. of. under. being. 139. autorecorder. phosphate. H2O2. Abstract Perkin-Elmer was the. buffer 2.5. spectrophotometer. with. a. .. following ,. times. type. used. conditions. pH. 6.8),. the. concentration. which. (final showed. concentration the. of. identical. employed. in. condi. the. titration. method. Both The those. assays. by. obtained. titration,. and. sufficiently of. were. results. hypocatalasemia. by. titration;. proved serve. carried. out. ultraviolet. that for .. the. at. 37•Ž. .. spectrophotometric the each. values values. measurement. method. obtained showed of. human. by a. good blood. UV. (UV. method). method. correlation catalase. were .. were about. Therefore. activity. compared 90%. of. this or. for. with those. method the. screening. by will.
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