効果 プ ド ゾ 反応 お け る ト ア ナ ラ キ

モ ル モ _ッ ト^の アナフ ィ ラキ シ ^ー 反 応 ^における プ ^レ ド^ニ ゾ^ロ ン の 効 果

金沢 大学 医学 部 内 科 学 第三講座 は 任^こ月艮部 純^一一教 授I

金 森 紀

く昭和5 9年3 月1 9 日受付I

感作^{モ ル モ} ット か ら摘 出し た気 管^に抗 原を投 与す る と， 収 縮 反 応が お き る^{． こ}の反応は， 気 管摘 出

の6 時 間 前^にプレド^ニゾ^ロ ンをモ ル モ ット腹 腔 内^にあ ら か じ め投与す ることによ り， 抑制さ れ た． ま た，

感作^{モ ル モ} ット よ り得た気 管模 本を in vitr o でプ^レド^ニ ゾ^ロ ンと イ^ンキエ ペ ^ー 卜 し て も， 抗 原^によ る気 管 収縮反応は抑 制さ れ た^． 抗 原投 与によ ^って^おき る感 作モ ル モ ット肺 組 織標 本か らの ヒ スタ ミ^ン遊離， およ び肺 組 織^{ヒ ス}タ ミン含量 は， 6時 間 前^にプレ ド^ニ ゾロ ンを^{モ ル モ} ット腹腔 内^に投 与す る^こと^によ り， 減少 し た． ま た， 非 感 作モ ル モッ ト気 管標 本^{の ヒ スタ ミン およ び アセチルコ リンに よ る}収 縮は， プレド^ニ ゾ^ロ ンと 1 時 間イ ^ンキ^{ュ ベ ー} 卜 す る^こと^によ り抑 制さ れ た^． こ のよ う な プ^レ ド^ニゾロ ンの抗ア ナフ ィラ キ^シー 作用 は， 時 間^に関して2 相 性^であ^った． す な わ ち， プレド^ニゾロ ン投 与 後 短時 間で おこる初 期の プレド^ニ

ゾ^ロ ン の作用 は， 気 管収 縮^への直 接^の抑制である と考え ら れ る． ま た， 数 時 間後^にみ ら れ る プ^レド^ニ ゾ^ロ

ン の後 期^の効 果は， ヒ スタ ミン産 生 ^．遊 離の抑 制の結 果^であ る と考え ら れ る^． こ の場 合， お そ ら く プ^レド

ニ ゾ^ロ ン の受 容体を介す る機 序が関 与し ている と思わ れ る．

K ey ^{w o r}ds a n aph_ylaxis，P^{r e}dnis olone， g^uin e a pi_g，h ista min e

気管 支喘 息^の治療^には プレド^ニ ゾロ ンな ど の グ^ルコ

コルチ^コイ ド は重 要^{であ り}， と り わ け 発作 重 積状 態^に は不可 決な薬 剤で あ る^． 気管 支 喘 息^に対す る グルコ コ ルチコイ ド^の作用機 序と し て は，血管収 縮や リ ソ ゾ^{ー ム} 安定化な どの抗 炎症 作用， 抗 体 産生抑 制 作用， ケミカ ル メジ^{ュ ー} タ ^ー の産生ま た は遊 離^の抑 制 作用， カ テ

コ ^ー ルアミ ン の効果 増 強 作用， 気 道平滑 筋に対す る直 接弛綬 作用， ケミカルメ ジ^{ュ ー} タ^一 によ る気 道収 縮^の 抑制作用 な どが知ら れて いる^{り2 J．} しかし な が ら， これ らに つ い ても未だ議論^のあ る と^ころであ り，

一 定し た

見解のない のが 現状^であ る．

従来， 気管 支 喘 息発 作^に対してグ^{ルコ コ ル}チ^コイ ド の効果 が得ら れ るには， 数日間^にわ た る投 与が 必要^で あ る と さ れて おり， グ^{ルコ コ}ルチ^コイ ドの 1 回単独 投 与では効 果が得ら れ な^いと^いう報 告も あ る^{3 川．} しか し，E lluト M ic allef ら は，慢性型の気 管 支喘 息 患 者^にプ レド^ニゾ^{ロ ン}を1 回投 与して呼吸機 能を経 時 的^に測 定

し， 経口投与で は投与 後3 時間よ り， 静 注^では投与 後 1 時 間よ り， 気 道 収 縮^の改 善を み た と報 告し て^い る^引引． 筆者^の経験^から も， 慢 性 型^の気管^{支喘 息 患者に}

プ^レド^ニ ゾ^ロンを経^口投 与す る と， 投 与 後^{4 旬} 6時間

で症状^の改善を み る^こと が あ る^．

そこ で， 気管 支 晴 息^に対す る グ^{ル コ コル}チコイ ド^の 急 性効 果^と，その時 間 的経 過を調^べる目 的で，モ ル モ _ッ トのア ナフ ィラ キ^シー 反応^にお け る気 道 収縮を実験^モ デルと し て， これに対す る プ^レド^ニ ゾ^ロ ン の効 果を経 時 的^に検 討し た． さ らに_， 気 管 支喘 息^に対す る プ^レ ド

ニ ゾロ ン の作用機 序を解明 す る た め^に， ア ナフ ィラ キ シ ^ー反応 時^に肺か ら遊 離さ れ るヒ スタ ミン量と肺^{ヒ ス} タミ ン含量， およ び^{ヒ ス}タミ ン の気 道平滑 筋収 縮 作^用

に対す る プ^レ ド^ニ ゾロ ン の効果 を検 討し た^． 材 料^名よ び方法

1． 動 物

E ffe ct of Pr ednis olo n e o nthe A n aph_yla xis of Guin e a P_{i g}． Ka z u n ori K a n a m o ri，Dep^{e r}tm e nt of Inte r n al M edicin eく^IIIJ く^{D ire cto r}i Pr of． Ke nichi H at to ril^{，S cho ol of M edicin e，Ka n aza w a} Uni_{v e r s}i_{t y}．

体 重2 5 0 g前 後の^{ハ ー} ト^レ一 系 雄^{モ ル モ ッ}ト を使用 し た．

1 ． 試 薬

卵 白ア^ルブ ミンくS igm aう， 二塩酸^{ヒ ス}タ ミンく乗 京化 成1， ア^セチ^ルコリン く第^一製 薬， オ ピ ソ^ー トン，

オルトフタ^ー ルアルデヒドく0⁻phth al al dehyde， 以下 O P T と略I く和 光 純薬う， プレド^ニ ゾロ ン^．ソジ ウ^{ム ．}

へ ミ サ ク^シネ ^ー ト くpe ndnis olo n e s od iu m he mis u c ci⁻

n ate， 以下Ps と略I くS igm al． 他の試 薬は， す^べ て和 光 純 薬特 級を用いた．

3 ^． モ ル モ ットの感 作^{お よ び Ps}投 与

卵 白アルブ ミンを生理食 塩 水に溶 解し て 2 0％ 溶 液 を作 製し た^． この溶 液0^．5 ml をモ ル モ ッ ト腹 腔 内

に， 1 日 お き に 3 回 注入 し て， 能 動 感 作し た．

感作 終了後^{4 旬} 6過^に， モ ル モ ット を次の 5 群にわ け た^． I 群く対 照群ン^ニPs を投 与せず^に撲 殺し， 気 管^お よ び心肺を摘 出し た． H 群 くPs l時 間 前投 与 群う^二Ps

2 0 mgノkg を腹 腔 内^に注入 し， 1 時 間後に撲 殺摘 出し た^．III群くPs 2時 間前 投 与 群I ^ニPs2 0 m glk_g腹 腔 内 注 入後2時 間に撲 殺 摘 出し た． 汀群 くPs 6時 間前 投与 群l ニPs2 0m gIk_g 腹 腔 内注入後6時 間に撲 殺 摘 出し た^． V群くPs 5 日間投 与 群l ^ニPs2 0 m glk_g を 5月 間毎 日腹 腔 内に注入 し，最 終 投 与よ り 24 時 間後^に撲 殺 摘 出 し た． 工群は 1 0 匹，工工^旬 V群は各^々8 匹^について， 実 験を行った^．

Water ba th

F i_g^．1^． S^che m e of the b io a s s ay syste m fo r m e a s11 r e m e nt Ofthe r e spo n s e s oftr a che alchain s to a ntige n，h ista min e o r a c et ylcholin e．On e e nd of the tr a che al chain is 丘x ed to the bot t_{o m} of M agn u s tube in the w ate r bath m aintain ed at 3 r C．Kr ebs⁻He n s eleit s olutio n in M agn u stubeis S atu r ated with mix ed ga s c o mpo s ed of 95 ％02 a nd 5％C O2．T he othe r e nd ofthetr a che alchain is at ta chedtois oto nictr a n sdu c e r a ndthete n sio n

Of the tr a che al chain is r e c o rded o n the p^ol_y⁻

r e c o rde r．

4 ^． 気 管 鎖^の卵 白アルブ ミン添加^に対す る収 縮_反応

の測 定

摘 出し た気 管を Kr ebs⁻He n s eleit液^7，中に おき，

T im m e r m a n らの方法^8一に従っ て，気 管 鎖を作 製し た．

す な わ ち， 1 つの輪が1 つの気 管軟 骨を含_{む よ う}に気 管を切り，1 0 偶の輪を連 結し た ものを¹ 本の鎖と し た くFi_g^．11． モ ル モ _ッ ト 1 匹 よ り1本^の気 管鎖を作製し た．

この気 管 鎖の ^一 端を， 1 0 mlの マ グメ ス管の管 底^に と り^つけ， これに Kr ebs−^{He n s eleit}液9 ml を 入 れ，

9 5％02，5％C O2の 混合ガスで飽和さ せ た^{． マ}グメ ス管 は， 3 アC の恒 温槽^にひ た し た． 気 管 鎖の他 端は， アイ ソ ト^ニ ック^． ト ラ^{ン ス}デ^{ュ ー} サ ^ー くM E ^{コ マ ー} シ ャ ル

社フ に と り^つけ， 気 管 鎖の反応は ポ リ^{レ コ ー} ダ ^ー く日 本 光 電R M ⁻51 ^に記 録し た く^tis s u e b io a s s ay syste m ，

F i_g．い． 初 期 張 力は 0 ．6g と し た． なお_，5 0 0 mg の錘 を と り^つ け^て，キャリ ブ^{レ ー ショ} ン の際の単 位と し た．

各 群^{の モ ル モ ッ}トから摘 出し た気 管鎖を¹ 時間 静置 し て， 張 力が安 定し た ところで卵 白ア^ルブ ミンを添 加 し た． す な わ ち， 卵 白ア^ルブ ミ^ンを Kr ebs−^{He n s eleit} 液^に溶 解し て 5 0 0_F^Lgノ^ml と し た溶 液1 ml を^マグヌ ス

管^に加え く卵白^{アルブ ミン のマ グメ ス}管 内 最終 濃度を 5 0_{声 g}ノml と し^てI， 気 管鎖の収 縮を記 録し た^．

さ らに，in vitr o で Ps と イ^ンキ^{ュベ ー} ト し た場合の

効 果を み る た めに_，18 匹^の感 作モ ル モ ット を 6 匹ずつ

3群^にわ け， 気 管 鎖を作製してb io a s s ay syste m にと り^つ け た． 各 群を各々Psl O O_JJgl ^ml， 5 0 0J^Lgl ^ml， 1

m gノml溶 液9ml と イ^ンキ^{エ ペ ー} 卜 し， 1 時 間 後^に 5 0 0_メイgノml の卵 白ア^ルブ ミ^ン溶 液1 ml を加え て気 管 鎖の収 縮を測定した． 収縮^のピ^ー ク時の張 力くm gつを，

そ の 反応の大き さ と し た．

5 ． 抗 原 添加^によ る感作 肺組 織^からの ヒ スタ ミ^ン遊 離^の測定

各 群 の モ ル モ_ッ トから摘 出し た 心肺 を Kr ebs

−H e n s eleit液 中^に入 れ， 右心室か ら肺 動脈に カテ^ー テ ルを挿入 し て Kr ebs−^{He n s el}eit液で ゆ^っく り湾 流し，

血液を洗^い流し た． その後， 肺 末柵 部^を切り出し， こ れ を 1 ^旬2 m m の小 片^にな る よ う細 切 し た^． Kr ebs

−H e n s eleit 液 中で よ く洗催し た あ と濾 過し， 肺 組織片

1 0 0 ^mg ず^つ を秤量 して_， あ らかじ め 5 ml のKr ebs

−^{H e n s eleit} 液を 入 れ た試 験 管1 4本にと^っ た^． 3 7^OC^で 1 0分 間 振遺し た あ と， 2本を 1 組と し， 各 組^に0， 1，

1 0， 1 0 0， 50 0，1，0 0 0，2，0 0 0ノ^ノgノml の卵 白アルブミ ン

溶 液¹ ml を加え た^． 卵 白ア^ルブ ミ^ンを加えて正確^に 1 5分 後に濾 過して， 肺 組 織と濾 液^に分離し， 各^{々 に} 3 0％ト リ ク^{ロ ー ル}酢 酸 溶 液0．5 ml を加えて反応を停 止 さ せ た．

肺 組織^およ び濾 液 中^{の ヒ ス}タミ ン量は， S ho r e らの

原法^9Jを ^一部修正 し た蛍 光 法で測定し たくTab le ll．

O P T は， 1 g を 石油エ ^ー テ^ル1 0 0 ml に完 全^に溶 解さ せ て グ ラス フ ィ ルタ^ー で濾 過し， 濾 液をシ ャ ^ー レ に とって 石油^{エ ー} テル を蒸 発さ せ再結 晶さ せ た ものを，

デ^シケ ^一 夕^ー 内に冷 却保 存して用いた．O P T との反応 温度お よ び反応 時 間は，鈴 木の報 告^{1 0}りこも と づ き，0⁰C，

4 5分 間と し た． 蛍光 強 度は，0 ．1N 塩 酸^に溶 解し て 1 0

声gノ^ml と し た塩 酸キ^{ニ ー} ネ の蛍光を 1 00 と し， これ^に 対す る比 較蛍 光 強 度 くr elativ e8u o r e s c e n c einte n si_{t y}l で表 現し た^． サンプルと と も^に， 外 標 準曲 線お よ び内 標 準 曲線も測 定し た．Fig^．2 にそ れ らの実 例を示 し た^．

遊 離し た^{ヒ ス}タ ミ^ンは， ヒ スタ ミン遊 離 畳と^{ヒ ス}タ ミ^ン遊離 率^で示 し た． す な わ ち，

ヒ スタ ミン遊 離 量^ニ ー濾 液 中のヒ スタ ミ^ン畳 ト く卵 白 ア^ルブ ミンを加え な^も1と き の濾 液 中の^{ヒ ス}タ ミ^ン量1

Tab lel． Method fo rh ista min e m e a s u r e m e nt．

F l l tr a te

i l t r at e 4．O m1 0 篭T C A O ．5 ml

C e nt ri f ug^e

S up^{e r n a} ta n t 4 ．O ml

L un g Fr ag^{m e n}t

r ag^{m en} t l O O mg 0 宅T C A 0 ．5 ml ho m og^{e n a}te ad d R ⁻H s olut i on 9 ．5 ml

C e ntri f^ug^e Sup^{er n a}ta nt

t oノ e a c h s up ^{e rn a}t an t ad d N aO H O ．5 ml

aC l l ．5 g

−But a n ol l O ．O ml mix for l O min C en tri fug^e

4 ．O m l

uta n oI p h^{as e}

al t ⁻S atu rated O ^．1 N NaO H 5 ^．O r nl mix for l O m in

C en tr i fug^e

uta noI p h^{as e}

．1 N H C l

−Hep t^{a n e}

p h^{a s e} Na O H O pT

2 ^．5 ml 1 5 ^．O ml mlx fo r l O m 土n C en tri f ug^e

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a c tiv at ion 3 6 0 nv^l f luor e s ce n c e 4 5 O m p

K ^qH s olutio n，Kr ebs−^{He n s eleit s olutio n}i ^{C e n}trifuge，C e ntrifuge at3，0 0 0 rpm fo r lO

lll lIl．