c変異株 の細胞 2 , f i

近磯大殿紀要 6: -13 iU 5 2

h L 1 l i ( I 1 _

･Agr. L tru. l J c M

日1 6:

) 3 8 1 9

ILJt,.

AMP に よる大腸 菌 K

･

c

i日19 : ) -- 5 2

】 83)

c変異株 の細胞 2 , f i

1 -

伸長研究への組換 え DNA の利用

内海龍太郎 暮･川向 誠 ･姫野道夫 ･軌野 徹 ‥

la UseofRe mbi DNA toS yCellFi me

O‥

d tu

Ry o UT hllM a o K^wAML dTo uKoMANhr

k to t nan

an : U co

S t

uar

ion tt n a t tan i

f 2

,

1

yCAM P inEscerch ihiacozl'K- eM u b

N i

h c 1, A K

I M i o HLME O

as t no ) tt na o f ransere

Ha er

e gene inan reco s ) 0 2 - 0 L

Syno冶il

C3 mb tDNA w et di E sincHf me nw l

I A C2 dc

El a( )a oE ( i lveyan.

P h YLe･ -

iK mu dt

n t tan r,cspect

3 - 3 L P (.Jt 2.

･ - 1 位 - I co

Ca

E er eo

l esu

wa d n ture

･ J fc

l scu l o H o ows. er

.Ther tsw easf igaetd

l :o invest

A rec

E. tRC5 f tec o _ 丘

i sunqu R

io it ara u

l bb ro a n L p / 2 (I) Wh ■c iUN81

L

‖d nw si 2 1 /

a

15 o

E. bUN8 4 i e adp yd etov t

ee fp C2 en

iiivso l co

co e

) WhnUK6 3 (C511 C3 dosag

ce in in 2 (

2

24(RC511/ C2 lPL 3-3 dat43ccinteh absenceo AMPrc , ur ene o i no heno i d e cc i tt na o la

i n d n l co

dadcellf me no urr .Thsp me nddntocc /

2 1

1 Ela

m byg te

i b i h n

3 L p

J

A200/ C2-.Th er3 es esultsindi tcaet tcHf meha e Ha nattion is

bl tao nof〔AMP me 3

-.

3

resenc h

ture l u 0

2 -

0 )wasc dilltep eofnalidiixcacid,recA L

ec io tt na osag en h iesze

t yn la i i l ncreasng

. e a

fC o

itae d i t proe presence

n w si ys d byg ed eeff tofp rer

AMP Th me

A一me dcHf me

he o bu 0, 2 - 0

C3 tntin t )

l ha tt gess

isresu sltug teefila nby〔AMPisno cont cernedwith ion.

tt na

Ⅰ 緒 言 埋活性物 質 とな りうることを示 している.細胞 の伸 著者等 は大腸菌

/

L'C変異株, A3 2P 09においてアデ

AMP)に より細胞 分裂が阻審

長 と分裂 を規則正 しく繰 り返 す細胞分裂の諸過程 は 過 伝子上 にあ らか じめプログラ ミングされていると

i t proen C

t por '

5 '

C (

/シン 3.-リン酸 (

きれ通常の敬 10倍 に も細胞が伸長 するこ と,さらに 考 えられ るが, この よ うな逝伝子の発現が いつ, い その細胞伸長 には cAMPの他 にその受容 タンパ ク かな る方法でな され ているのか, また抑制 され てい AMPr∝e ,CRP)が関与 してい るのか現在の ところ,不明 である.大腸 菌 PA3 209を 質

用いて cAMPによる細胞伸長 の現魚 を明 らか にす )c.

2

ることを報告 したり AMPは大腸菌 においてラ ク

トー スオペ ロ ン等 で CRP と結 合 して RNAポ リメ ることは,大腸 菌細胞分裂制御横横 な らびに形態形 ラー ゼの転写活性 を調節 することが知 られてい る. 成 に関係 す る過伝子 の発現制御機構 を理解す る うえ この ような形質発現 を調節 する物質 による大腸 菌細 でni要な知 見 を与 えることになろ う.

胞伸長 の現 象は cAMPが大腸 l;酌こおいて細胞 分裂 本報告 では,細胞 内 cAMPの細胞分裂 におよぽす における細胞 伸長 と隔壁合成 の制御 を司 る並要 な生 影轡 を調べ るlJめに cAMP合成 野栄 であ るアデ二

･Jtぷ化学tl生拘化学研究室

l. Clu

.

l^

hlicns rl

p iCo D t i l

J t L ba or. ( crT

L

BiKh sry.cto 灯i

(bofB )I伽 p OrA即i T cr t

L 1ur. ChllSlry.Kl inkUn､i･. apan o l. L i nv.

k ( (

i )t a i try.

S i h Ter C l L lura I U 亡

ltだ dl芯I 577J l

Ky oU KyL Ja

･･Fq火サA草鞋JL苗化予fl生物化7研究室 o.606 parL)

2

116 近 畿大 学 位学 部紀 要 第 16号 (1983)

レー ト シ クラー ゼの迫伝 子 (y ) を ca cIoElをベ ク g,呼天 15g, t2l0 L/) を用 い た.

ター として組 み こん だ組換 え DNA(PLC23‑3)を大 組 換 Iえ I)hTAの 調 製 大 腸 蔚 UN8124と 腸 菌 PL‑変異 株 に帝 人 して, その細 胞 分 裂 に お よぽ UK6153を1/L‑broth中37.Cで培 頚 した.対数増 す影 響 を調 べ た. 殖 期 にお い て. クロ ラ ム フェニ コー ル 200mgを加 一 方 大腸菌組 抱伸長 はナI)ジクス酸 等 に よ る recAタ え, さ らに 8‑12時 間培 発 を続 け袋 菌 す る.沈 殿 を ンパ ク質 の増 加 を と t)な う SOS横 柄 を誘 発 させ た 冷 50mM TrisHCl(pH80.)で洗 浄後,冷 シ ョ糖 溶 時 に も生 ず る こ とが よ く知 られ てお り3) AMP,c に 液【52%ショ糖, 0mM 5 TrsHClpiI (H80.),)敬 m/

よ る細胞 伸 長 の現 繁 も reAc タ ンパ ク質 の増 加 に よ に懸 濁 す る.冷 リゾチ ーム溶 液【 5 "g m1/Lリゾチー る SOS現 象 で あ るか ど うか を調 べ る た め に n Ac ム,O2.5M TrsHClpi‑ (H80.)),O81nLを加 えて 避 伝 子 を coEIlをベ ク ター と して組 み こん だ組 換 OoCで 5分間 反 応 させ た後,0.25M EDTA(pH8.

え DNA(PLC30J20)を大腸 菌 /L'C変 異株 に封 入 して 0),1.6mIを 加 え, OoCで 5分 間 放 虻 す る. 5 cAMPとナ リジ ク ス酸 それ ぞれ に よ る rceAタ ン/ I M NaCllZm,Iを加 え て脱 合 した後 , しば ら く室 温

ク質 の誘 発合 成 な らび に細 胞 の形 態変 化 を調 べ た. で放 粧 し次 に 10%SDS,0.8mLを加 え る.冷蔵雄中 で l晩 放 氾後 超 遠 心 分灘 (100,000Xg,30分 2oC) Il 材 料 お よ び 方 法 を行 な い,染 色体 ‑膜 画 分 を沈殿 させ る.上沼(la‑cer 菌株 と組 換 え D.TIAT 本 報 告 に用 い た大腸 簡 な ら e yaedlst)が組 換 え DNA抽 出液 で あ る. この抽 出 び に組 換 え DNAを TabeLlに記 載 した. 液 に 50仰〟 酢 酸綾 衝液 (H50p .)中 で 100C, 5o 分 培 地 大 腸 菌 を培 茸 す る た め の 培 地 と して はし 間 熱処増 した 5′〟g/1nlリボ ヌ ク レア ー ゼを 0.1m/

‑broth(ポ リノやプ トン 10g,酵 母エ キ ス 5g,Nau 加 え,37.Cで 30分〜1時 間 反応 させ る.次 に塩 化セ 5g, グル コー ス 1g,チ ミン 50Ygn. 1M C CJa ･ L シ ウム ･エチ ジ ウム ブ ロマ イ ド平 衡 密 度勾配 遠心 法 2Jm/,f･I.,0 日 ,pH72.)を用 い た. また合成培 に よ り閉環 状 DNA (oaety cv lnl coe crualsd iclr 地 と して は eM培 地 (K2HPO一105g,K112PO.4 DNA.cccDNA)を分離相 戦 した.

5g,MgSO.0.05g,(NH.)ZSOJLOB,クエ ン酸 ナ アガ ロー スゲ ル喝 気泳 動 オー トクレーブに よ り トリウム 0.47g,カサ ミノ酸 2.7g,ラ ク トー ス 2 E緩 衝液 〔40mM Trsi,20mM 酢 酸 ナ トリウム,

Ta一 be1 BceJltan adrcm lal)yatrasrlS n eu bnn rhA

Stanrcmbnn DNA ri/eo lat G ntleoy光 Suo.re c stanri

PA3)2(9 _{/IIr/‑ /lB)crrI /iht)} 〝_Jg･lll Jふ _In l^iUTSUMl^UJ I,'‑pIIc rllll gr7･ /6 nll‑J/L ･IA)/7‑

lltLlZAI (人) r la J Irl･I: J･p･ sL9 to7.1A1)

^ . 広JW♪ J ノc T

RC5112 P 0A392 I･e,AI C //tl･ A' P 02X A39 KL16‑99 KL169‑9 1firyleC4.1 //Jl'‑I I/rJJ･3 71Ql･ // Lb)ao〉a(rtr

stock JA200 F■ /Irt･‑I /(,/6 I･ /C 'P I/ J IrPgう LC A K.LRr:6(J

l･e(･A

CA8036 HfHr /l' Jz l･CeA AllI .Y ∫B C 町日lEKl UN814 2 l 1 P C3tC5I2/ L 2‑3 tt5C 日2X

JA200/pLC23･3 UK6153 RC 日2PC023 /L 3‑0 RC5112X

IA2OpCO20JL 3‑O Reo bn1cm la【)1rNA

pL 2･C33 ctoEl･(tl ,r LCLR E6. A K (I

pL 3･0 C02 ^{cI I･AoEl7CC} LC A K ().LR E6

内海 ･川向 .唯野 ･駒野 :AMAによる大c 腸菌 K-1.2/ct変異株の細胞仲良研究への組換えDNAのfJl用 172 2mM Jl;)ITA.18mM .TtaTCl(pH80))に溶解 さ

せたアガ ロー スゲル (1%)を 70oCぐらい まで冷却 し,エナジウムブロマ イ ドを lJJg/川/にな るように 加 え､ これ をガラス平板上 に流 し圏化 させ る. その 後 1時開放濫後,DNA溶液 に BJ..溶液 〔.%プロ0 1 ムフェ ノールプ/レ - BPB)( . 1 177M EDTA.5%0 シ ョ糖 )を!iiTI加 えた後,試料穴 に歎 1n 0FLl注入 し, 屯気泳動 (60V, 6時間)を行 った.泳動終 了後, ガラ ス平板 を取 りはず し, ゲ ル を トラ ンス イル ミ ネー タ上にのせ,紫外線 を照射 してバ ン ドの検 出な らびに写式粒形 を行 った.

膿 タ ンパ ク賃 の調 製 膜 タ ンパ ク質 は LuTKEN

llAUs-1の方法に従 って調製 した.すなわ ち,増資菌

体 を超音波処理L細胞破砕 する. その後遠心 によ り 細胞破砕物 を取 l)除 き, その上TTtJを とり,超遠心分 離 (100.000×g,45分, doc)を行い, その沈殿物 を膜断 片 として用 いた.

SDS-ポ リア ク リル ア ミ ドゲ ル 電 気 泳 動 SDS -ポ リア クリJ,Lア ミドゲルq気泳動 (DS PZ S - AGE)は LUGHTENBERGS)の方法 に従 った.屯気泳動 は 25mA で約 6時間行い,泳動終了後 0.1% coomassiebrH- 1ina L bule (C伝B)を 含 む 5%0 ト リ ク ロ ロ 酢 酸

(TCA)溶液で固定染色 した,数時間後 7%酢酸, 10%メタ ノー/レ混液 で脱色 した.

cua遺伝 子 を含 む組 換 え DNAの 同定 CLARKE とCAR3N1L06の コレクションの中か ら,qa過伝子 を 持 つ 大 腸 菌 と し て JA200/pLC23-3を 選 ん だ.

1 2 Fl居.1.Jdentlfication of

colElt}･a'rccom- binanl i)NA

(pLC23-3)in E. OC co/L' /'I'(I mutant CCC

-

UNBT.別. Recom- binantDNA I)LC 23-3in E.coll UN8121waspre･ pared as de- scribd inMillcri- alsand ltTcthods. t,anビllSpt.C23-3 DN.AandlaTle2is A DNlA diL,ごSled with Hind ITI CCC.covalentLy cloLt=d circular DNÅ. 0(::Open Circu)arDNA

pLC23-3が (ツa迎 伝子 を持 って い る こ とを確 認す る た め に cya変 異 株 で あ る CA8306と JA200/

pLC23-3を楼台 させ,CA8306が cya'にな ることで 確認 した.すなわ ち. cJa,-の場 合, ラク トースの発 酵能が欠損 するが,pLC23-3が番人 され ると.ラ ク

トー ス発酵能が回役 した.選択培地 としては トリフ トフアンを欠 きグル コー スの代 わ りにラ ク トー スを 含むeM培地 (合成培地) を用いた.

rec^遺伝 子 を含 む組 換 え DNAの 同定 q･o 過

伝子の同定 と同様 に,CL REとCA IAK RXN))6の コレク シ ョンの 中 か ら rec.4泊 伝 子 を持 つ大船 歯 と して JA2)/ L 02-t0p C3-0を選 んだ.確認のために,JA200/ pLC30-20を rccA変 異株 で あ る RC5112と接 合 さ せ た. そ の 結 lR.伝 適 さ れ た pLC3020に よ り RC51-l2がrceA手にな っf.選択培地 としては コ リ= シン Elを滴下 Lr., ス トレプ トマ イシン (: 100JJ/ g

ml)を含む L-broth寒天 を用いた. また recA十の確

認

は紫外線の感受性 によって調べた.

(A)

ヽ.

. I

ヽ

＼

Fi.. etflmetto uueg2 C一 ia nainidcdb, AMP )C FIJ colI'/l'rmuatP 01tn A39)w sclue nL_ a utrdl bohcnt o i gCtanin AMP(.05mg/111/a 4) L3 C (A

r

)orintheabsenceorCAMP (H). Aftre 2ho nuainc sw T a ld fIcbto.ell eCSmpe and osTebeV d wlh eetoL 一crn mlrSOyCOCP.

rirL Lma.OJ

128 近 散大学良乍 部組 撃 耶1 6;J,-( 3198)

大 腸 菌 fic変 異 株 -の P C2 -L 3 3と P C30 2L - 0の 導 入 組 換 えDNA pLC233とpLC3020の 大腸

拘

/F'C変異株 への帝人 に際 して.組換 え DNAの宿 主側 典色体への組 み こみ を防 ぐ[=めに,晴王 として大鮎 薗 PA3092の 代わ りに, その re(･A変 埠株 であ ろ大 腸 菌 RC5112を用 いた.pLC233I_Y導 入す る上始台, 大腸 菌 RC5112と

J

A200/pLC23-3を接 合 させ て, ス トレプ トマ イシ ン(100fLg/m/)を含 むL broth寒 天上 に塗付 し,その上 に コ リシン Elを滴

F

した.也 現 した コロニーの 中 か ら pL 33rC2-lY有 す る大脳 脚･ を l株 選 び,UN814と 名 づ け た. ま た 大 船 2 ['G UN812LIよ り PLC23-3DNAを 単 厳 し確 認 し た (Fi.)g1. また p C3L 020の RC5 112への封 入 も同 様 に行 った.

‖ 結 果 お よ び考 察

pLC2313の 大 腸 菌 /ic変 異株 の 細 胞 伸 長 に お よ ば す 効 果 大 腸 菌 /l'C変 災 株 PA3902は 培 地 中 に cAMPを添加 して培茂す る と, 3Cで細胞 が仲良 す

J

o る ( g 2.Fi.)

大隅 伯l勺にI,･け るcAMPの鮒 さを明{)か に す る ため には.外か .-)cAMPを加 え.その効紫 を税黙 す ろT_･'けでri･くして,細胞 内 cAMP感度 をrJ･ん /)かの 声法 でI.t'め る苛 'Lが で きi ぱ 有効 で あ る. そ こl L で ,

cAMPの 合成酵瀬であ るアデニ レー ト シ クラーゼ

J)退転 1二を組 み こん だ pLC233を大 腸歯 /tlr変 異 株 RC511-2に封 入 してその影甥 を調 べた.その結果, UNS)2 RC5 14( 12 pLC1332 )では,温度 を上 げ る

(43oC)rJ'けで,cAMPを添加 しfJ:くて も細胞 分裂 が阻 <i･ tlさJ て,細胞 が伸長 した ( g 3C)Fi. .3o1Cに I'･い ては,

1 3

oCほ ど細胞 U)伸長 は観 察 され なか った が, 少 し通常の短 軸 鵬 よ りフ ィラメン ト化 していた

(Fig 3 L)).ま たp C233を 有 し な い 大 脳 薗L JtC5112では.ど ち らの 温 度 で も地 常 の 短 梓 菌 で あ った (Fig3A.B).

まL pLC233の代4)I)に coIEI DNAを大勝 歯 RC51'12に帝 人Lf･_場 合,4o3Cに上 げ て も細胞 伸長 は観察 されなか った. これ らの結 果 よ り,pLC233 に 1 る細 胞 仲 良 の 現 筒 は pLC233の genedosage 劾媒 に よ りcAMP合成酵 糸が増 え.それ に と もない

F唱 3..Mopoo La cag r lr/rhrFClhneo L.oLUN8' 1'Z

J .

E cl.oLR' C511 A R n2( . )adUNH2.'】J (C D) ee ul. w r C ue t 1 .lrda 3 C WhnOD. ae ●いVSO1te uI.h c ueW s iie noIr a dvddit

い voparts.OnL･WaSCUllureda131C (B.D)andth(I('th(ゝrWaSat43C(A.C). ArLr2h c‖e . .esV rc(･sⅢpe na ldadosLVdudrlg Lmir糾･P. B r 1btre ne jh cり ｡e a.0

JJ717.

内海･川向 ･姫野 ･駒野:cAMAによる大腸菌K-12./LC変異株の細胞伸長研究への組換えDNAの利用 129 cAMPの代 謝 に変劫 が生 L:たため であ る と考 え ら 対応 した郁々の迎伝子発現調節の問題 が今後明 らか れ る.なお cAMPの細胞 内濃度 については現在検討 に され なければな らない.

中である.さらに JA200/pLC23-3では,43oCに上界 cAMPに よ る 細 胞 伸 長 と

S O

^{S横 積 大 勝 歯}

して も細胞 伸長 は観 察 され なか ったので. UN8124 PA3092の細 胞 伸長 は cAMPに よるだ けで な くし に よる細 胞 伸長 は J7C迫 伝 ィ-の 変 異 の ため で あ ろ て,ナ リジクス酸 によって t'生ず る くFlg 4).

う.現在 ♪r逝伝 子の働 きはよ くわかっていないが, ナ リジ クス酸 に よる場合, その フ ィラ メン ト中に cAMPの代謝 に関係 するのか もしれない. は染色体DNAの分布 は見 られない (F喰･4B). こ Fig3に示 す ように,pLC23-3の ge11edosage効 れはナ リジクス酸 による DNA合成阻啓 とそれ に と 果 に よ り細胞外 か ら cAMPを加 えな くて も細胞 分 もな う分解の ためであ ろ う.

一

方 cAMPの場 合, 裂が阻啓 す る

T

ff実 は cAMPに よる細 胞 分裂制御横 フ ィラ メン ト中に多 くの典色体 DNAが分布 してい 椛が大腸菌内 に存在 している可fJL性 を示唆す るもの巨 た (Fig.4A).

であ り,特 にアデニ レー ト シクラーゼの迎伝子発現 つぎに,この ように cAMPとナ リジクス酸 によっ 制御 とcAMP濃度の関係,さらにその感度の変化に て大腸菌 PA3092を細胞伸長 させて, その膜 タン,(

･亀 酎

簡 弊酵 千･･ 雷 p

噂 h cbrW ～叫 10"A 三撃 転

'･i‡ i主 喝 ヽ 噸 艶 !』 ^ &

i E.L

二

^{_二 二里 ㌦ 7 -8-}

l T ;t = r : ｡

^{6 L}

合

^〔＼

FJ..C) akn )cg4 tmpr,n(EAMl n ue lalns t n iiiailidcdflmet. )idcdfLneLwih 1dxc c(-n ue ia ns E collP 02w sclueA39 a utrdatJ℃. Whn3 e O^a

D

古0 . a . h utrW s0LteclueW s a diievddlllOt oPrs ThnCt w at_ e.AMP(.,g l a de o(n A)and05ll/lll)w saddt )e(

nallii cd H5dxcai /gwlL/t)w st h te t)a oteohr(3. Afetr2h c sWeeh r. ell r a- vesled ThispelletwasflXedandanultra-thinsectionWasmadebythe previouslydescribedmethod(9).tうar.I〟 777

0 3

1 近 故大 字 殿学 部紀 要

ク質 を SDS AGE-P で分析 す る と, ナ リジ クス酸 添

第 1号

の場 合, ナ IJジ クス巌 に J:る 6 (1983)

A

rec タンパ //野 め 合 ブ質の 加 の場 合 ,井上 ら7Iに よ り指 摘 され た よ うに.分子 現 成 は抑制 され たが AMPに よる4K0 タ ン-

タ ン′,クだ)の増 加 が観' 合成 は抑 制 され なか ったd.こL らの こ とよ り l L c

, 0

4 .000の タンパ ク質 ( 察 され た (Fi .c

A rec

) 51 3 g..ane

K 0 4 , AMPの場 合 も同様 の タ Aタンパク質 は異 な る こ とが 示唆

A

･

され た. 圭た この こ とは ( タンパ ク質 の抗 血楢

さら ye

( rc タンパ ク質 と ンパ ク野 の 合成 が促進 され た (

に, ナ リジ クス酸 に よ って誘 発 合 成 され た ). 2 i 5Lg..ane F

A

rec タ を用 い た実験 か ら も証明 され た引.

_ これ らの こ とよ り cAMPに よ る細 胞 伸 長 の 現 象 q

ク野 と cAMPに よって合成 促 進 され [=

ン′.' 分 子

.000の タンパ ク質 ( 明 らか に す る た め に DNA p C3

歯 UK6 3にお い て 4

c , J 0 5 L 1 0

4 0Kタンパ ク質)の 相同性 を

退 伝 子 を持 った 組 換 え

lCe

はナ リジ クス酸 に よ る t Aタンパ ク質 の増 加 に と もな う SOS税 額 とは異 な る もの で あ ろ う.

A rec

Oを大 腸 菌 RC5112に導 入 した大 船 Z

AMPとナ リジ クス酸 をそれ タ ンパ ク質 の訣 発合成 が A

rec

lV 要 約 9

大 腸 菌 Jfc変 異 株 PA3 20 の 細 胞 伸 長 に お け る ぞれ添 加 した条件 で.

生 ず るか ど うか調 べ た.その潜 果 ,Fi 5g.に示 され る yecA lCe cyaと C_ t･ とa J

迫 伝 子 の働 き を明 らか に す るた め に､

C3 0の タンパ ク質が 多 rriに

2 - 0 L p

9 0 2

- 0 L p - 3 L P

A過 伝 子 を ク ロ-ニ ン グ し た 組 換 え C2 3と C3 0を 大 腸 菌 PA3 2の よ うに, ナ リジ クス酸 を添加 した場 合

DNA ),r

i 51g..anc 効 果 に よ r 生成 され る (

A ec 4 F

d gene osage

fCe

)が,cAPMの場 合 J A recA変 異株 (RC5112)に それ ぞれ別 々 に導 入 してそ ane

. l i 5g.

F

( れ らの組 換え DNAの大腸 菌 Jic変 異株 の細 胞 分 裂 にお よぽす効 果 を調 べ た.

タン′1ク質 は誘 発 合 成 され な か った

R 2) '

. さ らに大 腸歯 PA3 209の 変 異株 (C511 )

5 recA

3Co 3

- 3 L p / 2 R 2 1

1)大腸 菌 UN8 4(C511 C2 )を 4 で培 発 す る とcAMPを加 えな くて も細 胞 伸 長 が 生

3 L p / l

co / 2 1

1 ElやJA200 C2 じた が, 大 腸 菌 RC5

に お い て は生 じ な か った. こ の こ と よ り大 腸菌 3 - f L

osage 2 1 gen

UN8 4の細 胞 仲 島 は Jc変 異株 特 有 で,p の ed 効 果 に よ るア デニ レー ト シ クラー

3 - 3 C2 ゼの増 産 に と もな う cAMP代 謝 の 変 動 に よ る と考 え られ た.

osage 0 2 - gen 0 L p / 2 R 5 1

2)大腸 菌 UK6 3(C511 C3 )におい て ナ リジ クス酸 に よ って pLC30-20の ed 効 果 に 対 応 し てrecAタ ンパ ク質 が 増 大 した が, cAMPに よ って は合 成促進 され なか った.この こ と よ りcAMPに よ る細 胞 伸 長 はrecA 過 伝 子 が 関 係 す る SOS現 象 と異 な る こ とが示唆 され た.

本研 究 の昭 子顕 微鏡 櫛 形 に際 して, 協力 してい た だ いた シオ ノギ製 薬株 式 会 社,字 尾実験 室 の遠 藤 奉 久氏 は じめ. その実験 室 の 方 々 に深 く感 謝 します.

h t e tu

l t swerercae

l u er 5 . OIC as ..

lane io 5 1 d t nuc

e c ig.

F 5 I

UK6 3( s4 )w ec rda WhnOD… w ell dWi

AMP(

d n 23 . . Iane

C i

甘 proet 9

0 P ' t / E c.o

nof/ A nbyn A3 2( s1 )a

C iIx id L

a Ca dl R f leere一CSe C.

' 3 E C.OLLL

t4 U M.

U～

S

S 2

1)R UT

)R UT .

i lT ace E l A N . n

0 ( N

. TA , Y

W . H き

KAWAMU

)ad Y HI B ･ -119H9

T K^

A l h

. MO O.

Al. K A S . H t, A

K M.HIMENO,T.KoMA･

5 . lane

! / zg

, ml s2 )ornalidlXic

′ 05.

d n il tera n o t

be repare

i escr er P i ac

･ O

Lonr exptl errLnent i

t proen S I

hd

【os. d(

Wlhn sw ep d ads DS AGEasd dinMa sa Me

he an

) J . ll.ane / Lg 5F

1 m s3 .L ellSt ROTA.I. ol.,147,1105 h

2 '

terrane. 81) e

dru h n t arvese er

ce

g Af sw eh d ad tem mb

O, T K へ . N . lY,

l AMO M.K∧ MUwA KAl,;VI. o

C lCet b u d t

B tacen . ノ N Ko . n N

HIME OadT MA O: 'o.L 1.518,07 1

1 8

- 2(982) II

1 3 1 AMAによる大腸菌 K‑12/,t'{変異株の細胞伸長研究への組換えDNAの利用

l o

A B.PARDEE･I Bi d

an )^{M .INOUYE} 7

7 O 9

‑ 9 ilRo.cu. 6

B LTa et. )^{E.M .W tTK}HN :

3

) 0 7 9 9(1 1 8 5

‑ 3 1 8 5 5. 4 ) 2

6 7 9 1 (

内海 ･川向 ･姫野 ･駒野 :c

hu .C m.

.hlAK^MOTO.K, T.

d an

h S L

J NISHtTSUJ卜Uwu:T l

‑o.

I B L.ocen tte

Obes mi dto )M .S.:nsHIMURA

b u

d an dC

t an

9

) 0 8 9 1 4 2

‑ 3 2(

3 2 2, I1. / e 7

3

9 9

‑ 1

S E 4 . 8 llo..131.6

0

L.VAIt' AL HEN:p FE 9. 9 LUTKENHAUSl.I.BL7CLen

)J ト6

5)B.LuGHTENtlERG. ∫.M EりERS. R.PE■ll･:kS. ㍗. KoM^NO 3

F . 4

) 5 7 9 d an 8 2. E,5 Lle

J CARけON:Cle.l d

an )L CLARKE 6

8(1 5 2

‑ 4 5 ) 7 7 9 1 (

) 6 7 9 1 (

8)R.UTSUML,M .KAWAMUKAJ.Y OBATA. J.M oRITA, ht ti.JmlENO VANDER HoEK