各 種 動 物 の 骨 髄 体 外 組 織 培 養
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(2) 1292. 末. (昭31)並. に 第6回 国 際 血 液学 会(1956)に. 永. て発 表. され た.こ の 様 な研 究 発 表 は 内外 に そ の 例 を 見ず, 従 来 の血 球 の死 後 乃 至瀕 死 の状 態 にお け る観察 に比. 泰. 三. 部 に就 て夫 々一 視 野 の組 胞 数 を 計算 し,そ の和 を密 度指 数 とした. c)遊. 走 速 度測 定:ア. ツベ の描 画 器 に て細 胞の中. すれ ば 血 液 学 え の一 大 飛 躍 で あ り,骨 髄 培養 の長 所. 心 点 の軌 跡 を画 き,之 を 「キ ユ ル ビ メー ター」 で計. を 如 実 に発 揮 した もの と云 う事 が 出来 るで あ ろ う.. 測 し,そ の倍 率 か ら換 算 して 実数 値 を 求 めた.即 ち. 私 は教 室 の骨 髄 組 織培 養 に於 け る研 究 の 一環 とし て,. 各 細胞 に就 て30秒 毎 に 形 態 を描 画 し, 2〜3分. 温 血動 物 よ り冷 血 動 物 に至 る各種 動 物 骨髄 の体 外 培. 察 し, 1分 間 の平 均 値 を算 出 した.. 間観. 養 を 行 い,組 織 増 生,細 胞 運 動 生 態 と共 に墨 粒 貪 喰 第3章. 能.生 体 染 色に 就 い て も系 統的 に観 察 し,種 々 の角 度 よ り一連 の 実験 を 試 み た.. 1.増. 本 編 に 於 て は組 織 増 生,増 生 帯 の細胞 活 動 の推 移,. 実 験 成 績. 生面 積 の時 間的 推 移. 白 鼠,猫,海. 〓 の 骨 髄 面 積 増 生 は72時 間迄増生. 各 種 細 胞 の 運 動生 態,並 に 好 中球,偽 好 酸 球遊 走 速. し,二 十 日鼠,鶏,鳩,蛙. 度 の時 間 的 推 移等 に就 いて 報 告す る.. 見 られた.犬 は 雑 種 が 多 くそ の成績 は幼 若犬,成 熟. 第2章. で は48時 間 で 増生 停止が. 犬 で 異 な り一 律 に 論 ず る事 は 出来 な いが,生 後3ケ 実 験 材 料 並に 実 験 方 法. 月 未満 の 幼若 犬 で は48時 間 迄 増 生可 能 で あ り,成 熟. 培養 組 織. 犬 で は24時 間 で早 くも増 生 の停 止 が 認 め られ た.. 哺 乳 類:二 十 日鼠,白 鼠,海 〓,猫,犬. 各 時 間 に於 け る比 較成 長価 を動 物 別 に示 す と第1. 但 し犬 で は後 述 の如 く幼若 犬,成 熟 犬 で著 し く実 験成 績 を異 にす るの で生 後3ケ 月 未満 の. 表 〜第9表 の 如 くであ るが,複 雑 化 を 防 ぐ爲各動物 3例 の平 均 値 を求 め,動 物相 互 間 の比 較成 長価 を一. 幼 若 犬 と. 6ケ 月 以上 の成 熟犬 を 夫 々使 用 し. 括 比 較 して 見 る と第10表,第1図. た.. 即 ち 白鼠,猫 は72時 間 で50前 後 の高 値 を 示 し,鶏 が. に示 す 通 りであ る.. 鳥 類:鶏,鳩. 48時 間 で32.75と な り,以 下 幼 若 犬,鳩,海. 冷 血動 物.殿 様蛙(夏 蛙). 十 日鼠 の順 で何 れ も25前 後 の 数値 を示 す が,成 熟犬. 以上 の 各動 物 を 夫 々3例 宛 用 い,大 腿 骨 骨髄. は24時 間 で6.72,蛙 は48時 間 で僅 かに3.22を 示 すに. を無 菌 的 に 取 出 して使 用 した.. 過 ぎな い,. 培 養 基 材 料:培 地 の支 持 体 と しては 同 種 動 物 のへ バ リン 加血 漿 を,発 育 促 進 物 質 には9日. 目の家 鶏 胎. 第1表. 二十 日鼠比較成長価. 児 圧 搾 液 を用 い た. 培 養 操 作:培 養 は被 覆 培養 法(懸 滴 法)を 用 い教 室 の 術 式 に 準 じて行 つ た.即 ち先 づ被 覆 硝 子 上 にヘ パ リン加 血漿 を1滴 取 り, 1.5cm直 の 中 央 に骨 髄 組 織 片(約1mm3の. 径 に 拡 げ,そ. 細 片)を 載 せ,鶏. 胎 圧 搾 液1滴 を加 え,血 漿 の凝 固 の後 凹 窩 載 物硝 子 に 合 わ せ てパ ラ フ ィ ンで 封 入 し,温 血 動物 で は標 本 を孵 卵 器(37〜38℃)内 室 温(20℃. に 入 れ,冷. 血 動 物 標本 は. 第2表. 前後)に 静 置 した.. 観 祭 方 法:温 血動 物 で は全 て37℃. に保 つた 顕 微. 鏡 保 温 箱 内 に て行 い,冷 血動 物 では 室 温に て観 察 し た. a)増. 生面 積 の計 測:ア ツ ベ の描 画 器 を用 い て 新. 生 組織 を描 画 し,そ の面 積 を プ ラニ メ ー ター で 計測 し,増 生 前 後 の 差 即 ち絶 対 成 長価 の原 面 積 に 対 す る 比 率 を 比 較 成 長価 とした. b)細. 〓,二. 胞 密 度 の 測定:接 眼 レン ズ5倍,対. 物 レン. ズ100倍 に て 増 生帯 の周 辺部,中 間 部,中 心 部 の3. 白鼠比載成長価.
(3) 各 種 動物 の骨 髄 体外 組 織培 養. 1293. 第3表. 海〓比較成長価. 第7表. 鶏比較成長価. 第4表. 猫比較成長価. 第8表. 鳩比 較成長価. 第5表. 幼若犬比較長成価. 第9表. 蛙比 較成長価. 第6表. 成熟犬比較成長価. 第10表. 各 種. 動. 物. 比. 較 成. 長 価(平. 均値).
(4) 1294. 末. 第1図. 永. 泰. 三. 各種動物比較成長価(平 均値). 第13表. 海〓細胞密度指数. 第14表 猫細胞密度指 数. 2.細. 胞 増 生帯 密 度. 各動 物 の時 間 別 密 度指 数 は第11表 〜第19表 の 如 く で あ るが,各 々 の平 均値 を比 較 して見 る と第20表 に 示 す 襟 に な る. 24時 間 に於 け る 密 度指 数 は犬,蛙 が 僅 か に25前 後 の 低値 を示 す の に対 し,他 動 物 で は何 れ も50以 上 の 数値 が 認 め られ る.犬 は幼 若 犬 に於 て も比 較 成 長価 に比 し て密 度指 数 は 著 し く低 く,従 つ て増 生 面 積 及 び密 度 両 者 を 考 慮 に 入 れ 真 の 増 生値. 第15表. (面 積 ×密 度)を 見れ ば,他 の 温 血 動 物 に比 して一. 幼若犬細胞密度指 数. 段 と増 生不 良 な る事 が容 易 に 伺わ れ る. 第11表. 二 十 日鼠 細 胞密 度 指 数. 第16表 成 熟犬細胞密度指数. 第12表. 白鼠細胞密度指 数. 3.全. 細 胞運 動 停止 時 間. 成 熟 犬骨 髄 細 胞 が36時 間 で最 も早 く運 動停 止 し, 蛙 が72時 間,二 十 日鼠,幼 若 犬,鳥 類 が96時 間,白 鼠,海 〓,猫 では 何 れ も120時 間 で あ つ た.但 し鶏 に て一 例96時 間 で運 動 停 止 が 見 られ ず, 120時 間で.
(5) 各 種 動物 の 骨髄 体 外 組 織培 養 停 止 を 見 た. 4.細. 1295. 第17表 鶏細胞密 度指数. 胞 増 生 帯 に於 け る細胞 活 動 の推 移. 二 十 日鼠.白 鼠,海 〓,猫,鶏,鳩. 等 の温 血動 物. で は 大体 同様 な傾 向 を 示 す.即 ち初 期(12時. 間迄). は 組 織増 生盛 ん に して 好 中球,偽 好 酸 球(鳥 類)最 も活 発 に 運動 し,中 期(48時 間 迄)で は 好 中球,偽 好 酸 球 の運 動 稍 々不 活 発 とな り,単 球 が 比較 的活 発 に 運動 す る.末 期(48時. 間以 後)に な ると 白血 球 に. は 変性 顆 粒,空 胞 出現 し,胞 体 膨 化 して 遂 に は運 動 停 止 す る.又 上 記 動物 の 培養 経 過 の 概 略 を逐 時 的 に 見 ると,培 養 後1時 間 で は増 生 帯 は 好 中球,偽 好 酸 球. 第18表 鳩細胞密度指数. が 活発 に運 動 し, 3時 間 に至 る と好 中 球,偽 好 酸 球 は 依 然 と して活 発 な 偽 足運 動 を な し,好 酸 球 も次 第 に 活 発 とな り,淋 巴 球,単 球 も漸 く原組 織 周辺 に 出現 す る. 6時 間 で は 好 中球,偽 好 酸 球 は 周辺 部 よ り中 央 部 にか け て 運 動 し,淋 巴 球,単 球 は 中心 部 に未 だ 存 在 す るが 運 動 は亢 進 す る. 12時 間 に 至 る と好 酸球, 淋 巴 球,単 球 は 中 央部 近 くに進 出 し, 24時 間 では 周 辺 部 の好 中球,偽 好酸 球 の運 動 が 稍 々不 活 発 とな り 中央部 と同 程 度 に な る. 48時 間 で は 中央 部 の 細 胞が 周 辺部 よ り活 発 で.淋 巴球 は 殆 ん ど動 か な くな り, 第19表. 単 球 も漸 く遊 走 速 度が 衰 う えて 来 る. 72時 間以 後 で. 蛙細 胞 密 度指 数. は 中心 部 の 細 胞 の みが 活 動 し,漸 次全 細 胞 が 運 動停 止 す る.線 維芽 細胞 は 鳥 類 で は24〜48時 間,哺 乳 類 で は大 体48〜72時 間で 出現 が 見 られ次 第 に増 加 す る. 犬 では組 織 増 生,細 胞 遊 走 速 度 は一 般 に 非常 に劣 り,増 生 帯 周囲 は他 動 物 に 比 し一 般 に不 鮮 明 で あ る. 成 熟犬 細 胞 は 円形 の休 止 状 態 に あ る事 が 比 較 的 多 く, 運動 状 態 に あ る細 胞 も他 動 物 に見 られ る様 な活 発 な る形 態 の変 動 は 余 り見 られ ず,偏 平 な 偽 足 を 出 し, 緩 慢に運 動 す る のを 僅 か に認 め る程 度 で あ り, 24時 間 以後 で は細 胞 運 動 は 全 く不 活 発 とな る.尚 線 維 芽. 第20表. 各 種. 動 物. 細. 胞 密. 度 指. 数(平. 均値).
(6) 1296. 末. 永. 泰. 三. 細 胞 は18時 間 後 に て 出現 が 認 め られ た.幼 若 犬は 前. 類 よ り出現度 僅 か に大 で,そ の遊 走 性 は 余 り活発 で. 記哺 乳 動 物 と大 綱 に 於 て大 差 な い が,一 般 に 運動 は. な く,原 形 質顆 粒 は 微 細 球 形 で.核 は単 核 で境 界轍. 不 活発 で あ る.. 明 らか でな く遊走 時 先 進 す る.蛙 で は 中等 度 に認 め. 蛙 は 室 温 に て放 置 観 察 す る と,培 養 後6時 間 で 漸. られ 大 小種 々 な もの が あ り,遊 走 性 は殆 ん どな く,. く増 生 が 認 め られ る様 に な り,当初 好 中球,好 酸 球 が. 時 に変 形 運 動 を 呈 し,顆 粒 は 紡 錘形 で光 輝 性 を有 し,. 出現 し,単 球 が 梢 々遅 れ て 出現 す るが,好 中球 は9. 核 は概 し て大 き く境 界 は 不 明 瞭 で あ る.. 時 間 頃 に 最 も活 発に 運 動 す る. 12時 間 に至 る と単 球. 淋 巴 球 の遊 走性 は 各動 物 共 殆 ん ど同樣 で,原 形質. も漸 く活 発 とな り, 18時 間 を過 ぎ る頃 よ り細 胞 の増. は 無顆 粒 で明 徹性 あ り,爲 に 円 滑 に 感 じ られ,核 は. 生 帯 進 出 も多 くな り, 24時 間 で最 も密 とな り,細 胞. 見 え 易 く遊 走 時先 進 し,胞 体 の 輪廓 が明 らかで ある,. 活 動 も衰 退 を 見 せ な いが, 48時 間を 過 ぎ る頃 よ り漸. 単 球 の 生態 も各動 物 で差 異 な く,大 型で 原形 質 は無. 次 白血 球 は 変 性 現象 を 呈 し遊 走速 度 も鈍 くな る,線. 顆 粒 な る も明 徹性 な く,胞 体 の 輪廓 は明 らかで な ぐ,. 維 芽細 胞 は24〜36時 間 にて 出 現 が認 め られ た.. 培 養 時 間を 経 過 すれ ば 大 な る顆 粒 を生 じ胞体 内 を流. 5.各. 種 細 胞 の 生態 観 察(特 に運 動 生 態 に つ い て). 骨髄 芽 球,前 骨髄 球.骨 髄 球 は全 動 物 に て同 様 な 生 態 を 示 し,且 遊 走性 を認 め 得 な い.骨 髄 芽 球 では 核 は 円形 で著 明 に見 え核仁 も認 め られ るが,原 形 質. 動 す る,そ の 運動 は甚 だ特 有 に して蛸足 樣偽 足運 動 乃 至 は 扁平 な 偽足 を緩 や か に 出 して緩 慢 に運 動 し, 胞 体 の変 形 は 著明 で,核 は 遊 走時 先 進 す る.哺 乳類 巨 核 球 の運 動 性 に つ いて は,教 室 に於 て 別 に詳細に 研 究 され て い るので 私 は省 略 した.栓 球 では大部 分. には 明瞭 な顆 粒 を認 め 得 な い.前 骨 髄 球 は哺 乳類,. の もの に運 動 は認 め られ な いが,一 部 の も のに位置. 鳥 類 で は 時 に胞 体 の ブ ラ ウ ン運 動樣 震顫 運 動 乃至 は. の移 動 を 見 る.鳥類,蛙 に 見 られ る紡 錘状 細 胞 は一 般. 廻 転 運 動 が 見 られ る事 あ る も,蛙 で は殆 ん ど この様 な運 動 は 見 られ ない.核 は 明 瞭 に 見 え 円形 に して位 置移 動 の認 め られ る事 が あ る.骨 髄 球 には 固 有顆 粒 が 明 瞭 に認 め られ 分 子 運動 を行 い,核 は円 形 で 明瞭 に 見 え胞 体 内 を移 動 し胞体 は徐 々に 変 形 し てゆ くが 活 発 な る遊 走 性 は認 あ られ な い.後 骨髄 球 か らは遊 走が 認 め られ偽 足 を 形 成 して運 動 し,核 は 殆 ん ど腎 臓 形 を 呈 して遊 走時 後 進 し,原 形質 顆 粒 の流 動 が 見 られ る.姫 中 球,偽 好 酸球 は各 動物 共最 も活 発 に ア メー バ樣 運 動 を 行 い細 胞 の形 状 が 絶 えず変 化 す る. 哺 乳 類 好 中 球 で は,核 は 運 動時 不 鮮 明 で胞 体 の 中心 乃至 後 進 部 にあ り変 形 しな い.原 形 質顆 粒 は 光 輝性 に乏 し い中 等 大 乃至 微 細顆 粒 であ る.鳥 類 偽 好 酸球 では 顆 粒 は 光 輝性 の強 い粗 大 で紡 錘 形 乃至 類 円形 を 呈 し,蛙 好 中 球 の原 形 質顆 粒 は極微 細 で光 輝 性乏 し く暗 色 小 斑点 として 認 め られ る外,哺 乳類 好 中球 に 同 じで あ る.好 酸 球 は 全動 物 共 活 発 に遊 走 し偽足 運 動 を な し核は 後 進 す る,哺 乳 類 好 酸 球 の顆 粒 は大 型 で 特 に 光 輝性 強 く,鳥 類 の顆 粒 も平 等 な る大 き さを 有 し偽 好 酸球 よ り稍 々小 さい.又 蛙 では 粗 大 球形 な る固 有顆 粒が 殆 ん どで,他 に好 中球 顆 粒 に 相 似 た る 微 細顆 粒 を有 し,核 は 単核 乃至 多核 で遊 走 時偏 在 の 傾 向 が あ る.好 塩 基 球 は哺 乳類 で は僅 少で 出 現 度 も 極 め て 低 率 な 爲詳 細 な 観察 に欠 け る恨 が あ るが,一 般 に 運 動 は活 発 でア メー パ運 動 を な し,そ の顆 粒 は 光 輝性 に乏 し く殆 ん ど認 め られ な い.鳥 類 では 哺 乳. に集 在 の傾 向 を 示 し,軽 度 乍 ら偽 足 運 動 が 見 られ る, 6.好. 中 球,偽 好 酸 球 遊 走 速 度 の時 間 的経 過. 増 生 帯細 胞 の機 能 的 方 面 を 示 す も の と して,骨 髄 細 胞 の 代表 細 胞 で あ る好 中 球 の遊 走 速 度 を計 測 した, 動 物 個 々 の遊 走 速 度成 績 は第21表 〜第29表 に示す 如 くで あ る が,更 に 各 々の 平 均値 を求 め一 括比 較 して 見 る と,第30表,第2図. の如 くな る.温 血動 物 では. 大 体 一 樣 に培 養 後3〜6時 冷 血 動 物(蛙)で. 間 に て最 高 値 を示 す が,. は9時 間 で あ る.最 大 遊走 速 度は. 白鼠,猫 が 高 値 を示 し,以 下 鶏,海 〓,鳩,蛙,幼 若 犬,二 十 日鼠 の順 で僅 小 の差 を 以 て続 くが,成 熟 犬 は4.03で 最 低値 を示 し36時 間 で遊 走停 止 す る.全 遊 走時 間 は犬,二 十 日鼠 を例 外 と して他 の哺 乳類 で は120時 間,鳥 類96時 間(但. し鶏 に て一 例 丈120時 間. 第21表 二十 日鼠好 中球遊走速度.
(7) 各 種 動 物 の骨髄 体外 組織 培 養 第22表. 白鼠好 中球遊走速度. 第26表 成 熟犬好中球遊走速度. 第27表 鶏偽好酸球遊走速度. 第23表 海 〓好 中球遊走速度. 第28表 鳩偽好酸球遊走速度. 第24表 猫好 中球遊走速度. 第29表 蛙好中球遊走速度. 第25表 幼若犬好 中球遊 走速度. 1297.
(8) 1298. 末. 第30表. 第2図. 永. 泰. 三. 各 種 動 物 好 中 球,偽 好 酸 球 遊 走 速 度(平. 好中球 ・偽好酸球遊走速度(平 均値). 均値). 種 血漿 使 用 の もの よ り遙 か に 高値 を示 し,又 密度指 数 は 第32表 に 見 る如 く24時 間 に 於け る数値 では鶏 血 漿 に て最 大 であ る が,夫 とて も前 記 他動 物 の密度指 数(第20表)に. 比 べ る と遙 か に低 値 であ る.又 好 中. 球 遊 走 速度 は 第33表,第4図. に 見 る如 く,最 大遊走. 速 度 は 犬血 漿 が異 種 血漿 使 用 の も のを 凌 駕す る.以 上 の成 績 か ら 見 る と犬 骨 髄 の組 織 増 生,遊 走 速 度が 劣 る のは,犬 の血 漿 が犬 骨 髄組 織 培養 に 不適 で ある 爲 で はな い事 が分 る.. 第32表. 遊 走)蛙72時 7.各. 各種動物血漿使用時の犬細胞密度指数. 間で あ る.. 種 動 物 血 漿 の 犬骨 髄 組織 培養 に 及 ぼ す影 響 に就 い て. 前 記 実験 成 績 に 見 られ る如 く,同 一 条 件 下 に組 織 培 養 を 試み た哺 乳類 各動 物 の中,犬 骨 髄 の み に組 織 増 生,細 胞 遊 走 速 度 の著 しい 低 下 が 見 られ た ので, 或 は 犬 血漿 が培 養 に 不 適 では な い か と疑 い,人,家 兎,鶏 の 各 血漿 を 使 用 して比 較 実験 を試 み た.第31 表,第3図. 第31表. に示 す 如 く,比 較 成 長価 では 犬 血漿 が 異. 各種動物血漿使用時の犬比較成長価. 第33表 各種動物血漿使用時 の犬好 中球遊 走速度.
(9) 各種 動 物 の骨 髄体 外 組織 培 養 第3図. 各種動物血漿使用時の犬比較成長価. 1299. 示 す に 過 ぎ な い.こ の結 果 よ り成 熟 犬,蛙 の面 積 増 生が 他 動物 に比 較 して 著 し く不泉 な る事 が 容 易に伺 わ れ る.先 に教 室 大藤 ・亘 理12)は人(胸 骨 穿 刺)家 兎(大 腿骨 々髄)を 用 いて,正 常 骨 髄 培養 所 見に つ き詳 細 な研 究 を 発 表 したが,面 積 増 生 は人 の18時 間 に比 し て家 兎 では48時 間 に及 び,且 比 較成 長価 は 家 兎44.65(48時. 間),人10.73(18時. 間)と 記 載 して. い る.私 の実 験 成績 と対 比 して骨 髄 造 血 の旺 盛 で あ る温 血動 物(哺 乳 類,鳥 類)の 中 では 面 積 増 生は 動 物 の分 化 の程 度 に関 係 を有 す る とは 思 わ れ な いが,脊 椎 動 物 の 中 で始 め て骨 髄 造 血 が認 め られ,且 夫 が 脾 造 血 の移 行 と して 出現 す る と され てい る無 尾 両棲 類 (蛙)骨 髄 では組 織 増 生 は 温 血 動 物 に比 し て著 し く 劣 る. 細 胞増 生 帯 密 度 では 犬,蛙 が低 値 を示 す が,他 動. 第4図. 各種動物血漿使用時の犬好 中球遊走速度. 物 で は何 れ も24時 間 で50以 上 の数 値 を示 した.蛙 は 組織 増 生 も劣 り,細 胞 密 度 も低 い が,之 は 下等 動 物 な るが故 に 容 易 に理 解 され る.犬 は 幼若 犬 に 於 て も 比 較 成 長 価 に比 して 密 度は 著 し く低 値 を示 す.そ こ で増 生 面 積 及 び密 度 両 着 を考 慮 に入 れ 真 の 増生 値 (面積 ×密 度)を 見 れ ば,他 の 温 血 動 物 に比 して 一 段 と増 生 不 良 な る事 が伺 わ れ る.同 一 条 件 下 に培 養 せ る犬 骨髄 の み が,他 の温 血 動 物 に比 し組 織 増 生 が 非常 に 劣 る事 に就 て は,教 室 石 田並 に柚 本 も夫 々犬 を用 い て の骨 髄 培 養 で 同様 な結 果を 得 てい る,. 第4章. 総括 並 に考 按. 石 橋2)は 犬 の 臓 器(肝 臓,腎 臓,心 臓,脾 臓)で は同 種 血 漿 よ り寧 ろ 異 種血 漿 中 に よ く増 殖 し,且 臓. 各種 動 物 の 血 液 の観 察 は それ 丈 で甚 だ 興味 をそ ゝ る ものが あ り,系 統 発 生 の立場 よ りの 比 較 血液 学 的 の研究 は 従 来 必 ず し も少 くな く,我 国 で も天 野 氏1). 器 の発 育 に 向つ て犬 の 血漿 は 最 も 悪 い と述 べ,清 水23)は各種 動 物 血 漿 の 家兎 及 び 海〓 胎 児組 織 発 育 に 及 ぼ す 影 響 につ いて検 索 し,犬 血漿 で は発 育 不 良 な. を 中心 と して か な り詳 細 に 考究 され て い る.抑 々骨. る事 を 指 摘 し て い る.之 等 の研 究 よ り見れ ば 犬 血漿. 髄 造血 は 無 尾両 棲 類(蛙)に. の使 用 が組 織 増 生 の不 良を齎 らす事 も一応 考 え られ. て 初め て 認 め られ,こ. れ 以上 の 高等 脊 椎 動 物 に 於 て は骨 髄造 血 が最 も主 要. るが,私 の犬 骨髄 に於 け る血漿 交 叉 実 験 では 異 種 血. な造 血竈 とな る の であ るが,私 は骨 髄 培 養法 を各 種. 漿 よ り も犬血 漿 に て良 く発 育 を 見た の で,犬 骨髄 の. の脊椎 動物 に 導入 し,動 物 相 互 間で 組 織 増生,血 球. 増 生 不 良 を 血漿 のみ に 原因 を 求 め る事 は 困難 で,そ. の生態 及 び機 能 に異 同 が あ るか 否や を 検 討 し,以 上. の真 因 は依 然 と して不 明 で あ るが,犬 に於 ては 赤色. の実験成 績 を得 た.. 髄 が 生後 比 較 的 急速 に黄 色髄 に換 え られ る様 で あ り,. 先 ず増 生面 積 の時 間 的推 移 に関 して は,白 鼠,猫,. そ れ が 一 因 をな す とも考 え られ るが,生 後 間 もな い. 海 〓 等 の哺 乳類 で は 面 積 増生 は72時 間 に 及び,他 の. 幼 若 犬 に 於 ては 未 だ赤 色 髄 を保 つ て い るに不 拘,か. 動物 で は 殆 ん ど48時 間 で 増 生停 止 が 見 られ,成 熟犬. な り成 績 が 劣つ てい るので 軽 々 し く今 茲 で断 ず る事. の み例 外 で24時 間 で早 くも増 生 停 止が 認 め られ た.. は 出来 ず,今 後 の研究 に俟 た ね ば な らな い.. 又 比 較成 長価 では 白鼠,猫 が高 値 に 達 し鶏 が 之 に次 ぎ,幼 若 犬,鳩,海. 〓,二 十 日鼠 の最 高 値 は48〜72. 細 胞 運動 停 止 時 間 は面 積 増 生 と大 体 平行 関 係 を示 し,白 鼠,猫,海. 狸等 の哺 乳類 が120時 間で 最 も長. 時 間 で 何 れ も25前 後 の 数値 で大 差 は 認 め られ な いが,. く,成 熟 犬 では36時 間 で運 動 停 止が 見 られ,鳥 類96. 成 熟 犬 は24時 間 で6.72,蛙. 時 間,冷 血動 物(蛙)72時. は38時 間 で 僅 かに3.22を. 間 で あつ た.尚 亘 理12)の.
(10) 1300. 末. 永. 泰. 三. 成績 は 人 胸骨,家 兎 骨髄 共 に120時 間 で あ る,次 に. 発 に ア メー バ運 動 を行 い細 胞 の形 状 は 絶 えず 変化す. 細胞 増 生帯 にお け る細胞 活 動 の推 移 に 就 て,温 血 動. る,好 酸 球 も活 発 な る遊 走 が 見 られ,好 塩 基 球は哺. 物 で は 大 藤,亘 理12)の人,家 兎 所 見 と殆 ん ど異 る所. 乳類 に著 明 な遊 走性 を 認 め 得 る が,鳥 類 では 梢々不. は な い.即 ち 初 期は 組 織 増 生盛 ん で 好 中球,偽 好酸. 活 発 とな り,蛙 では 僅 か に変 形 運 動 を呈 す るのみ と. 球 活 発 に 運動 し,中 期 で は好 中球,偽 好酸 球 運動 梢. な る.尚 好 中球(偽 好 酸球),好. 々不 活 発 とな り,単 球 が 比 較的 活 発 に 動 き,末 期 で. は 動 物 種 属 に よ り原 形質 顆 粒 に 異 同 が認 め られる.. 酸 球,好. 塩基球 で. は 線 維 芽 細胞 次第 に増 加 し,白 血 球 は 遊走 速 度 漸次. 淋 巴 球 並 に単 球 は 各 動物 で遊 走 性 に差 異 な く,共. 低 下 し変 性 に 陥 り,遂 に運動 停 止 す る.培 養 初 期 の. に原 形質 は無 顆 位 で 前者 は偽 足 運 動 あ る も一般に恰. 細 胞 出 現 に就 てGrossmann60)は. 海 〓 に て偽 好 酸球,. も靜 か な 感 じの 運 動 を な し,後 者 は大 型 で その運動. 間 に て 出現す る と云 い,河 島16)は. は 甚 だ特 異 で蛸 足 樣 偽足 を緩 や か に 出 し緩 慢に運動. 好 酸 球 は4〜6時. 鶏 胎 児 骨髄 で第1時 間 目に骨 髄 芽 球 様 細胞 及 び前 骨 髄 球,骨 髄球 が 出現 し てア メー バ 様 運動 を 営 む が, 偽 好 酸 球 は認 め られ ず 培養 数時 間 で 現わ れ る と記載 し てい るが,私 の鶏,海 〓骨 髄 培 養 所 見 では 何れ も 培 養 後1時 間 で増 生 帯 は殆 ん ど好 中球,偽 好 酸球 が. し胞 体 の変 形 は 著 明 で あ る.栓 球 では 一 部 の ものに 位 置 の移 動 を認 め,鳥 類,蛙 の 紡錘 状 細 胞は 集在の 傾 向 を示 し軽 度 乍 ら偽 足 運 動 が 見 られ,蛙 は鳥 類に 比 し運動 性 が 劣 る. 動物 白血 球 の 運 動 性 に つ い ては,. 占め 活 発 に運 動す る.又 海 〓 骨髄 で淋 巴球 を特 に検. Wharton. 索 したGrossmann60)は,培. が 文 献 上 最 も 古 く, Schiling(1908)は. 養2日 目 に淋 巴 球 出現. Jonesに. 1世 紀 以上昔. よつ て 「エ ヒ」 で 証 明 され たの 白血球 の. を見 て い る が,私 は 海 〓骨 髄 にて 培 養3時 間 で 既 に. 運 動 を暗 視 野 装 置 の下 に 観 察 した が,彼 以 後 白血球. 出現 せ るを認 め た.培 養 中 期 よ り末 期 にか け て の細. の遊 走速 度 を 観 察 し た人 は 少 な く, Comandon53),. 胞 活 動 推 移 の 大 綱 はFoot58)(鶏), (海 〓)原35)36),河 島16)(鶏)等. Grossmann60). が 示 した所 見 と略 々. Jolly65)Mc.. Cutcheon72),杉. 山 ・森27)28), Hender. son62), Philipsborn78),渡 辺,植. 木6),山 下46),小. 同 様 で あ る.線 維 芽 細 胞 は鳥 類 で は24〜48時 間,哺. 野 田13)14)等 実 に枚挙 に遑 が な く,各 種 動 物 の遊走. 乳 類 で は48〜72時 間 で 出現 を 認 めた が, Bermann48). 速 度 が記 載 され て い る.し か し之 等 は殆 ん ど末梢血. は 海 〓 で48時 間,河 島16)は鶏 に て24時 間 で 出現 を認. に よ る もの で あ り,骨 髄 内 白 血 球 の 運動 性 に就いて. め て い る.幼 若 犬 は 前 記動 物 と大差 な いが,一 般 に. はFoot58),. 運 動 は 不 活発 で あ り,成 熟 犬 で は 更 に不 活 発 とな り. 織 培養 法 に て 観察 して い るが,遊 走 速度 の記 載はな. 線 維 芽 細 胞は18時 間 に て 出現 を 認 めた. 蛙 で は 培養 後6時 間 で漸 く増 生 が認 め られ る様 に. Grossmann60).原35). 36),河 島16)等が組. く,坂 野22),井 上5)の 超 生 体 観 察 に よ る遊 走速度が 見 られ るも,何 れ も疾 病 時 の 遊 走 速 度の 比較 であつ. な り,好 中球 活 動 は9時 間 で 最 も活 発 で, 24時 間 で. て結 局 正常 骨 髄 細 胞 の遊 走 速 度 に つ いて は従 来不完. 細 胞 密 度指 数 は 最 も大 とな り,線 維 芽 細胞 は24〜36. 全 で あつ た.教 室 亘理12)は人,家 兎 の骨髄 培養 で始. 時 間 に て 出現 し, 48時 間を 過 ぎ る頃 よ り白 血球 は 変. めて 白 血球 遊 走速 度 を時 間 的 経 過 に従 つ て記 載 しー. 性 現 象 を 呈 し遊 走 も鈍 くな る,即 ち温 血動 物 に比 し. 革 新 を齎 した が,私 は 亘 理 氏法 に則 り骨髄 細 胞の代. 細 胞活 動 は 遅 く始 ま り且 早 期 に衰 退 す る感 を抱 か せ. 表 白 血 球た る好 中球,偽 好 酸球 遊 走 速 度を 各動物 に. る.. 就 て算 定 し,動 物 相 互 間 の 比 較を 試 み た.最 大遊走. 次 に 骨 髄 細 胞 の運 動 生 態 に 関 して,骨 髄 芽 球,前. 速 度を 示 す時 期 は 温 血動 物 で は殆 ん どが 培養 後3時. 骨 髄 球,骨 髄 球 で は温 血動 物 で 時 に廻 転 運 動 乃至 は. 間,冷 血動 物(蛙)で. 中心 点 の 位 置 移 動 の 見 られ る事 が あ るが,活 発 な る. 後6時 間 で 漸 く増 生 が認 め られ,そ れ に附 随 して細. 遊 走 性 を 認 め得 な い. Grossmann60)(海 〓),原35) 36),. 胞 遊 出も段 々活発 に な る爲,哺 乳類 に比 し て上の様. 河 島16)(鶏)は. な時 間 的差 を生 ず る と思 わ れ る.最 大遊 走速 度を比. 骨 髄 培 養 で骨 髄 芽 球 に 多 少 の変 形 運. は9時 間 で あ る.蛙 で は培養. 動 を認 め,前 骨 髄 球,骨 髄 球 は偽 足 を 出 して ア メー. 較 して 見れ ば 白鼠(11.43),猫(10.43)が. バ 運 動 を 営 む と 述 べ てい るが,教 室 大藤,亘 理12). し,以 下鶏(8.20)海 〓(8.13)鳩(7.43)蛙(7.30). (人,家 兎)は 此 等 細 胞 の 活発 な る遊 走 性 を否 定 して. 幼 若 犬(6.76)二. い る、 後 骨髄 球 か らは 全 動物 に て遊 走 が 見 られ 偽足. 続 き,成 熟 犬(4.03)が. を 形成 して 運動 し,原 形 質顆 粒 の流動 が 見 られ 諸 家. 髄 に て 好 中球,偽 好 酸 球 遊 走 速 度を 系 統 的 に記載せ. の 所 見 と略 々一 致 す る.好 中 球,偽 好 酸 球 は 最 も活. る業 績 は 未 だ 見出 し得 な いが 末 梢 血 の面 で,杉 山 ・. 十 日鼠(6.53)と. 高値 を示. 僅小 の差 を以て. 最 低値 を 示 す.各 種 動物骨.
(11) 各 種 動 物 の 骨 髄 体 外 組 織 培 養 森27)28)並 び に小 野 田13)14)は 温 血 動物 よ り冷 血 動物. 1301. 於 て組 織 増 生,細 胞 機 能 が 劣 る のは 犬 血漿 使 用 に基. に 至 る各種 動 物 にて 白 血球 遊 走 速 度 を検 索 し,好 中. くもの では な い 事 が明 確 で あ る.従 つ て犬 骨 髄 培養. 球遊 走速 度 は一 般 に 動物 の分 化 高 きも の に て大 で,. の成 績 が 劣 るの は,前 記 せ る 如 く犬 骨髄 自体 に 原因. 低 き もの に は小 で,動 物 が下 等 とな るに従 い遊 走 速. を求 む 可 き もの が あ る と思 われ る.. 度 は 減 少 す る傾 向を 示 す と述 べ て い る.私 の実 験 成 第5章. 績 よ り各 種 属動 物 の最 大遊 走速 度平 均 値 を算 出 して 見 ると,哺 乳類7.885μ/m,鳥 動物(蛙)7.30μ/mと. 類7.815μ/m,冷. な り杉 山 ・森,小. 血. 野 田 の結. 哺 乳 類(二 (鶏,鳩)冷. 十 日鼠,白. 血動 物(蛙)の. 結. 論. 鼠,海. 〓,猫,犬)鳥. 類. 骨髄 組 織 培 養 に よ り組 織. 論 と一 応 一 致 は す るが,末 梢 血で 彼 等 が 認 め て い る. 増生 の経 過 並び に遊 走 細胞 の 観察 を 行 い次 の結 論 を. 如 き大 差 は 見 られ な い.し か し好 中球,偽 好 酸 球 全. 得 た.. 遊 走時 間 は 一 ・二 の例 外 を 除 き,哺 乳 類 で は120時 間 で最 も長 く,鳥 類96時 間,蛙72時. (1)増. 生面 積 で は 白鼠,猫,海. 〓 は72時 間 迄,. 間 で あ るの で 一. 他 の動 物 で は殆 ん ど48時 間 迄 増 生す るが,成 熟 犬 は. 般 に 下等 動 物 に な るに従 つ て 短 か くな る傾 向 が明 ら. 24時 間 で 増 生停 止が 見 られ,成 熟 犬,蛙 の比 較 成 長. か で あ る.以 上 を 更 に要 約 す れ ば,高 等 動 物 よ り下. 価 は著 しい 低値 を示 す.. 等 動 物 とな るに 従 つ て 好 中球 最 大 遊 走速 度 は僅 小 の. (2)培. 養後24時 間 に於 け る密 度指 数 を比 較 す る. 差 を 認 め る に過 ぎな い が,全 遊 走 時間 に は 明確 な差. と,犬,蛙. が著 しい 低値 を示 す 外.他 動物 で は何 れ. 異 が あ り,細 胞 機 能 判定 に遊 走 時 間は 大 きな一 因を. も50以 上 の 数値 が認 め られ る.. なす も の と思 わ れ る.. (3)骨. 髄 芽 球,前 骨髄 球,骨 髄 球 は 全 動物 に て. 前 述せ る如 く,同 一条 件 下 に 培 養 を試 み た 温 血動. 活 発 な る遊 走 性 を認 め ず,後 骨 髄球 以後 は 遊 走が 見. 物 の中,犬 骨髄 のみ に 組 織増 生,細 胞遊 走速 度 の著. られ 好 中球,偽 好 酸 球 は最 も活 発 な る偽 足 運 動を な. しい 低 下 が 見 られ た.培 養 基 として使 用 され る犬 血. す.. 漿 の 組織 発育 に及 ぼ す 影 響 に就 いて, Lambertu. Hanes68)はRat. Sarcomaの. 発 育 に 対 し て犬 血漿. (4)好. 塩 基 球は 下 等動 物 とな るに従 つ て遊 走 性. は 衰 え るが,好 酸 球,淋 巴球,単 球 の遊 走性 は各 動. に二 十 日鼠,海 〓 血漿 に 比 し著 し く劣 る と記 載 し,. 物 で 著明 な 差 異 は な い.栓 球 に位 置移 動 を 見,鳥 類. 石 橋2)は 犬 血漿 は 各 動物 血漿 中増 生 的 影 響少 く,犬. 以 下 の紡 錘 状 細 胞 に も軽 度 の偽 足 運動 が見 られ る.. の臓 器 は 同 種 血漿 よ り寧 ろ異 種 血漿 中 に よ く増 殖 す. (5)好 中 球,偽 好 酸 球遊 走速 度 を比 較 すれ ば, 一 般 に犬 が 低値 を示 す 外,各 動 物 間 で最 大 遊 走速 度. る と述 べ,清 水23)は家 兎 及 び海 〓 胎 児組 織 を各 種動 物 血 漿 中 に培 養 し,同 種 血漿 が発 育 に最 も秀 で 人 血. に著明 な差 異 を 認 め な いが,遊 走 時 間は 一,二 の 例. 漿 が 対 照 血漿 に近 き発 育 度 を示 す が,犬 血漿 は哺 乳. 外 を 除 き一 般 に 下等 動 物 に な るに 従 つ て短 か くな る.. 類 中で最 も発 育 不 良 で あ ると報 告 して い る.之 等 の. (6)犬. 骨 髄 培養 に於 け る血漿 を 犬,人,家. 兎,. 研 究 業績 よ り犬 血 漿 使 用 が組 織 培 養 に対 して 当然 問. 鶏 の 各 血漿 で比 較 した 所,犬 血 漿使 用 が比 較成 長 価,. 題 とな る様 に思 わ れ るの で,私 は 補促 的 実験 と して. 好 中 球遊 走 速 度共 に最 良 の成 績 を 示 す.. 同種 血漿(犬)並. び に異 種 血 漿(人,家. 兎,家 鶏). の犬 骨髄 培 養 に 及 ぼ す 影 響 につ いて 検 討 した. その結 果 は 第3,. 4図 に 見 る 如 く組 織 増 生,細 胞. 遊 走速 度(最 大 遊 走 速 度)共 に 同 種 血漿 が優 り,異 種血 漿 の 中 では 人 血漿 が犬 血 漿 に近 き値 を示 した. 以上 の事 実 よ り,骨 髄 組 織 培 養 でも 一般 に認 め られ てい る如 く,同 種 血 漿 の使 用 が 最 も適 切 な る事 が容 易 に 推 察 され る所 で あ り,又 同 時 に犬 の骨 髄培 養 に. 擱 筆 す るに 当 り終 始 御懇 篤 な 御指 導御 校 閲 を賜 つ た 恩 師 平木 教 授 並び に 大藤 助 教 授 に 深甚 な る謝意 を 表 します. (本論 文 の要 旨は 昭 和31年 日本 血 液学 会 第18回 総 会 に 於 て発 表 した) (文献 後掲).
(12) 1302. 末. Tissue. Culture. of the. 永. 泰. Bone. Marrow. Part Observations. on Tissue. 三. in Various. Animals. 1.. Growth. and. Wandering. Cells. By Taizo Suenaga Department of Internal MedicineOkayama University Medical School (Director: Prof. Kiyoshi Hiraki) By conducting a series of tissue culture with bone marrow obtained from mammals (mice, albino rats, guinea pigs, cats and dogs), birds (chicken and pigeons), and cold blooded ani mals (frogs) the author studies the rate of tissue growth and wandering cells, and obtained the following results. 1) As for the growth area, the explant in culture grows up to 72 hours in the cases of albino rats, guinea pigs and cats, while in the case of other animals the growth continues almost up to 48 hours. However, in the case of mature dogs the growth ceases within 24 hours, and the relative growth in the cases of mature dogs and frogs presents a marked decrease. 2) In comparing the index of the cell density at the 24-hour culture, it is markedly lower in the cases of dogs and frogs, whereas in other animals it is over 50. 3) Myeloblasts, promyelocytes and myelecytes of all these animals have no active wan dering capacity, and at the stages of maturation later than metamyelocytes cells show the wandering capacity. Neutrophils and pseudoeosinophils show the most active pseudopoid move ment. 4) As for the wandering capacity of basophilocytes, the lower the species of animals the poorer is their wandering capacity. However, as for the wandering capacity of eosinophils, lymphocytes and monocytes no marked difference in the wandering capacity can be observed among different animals. Motility of thrombocytes can be observed and moreover, even in species lower than birds, a slight pseudopoid movement of spindle cells can be recognized. 5) Comparing the wandering velocity of neutrophils and pseudo-eosinophils of various animals, with exception of dogs that show generally a decrease, no marked difference in the maximum wandering velocity among them. As for the duration of wandering, with one or two exceptions, generally the lower the species the shorter is the duration. 6) In comparing various plasma such as those of dog, man, rabbit and chicken as the medium for bone marrow culture of the dog, dog plasma gives the best relative-growth value as well as the highest wandering velocity of neutrophils..
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