早稲田大学大学院理工学研究科
博 士 論 文 概 要
論 文 題 目
清酒醸造に有用な菌類の細胞外タンパク質 に関する研究
Studies on the extracellular proteins of some fungi which are useful for the sake brewing
申 請 者
藤井 力
Tsutomu Fujii
2006 年 12 月 専攻・研究指導
(課程内のみ)
1
麹 菌 A s p e rg i l l u s o r y z a e (以 下 、 麹 菌 と い う 。)及 び 酵 母 S a c c h a ro m y c e s c e r e v i s i a e
（ 以 下 、酵 母 と い う 。）は 清 酒 や 味 噌 、醤 油 の 醸 造 に 用 い ら れ る 日 本 を 代 表 す る 微 生 物 で あ り 、 長 年 に わ た る 利 用 に よ り 食 品 と し て の 安 全 性 が 確 認 さ れ 、 知 的 蓄 積 が 豊 富 に 存 在 す る 。 両 者 は 、 真 核 生 物 の 基 礎 研 究 に お い て モ デ ル 系 と し て も 利 用 さ れ る と と も に 、 特 に 麹 菌 は 多 様 な 酵 素 を 大 量 に 分 泌 す る の で 、 醸 造 ば か り で な く 異 種 タ ン パ ク 質 の 生 産 に も 用 い ら れ る 。
本 研 究 で は 、 麹 菌 分 泌 酵 素 の 一 つ で あ る リ ボ ヌ ク レ ア ー ゼ （R N a s e）T 1 を コ ー ド す る 遺 伝 子 を 麹 菌 か ら 取 得 し 、マ ル チ コ ピ ー で 遺 伝 子 導 入 し た 高 生 産 株 を 作 成 、 高 分 泌 生 産 を 確 認 し た 。 酵 母 で の 高 発 現 が 細 胞 の 増 殖 を 阻 害 す る こ と を 発 見 し 、 同 じ 真 核 微 生 物 で あ り な が ら 麹 菌 と 酵 母 で は 分 泌 系 に 違 い の あ る 可 能 性 を 示 し た 。
ま た 、酵 母 は そ の 高 い ア ル コ ー ル 生 産 性 と ア ル コ ー ル 耐 性 か ら 醸 造 に 用 い ら れ 、 そ の ア ル コ ー ル 耐 性 に 関 す る 研 究 は 古 く か ら 行 わ れ て き た 。 い く つ か の ア ル コ ー ル 耐 性 変 異 株 は 、 細 胞 壁 溶 解 酵 素 に 対 す る 感 受 性 が 低 い こ と か ら 、 ア ル コ ー ル 耐 性 と 細 胞 壁 の 関 連 を 論 じ る 報 告 も あ っ た 。 本 研 究 前 に は 細 胞 壁 に ど の よ う な 種 類 の タ ン パ ク 質 が あ る の か さ え あ ま り よ く 分 か っ て い な か っ た が 、 申 請 者 は T i p 1 p が 細 胞 壁 タ ン パ ク 質 で あ る こ と を 発 見 し 、 こ れ を 用 い て 細 胞 壁 と の 結 合 部 位 を 解 析 し 、 細 胞 外 へ の 輸 送 転 移 機 構 に 関 す る モ デ ル を 提 案 し た 。
本 論 文 は 4 章 よ り 構 成 さ れ て い る 。
第 1 章 で は 、 ま ず 、 麹 菌 と 酵 母 に つ い て 、 醸 造 で の 役 割 、 真 核 生 物 の モ デ ル 、 異 種 タ ン パ ク 質 の 分 泌 生 産 宿 主 と し て の 利 用 な ど に つ い て 述 べ る と と も に 、 麹 菌 が 多 様 な 酵 素 を 大 量 に 分 泌 生 産 す る こ と 、 酵 母 の ア ル コ ー ル 耐 性 と 細 胞 壁 の 関 係 の 研 究 な ど に つ い て 概 説 す る 。 続 い て 、 麹 菌 の 菌 体 外 酵 素 の 研 究 、 特 に 本 研 究 に 用 い た R N a s e T 1 に 関 す る 研 究 に つ い て 総 括 し 、本 研 究 の ね ら い を 述 べ る 。ま た 、 酵 母 の 細 胞 壁 タ ン パ ク 質 に つ い て 、 構 造 面 、 機 能 面 、 環 境 へ の 応 答 、 さ ら に 細 胞 壁 へ の タ ン パ ク 質 の 固 定 と い っ た 利 用 面 を 含 め て こ れ ま で 研 究 を 概 括 し 、 本 研 究 の ね ら い を 述 べ る 。 最 後 に 、 本 研 究 の 概 要 を 説 明 す る 。
第 2 章 で は 、 麹 菌 R N a s e T 1 遺 伝 子 の 解 析 に つ い て 記 述 す る 。 麹 菌 は 多 く の 加 水 分 解 酵 素 を 大 量 に 分 泌 す る 微 生 物 で あ り 、 分 子 生 物 学 分 野 の 研 究 で 利 用 さ れ る R N a s e T 1 も 麹 菌 培 養 物 の 水 抽 出 物 か ら 得 ら れ る 消 化 剤 タ カ ジ ア ス タ ー ゼ か ら 精 製 さ れ た 分 泌 型 加 水 分 解 酵 素 で あ る 。R N a s e T 1 は s i R N A（s m a l l i n t e r f e r i n g R N A） 合 成 の た め に も 利 用 さ れ る 限 定 分 解 型 R N a s e で あ る が 、 遺 伝 子 は 取 得 さ れ て い な か っ た 。 本 研 究 で は 、 麹 菌 R N a s e T 1 に つ い て 、 ゲ ノ ム D N A 及 び c D N A を 取 得 、 麹 菌 及 び 酵 母 で の 大 量 発 現 系 を 構 築 し 、 酵 母 と 麹 菌 の タ ン パ ク 質 発 現 、 分 泌 機 構 の 違 い に つ い て 考 察 し た 。 ま ず 、R N a s e T 1 遺 伝 子 を 麹 菌 ゲ ノ ム の フ ァ ー ジ ラ イ ブ ラ リ ー か ら 取 得 し 、 宿 主 麹 菌 及 び A s p e r g i l l u s n i d u l a n s に 本 遺 伝 子 を 導 入 す る こ と に よ り 、 取 得 し た 遺 伝 子 が 機 能 の あ る R N a s e T 1 を コ ー ド し て い る こ と を 確 認 し た 。R N a s e T 1 遺 伝 子 の m R N A は 通 常 の 培 養 条 件 の 麹 菌 か ら は 取 得 で き な か っ た が 、
R N a s e T 1 高 発 現 株 か ら m R N A を 抽 出 し 、R T- P C R を 用 い る こ と に よ っ て R N a s e T 1 の c D N A を 得 る こ と が で き た 。R N a s e T 1 遺 伝 子 の ゲ ノ ム D N A と c D N A の 塩 基 配 列 を 比 較 し 、本 遺 伝 子 の 転 写 産 物 は 細 胞 外 分 泌 の た め の 2 6 ア ミ ノ 酸 か ら な る プ レ プ ロ 配 列 を 持 ち 、 こ の 部 分 配 列 を コ ー ド す る 塩 基 配 列 内 に 1 1 4 b p の イ ン ト ロ ン を 持 つ が 、 そ れ 以 外 の O R F に は イ ン ト ロ ン が な い こ と が 分 か っ た 。 次 に 、R N a s e T 1 遺 伝 子 の 高 発 現 が 、 麹 菌 及 び 酵 母 の 増 殖 に 与 え る 影 響 に つ い て 解 析 し た 。 麹 菌 で 高 発 現 す る こ と が 知 ら れ る α ア ミ ラ ー ゼ a m y B の プ ロ モ ー タ ー に 本 c D N A を 接 続 し た プ ラ ス ミ ド を 麹 菌 に 導 入 す る こ と に よ り 、 対 照 に 比 べ 活 性 で 3 0 0 倍 以 上 高 発 現 す る 株 が 取 得 で き た 。 一 方 、 酵 母 で は 同 じ c D N A を ガ ラ ク ト ー ス 誘 導 プ ロ モ ー タ ー の 下 流 に 接 続 し 、 ガ ラ ク ト ー ス 誘 導 条 件 に よ り R N a s e T 1 を 高 発 現 さ せ る と 取 得 株 の 増 殖 が 強 く 抑 制 さ れ る こ と 、 す な わ ち 、 麹 菌 と 違 い 、R N a s e T 1 の 発 現 が 酵 母 の 増 殖 に 影 響 す る こ と が 分 か っ た 。 本 研 究 以 前 に は 、R N a s e T 1 の ア ミ ノ 酸 配 列 か ら 塩 基 配 列 を 推 測 し た 合 成 D N A を 用 い て 大 腸 菌 で の 発 現 を 試 み た 場 合 、 そ の ま ま で は 生 産 さ せ る こ と が で き ず 、融 合 遺 伝 子 と し て 発 現 さ せ 、分 泌 後 に R N a s e T 1 と 融 合 タ ン パ ク 質 を 切 断 す る こ と に よ り は じ め て 成 功 し た と 報 告 さ れ て い た 。 本 研 究 に よ り 、R N a s e T 1 の 発 現 ・ 分 泌 が 、 麹 菌 で は 増 殖 に 影 響 し な い が 、 酵 母 で は 影 響 す る こ と が 示 さ れ た 。 麹 菌 と 酵 母 は と も に 真 核 微 生 物 な の で 同 じ 分 泌 経 路 を 持 つ と 考 え ら れ る が 、R N a s e T 1 発 現 が 麹 菌 に は 影 響 が な く 酵 母 に 影 響 を 与 え る と い う 結 果 は 、 タ ン パ ク 質 分 泌 機 構 自 体 、 発 現 し た R N a s e T 1 に よ る 阻 害 の 影 響 等 に 、 両 者 間 で 何 ら か の 差 が あ る 可 能 性 を 示 唆 し て い る 。
第 3 章 で は 、 酵 母 細 胞 壁 タ ン パ ク 質 T i p 1 p の 精 製 、 細 胞 壁 結 合 部 位 の 解 析 に つ い て 記 述 し て い る 。T i p 1 p は 低 温 シ ョ ッ ク に よ り 高 発 現 す る こ と が 知 ら れ 、N 結 合 糖 鎖 を 持 た な い G l y c o s y l p h o s p h a t i d y l i n i s o t o l ( G P I )型 タ ン パ ク 質 で あ る が 、 申 請 者 は T i p 1 p が 細 胞 壁 タ ン パ ク 質 で あ る こ と を 発 見 し た 。 真 核 生 物 の 細 胞 表 面 の タ ン パ ク 質 に は G P I ア ン カ ー と よ ば れ る 糖 脂 質 を 介 し て 細 胞 膜 に 結 合 し て い る タ ン パ ク 質 が 知 ら れ て い る が 、 酵 母 細 胞 壁 グ ル カ ン に 共 有 結 合 し て い る 「 狭 義 の 細 胞 壁 タ ン パ ク 質 」 も G P I ア ン カ ー 付 加 に 必 要 な シ グ ナ ル 配 列 を 持 つ の で 、G P I ア ン カ ー を 介 し て 細 胞 膜 に 固 定 さ れ た 後 、 細 胞 壁 グ ル カ ン に 転 移 す る と 考 え ら れ て い た 。 し か し 、 こ れ ま で の 解 析 は 細 胞 壁 全 体 を 用 い た 解 析 が 中 心 で あ っ た た め 、 タ ン パ ク 質 の 転 移 機 構 や グ ル カ ン と の 結 合 様 式 の 詳 細 は 明 ら か に な っ て い な か っ た 。 粗 試 料 に は N 結 合 糖 鎖 も 含 ま れ る た め 、 そ の 加 水 分 解 物 の 糖 組 成 分 析 を 行 っ た 場 合 に 見 出 さ れ る グ ル コ サ ミ ン が 、G P I ア ン カ ー の 加 水 分 解 物 に 含 ま れ る グ ル コ サ ミ ン と 見 分 け ら れ な く な る こ と も 結 果 の 解 析 を 複 雑 に し て い た 。 申 請 者 は 、 以 下 の よ う に グ ル カ ン の 一 部 を 結 合 し 、N 結 合 糖 鎖 を 持 た な い T i p 1 p を 用 い る こ と で こ れ を 克 服 す る こ と が で き た 。L i C l 処 理 や S D S で の 煮 沸 に よ り 非 共 有 結 合 タ ン パ ク 質 を 除 去 し た 精 製 細 胞 壁 を 調 製 し 、 グ ル カ ナ ー ゼ 処 理 に よ り グ ル カ ン の 一 部 を 結 合 し た 細 胞 壁 タ ン パ ク 質 を 得 て 、 こ こ か ら T i p 1 p 部 分 を 含 む 標 品 を 精 製 し た 。
3
こ の 標 品 に は 約 7 . 5 m o l / m o l の グ ル コ ー ス （ グ ル カ ン 構 成 成 分 ）、 約 1 m o l / m o l の エ タ ノ ー ル ア ミ ン （G P I ア ン カ ー 構 成 成 分 ） が 含 ま れ て い た 。 リ シ ル エ ン ド ペ プ チ ダ ー ゼ 消 化 し た ペ プ チ ド で は 、G P I ア ン カ ー に 結 合 す る C 末 端 ペ プ チ ド の み が グ ル コ ー ス を 含 ん で い た 。 ま た 、C 末 端 ペ プ チ ド に は 、G P I ア ン カ ー 由 来 と 思 わ れ る マ ン ノ ー ス 及 び 約 1 m o l / m o l の エ タ ノ ー ル ア ミ ン が 含 ま れ て い た が 、G P I ア ン カ ー の 他 の 構 成 成 分 で あ る グ ル コ サ ミ ン や イ ノ シ ト ー ル は 検 出 さ れ ず 、C 末 端 に 結 合 し た G P I ア ン カ ー が 糖 鎖 部 分 で 切 断 さ れ て い る こ と が 示 唆 さ れ た 。T i p 1 p 部 分 を ヒ ド ラ ジ ン 分 解 に よ り 切 断 し 、 遊 離 し た グ ル カ ン 結 合 糖 鎖 を H P L C に よ り 精 製 し た 。 グ ル カ ン 結 合 糖 鎖 に は エ タ ノ ー ル ア ミ ン 、 マ ン ノ ー ス 、 リ ン 酸 ジ エ ス テ ル 結 合 、 グ ル コ ー ス 還 元 末 端 を 含 ん で い た が 、 マ ン ノ ー ス の 還 元 末 端 は 検 出 さ れ な か っ た 。 こ れ ら の 結 果 に よ り 、T i p 1 p の グ ル カ ン 結 合 糖 鎖 は G P I ア ン カ ー 由 来 で あ っ て 、G P I ア ン カ ー の マ ン ノ ー ス と グ ル コ サ ミ ン の 結 合 ま た は マ ン ノ ー ス と マ ン ノ ー ス の 結 合 が 切 断 さ れ る こ と に よ り 生 じ る マ ン ノ ー ス の 還 元 末 端 を 利 用 し て 、 T i p 1 p が 細 胞 壁 グ ル カ ン と 結 合 し て い る こ と が 示 さ れ た 。T i p 1 p の さ ら な る 高 発 現 条 件 を 設 定 し 、 グ ル カ ン 部 分 を 単 糖 や 二 糖 に ま で 分 解 で き る グ ル カ ナ ー ゼ を 用 い て 単 一 な グ ル カ ン 結 合 糖 鎖 を 大 量 に 精 製 す る こ と に よ り N M R 解 析 が 可 能 と な り 、 G P I 由 来 糖 鎖 の タ ン パ ク 側 か ら 3 番 目 の マ ン ノ ー ス と グ ル カ ン が α1 - 4 マ ン ノ シ ド 結 合 し て い る こ と が 明 ら か に な っ た 。 ま た 、 細 胞 膜 に 結 合 し て い る G P I タ ン パ ク 質 の G P I側 鎖 は α1 - 2 結 合 し た マ ン ノ ー ス の 割 合 が 高 い と 報 告 さ れ て い る が 、T i p 1 p の G P I 由 来 糖 鎖 の 側 鎖 は α1 - 2 結 合 し て い る α1 - 3 マ ン ノ シ ル マ ン ノ ー ス の 割 合 が 高 い こ と が 分 か っ た 。
第 4 章 で は 、 本 研 究 の 成 果 を 基 礎 と し て 、 酵 母 、 麹 菌 の タ ン パ ク 質 分 泌 経 路 研 究 及 び 細 胞 壁 タ ン パ ク 質 の 転 移 機 構 研 究 に つ い て の 展 望 と 本 研 究 成 果 の さ ま ざ ま な 分 野 へ の 貢 献 の 可 能 性 に つ い て 記 述 す る 。 麹 菌 R N a s e T 1 に つ い て は 、 本 研 究 で 開 発 し た プ ラ ス ミ ド 等 が 麹 菌 や 酵 母 の タ ン パ ク 質 分 泌 経 路 研 究 の 基 盤 材 料 と し て 利 用 さ れ 、 北 本 ら （ 東 京 大 学 ） の グ ル ー プ は 、 酵 母 で 「R N a s e T 1 発 現 に よ る 超 感 受 性 変 異 株 の 取 得 ・ 解 析 」 を 行 い 、 い く つ か の 遺 伝 子 の 機 能 を 明 ら か に し た 。 酵 母 細 胞 壁 タ ン パ ク 質 T i p 1 p に つ い て は 、 こ の 研 究 に よ り G P I ア ン カ ー の マ ン ノ ー ス 糖 鎖 部 分 が 切 断 さ れ 、 生 じ た G P I ア ン カ ー 由 来 の マ ン ノ ー ス 還 元 末 端 を 利 用 し て α1 - 4 結 合 し て い る こ と 、G P I 由 来 糖 鎖 部 分 が 、既 報 の 細 胞 膜 結 合 G P I タ ン パ ク 質 の 側 鎖 と 結 合 の 種 類 お よ び 糖 残 基 数 の 点 で 異 な る こ と が 明 ら か と な っ た 。 転 移 反 応 の 産 物 が 分 か っ た た め 、 今 後 は 、 転 移 反 応 及 び そ れ を 司 る 酵 素 の 発 見 や そ の 利 用 が 重 要 な 課 題 と な る 。 本 研 究 成 果 で 得 ら れ た 基 礎 的 な 知 見 は 、 細 胞 外 タ ン パ ク 質 の 細 胞 壁 へ の 転 移 反 応 の 解 明 や そ の 利 用 に 役 立 つ と 考 え ら れ る 。
5
研 究 業 績
種 類 別 題名、 発表・発行掲載誌名、 発表・発行年月、 連名者（申請者含む）
論文 ○
○
講演
1. Structure of the glucan-binding sugar chain of Tip1p, a cell wall protein of Saccharomyces cerevisiae、1999年4月、Biochim. et Biophys. Acta 1427, 133-、T. Fujii, H. Shimoi and Y.
Iimura
2. Cloning and Nucleotide Sequence of the Ribonuclease T1 Gene (rntA) from Aspergillus oryzae and Its Expression in Saccharomyces cerevisiae and Aspergillus oryzae、1995年10 月、Biosci. Biotech. Biochem. 59, 1869-、T. Fujii, H. Yamaoka, K. Gomi, K. Kitamoto and C. Kumagai
3. The sites of electrondonation of Photosystem I to Methy viologen、1990年1月、Biochim. et Biophys. Acta 1015, 41、T. Fujii, E. Yokoyama, K. Inoue and H. Sakurai
4. Yeast genes involved in response to lactic acid and acetic acid: Acidic conditions caused by the organic acids in Saccharomyces cerevisiae cultures induce expression of intracellular metal metabolism genes regulated by Aft1p、2006年9月、FEMS Yeast Res. 6, 924-、M.
Kawahata, K. Masaki, T. Fujii and H. Iefuji
5. 酵母を用いたエチレンジアミン・ヘキサメチレンジアミンの処理に関する基礎的検 討、2006年6月、水環境学会誌29, 339-、渡部、鈴木、藤 井、尾崎、正木、家藤 6. Effects of the cultivation conditions on ergosterol biosynthesis by Saccharomyces
cerevisiae、2005年12月、Biosci. Biotechnol. Biochem., 69, 352-、M. Shobayashi, S.
Mitsueda, M. Ago, T. Fujii, K. Iwashita, H. Iefuji
7. Effect of Uranium (VI) on the Growth of Yeast and Influence of Metabolism of Yeast on Adsorption of U (VI)、2005年11月、Journal of Nuclear and Radiochemical Sciences, 6, 99-、F. Sakamoto, T. Ohnuki, N. Kozai, E. Wakai, T. Fujii, H. Iefuji, and A. J. Francise 8. Production, Purification and characterization of an extracellular lipase from the yeast,
Cryptococcus sp. S-2、2000年11月、Process Biochemistry, 36, 317-、N. R. Kamini, T.
Fujii, K. Kurosu and H. Iefuji
9. Transport of pyruvate in Saccharomyces cerevisiae and cloning the gene encoded pyruvate permease、2000年5月、Biosci. Biotechnol. Biochem., 64, 980-、O. Akita, C. Nishimori, T.
Shimamoto, T. Fujii and H. Iefuji
10. Cloning and Characterization of a Gene Complementing the Mutation of an Ethanol-sensitive Mutant of Sake Yeast、2000年2月、Biosci. Biotechnol. Biochem.64, 229-、T. Inoue, H. Iefuji, T. Fujii, H. Soga, and K. Sato
11. 繊維凝集性酵母M111株からの高凝集活性変異株の分離、1998年6月、醸造協会誌 93, 481-、秋田、岩下、藤 井 、家藤、飯村
12. Effects of selective destruction of iron-sulfur center B on electron transfer and charge recombination in Photosystem I、1991年1月、Photosynthesis Research 27, 65-、H. Sakurai, K. Inoue, T. Fujii and P. Mathis
13. The sites of photoinhibition around Photosystem I in chloroplasts、1989 年8 月、VIII International conference on Photosynthesis、K. Inoue, T. Fujii, E. Yokoyama, N. Kusumoto, H. Sakurai
14. The Photoinhibition Site of Photosystem I in Isolated Chloroplasts under Extremely Reducing Conditions、1989年1月、Plant Cell Physiol. 30, 65-、K. Inoue, T. Fujii, E.
Yokoyama, K. Matsuura, T. Hiyama and H.Sakurai
1. 酵母のGPI型細胞壁タンパクTip1pとグルカンの結合部位の解析、2001年3月、日 本農芸化学会2001年度大会、藤 井 、下飯、家藤、黒須、中島
2. 出芽酵母細胞壁タンパク質の局在と発現に関する細胞学的研究、1999年4月、日本 農芸化学会1999年度大会、藤重、藤井 、下飯、家藤、大場、黒須
3. S. cerevisiaeの細胞壁タンパクTip1pの細胞壁グルカン結合部位の解析、1997年7月、
酵母遺伝学フォーラム第30回研究報告会、藤 井 、下飯、飯村
6
研 究 業 績
種 類 別 題名、 発表・発行掲載誌名、 発表・発行年月、 連名者（申請者含む）
講演
（続き）
その他
（特許）
その他
（講演）
4. 酵母細胞壁タンパクTip1pの細胞壁グルカン結合糖鎖の解析、1997年3月、日本農 芸化学会1997年度大会、藤井 、下飯、飯村
5. Structure of Glucan-binding region of Tip1p, a cell wall protein of Saccharomyces cerevisiae、1996年8月、1996 Yeast Genetics and Molecular Biology Meeting、T. Fujii, H.
Shimoi, Y. Iimura
6. グルカナーゼにより酵母細胞壁から遊離するタンパク質TIP1の細胞壁結合部位の解 析、1995年8月、日本農芸化学会1995年度大会、藤 井 、下飯、飯村
7. 麹菌A. oryzaeのリボヌクレアーゼＴ1の cDNAのクローニングと発現、1993年12
月、平成5年度日本生物工学会大会、藤井 、五味、北本、熊谷
8. 麹菌（Aspergillus oryzae）のリボヌクレアーゼＴ１遺伝子のクローニングと塩基配列
の決定、1991年11月、平成3年度日本発酵工学会大会、山岡、藤 井、五味、北本、
熊谷
1. バイディーゼル（モノアルキルエステル）の製造方法、2006年8月、家藤、カミニ、
藤井 、黒須、岡崎、特許3837466
2. 酵母由来の新規リパーゼ CS2、2004年 1 月、特許3507860、家藤、カミニ、藤 井 、 黒須
3. 高凝集活性変異株、2000 年 3 月、特許 3044284、飯村、秋田、家藤、下飯、藤 井 、 岩下
1. Protein expression of Saccharomyces cerevisiae in Response to Uranium Exposure、2006年10月、The 6th International Symposium on Advanced Science Research、F. Sakamoto, T. Nankawa, N. Kozai, T. Fujii, H. Iefuji, A. J. Francis, T. Ohnuki
2. Cryptococcus sp. S-2リパーゼのPichia pastorisによる分泌生産、2006年9月、平成18 年度日本生物工学会大会、和田、正木、藤 井 、家藤
3. 酵母を用いた砒素回収除去に関する研究、2006年9月、平成18年度日本生物工学会 大会、西堀、藤井 、正木、家藤
4. 酸条件下で機能する酵母の遺伝子、2006年9月、平成18年度日本生物工学会大会、
河畑、正木、藤井 、家藤
5. Aspergillus kawachii由来Cel61の発現と酵素化学的性質、2006年9月、平成18年度 日本生物工学会大会、目瀬, 正木, 藤井, 家藤, 小関、伊藤
6. 微生物による焼酎蒸留廃液処理、2006年6月、第21回焼酎講演会、藤井
7. 担子菌酵母Cryptococcus sp. S-2における形質転換系、発現系の構築、2006年3月、
日本農芸化学会2006年度大会、土岡、池田、正木、藤 井 、家藤
8. 出芽酵母による異種蛋白質 Taka-amylaseの生産分泌に関する検討、2006年3 月、日 本農芸化学会2006年度大会、池田、正木、藤 井 、家藤
9. 酵母におけるS-アデノシルメチオニンの生産・蓄積挙動に関する研究、2006年3月、
日本農芸化学会2006年度大会、高岡、庄林、浮穴、正木、藤井 、家藤
10. カドミウムバイオモニタリング酵母の高感度化の検討、2006年3月、日本農芸化学
会2006年度大会、安達、河畑、正木、藤井 、家藤
11. 酸に応答する酵母の遺伝子、2005年11月、平成17年度日本生物工学会大会、河畑、
正木、藤 井、家藤
12. カドミウムモニタリング酵母の開発、2005年11月、平成17年度日本生物工学会大 会、安達、宗正、正木、藤井 、家藤
7
研 究 業 績
種 類 別 題名、 発表・発行掲載誌名、 発表・発行年月、 連名者（申請者含む）
その他
（講演）
（続き）
13. 環境保全と副産物の利用 しょうちゅう粕の微生物処理と清酒酵母の SAM につい て、2005年11月、四国醸造セミナー、藤 井
14. 微生物を用いたしょうちゅう粕処理、2005年10月、酒類総合研究所講演会、藤井
15. リン高蓄積酵母を用いたしょうちゅう蒸留粕の酵母処理の検討、2005年9月、土木
学会年次学術講演会、渡部、藤 井 、家藤, 尾崎
16. 酵母の砒素応答機構の解析とその利用、2005 年3 月、日本農芸化学会2005 年度大 会、宗正、正木、藤 井 、家藤
17. 酵母を用いたエチレンジアミン・ヘキサメチレンジアミンの処理に関する研究、2005 年3月、日本農芸化学会2005年度大会、渡部、尾崎、正木、藤井 、家藤
18. 酵母の酸耐性または感受性に関わる遺伝子、2005 年 3月、日本農芸化学会2005 年 度大会、河畑、岡田、森、正木、藤 井、家藤
19. 麹菌を用いたしょうちゅう蒸留粕の有効処理装置の開発に関する研究、2005年3月、
第39回水環境学会、渡部、高山、尾崎、正木、藤井 、家藤
20. Effect of uranium(VI) on the growth of yeast、2004年11月、The Fourth International Symposium on Advanced Science Research、F. Sakamoto, T. Ohnuki, N. Kozai, E. Wakai, T. Fujii, H. Iefuji, A. J. Francis
21. 食品産業用酵母の26S rDNA D1/D2領域とITS領域の塩基配列による分類、2004年
9月、平成16年度日本生物工学会大会、河畑、森、藤 井 、正木、家藤
22. 実用排水処理酵母からのリン高取込み酵母の育種と利用、2004 年9 月、平成16 年 度日本生物工学会大会、渡部、尾崎、岩下、藤 井 、家藤
23. ノニルフェノールに応答する酵母S. cerevisiae遺伝子の検索、2004年9月、平成16 年度日本生物工学会大会、藤 井 、浮穴、宗正、正木、家藤
24. 砒素に応答する酵母S. cerevisiae遺伝子の検索とその利用、2004年3月、日本農芸 化学会2004年度大会、宗正、岩下、浮穴、藤 井 、家藤
25. 清酒酵母用発現ベクターの構築、2004年 3月、日本農芸化学会 2004年度大会、池
田、正木、藤井 、家藤
26. 各種クチナーゼによる生分解性プラスチックの分解、2004年3月、日本農芸化学会 2004年度大会、名倉、正木、藤井 、家藤
27. 瀬野川ぶどうより分離した酵母の製パンへの利用、2004年3月、日本農芸化学会2004 年度大会、河畑、岡田、森、藤 井 、家藤
28. 実排水処理酵母からのリン高蓄積株酵母の育種と利用、2004 年 3月、第 38 回水環 境学会、渡部、尾崎、岩下、藤 井 、家藤
29. 麹菌を用いた余剰汚泥の脱水処理に関する研究、2004年3月、第38回水環境学会、
高山、尾崎、藤井 、正木、家藤
30. しょうちゅう粕の現状と対応-南九州での知見を中心に-、2004年3月、第55回日本 醸友会沖縄支部講演会、藤井
31. 凝集性酵母Hansenula anomala J224の凝集因子タンパクの解析、2001年3月、日本 農芸化学会2001年度大会、西森、家藤、藤 井 、黒須
32. 協会９号清酒酵母の遺伝子解析、2001年 3月、日本農芸化学会 2001年度大会、池 田、家藤、藤井 、黒須
33. Conversion of vegetable oil to biodiesel using Cryptococcus sp. S-2 lipase、2001年3月、
日本農芸化学会2001年度大会、N. R. Kamini, H. Iefuji, T. Fujii, T. Kurosu
34. Purification and characterization of cellulose digesting enzymes、2001年3月、日本農芸 化学会2001年度大会、P. S. Fernando, H. Iefuji, K. Maski, T. Fujii, T. Kurosu
その他、海外講演 3 回を含むその他（講演）23 回、外部資金報告書 8 通
