博士（医学）田村 学位論文題名
肝温虚血再潅流障害におけるIVIac ―1 ， 内 在 性 TNF ー ロ ， IFN‑ ア の 役 割
学位論文内容の要旨
I． 諸 言
兀
肝 臓 の 温 虚 血 再 濯 流 障 害 は ， 肝 移 植 に お い て 避 け ら れ な ぃ 障 害 の ひ と つ で あ り ， 移 植 肝 早 期 機 能 不 全 の 原 因 の ひ と っ と 考 え ら れ て い る ． ま た 肝 切 除 で は 出 血 の コ ン ト ロ ー ル の た め に 肝 門 部 で の 一 時 的 血 行 遮 断 が し ぱ し ぱ 行 わ れ ， こ れ が 術 後 肝 機 能 障 害 の 要 因 の ひ と っ と さ れ て い る 。 最 近 ， 肝 温 虚 血 再 濯 流 障 害 の 機 序 と し て ， 再 濯 流 後 の 肝 臓 に 炎 症 反 応 が お こ り ， こ れ に よ り 肝 臓 が 障 害 を 受 け る と の 仮 説 が 考 え ら れ て お り ， 好 中 球 や ク ッ パ ー 細 胞 ， そ れ ら と 関 連 す る 各 種 サ イ ト カ イ ン の 役 割 が 注 目 さ れ て い る 。 今 回 ， マ ウ ス の 肝 温 虚 血 再 濯 流 障 害 モ デ ル を 確 立 す る こ と に よ り ， マ ウ ス の 接 着 分 子 ， サ イ ト カ イ ン に 対 す る 単 ク ロ ー ン 抗 体(MAb） の 投 与 が 可 能 と な っ た の で ， 好 中 球 の 接 着 分 子 で あ るMacー1，TNF‑ば ， お よ び マ ク ロ フ ア ー ジ 活 性 化 因 子 で あ り ， 肝 温 虚 血 再 濯 流 障 害 に お け る 役 割 が 注 目 さ れ て い るIFN‑yに つ い て 検 討 し た 。
n． 実 験 材 料 お よ ぴ 実 験 方 法 1． 実 験 モ デ ル
体 重40g前 後 のddY雄 性 マ ウ ス 使 用 し た 。 ヘ パ リ ン を 静 注 後 ， 肝 門 部 で 肝 正 中 葉 ， 外 側 左 葉 に 向 か う 門 脈 ， 動 脈 ， 胆 管 を ク リ ッ プ を 用 い て50分 間 遮 断 し ， そ の 後 再 濯 流 し た 。 虚 血 さ れ た 肝 は 全 体 の 約7割 を 占 め て い た 。
採 血 は ， 開 腹 前 と 再 濯 流30分 ，1，3，6，12，24時 間 後 に 施 行 し た 。 ま た 採 血 は1個 体 よ り1回 だ け と し ， 一 度 採 血 し た 個 体 は 虚 血 実 験 に 用 い な か っ た 。 再 濯 流24時 間 後 に は ， 採 血 後 に 虚 血 肝 の 一 定 部 分 を 採 取 し た 。
2．ldAb
抗 マ ウ スMac−l14Ab，5C6（rat IgG2b） と 抗 マ ウ スTNF‑aMAb，hfPー6ーXT22（rat IgGl） お よ び 抗 マ ウ スIFN‑'yMAb，R4―6A2（rat IgGl） を 阻 血 前 に 投 与 し た 。 コ ン ト ロ ー ル 群 に は 正 常 ラ ッ ト グ ロ プ リ ン を 投 与 し た 。
3．TNFー 戉 ，IFN‑7の 測 定
TNF‑a， IFN‑Y値 は doubleー sandwich ELISA法 を 用 い て 測 定 し た 。 ―391−
4 ．肝障害の評価
血 漿 GPT と ， 阻 血肝 断 面の 組織像より 算出した 壊死面積 割合を用 いて行っ た。
5 ．ミェロペルオキシダーゼ（MPO ）陽性細胞数
Graham and Karnovsky の方法に準じて阻血肝組織片のMPO を染色した。50 強視野に含 まれる陽性細胞数を測定した。
6 ．統計処理
測定値はすぺて平均値土標準誤差にて表記した。統計処理にはWilcoxson nonpara − metric rank suru test を 用 い ， p く O ． 05 を 有 意 差 あ り と 判 定 し た 。
m． 結 果
1 ．肝組織及び血中TNF ーロ，IFN ーY の推移
抗体未投与群で，再灌流後1 時間より24 時間の間，虚血肝組織でTNF‑a の上昇を認め たが，INF ー Y は組織，血中とも測定感度以下であった。
2 ．各種抗体の投与効果 1 ）抗Mac −1 抗体投与の効果
再灌流24 時間後血漿GPT 値および肝壊死面積は有意な減少を示した。 MPO 陽性細胞数も 有意に減少した。
2 ）抗TNF‑a 抗体投与の効果
血漿 GPT 値およぴ肝壊死面積は減少しなかった．MPO 陽性細胞数にも有意な変化を認め なかった。
3 ）抗I FN‑Y 抗体投与の効果
血漿 GPT 値，肝壊死面積は有意な変動を示さなかった．MPO 陽性細胞数にも有意の減少 を認めなかった。
4 ）抗Mac −1 抗体およぴ抗TNF‑ ロ抗体同時投与の効果
血漿 GPT 値および肝壊死面積は有意な減少を示した。しかし MPO 陽性細胞数の減少はな かった。
1V． 考 察
Mac −1 （CDllb/18 ）は，主に顆粒球，単球に認められる重要な細胞間接着分子であり，
抗 Mac ―1 抗体の投与によりそれら細胞の接着が抑制され，その機能が抑制されることが 予想された。また MPO は，顆粒球，単球に多量に存在するが，肝の虚血再濯流障害で肝に 浸潤したMPO 陽性細胞数は好中球数を反映するとされている。したがって本実験で抗 Mac −1 抗体投与後に肝温虚血再灌流障害が軽減したことから，Mac −1 分子をブロックす ることにより好中球の浸潤が抑えられ，肝温虚血再濯流障害が軽減したことが示唆され た 。し たがって同 障害にお いて Mac ― 1 が 重要な役 割を果し ていると 考えられた 。 一方虚血肝組織中に TNF‑ 乱の上昇を認めたが，抗 TNF‑ ロ抗体の投与は障害を軽減する ことはできず，好中球の浸潤も抑制されなかった。また，抗Mac −1 抗体と抗TNF‑a 抗体
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の 同 時 投 与 は 障 害 を 緩 和 し た が ， そ の 程 度 は 抗Mac―1抗 体 単 独 投 与 の 場 合 と ほ ば 同 様 で あ っ た 。 以 上 よ りTNF‑aの 肝 温 虚 血 再 濯 流 障 害 に お け る 役 割 は 中 心 的 な も の で は な い と 考 え ら れ た 。 ま た 本 実 験 モ デ ル でMac−1が 重 要 な 役 割 を 果 し て い る こ と を 考 え る と ，TNF
‑aがMac−1活 性 化 の 中 心 的 な 因 子 と は 考 え ら れ な か っ た 。
INF‑Yは 虚 血 肝 ， 血 液 共 に 検 出 さ れ な か っ た 。 ま た 抗IFN‑Y抗 体 投 与 は 障 害 を 緩 和 せ ず ，MPO細 胞 数 に も 変 化 を 認 め な か っ た 。 こ の こ と か ら ， 肝 温 虚 血 再 灌 流 障 害 でINF‑Yが 発 現 し て い る と し て も そ の 量 は 微 量 で あ り ，TNF‑琵 と 同 様 に そ の 役 割 は 限 ら れ た も の で あ る こ と が 考 え ら れ た 。
V． 結 語 肝 温 虚 血 再 濯 流 障 害 に お い て
1） 抗Mac→1抗 体 投 与 が 障 害 を 軽 減 し た こ と か らMacー1は 同 障 害 に 重 要 な 役 割 を 果 し て い る こ と が 示 さ れ た 。
2） 抗TNF‑ロ 抗 体 の 投 与 は 障 害 を 軽 減 し な か っ た こ と か らTNF‑戉 の 同 障 害 に 与 え る 影 響 は 小 さ く ， ま た ，Mac―1の 活 性 化 に も 中 枢 と な る 役 割 は 果 た し て い な ぃ と 考 え ら れ た 。
3） 抗IFN‑Y抗 体 投 与 が 障 害 を 緩 和 す る こ と が で き な か っ た こ と か らIFN‑Yの 役 割 は 限 定 さ れ た も の で あ る と 推 測 さ れ た 。
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主 副 副
学 位 論 文 審 査 の 要 旨
学 位 論 文 題 名
