子宮内膜症の病因は未だに確定していない

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子宮内膜症病巣における AngiotensinⅡ type1 (AT1), type 2 (AT2) receptors 発現について

（要約）

日本大学大学院医学研究科博士課程外科系産婦人科学専攻

仲尾岳大修了年 2015 年指導教員山本樹生

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[緒言]

子宮内膜症（endometriosis）とは子宮内膜組織に類似する組織が子宮内腔以外の部位で発生・発育する類腫瘍として取り扱われる疾患である。

子宮内膜症の病因は未だに確定していない。異所性子宮内膜は Prostaglandin（PG）を産生することが知られている。特にPG E2は炎症や疼痛に関連するだけでなく子宮内膜症の病態に関連していると考えられている ^{1, 2}。子宮内膜症病巣では Cyclooxygenase-2

（COX-2）や誘導型microsomal prostaglandin E synthase-1（mPGES-1）が強発現していることが報告された^3-5。

レニン‐アンジオテンシン系rennin-angiotensin system(RAS)は、血管収縮、腎における血行力学、水電解質バランスを調節し、血圧を変化させる ⁶。AngiotensinⅡ receptor はType1（AT1） receptor、Type2（AT2） receptorに分類される⁷。

ヒト子宮内膜組織においてAT1 receptorおよびAT2 receptorが発現していることが報

告された^{8, 9}。ラットの子宮内膜間質細胞においてangiotensinⅡはCOX-2を誘導するこ

とが報告された¹⁰。このことから子宮内膜症病巣において、RASがアラキドン酸カスケードを介して子宮内膜症の病態に関連していると仮説を立て検証することとした。

本検討において著者は子宮内膜症病巣におけるAT1 receptor, AT2 receptor mRNA発現および蛋白産生を解析し、さらにCOX-2, mPGES-1 mRNA発現との相関を解析検討した。

[方法] (1) 対象

子宮内膜症患者32人より採取した卵巣子宮内膜症性嚢腫壁組織29検体、非子宮内膜症患者15人より採取した子宮内膜組織15検体をコントロール対象とした。採取した子宮内膜組織は、増殖期、分泌期、月経期に分類した。

(2) 患者背景

卵巣子宮内膜症性嚢胞患者は29名であった。非子宮内膜症の婦人科良性疾患患者は 15 名であった年齢、収縮期および拡張期血圧、心拍数はいずれも両群間に有意差を認めなかった。

(3) 免疫組織化学染色

採取した検体は10%ホルマリンで固定処理し、パラフィンに包埋し薄切した。

一次反応抗体として、AT1 receptorはrabbit polyclonal antibody to Anti-Angiotensin Ⅱ Type 1 Receptorを使用し、AT2 receptorはrabbit polyclonal antibody to Anti-Angiotensin Ⅱ

Type 2 Receptorを使用した。ヒストファインシンプルステインMAX-PO (R)を用いて発

色させた。

染色された組織標本を3名が別々に鏡検した。腺上皮細胞と間質細胞について4段階で評価し、3名の評価の平均値を元に解析した。

(4)RNAの抽出、RTおよび qRT-PCR

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検体は-80℃に凍結し粉砕の後、TRIZOL Reagentを用いてtotal RNAを抽出した。High Capacity cDNA Reverse Transcription Kitを用いてcDNAを作製した。

Quantitative RT-PCRを用いてAT1, AT2 receptor, COX-2, mPGES-1 mRNA発現定量を行った。

mRNA発現量の検討は比較CT 法を用いて解析した。CT値はGAPDHの平均CT 値より換算した。ΔΔCT法により、非子宮内膜症患者の増殖期子宮内膜組織と比較し相対値（fold difference）を示し評価した。

(5) 統計学的解析

統計学的解析について、各郡間の有意差検定はMann-Whitney U testを用いて行った。

相関関係の解析はpearsonの積率相関係数を用いて検討した。P値<0.05をもって有意差ありと判定した。

[結果]

Ⅰ 子宮内膜症病巣および正所性子宮内膜組織におけるAT1, AT2 receptor 蛋白発現について

子宮内膜症患者の正所性子宮内膜（増殖期、分泌期）、卵巣子宮内膜症性嚢胞壁のいずれにおいても腺上皮細胞、間質細胞に陽性細胞を認めた。

Ⅱ 子宮内膜症病巣および正所性子宮内膜組織におけるAT1, AT2 receptor mRNA発現について

採取した検体を非子宮内膜症患者の正所性子宮内膜（月経期、増殖期、分泌期）、子宮内膜症患者の正所性子宮内膜（増殖期、分泌期）、卵巣子宮内膜症性嚢胞壁、腹膜病変に分け、mRNA発現量を比較検討した。

(1) AT1 receptor mRNA発現について

卵巣子宮内膜症性嚢胞壁は非子宮内膜症患者の増殖期子宮内膜に比較し有意に高値であった（P<0.05）。一方卵巣子宮内膜症性嚢胞壁と非子宮内膜症患者の分泌期子宮内膜とでは有意な差を認めなかった。

非子宮内膜症患者の分泌期子宮内膜は増殖期に比較し有意に高値であった（P<0.05）。 (2) AT2 receptor mRNA発現について

いずれの群においてもAT2 receptor mRNA発現量に有意差を認めなかった。

(3) AT1 / AT2 receptor mRNA発現比について

卵巣子宮内膜症性嚢胞壁は非子宮内膜症患者の増殖期子宮内膜に比較し有意に高値であった（P<0.05）。

卵巣子宮内膜症性嚢胞壁は子宮内膜症患者の増殖期正所性子宮内膜に比較し有意に高値であった（P<0.05）。

子宮内膜症腹膜病変は非子宮内膜症患者の増殖期子宮内膜に比較し有意に高値であ

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った（P<0.05）。

Ⅲ 卵巣子宮内膜症性嚢胞壁組織におけるAT1, AT2 receptor mRNAとCOX-2, mPGES-1 mRNA発現の関連について

(1) 卵巣子宮内膜症性嚢胞壁組織における AT1 receptor mRNA と COX-2, mPGES-1 mRNA発現の関連について

AT1 receptorとCOX-2 mRNA発現にR=0.669、P<0.01と相関を認めた。AT1 receptor

とmPGES-1 mRNA発現に相関関係を認めなかった。

(2) 卵巣子宮内膜症性嚢胞壁組織における AT2 receptor mRNA と COX-2, mPGES-1 mRNA発現の関連について

AT2 receptorとCOX-2 mRNA発現にR=0.659、P<0.01と相関を認めた。AT2 receptor

とmPGES-1 mRNA発現に相関を認めなかった。

(3) 卵巣子宮内膜症性嚢胞壁組織におけるAT1 / AT2 receptor mRNA発現比とCOX-2,

mPGES-1 mRNA発現の関連について

AT1 / AT2 receptor とCOX-2 mRNA発現に相関を認めなかった。AT1 / AT2 receptorと mPGES-1 mRNA発現にR=0.590、P=0.01と相関を認めた。

(4) 非子宮内膜症患者の正所性子宮内膜における AT1 / AT2 receptor mRNA 発現比と COX-2, mPGES-1 mRNA発現の関連について

AT1 / AT2 receptorとCOX-2、mPGES-1のいずれもmRNA発現に相関を認めなかった。

[考察]

今回著者は子宮内膜症の病態におけるレニンアンジオテンシン系との関連を検討した。

これまでヒト子宮内膜症病巣におけるangiotensin receptorの検討報告はなく、今回著者はヒト子宮内膜症病巣において初めてAT1, AT2 receptor発現を検討した。ヒト正所性子宮内膜におけるangiotensin receptorの発現は1989年に初めて報告された⁸。今回、子宮内膜症病巣におけるangiotensin receptorについてmRNA発現および蛋白産生を確認した。

ヒト正所性子宮内膜におけるangiotensin receptorと月経周期との関連については以前より報告がある。ヒト子宮内膜に AT1, AT2 receptor 蛋白が発現しており、特に AT1

receptor はホルモンの影響を受けることが報告されている ⁹。今回の検討において AT1

receptor mRNA発現は非子宮内膜症患者の分泌期子宮内膜が増殖期正所性子宮内膜に比

較して有意に高値であり、子宮内膜症病巣が非子宮内膜症患者の増殖期子宮内膜に比較して有意に高値であった。レニンアンジオテンシン系がAT1, AT2 receptorを介して細胞増殖や血管新生に影響することで、月経周期だけでなく子宮内膜症の病態にも関与している可能性を考えた。

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子宮内膜症の病態については諸説あるが、子宮内膜症の病態にアラキドン酸カスケードとの関連が指摘されている^3-5。またレニンアンジオテンシン系とアラキドン酸カスケードの関連について報告があり、ラットの子宮内膜間質細胞において angiotensinⅡが COX-2を誘導することが報告されている¹⁰。今回の検討ではAT1, AT2 receptorとCOX-2 mRNA発現に正の相関を認めた。子宮内膜症病巣においてAT1 / AT2 receptor mRNA 発

現比とmPGES-1 mRNA発現に正の相関を認める一方で非子宮内膜症患者の子宮内膜に

おいて相関を認めなかった。レニンアンギオテンシン系がアラキドン酸カスケードを介して子宮内膜症の病態に関連があると考えた。

レニンアンジオテンシン系は血圧や脈拍を調節することが知られている。本検討では卵巣子宮内膜症性嚢胞群と非子宮内膜症群で血圧および脈拍に有意差を認めなかった。

正所性子宮内膜や子宮内膜症病巣における AT1, AT2 receptor 発現は全身への影響は少なく局所への影響に留まると考えた。

AT1 receptor作用としては血管新生、細胞増殖、炎症反応、アポトーシスの抑制とい

った働きがある。AT1 receptor阻害薬であるlosartanは、VEGF産生抑制作用や前立腺癌、

乳癌、子宮内膜癌の細胞増殖抑制作用が報告されている^11-13。このような観点から今後のさらなる検討によりヒト子宮内膜症治療にARB (angiotensinⅡ receptor blockers)の作用が治療に応用できる可能性がある。

これらの結果を踏まえ今後は細胞培養実験が必要であると考える。細胞培養実験において、losartanやterminsartanといったAT1 receptor阻害薬の効果を確認する必要がある。

また近年注目を集めているangiotensin(1-7)やその受容体であるMas receptorを検討する必要がある。

[まとめ]

著者はヒト子宮内膜症病巣においてAT1, AT2 receptor発現を初めて確認した。レニンアンジオテンシン系は子宮内膜症の病態に関連し、PGE²合成系を介して関連している可能性を考えた。今後の更なる検討により子宮内膜症の病態解明や、ARB が新たな治療法へ発展する可能性が考えられた。

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