様 抗 原 発現能 相 く l け 違 前 駆細胞 球 前駆 細胞 く l 単球 系 顆粒 系

4 00 金沢 大 学十 全 医 学 会 雑誌 第9 7巻 第2号 4 0 0−^{41 2 く}1 9881

顆 粒球系前駆細 胞 く^{C FC −G}l ^と単 球 ^{． マ} ク ^{ロ フ} ァ ^ー ジ系前駆 細 胞く^{C F じ M} l ^{に お} ける I^a 様抗原発 現 能 ^の相^違

金 沢大 学 医 学部小 児科 学 講^{座 く主}任二谷口 昂 教 授I

沼 田 三 枝 子

く昭和^{6 3}年² 月^{2 5 日}受 付う

顆 粒 球^一単 球ノ^マクロ フ ァ^ー ジ系前 駆 細 胞 くC F U⁻G Mン か ら額 粒 球 系 前駆 細 胞 くC F C⁻Gl お よ び単 球ノマクロ フ ァ ^ー ジ系 前 駆 細 胞 くC F C 朋1 ^{へ の}分 化^の過 程と 工a 様 抗 原の発現 能と の関 係^につ いて検 討し た一 方法と し て，工a 様 抗 原に対す る単ク^{ロ ー ン}抗体O K lal と補 体^で処理 し て^ヒト臍帯 血お よ び骨 髄 単核 細 胞から Ia 様 抗 原 陽性 く1a^＋l 細 胞を除 去す る方 法 くn egativ e s ele ctio nl， な ら び^にブ ド ウ球 菌よ り精 製し た プロ テ イ^ンA 結合ウシ赤血球と単ク^{ロ ー} ン抗体O K lal と を 用^いた^ロ ゼット法お よ びセ ル^． ソ^ー ティ ン グ法^によ り^ヒト臍 帯 血や骨 髄 単 核 細 胞か ら 王a^＋細 胞と 工a 横 坑 原 陰 性 く1a

−1 細 胞を分離 分 取す る方 法 くpo sitiv es ele ctio nl を用い て検 討し た． まず， O K Ial と補 体^でIa^＋細 胞を除 去後， C F U⁻G M ^コ ロ ^{ニ ー}培 養法を行なうと，骨 髄^では補 体のみ で処_{理 し た}対 照^に比^べ C F U⁻G M が著し く減少し， エ ステ ラ ^ー ゼニ重染 色 法^によ る と， そ の ほ と ん ど が C F C^．G の減 少によ る も の であ^った．

一方， 臍帯^血では C F U⁻G M の減 少は軽 度で， 残っ た I^a一紙 胞は C F C^，G よ り も C F C⁻M を強く発 育さ せ た． ま た，Ia^十細 胞と Ia

一 紙 胞を^ロゼット

法で分離 分 取す る と， 臍 帯血 C F C⁻G は お もにIa^＋細 胞 群に お い て形 成さ れ， 骨 髄C F C⁻G も ま た同様^の結 果と な^った． これに対し， 臍 帯 血C F C^．M の大 部分は Ia一_{細 胞 群}に お いて形 成^{さ れ た．} 骨髄に おけ る C F C^． M の絶 対 数は臍 帯 血に比^べて非 常^に少な^いた め， 骨 髄C F C⁻M の形 成は 王a

一 細胞 群に お い ても 少 な く， 有 意の結 論は得ら れ な かった■ 螢 光 活性 化^{セ ルソ一} 夕 ^ー を利用 し たセ ル ^． ソ ^ー ティ ング法を 用^いて よ り純粋

にIa^＋細 胞と Ia

一細 胞を分 離分 取し た が， Ia^＋細 胞 群^{に お}け る C F C⁻G ^{コ ロ ニ ー} 形 成^の優 位 性な ら び^にIa− 細胞 群^にお け る C F C^．M ^{コ ロ ニ ー}形 成^の優 位 性が確 認さ れ た． ま た， 臍 帯血単核 細 胞か らのT リン パ球 除 去，ある^いは h ^＋細 胞お よ び Ia

一 紙 胞^{に よ る}培 養 細 胞の再構 築，あ るいは分 画し た 工a^＋細 胞な ら びに工a一紙 胞培 養 上 清の C F U ^．G M アツ セイ系への添 加によ り，C F C⁻G，C F C⁻M にお け る Ia 横坑 原 発現能には偏^った 増減はお こらず， 補 助 細 胞の関 与や培 養 中^にIa^十，1a

一 紙 胞か ら放 出さ れ る液 性因 子の関 与は少な^いものと 思わ れ た．以 上 の結果よ り，C F U ⁻G M か らの顆 粒球 系あ る^いは単 球 系ど ち ら^かへの方 向づ け と Ia 様 抗 原発 現能と の間には密接な関 係が あ り，C F C⁻G では その発 現能が強く，C F C⁻M で は その発現能が弱い こと が 明 らかと な^った^． ま た， 臍 帯 血で は Ia 様 抗 原発 現 能^の弱^い C F C⁻M が多数 存 在し， 何らか の生理的 意 義が 示 唆さ れ た．

Key ^{w o r}ds ste m c ells，Ia a nti_ge n s， g^{ra n u}lop^oie sis_，bo n e m arr o w _， C O rd b lo od

Ia 抗 原は， マウス の1 7 番 目の染 色 体上にあ る 主 要 I r egi ^{o n−a S S O C}iated a nti_ge n s で あ る と^ころから，Ia抗 組 織 適 合遺 伝子群 くm ajo r histo c o m patib ili_{t y} c o m^一 席と総 称さ れ た^り． ヒトでは， こ の M H C が第6染 色体

ple x，M H Cl ^のI 領域 遺 伝子 くと くにI⁻A と I⁻E 亜領 短 腕上にあ り H L A 複合 座と呼ば れ， その中^に存 在す 卿 によって支配さ れ て産 生さ れ る糖蛋白 質抗 原^で， る H L A ⁻D R 領 域は免 疫 学 的^に重 要な機 能を担^ってい

A b br e viatio n s こB F U ^．E，bu r st⁻fo r ming ^{u n}itsin e ry th_{r o}id_ニB R B C，bo vin e red b lo od c ells三 C F C^．G， C Olo ny⁻fo r ming ^{c e}lls in g^{r a n u}lo cy t^ei C F C⁻M ， C Olo ny⁻fo rmi ng ^{c e}lls in m o n o cy t^el

m a c r ophag^eニC F U ⁻E，C Olo ny⁻fo r ming ^{u n}itsin e ry thr oid_三C F U⁻G E M M _，C Olo ny⁻fo r ming ^{u n}its

in g^{r a n u}lo cy t^{e， e r}y thr oid， m O n O Cy t^{e， m e}g^aka ry^{o c}y t^eニC F U ⁻G M ， C Olo ny⁻fo r ming ^{u n}its in

C F C⁻G と C F C⁻M に お け る Ia 横 坑 原 発 現能

る D R 抗 原を支配す る遺伝子領 域^であ る． この D R 抗 原は組織分札 生 物 学 的性 状， 分子構 造^{に お い てマ} ウ ス の1−^{E 抗原と似て いる ため王a 様 抗 原と呼ば れ てい}

る^{2 1． こ の}工a 様 抗 原は B 細胞， 抗 原 提示細胞， 活 性 化 丁細胞^に発現 さ れ， 免 疫 担 当細 胞 間 相互作用に お いて 重 要な働き を担^っている^釘．

一方， 造血細 胞^にも 工a 様

抗 原が発 現す る^こと が 明 ら^かと な^ってき た． 顆 粒球 系 で は，骨 髄 芽球，前 骨 髄球^には 1a 横 坑 原が発 現す る が，

よ り成 熟し た顆 粒球は Ia 横 坑 原 陰性で あ り，骨髄 芽 球 よ り未熟な顆 粒 球一^{単 球ノマ クロ フ ァ ー ジ系 前 駆 細 胞} く^{c o}lo ny^．fo rmi ng u nits in gr a n ulo cy t^e−m O n O Cy tel

m a c r ophag^e，C F U ⁻G Ml で は Ia 様 抗 原が発 現し てい る と^の報 告が数 多く な さ れ て^いる^{4ト 州}．ま た，赤 芽球 系 細胞^に関し て は， 未 熟な赤 芽 球 系 前 駆 細 胞 くbu r st⁻ fo r ming u nitsin e ry thr oid， B F U⁻El で は I^a 様 抗 原 が発 現し ている が^{鋸1 1ト 1 4J}， よ り成 熟し た赤 芽 球 系 前駆 細胞 く^{c o}lo ny⁻fo rmi ng u nits in e ry thr oid， C F U ⁻El

に^{つ い}て は議論の残^って^いる と^ころ で あ る が，工a 様 抗 原は発現し^{て い}な^いと さ れ ている^{8Il lト1 3I}． 近 年， C F しト G M ，B F U⁻E よ り未 熟で多分 化能を有す る造 血 幹細 胞

であ る c olo ny^．fo rmi ng u nits in gr a n ulo cy te，

e ry thr oid， m O n O Cy te， m egaka ryo cy te くC F U ⁻ G E M MJ ^に対す る^{コ ロ ニ ー}形 成 法が発 達し^{1 5ト1 71}，

C F U^．G E M M にお^いて も ま た Ia 様 抗 原が発 現し て^い る と報 告さ れ^{て い}る^{1 8ト 抑．} 以 上^のよ う^に，工a 様 抗 原は ヒト造血幹 細 胞^に発 現し， その分 化の過 程^に関 与して いること が 示唆さ れ て^いる．

一方，C F U ⁻G M は顆 粒 球 系前駆 細胞 くc olo ny⁻fo r ming ^{c e}lls in g^{r a n u}lo cy t^e，

C F C^．Gl と単 球l^マク^ロ ファ ^ー ジ系 前駆 細 胞 く^{c o}lo ny⁻ fo r ming c ellsin m o n o cy teノm a c r ophage， C F C⁻Ml

にさ ら^に分化す る と考え ら れ て^い る が， その各^{々 に}お け る 工a 横坑 原^の発現性^{につ い} て は ほ と ん ど検 討さ れ て^いな^い． 本研 究^では，工a様 抗 原^に対す る単ク^{ロ ー ン} 抗体O K lal と補 体を 用^{い て ヒ}ト骨 髄 細 胞と臍 帯血 よ り Ia 様 抗 原 陽 性 く工a^＋l 細 胞を除去 す る方 法 く^{n e}ga⁻ tiv e s ele ctio nl， な ら びに セ ル ^． ソ ^ー ティ ング法およ び プロ テイ ^ンA を利用 し た^ロ ゼッ ト法^によ り^ヒト臍 帯血 や骨 髄 単 核 細 胞^から Ia^＋細 胞と 工a 様 抗 原 陰 性 く工a−_{1 細 胞}を分 離 分 取^{す る}方法 くpo sitiv e s ele ctio nl

によ り， C F U⁻G M か ら C F C⁻G お よ び C F C⁻M への分 化の過 程と Ia 様 抗 原発現能との関 連^{につ い て}検 討し た．

g^{r a n u}lo cy t^{e−m O n O C}y t^el^{m a cr．o}ph ag^e三C F U ⁻S ，

4 01

材 料^およ び方法

I ． 材 料

正常新 生 児 分娩 直 後^で， 胎 盤を剥 離す る前^に切 断さ れ た臍 帯^の胎 盤側よ り採取し た臍帯 血^を使 用し た． さ ら^に特発 性 血小板 減 少 性紫斑病， 鉄 欠 乏性 貧血， 急 性 白 血病 寛 解 期， あ るいは末棺血 お よ び骨 髄の検 索を行

い骨髄 球 系 造血 が 正常と診 断さ れ た患 者^{か ら}採 取し た 骨 髄を使用 し た^．

工工^． 方 法 1 ． 単 核 球^の分 離

ヘパリ^ン加 臍 帯血に2^．5％デ キ^ス ト ラ^ンーリ^ン酸 緩 衝 液 生理食 塩 水 くpho sphate⁻buf fe r ed s alin e_， P B S，

pH ^ニ7．41 を等量加え 3 7⁰C， 3 0分 間静 置後上清を採 取 し， Fic oll^．Hy paqu e く1ymphopr ep，Nyega a rd 良 Co．，

01s o，No r w ayl 比 重遠 沈 法^にて 4 00 X g，3 0分 間遠 心 し中間 層^の単核 細胞を分 離し た． 骨 髄も^{ヘ パ}リン存 在 下に穿 刺吸引し， P B S で 5 倍希 釈し た の ち FノH 法に て 4 0 0X g，3 0 分 間遠 心し た^． 中間 層に分 画さ れ た単 核 細 胞を P B S で 3 回洗 浄し，M cCoy5 A 培養 液 くF lo w ，

M cle a n，V Al ^に浮遊^{し た2 112 21} 2 ^． 付 着 細胞の除 去

1 5％ 牛 胎 児血清 くF B S， Flo w， Sta n m o r e， N S W ，

Au str alial を含む M cCoy 5 A 培 養 液^にて単 核 細胞^を 5 ^Xl O⁸個ノml の濃 度に調 節し， プ ラ^スチック^ベ ト リ 皿 く6 0X1 5 m m ，F al c o n 揮30 3 01 ^にて 3 7⁰C， 5％C O2

条 件下で 6 0 分 間培 養後，付 養細 胞を除去し非 付 着 細胞 くN A 細 胞lのみ を 回収し た^． な お， N A 細 胞の ^{a ．}ナ^フ

チ^ルエステ ラ^ー ゼ染 色 陽性 率は 2 ％以下で あ^った．

3 ． 単ク^{ロ ー} ン抗 体O K lal と補 体^によ る補 体 依 存 性 細胞 溶 解 法

臍 帯 血や骨 髄か ら得ら れ た N A 細 胞を 5 Xl O⁸ノ^ml の濃 度^にな る よ うにM cCoy5 A 培 養 液に再 浮遊さ せ，

Ia 抗 原に 対す る単 ク ^{ロ ー ン}抗 体O K I^alくO^rtho

P ha r m a c e utic al Co rp^．， Ra ritan ， NJl を111 0 0 の割 合で加え， 3 0分 間室 温^にて インク^{ベ ー} 卜 し， O E Ial抗 体を N A 細 胞に結 合さ せ た^． 新鮮な， ある^いは ⁻8 0⁰C

に て保 存さ れ ていた ウ サ ギ 血清を補体と して， こ の O K Ial結 合N A 細 胞^に 111 0の割 合^で加え， 3 7⁰C， 4 5 分 間恒 温槽^にて イ^ンク^{ベ ー} 卜 し た後， 30 0^X g，1 0 分間 遠心 し， M cCoy5 A 培 養液^にて洗 浄 衡 抗 体 処理前の N A 細 胞浮 遊 液と同量にな る よ うにM cCoy 5 A 培 養

C Olo ny⁻fo r ming ^{u n}its in sple e n ニF A C S ，

flu o r e s c e n c e a ctiv ated c ell s o rte rニF B S，fetal bo vin e s e r um ニH P C M ， hu m a n pla c e ntal

C O nditio n ed m ediu m i P B S， pho sphate⁻b uffe r ed s alin e三P H A

， ph_{y t}ohe m aggl ^utininニP W M _， p^oke w e ed mitog^en 三S P A ，Staph_ylo c o c c al_pr otein A ．