論文審査の結果の要旨
氏名：藤 井 亮 太
専攻分野の名称：博士（医学）
論文題名：骨肉腫におけるmiRNA-1の抗腫瘍効果の検討 審査委員：（主 査） 教授 長 岡 正 宏
(副 査） 教授 吉 野 篤 緒 教授 川 名 敬 教授 大 島 猛 史
骨肉腫は近年の集学的治療により生存率は60-80%まで改善したが、ここ約30年間では一定で変わりが ない。本研究は骨肉腫におけるmiR-1の機能解析、またその標的遺伝子を同定・機能解析し、マウス皮下 腫瘍モデルにmiR-1を導入し抗腫瘍効果を検討したものである。
骨肉腫細胞株（MG63,Saos2,G292）と骨芽細胞株(hFOB1.19)におけるmiR-1の発現量をQuantitative real time PCR（qRT-PCR）で、増殖能をWST8 assayで測定し、細胞周期および死細胞の割合をフロー サイトメトリー法にて検討した。遊走能に関しては wound healing assay、浸潤能は matrigel invasion assayで調べた。標的遺伝子としてPAX3やSlug、細胞周期停止と細胞接着の関連遺伝子もqRT-PCR法 とwestern blot法で検討した。vivoにおいてはmiR-1の生体内における腫瘍抑制効果を検討した。
すべての骨肉腫細胞株でmiR-1発現が有意に低下しており、骨肉腫細胞株（MG63）にmiR-1を導入に より細胞増殖は有意に抑制された。細胞周期関連遺伝子の解析では、miR-1導入によりp21発現は有意に 上昇し、p53に非依存的な経路でG0-G1期での細胞周期停止を誘導した。p21を制御し、miR-1の標的遺 伝子の一つであるPAX3に注目した。miR-1導入によりPAX3発現が顕著に抑制され、PAX3-siRNAで細 胞増殖の有意な抑制と、G0-G1期停止とp21発現の上昇を認めた。マウス皮下腫瘍モデルでも有意に腫瘍 増大を抑制した。
遊走・浸潤能も有意に抑制した。miR-1 の標的遺伝子の一つであり、上皮間葉系転換に関与する Slug に注目した。miR-1導入により有意にSlug発現を抑制し、Slug-siRNA（siSlug）でも遊走・浸潤能の有 意な抑制を確認した。miR-1群とsiSlug群でともにOB-cadherin発現が上昇し、骨肉腫の遊走・浸潤能 にはOB-cadherinが重要と考えた。OB-cadherin-siRNAでは遊走・浸潤能ともに促進した。
以上より骨肉腫におけるmiR-1導入は骨肉腫の新規治療法として期待できることがわかった。
よって本論文は、博士（医学）の学位を授与されるに値するものと認める。
以 上 平成３０年２月２８日
