精 製 肝 炎 ウ イ ル ス に 関 す る 研 究
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(2) 5828. 津. 田. 哲. 郎. そ の 結 果 興 味 あ る 知 見 を 得 ら れ た と 信 ず る の で,そ. 2,000 r.p. m.. の 概 要 を 報 告 す る.. 内 に0.25ml宛. 20min.遠. 心 上 清 液 を得 て,漿 尿腔. 接 種 を 行 つ た.接 種 後 は毎 日2回 観. 察 し,胎 児 の死 亡 あ る場 合 は直 ち に,胎 児 の生 存 す 実 験 材 料 及 び 方 法 供 試 ウ イ ル ス:実. る場 合 は,ウ イル ス 接種 後7〜9日 に. 各 胎 児 よ り同 様 な方 法 で胎 児 臓 器 乳剤 を 作 り,次 代. 化 卵 累 代 に よ り 引 続 き保. 接 種 材 料 と した.著 者 の 分譲 を受 け た両 ウ イル ス株. 験 に 用 い た ウ イ ル ス は,先. 村 上 等 に よ り 分 離 さ れ,孵. に して 屠殺 し,. 存 さ れ て い る 肝 炎 ウ イ ル ス の 内 の 石 原,小. 川 両 株,. で は,夫 々3代 まで 累 代 を行 い,以 後 の 実験 に用 い. 泉 熱 ウ イ ル ス と し て は 先 に 大 日 方18)に よ り分 離 さ. た. 3代 まで の 累 代 に於 て は,肝 炎 ウ イル スで は,. れ た の を,当. 比 較 的 胎 児 の 死 亡 が 良 く認 め られ た が,泉 熱 ウイル. 教 室 に 於 て マ ウ ス累 代 に よつ て 保 存 し. て い る 社 株 で あ り,先. に 同 僚 高 田 に よ り,北. 里研 究. 所 笠 原 四 郎 博 士 よ り分 譲 を 受 け た 三 井 株 と,同. 一性. 化卵 に よ る累 代. 卵 の 漿 尿腔 内 に 予 め 準備 した. ウ イ ル ス感 染 乳 剤 を0.25ml宛 イ ル ス感 染 乳 剤 と し て は,肝. 高 田16)の 所 見 で あ るが,著 者 もま た 漿 尿腔 内 に ウ イル スを 接種 後 ウイル スの 精製 を試 み た.そ の精 製. 方 法 は 両 ウ イ ル ス共 に 次 の 方 法 に 做 つ た. 即 ち 孵 化 後10〜12日. 孵化 卵 の漿 尿 腔 内 に両 ウイ ル ス を接 種 す ると きに, ウ イル ス の増 殖 が あ る こ とは,先 に小 笠 原15),又 は. 状 を 有 す る も の と確 認 さ れ た もの で あ る. 孵 化 卵 に よ る 感 染 及 び 累 代:孵. スで は 殆 ん ど胎 児 の死 亡 が 認 め られ な かつ た.. 接 種 し た.初. 代 ウ. 炎 ウ イル ス の場 合は 孵. 要 領 は次 の如 くで あ る., ウ イ ル ス の 精 製 要 領:ウ. イ ル ス の 精 製 要 領 は,. 橋 本 の 行 つ た 超 高 速 遠 心 に よ る 反 覆 精 製 法 に 做 つ た.. 化 卵 の ウ イ ル ス感 染 を 惹 起 し た 胎 児 乳 剤 若 くは 胎 児. そ の 方 法 は 表 示 し た(第1表).著. 肝 臓 乳 剤 を 作 つ た が,之. 等 の 各 種 臓 器 乳 剤 調 製 に は,. ル ス 精 製 方 法 に よ り,泉. 予 め 罹 患 臓 器 を3〜4個. 宛 集 め,秤. 様 に 行 つ た 結 果,良. 量 し た 後,感. 卵 の 漿 尿 腔 液 を 用 い て 稀 釈 し, Homogenizerに つ て 均 等 な 乳 剤 を 得,更. に2,000r.. 遠 心 し た 上 清 液 に, Penicillin mycin. 100μg/mlを. し,滅. 添 加 し て 用 い た.又. 菌 食 塩 水(pH7.6)を. よ. p. m., 20min.,. 100u/ml,. ス に お い て は,罹 患 マ ウ ス の 肝,腎,肺. 染. 泉 熱 ウ イル. を集めて秤量. 加 え て, Homogenizer. に よ り 細 挫 し た 上, 10倍 稀 釈 乳 剤 を 作 製 し,同. 第1表. 様. 熱 ウイル スの精 製 もまた 同. 結 果 を 得 た.そ. の 方 法 の 概 要 は,. ウ イ ル ス 感 染 漿 尿 腔 液 を 多 量 に 集 め, 4,000 r. p. m. 20min.超. Strepto. 者 は この 肝 炎 ウ イ. 高 速 遠 心 を 行 い 上 清 液 を 得,粗. 織 片 を 除 去 し,更 して,夾 30min..遠. に10,000. 雑 物 を 除 き,得. r. p. m.. 30min.遠. た 上 清 を35,000. 心 し て 得 た 沈 渣 を,少. 大 な る組 心. r. p. m.. 許 りの食 塩 水 に浮. 游 し精 製 ウ イ ル ス と して 用 い た.肝. 炎 ウ イル スで は. 予 め 橋 本 の 行 つ た 確 認 法 と し て,電. 子 顕 微 鏡 に よる. 泉 熱 ウ イ ル ス の 精 製 方 法.
(3) 精 製 肝 炎 ウ イル ス に関 す る研 究 観 察,マ. ウス に対 す る起病 性 を確 めて い るの で,著. 5829. せ られ た.精 製 肝 炎 ウ イル ス に 於 て は殊 に 肝 臓 の病. 者 も両 ウイ ル ス に就 て 同 様 な実 験 を行 い,ウ イ ル ス. 理 所 見 が高 度 な場 合が 多 く,常 に病 変 の 発 現 が 平 等. の 精製 純 化 の程 度,若. で あ る こと も興 味 が 深 く,可 及 的夾 雑 物 を 除 去 し,. くは ウ イル ス様 粒 子 の存 在 を. 確 め た.. 純 化 した状 態 に 於 て は,組 織 片等 の混 在 に よ る ウイ 実. 1). 験. 成. ル ス の増 殖 の 抑 制 を 受 け な い,ウ イル ス の感 染 に は 績 最 良の 状 態 に あ る もの と推 測 され た. 精製 ウイル スを 用 い た 両 ウイル スの 一 般 性 状. の比 較 実験 i). 次 に泉 熱 ウイル スに 於 て は,先 づ 孵 化 卵 に 於 け る ウ イル ス の 累代 に よ り,漿 尿 腔 内 で よ く増殖 が行 わ. 両 精 製 ウイ ル ス の マ ウ スに対 す る病 原 性. 既 に 高 田 に よ り報 告 せ られ た如 く,未 精製 ウイ ル. れ る こ とは認 め られ た の で,肝 炎 ウイ ル ス と同様 に 累 代 を 重 ね た.肝 炎 ウイ ル スに 比 較 し,孵 化 卵 の胎. スを マ ウス に接 種 した 場 合,そ れ ぞ れ マ ウス は感 染. 児 死 亡率 が 低 く,し か も胎 児 の病 変 が少 い こと は,. 致 死 す る ことは な い が,特 有 の 病 理 所 見 を示 す 不 頭. ウ イル スの感 染 標識 とは な り難 い点 で あ るの で,マ. 性感 染 を惹 起 す る こ とが 知 られ て い るが,著 者 は 同. ウ スに 復 原 して 感 染 の 様相 及 び程 度 は,病 理所 見 に. 様 な精 製 方 法 で,精 製 純 化 した ウイ ル ス浮 游 液 を,. よ り窺 つ た.. 更 に マ ウ スに 接種 し,精 製 した 場 合の起 病 性 を 窺 つ. 又泉 熱 ウイル スの感 染 標 識 と して 認 め られ る病 理. た.肝 炎 ウ ウイ ル ス に於 て は,そ の病 理 所 見 と して. 変 化 は,一 般 に 各 臓 器 に 於 て認 め られ た.即 ち先 づ. は,先 づ 肝 臓 を 中心 と した病 変 が挙 げ られ た.即 ち. 肝 臓 に 於 て は,小 葉 内小 壊 死巣 の 形 成,肝 素 の解 離,. 肝臓 に 於 て は,肝 細 胞 の 変 性及 び壊 死,類 壊 死 若 く. 肝 細 胞 の変 性,血 管周 囲 の細 胞 浸 潤,星 細 胞 の 腫 大,. は壊 死 巣 周辺 に お け る単 球 の 集 合,病 変 の高 度 な 場. 増生,単 球 又 は 組 織球 よ りな る小 結 節 形 成 等 で あ り,. 合 に は.少許 り の 好 中 球 を 混 在 す る か,明 瞭 に Mallory氏 小 体 の 出現 等 が 認 め られ,星 細 胞 の腫 大. 肺 臓 に は間 質 性肺 炎,血 管 周 辺 の単 球.組 織 球 の 増. 及 び増 生,肝 素 の解 離,更. 腎 臓 で は 上皮 細胞 の 変 性,間 質 に於 け る細 胞 増殖,. に実 質及 び間 質内 に円 形. 生 が 挙 げ られ るが,他 に脾 臓 に は細 網 細 胞 の 増生 等,. 細 胞 の 浸 潤 等 が よ く認 め られ た.次 に肺 臓 に 於 て は. 充 血 若 くは 出血 等 が 認 め られ,未 精 製 ウイ ル ス と比. 胞 隔 炎,気 管及 び血 管 周 辺 に お け る 円形 細 胞 浸 潤,. 較 して,病 理 学 的 変化 は高 度 な場 合 が多 く,し か も. 更 に 胞隔 の肥 厚,肺 充 血 若 くは 出血 等 の 病 変 が窺 わ. 病 変 が確 実 に,平 等 に 出現 す る こ とは,肝 炎 ウ イル. れ たが,他 の脾,腎 に 於 け る病 変 が 少 い こ とが注 目. ス の 時 と同様 で あ る(第2表).. 第2表. 精 製 ウ イ ル ス に よ る 病 変 の 比 較. 註:(++)〜(⊥)病. 以 上両 ウイル スの マ ウス に於 け る病 理変 化 を 列挙. 変 の 程 度 を 示 す.. 単 球 又 は組 織球 の集 合 した部 分 の 細 胞 変 化(少 許 り. したが,一 般 に 示 す 病 理所 見 は甚 だ 類 似 した部 分 が. の好 中球 を混 在 し, Mallory氏. 少 くな い.殊 に 肝 臓 の病 変 は よ く類 似 して いて,明. 部 分)が 泉 熱 ウ イル スに 於 て は殆 ん ど認 め られ な か. 瞭 に区 別 し難 い部 分 が あ るが,肝 臓 だ けに 限 局 す る. つ た.病 変 の 軽 度 な 場 合は,単 に限 局 性の小 壊 死 巣. な らば,病 変 が 高 度 な場 合は,肝 炎 ウ イル スの 示 す. 形 成 とか,軽 度 の細 胞 浸潤 を示 す程 度 で全 く区 別 出. 病 変,殊 に類 壊 死 若 くは壊 死 巣 形 成 の 周辺 に於 け る. 来 な い.次 に肝 炎 ウ イル スで は,肺 臓 の 変 化 も伴 う. 小 体 の 散 見せ られ る.
(4) 5830. 津. 田. が,他 の 臓 器 に 於て は殆 ん ど特 記す べ き病 変 が 指摘 され な い に も拘 わ らず,泉 熱 ウイ ル ス に於 て は,一. 哲. 郎. 同 様 の現 象 を 認 め て い る. 著 者 も両 ウ イル ス の,精 製 した もの を用 い て,同. 般 に他 の 臓 器 に も等 し く認 め られ る事 実 が 明 か で あ. 様 の 稀 釈 試 験 を 行 つ た.精 製 肝炎 ウ イル スで は かつ. る.. て 鈴 木 の 実 験 で 証 認 され た が,本 実 験 に於 て肝 炎 ウ. 既 に 高 田 の報 告 に よ る未精 製 ウイル スに あ つ て は,. イル ス と同 様 な傾 向 を 有 し,低 稀 釈 に於 て は病 変 が. 殆 ん ど病 理変 化 の 出現 して い る両 ウ イル ス の病 理 所. 常 に抑 制 され るか の印 象 を受 け,高 稀 釈 に於 て 病変. 見 は 一 致す るか の印 象 を 受 け るが,精 製 ウイ ル ス に. は 一 定 して い て,な お且 高 度 な 場 合 が 多 い.之 等 の. 於 て は か な りの 程 度 に病 理所 見 に よ る区分 が 明 か に. 病 理 変 化 を 詳細 に窺 つ て 見 て も, 10‑6〜10‑9の 稀釈. な つ た よ うに推 測 され た.. 域 に認 め る類 壊 死 若 くは 壊 死 巣 の 形成 が 著 明 で あつ. 次 に之 等 両 ウ イル ス の稀 釈 試 験 を行 い,ウ イル ス. て,広 汎 な壊 死 巣 周 辺 に お け る細 胞 変 化 殊 に単 球 又. 稀 釈 に伴 う感 染 の程 度若 くは病 理 所 見 の比 較 を 行 つ. は組 織 球 の 集 合等,更 に星 細 胞 の 増殖 腫 大 等 の変 化. た.未 精 製 ウ イル ス に於 て は,肝 炎 ウ イル スの 場 合. も,一 様 に高 度 で あ る例 が 多 い.之 を 精 製泉 熱 ウ イ. は 稀釈 域 を10‑6〜10‑9程 度 の 高 い稀 釈 にす るほ ど,. ル ス に就 て 見 るに,泉 熱 ウイ ル ス には 寧 ろ この よ う. 病 変 が 良 く発 現 す る現 象 が 見 られ た.こ の 現 象 を 説. な 傾 向 が 左 程 著 明 で は な く,稀 釈 度 に応 じて確 実 に. 明 す る に組 織 片 の混 在 に よ る ウイ ル ス増 殖 の 抑 制 と. 病 理 変 化 が 窺 わ れ た.こ の稀 釈 試 験 は 再三 に亘 つ て. 解 釈 したが,高 田 の報 告 で は泉 熱 ウイル ス に於 て も. 試 み たが,同 様 な傾 向 を 指摘 し得 た(第3表).. 第3表. 精 製 ウ イル ス の稀 釈 に よ る病 変 の比 較. 註:(++)〜(⊥)病. 之 の 実験 成 績 か ら見れ ば,未 精製 ウ イル ス に於 て. 変 の 程 度 を 示 す.. は消 失 す る こ とが認 め られ た.反 之 して泉 熱 ウ イル. は相 等 度 に組 織 片 又 は細 胞 産生 物質 の混 在 が あ る も. ス に於 て は,病 理 変 化 は55ﾟ〜60℃. の と判 断 され,斯 る夾 雑 物 の ウイ ル ス増 殖 に対 す る. に よ り病 変 の 消 失が 認 め られ る事 実 よ り,既 知 の ウ. 干 渉 的 な役 割 も考 え られ たが,精 製 肝 炎 ウ イル ス に. イル ス と同様 に,. 於 て は 斯 る夾 雑 物 は可 及 的 除 去 され たが,な お不 活. り殆 ん ど不 活化 され る もの と推 測 され た.之 等 の一. 性 の 蛋 白成 分 が 残存 す る こ とは 明 らかで あ り,ウ イ. 般 性状 の比 校 に 於 て は,常 に両 ウ イル ス と もに,マ. ル スだ けが 純 粋 な 形 で,濃 縮純 化 され た と評 価 され. ウ スの 発 症 致 死 を認 めず,特 異 な病 理 所 見 に よ り判. な い の で,夾 雑 物 に よ る ウ イル ス の抑 制 も考 え られ. 定 した た め に,既 知 のウ イル ス と比 較 す る こ とは困. る.こ の稀 釈 実験 のみ よ り,ウ イ ル ス相 互 の 干 渉現. 難 であ るが,殊 に この耐 熱 性 試 験 に於 て は,可 及 的. 象 も考 え られ な くは な いが,本. 純 枠 な 状 態 に ま で精 製 濃 縮 した ウ イル ス に よ り,泉. ウイ ル スの 増 殖 の 様. 55ﾟ〜60℃. 30min.の. 加熱. に加 熱 す る ことに よ. 相 よ り見て,先 づ夾 雑物 の 混 在 に よ る ウ イル ウの 増. 熱 ウ イル スの 抵 抗 性 は著 し く減 少 し,未 精 製の実 験. 殖 の 抑 制を 考 慮 す るが 妥 当 と推 測 され た.. よ り も確 実 に判 断 され た.又 反 対 に肝 炎 ウイル ス に. 精 製 され た両 種 の ウ イル スを,濃 縮 純 化 され た 形. 於 て は,精 製 ウ イル ス を 用 い て も,そ の耐 熱 性は殆. で,そ れ ぞ れ の一 般 性 状 を 比 較検 討 した.. ん ど 低 下 せ ず,依. ii). 耐 熱 性. の加 熱 によ. り漸 く不 活 化 され る事実 が 明 かで あつ て,肝 炎 ウイ. 肝炎 ウイ ル スで は最 も重 要 と思 わ れ る性 状 で あ つ て, Havens以. 然 と して70ﾟ〜75℃. 来 よ く述 べ ら れ て い るが,鈴 木 の行. う た実 験 と同 様 に,肝 炎 ウイ ル スを 用い,別 に泉 熱 ウ イル スの 耐 熱 性 を も吟味 した. 肝 炎 ウイル スの 耐 熱 性は,極 め て特 異 的 で あ る.. ル スの 特 性 と して注 目さ れ る性 状 であ る ことが 指摘 され た. iii) 濾 過 性 肝 炎 ウ イル ス の 濾 過 性 に 就 て は,既 に述 べ られ た が20), Seitz E. K.を. 通 過 す る こ とが 知 られて いる.. 即 ち精 製 肝 炎 ウイ ル スを 用 い て実 験 に於 て,常 に. 他 方泉 熱 ウ イル ス に して も,笠 原,大 日方 等 の実 験. 70ﾟ〜75℃. 成 績 で確 認 され て い る.し か しなが ら両 方 ともに,. 30min.に. よ り病 理学 的所 見 が 軽 減 若 く.
(5) 精 製 肝 炎 ウ イル ス に関 す る研 究. 5831. ウイ ル ス の形 態 学 的検 討 は な され て い ない 現 況 で あ. Carbolを 夫 々添加 して, 4℃ に保 存 し た る後,所. る.即 ち泉 熱 ウ イル ス の大 さ に就 て も,俵(1939)21). 定 の 時期 に と り出 し,マ ウ ス に接種 後 病理 所 見 に よ. は3040mμ. り判 定 す る方 法 を採 用 した.. し た が,確. と 推 定 し 泉 は40〜120mμ. と記 載. 認 さ れ て い な い.肝. 炎 ウイル ス に就. て も村 上等 の 計 測 に従 うに50mμ. と推 定 され て い. 実 験 成 績 に 見 るに,之 等 の 薬剤 の添 加 に よ り, 5, 7, 10日 と 日を経 るに 伴 い,泉. 熱 ウ イル スの病 変 は. て,形 態 は小 円 形 若 くは小 杜 円形 と電 子顕微 鏡 的 所. 漸 次軽 減 して い る傾 向 が窺 わ れ, 12日 に於 て は殆 ん. 見 を 述 べ て い る.斯 る大 き さの 面 よ り見 れば 両 方 の. ど病 理 所 見 は認 め られ ぬ ま で に 至 る.. ウ イル ス共 にSeitz. E. K.に よ り濾 過 され 得 る こ と. 反 之 して 肝 炎 ウ イル ス に於 て は, 12, 14日 と,病. は推 測 され るが,一 部 に よ り吸 着 され 濾過 され る ウ. 変 が持 続 す るが, 21日 頃 よ り次 第 に病 理 所 見 を 見 出. イル ス粒 子 の 減 少 は 考 え られ る.そ の 結果 あ たか も,. す に 区難 を感 じ るに 至つ た.そ れ ぞ れ の薬 剤 に つ い. 濾過 第1代 に 於 て濾 過 し尽 され た とは言 い難 い 点 も. て この傾 向 が あ るが, 0.2%. 生 ず る訳 で あ る.こ の よ うな 理 由 か らす れ ば,精 製. 性能 を発 揮 し,次 で0.2%. Formalinが. 最 も強 い. され た,夾 雑 物 の少 い,比 較 的単 離 され た状 態 に近. が之 につ い だ.こ の病 理 所 見 を綜 合 して 見 るに, 3. い,好 条 件 の 場 合 の精 製 され た 状 態 の もの を 濾 過 さ. 種 の薬 剤 に よ り,泉 熱 ウ イル ス の場 合 は, 7〜10日. れ た場 合 が,長 結果 を得 る こ とが 考 え られ たの で,. で 殆 ん ど完 全 に不 活 化 され る もの と判 断 され るが,. 肝 炎 ウ イル ス と同様 に,泉 熱 ウ イル ス も十 分 に精 製. 肝 炎 ウ イル ス の 場合 は,之 等 薬剤 に強 い 抵 抗性 を示. した上 で,濾 過 性 を検 討 した.. し, 3週 間前 後 を要 す る こ とが 判 明 した.こ の場 合. Carbol, 0.01%. Marzonin. 実験 の成 績 を 見 る に,精 製 され た状 態 で は能 率 良. の 不活 化 の判 定 が 病 理所 見 に従 つ た点 よ り,従 来 の. く濾 過 は行 わ れ るが, Seitz E. K.の 濾 過 膜 に よ り 一 部 は吸 着 され る もの の 如 く,動 物 復 原第1代 に於. の差 が生 ず る こ とは考 慮 に入 れ て も, 3種 の 薬 剤 に. て は,病 理 所 見 が や や軽 減す る傾 向 が あ るが,次 第. 対 す る抵 抗 性 は,泉 熱 ウ イル スで は既 知の ウ イル ス. に 累代 を継 続す る に恢 復 す る点 よ り,両 方 の ウ イル. と同様 に 大 略7日 前 後,肝 炎 ウイ ル スの 場 合 は20日. ス共 に, Seitz E. K.は. 前 後 と解 釈 す る ことが可 能 で あ る と思 料 され た.. iv). 通過 す る もの と判 断 され た.. エ ー テ ル抵 抗 性. ウ イル ス と比 較 し,動 物 の生 死 に よ る判 定 と,多 少. vi). エー テル 感 受 性群 と,抵 抗 群 と に ウ イル ス を 区別. 紫 外 線 照 射 に よ る不 活 化 試 験. 前 記 の薬 剤 不 活 化 試験 と同様 に,紫 外 線 照 射 を試. す る ことは 知 ら れ て い る.著 者 も,堀 田(1956)19). み た上,時 間 毎 に マ ウス に接 種 して 病 理 所 見 に よ る. の 方法 に做 い,精 製 さ れ た両 ウ イル ス10‑2稀 釈 液. 判 定を 行 つ た.. に同 量 の エ ー テル を 添 加 し, 37℃ 30分 間 及 び40℃ 24時 間 保存 して,マ. ウ ス 皮 下 に0.3ml宛. 接種を行. 肝 炎 ウ イル ス に於 て は, 5, 10, 15, 20, 25min. と紫 外 線 照 射 を継 続 して も,病 理 所 見 は柳 か も変 化. い, 14日 後 の マ ウス の病 理 所 見 に よ り,耐 性 の有 無. は ない が,次 第 に30min.,. を判 定 した.未 精 製 の肝 炎 ウ イル ス に就 て は既 に 時. 病 変 は殆 ん ど消 失す る.病 理 変 化 の 種 類 よ り見 れ ば. 末 の報 告 が あ り,精 製 の 場 合 に 於 て は鈴 木 の 報告 が. 15〜20min.の. あ るが,共 に抵 抗 性 を 有 す る こ とが 認 め られ て い る.. 相 当の損 傷 を受 け る もの の 如 く,肝 臓 の 病 変 殊 に 肝. 著者 の実 験 に於 て は,実 験 の正 確 を 期 して,エ ー テ. 細 胞 障 碍 と見 られ る変 性 乃 至 壊 死 等 の 所 見 は少 くな. ル との接 触 後,累 代 を行 い確 め たが,両. ウイ ル ス共. り,軽 い細 胞浸 潤 の み が 認 め られ る.ウ イル ス が不. に マ ウ スに 対 す る病理 学 的 所 見 は緩 和 されず,病 変. 活 化 され た か否 かの 点 を,之 等 の 病 変 の ど の部 分 の. が 定 型 的 に 認 め られ た事 実 よ り,両 ウイ ル ス共 に 抵. 抑 制 に於 て 評 価 す るか は問 題 で あ るが,一 応 之等 の. 抗 性 群 に属 す る ウ イル スで あ り,両 ウイ ル スの鑑 別. 細 胞 浸 潤 を含 めて 判 定 す れ ば,ウ. に はな らな い こ とを 確 認 す るに 至つ た.. 30min,程. v). 薬 剤 に 対 す る抵 抗 性. 40min.と. 経 過す るに. 照 射 を蒙 る こ と に よ り,ウ イ ル ス は. イル ス の不 活 化 は. 度 の照 射 に よ り行 わ れ る もの と推 測 さ れ. た.. 肝 炎 ウ イル スが 薬剤 に対 して強 い抵 抗 性 を 示 す事. 泉 熱 ウ イル スで は,紫 外 線 照射 に よ りか な り早 い. 実 は 時末 の実 験 に も詳 しい.著 者 は精 製 され た両 ウ. 病 理 所 見 の緩 和 が認 め られ た.即 ち5min.,. イル スを 用 い,詳 細 に検 討 を行 つ た.. で か な り強 い傷 害 を受 け る もの の 如 く, 20min.で. 実 験 の方 法 は,時 末 の報 告 に 做 い,精 製 した両 ウ イル スに0.2%. Formalin,. 0.01%. Marzonin, 0.2%. 10min.. は病 変 は殆 ん ど証 明 され な い.ウ イ ル スの 増殖 は甚 だ 強 く障碍 され る もの と判 断 され た.薬 剤 の 抵 抗 性.
(6) 5832. 津. の 部 で も認 め たが,ウ. 田. イル スの 動物 体 内 侵 入 に 伴 い. 哲. 郎. で,実 験 を 行 つ た が,軽 度 の細 胞 浸 潤 は か な らず,. ,親 和 性 臓 器 に 定 着 増殖 す るた め に,該 当臓 器 の反. 之 等 両 ウ ィル スの病 理所 見 と して 認 め られ,し か も. 応 性 変 化 が,ウ. 有意 な病 変 と も判 断 され るので,紫 外 線 照射 に於 て. イル ス の量 とか,ウ イル ス の状 態,. ウ イル ス の条 件 等 に支 配 さ れ,諸 種 の 反応 を誘 発 し,. は,病 理 所 見 の重 要 な 所 見 と して評 価 した.こ の成. 炎 症 性 変 化 も之 れ に伴 う こ とは 明か で あ るが,ウ イ. 績 よ り見 て,肝 炎 ウ イル ス は可 成 り強 く抵 抗 性 を示. ル ス の場 合 は可 成 りの 夾雑 物 の混 和 され た こ と も考. す が,泉 熱 ウ イル スは既 知 の ウ イル ス と同 様 に5〜. 慮 されな くて は な らな いの で,判 定 が 困 難 で あ るが,. 10min.の. 照 射 に よ り殆 ん ど不 活 化 の状 態 に な る も. 著 者 の実 験 で は,可 及 的最 良 の条 件 を 有 す る精 製 ウ. の と判 定 され,両 ウ イル スの 抵抗 性 は異 る もの と判. イル ス を用 い た点 に意 義 を もつ もの と考 え られ た の. 定 され るに至 つ た.. 第4表. 紫 外 線 照 射 に よる ウ イル ス の不 活 化 試験. 註:(++)〜(⊥)病. 2). 精 製 ウイル スに よ る電 子顕 微 鏡 的 所 見. 両 精 製 ウイ ル スを 用 い て,動 物 の起 病 性 及 び他 に. 変 の 程 度 を 示 す.. 般 に 形 は同 様 で あ り,粒 子全 体 が平 等 に 隆起 してい る もの と判 断 され た.反 之 して泉 熱 ウ イル ス もま た,. 重要 と思 わ れ る生 物 学 的 性 状 の 内,耐 熱 性,濾 過 性,. 前 者 に 比 較 し て,孵 化 卵漿 尿 腔 液 に 於 け る ウイル. エ ー テル耐 性,薬 剤 抵抗 性,紫 外 線 照 射 等 を行 い,. ス の 増 殖 は,動. 物 試 験 の 結 果 よ り判断 してや や. 両 ウ イル ス を比 較 検 討 して,異 同 を 明 か に した が,. 劣 る よ う で あ る が,肝. 更 に電 子 顕 微 鏡 に よ り,形 態 学 的 に ウ イル ス粒子 に. 35,000 r.p. m.沈 澱 に 能率 良 く 精 製 濃 縮 され る こと. 炎 ウ イ ル ス と 同 様 に,. つ いて 比 較 を 試 み た.. が 認 め られ た.. 先 づ 肝 炎 ウ イル ス は前 に橋 本 に よ り記述 され た如. ウ イ ル ス様 粒 子 は 肝 炎 ウ イル ス と比 較 して見 るに. く,孵 化 卵 漿尿 腔 内 の ウ イル ス増 殖 の程 度 は優 れ て. 良 く類 似 性 を示 し,小 円 形 若 し くは小 楕 円形 であつ. い て,精. て,同 様 に一 様 に隆 起 して い るよ うに認 め られ た.. 30min.遠. 製 に よ り殆 ん ど 大半 が35,000. r.p. m.. 心 沈 澱 に 移 行 す るた め,電 子顕 微 鏡 的 に. も,多 数 の 小 円 形 若 くは小 楕 円形 の ウ イル ス様 粒子. 計 測 した 結 果 で は, 30〜110mμ. と形 状 に 於 て差 は. 見 られ るが,整 つ た形 を示 す 粒 子 は 凡 そ70mμ. と推. の 存 在 を確 認 した.形 態 は殆 ん ど一 様 の 粒 子 と見 ら. 定 され た.之 等 の ウ イ ル ス様 粒 子 が,再 三 の電子顕. れ,大. 微 鏡 標 本 に 於 て 多数 集 合 した形 で 存 在 す るが,一 部. き さ は凡 そ50mμ. 程 度 と 推 測 され た,多 少. の ウ イ ル ス様 粒 子 の間 の大 き さ に不 同が あ るが,一. で は 漿 尿 膜 の 細 胞 の腔 内 に脱 落 した と推 測 され る細.
(7) 精製 肝 炎 ウ イル スに 関す る研 究 胞 に附 着 し,又 は離 脱 す る如 き形 て 認 め られ た場 合. 第5表. 5833 両精 製 ウイル スの 主 な性 状 の 比 較. もあつ た.両 ウ イ ル ス と もに,形 状 に於 て や や差 が 示 され るの は,完 全 粒 子 又 は不 完全 粒 子 が あ り,発 育段 階 の 形 状 も混 在 す る もの と推 測 され た. 要 す るに 形 態学 的所 見 に於 て は,殆 ん ど両 ウ イル ス共 に,甚 だ 類 似 した 形態,大. き さを示 す ことが 指. 摘 され るの で あ つ て,形 態 に よ る鑑 別 は殆 ん ど不 可 能 で あ る こ とが判 断 され る. 総 括 及 び 考 按 肝 炎 ウイル スの 分離 及 び 固定 を行 うに 当 り,各 種 の ウ イル ス との 鑑 別 は,最. も重 要 で あ るが,最 も類. め. 似 性 を示 す 泉 熱 ウ イル ス との区 別 は な か なか 容 易 で は ない.特 に マ ウ スに 対 す る感 受 性 の側 か ら見 て も, 両 ウ イ ル ス と も に 発 症 致 死 しな い性 状 は,他 の Ectromelia virusと. 区 別 は 出来 て も,両 ウ イル ス. 共 に マ ウ スに対 す る感 染 は,病 理所 見 の み を 示す 不 顕 性 感 染 で あ る事 実 は,容 易 に 諸性 状 を 把 握 し難 い ことが注 目 され,し か も同 定 し難 い点 に も通 ず る よ. 著 明で あつ て,泉 熱 ウ イル ス で は斯 る病 変 は社 株 を 用 い た実 験 で は稀 で あ つ た.し か しな が ら感 染 経 路 に就 いて は腹 腔 よ りの 接種 に よ り,感 染 の成 立 が 見. うに推 測 され た. か つ て 同学 高 田 は 同様 な 意 図 の もとに,実 験 を行 つ たが,充 分 な実 験 結 果 を 得 られな か つ たの で,著 者 は之 等 の ウイル スの 生 物 学 的性 状 を明 瞭 に 把握 す. られ,更 に経 口感 染 が よ く成 立 す る等 の 条件 は甚 だ よ く類 似 す る.動 物 の 起病 性 に関 して は,詳 細 に検 討 す れ ば鑑 別 は可能 で あ る ことが示 唆 され た.. る 目的 か ら,先 づ 可及 的夾 雑 物 を 含 ま ぬ,純 粋 に 近. 次 に一 般 生 物 学 的性 状 の内,分 離 肝炎 ウ イル ス の. い状 態 に ま で ウ イル ス を濃 縮 純 化 した上 で,各 種 の. 殊 に 重要 な性 状 と注 目 され た耐 熱性,消 毒 薬 に対 す. 実験 を重 ね て 見 た い と念 願 し,両 ウ イル スを 単 離 に. る抵 抗 と,紫 外 線 照射 に対 して の 抵抗 等 が挙 げ られ. 近 い状 態 まで 精製 を試 み た後,実 験 に用 い た.. た.既 に耐 熱 性 に 就 て は,同 門 の 鈴 木,時 末 の実 験. 著 者 の両 ウイル スに 用 い た精 製 方 法 で は,比 較 的. 成績 が あ るが,慎 重 を 期 して著 者 も同 様 な実 験 を反. 簡 単 に濃 縮 化 され た の で,多 量 の ウ イル ス粒 子 を 含. 覆 し,泉 熱 ウ イル ス と対 比 したが,泉 熱 ウ イル ス が,. む 濃 厚 な浮 游 液 を,最 良 の 条件 下 に 維持 して実 験 に. 斯 る抵 抗 性 を 示 さず,一 般 ウ イル ス と同様 に55℃. 用 いた.. の 熱 で不 活 化 され,消 毒薬 に対 して も,少. 之 等 の精 製 ウ イル ス を用 いて,両. ウイル スの 動 物. くと も14. 日以 内 で不 活 化 され る こ とが判 断 され,更 に 紫外 線. に対 す る起 病 性,一 般 生 物 学 的 性 状 を検 討 して 比 較. 照 射 に 於 て も, 15〜20min.の. を行 い,更 に他 方 形態 学 的 に も比 較 した結 果 を,簡. 事 実 が認 め られ,肝 炎 ウイ ル ス と明 かに 区 別 され る.. 単 に表 示 す るに(第5表),両. この よ うな性 状 は,肝 炎 ウ イル ス の特 性 と も推 測 さ. ウ イル ス共 に甚 だ類 似. 性 を示 す こ とが指 摘 され る.先 づ 動物 の起 病 性 に 関 して は,精 製 ウイ ル スを 用 い た 場合,両. ウ イル ス と. 照射 で 不 活 化 され る. れ る もの で あ る. 形 態学 的 に は,電 子 顕微 鏡所 見 に よ り比 較 したが,. もに よ くマ ウス に対 して 感 染 を示 す が,感 染 標 識 と. 形 態 は殆 ん ど類 似 した 小 円 形若 し くは小 楕 円 形 を 呈. して は病 理学 的変 化 のみ で あ る所 謂不 顕 性 感 染 を 惹. して い て,大 き さ も,肝 炎 ウ イル ス は凡 そ50mμ,. 起す るが,肝 炎 ウ イル スで はそ の病 変 の発 現 が 肝 臓. 泉 熱 ウ イ ル ス は約70mμ. を 中心 に 発現 す る に拘 わ らず,泉 熱 ウ イル スで は 寧. 別 の 目 標 に は な り難 い と推 定 され た.. ろ全 身 臓 器(腎,脾,肺,肝)に. 病 変が 発 現 す る こ. とが 注 目 され た.又 肝 臓 の 肝 変 化 の み に限 局 して 見 て も,肝 炎 ウイル スの 示 す 肝 細 胞 障碍(肝 実 質 細 胞 の変 性,若. とほ ぼ 同程 度 で あ り,鑑. くは類 壊 死 乃至 壊 死 巣 の 形成 等)が 甚 だ. 結. 論. 既 に 村上 等 に よ り,肝 炎 患者 材 料 よ り分 離 され た ウ イル スの性 状 は,詳 細 に検 討 され たが,特 に泉 熱.
(8) 5834. 津. 田. 哲. 郎. ウ イル ス と よ く類 似 性 を 示 す ことが 知 られ て い る.. Marzoninの. 著 者 は橋 本 に よ り試 み られ た超 高速 遠 心 に よ り,ウ. 要 した が泉 熱 ウ イル スで は, 14日 で 殆 ん ど不 活 化 さ. イル ス の精 製 純 化 を行 つ た上,分 離 肝 炎 ウ イル ス と. れ る こ とが病 理 学 的 所 見 で 判 断 され た.. 泉 熱 ウ イル スを 比 較 し,併 せ て ウ イル ス学 的性 状 を 明 か に した.そ の結 果 を 次 の 如 く結 論 した. 1). 3). 添 加 に よつ て,不 活 化 に3週 間 以 上を. その他 紫外 線 照射 に よつ て も,肝 炎 ウ イル ス. に於 て は40min.以. 両 ウ イル ス と もに,橋 本 の超 高 速 遠 心 法 に よ. 上 の照 射 に よ り漸 く不活 化 され. るに拘 わ らず,泉 熱 ウ イル ス に 於 て は5〜20min.. り,容 易 に,し か も能 率 よ く精 製 純 化 され た.し か. の照 射 で傷 害 は大 き く,総 て 不 活 化 され る ことが,. も之 等精 製 ウ イル スは,マ ウ スに対 し強 い起病 性 を. 病 理学 的所 見 に よつ て認 め られ た.之 形 態学 的 観察. 示 し,定 型 的 な病 変 を示 す が,マ. ウス を感 染 致死 せ. は,電 子顕 微 鏡 で 行 つ た が,両 ウ イル ス と もに,小. しあな い.即 ち病 理 所見 を示 す が,所 謂 不顕 性 感 染. 円 形 若 くは 小 楕 円1形の 凡 そ50〜70mμ. を 惹起 す る点 で共 通 して い る.. ル ス様 粒.子と して証 明 され た.. 2). 程度のウイ. ウ イル ス学 的性 状 中,両 ウイル スの 著 し く異. な る点 は,温 熱 に対 す る抵 抗 性,薬 剤 に対 す る抵抗 性 で あ り,分 離 肝 炎 ウイ ル スに 於 て は殊 に抵 抗 性 が 強 い こ とが指 摘 され た.即 ち温 熱 に 対 して,肝 炎 ウ イル ス は70ﾟ〜75℃. 剤 に 対 し て も, 0.2%,. 不 活化 さ. Formalin,. 0.01%. 参 1) Anderson,. T. T.. Tulinius,. S... 考. 2) Findley, G.M. Maccallum, F. O. & Murgatroid, Trans.. Roy. Soc. Trop. Med. & Hyg.. 32, 575, 1939. Klin. Wschr. 20, 1665,. 1941. Meding, u. Weineck:. forsch. u. Exp. Therap. 5) Wildfiihr,. Zschr. f. Imm.. f. d. Ges. inner,. Med. 573, 1953. Handbuch. d. inn. Med. III/2,. 711, 1953 (Mohr & Stachelin. Berlin) 7) Essen u. Lembke: 8) Henle, W.: J. Esp. 荒 川,多. ヶ 谷:日. 10). 9). 木 村,堀. 田.東. 11). 荒 川 等:第5,. 1957〜1958. 12). 村 岡:日. 13). 村 上 等:肝. 14). Havens:. 本 細 菌 学 会 雑 誌,第13巻,. 1958.. 炎 シ ン ポ ジ ア ム. J. A. M. A.. 134,. 653,. 1947.. 山 医 学 会 雑 誌,第70巻,第7号,. 1958.. 高 田:岡. 山 医 学 会 雑 誌,第69巻,. 11号,. 1957.. 17). 松 浦,岡. 山 医 学 会 雑 誌,第69巻,. 12号,. 1987.. 18). 大 日 方:岡. 山 医 学 会 雑 誌,岡. 総 会,. 3,. 4回 泉 熱 協 議 会.. 19). 堀 田. 第4回. 20). 時 末:岡. 21). 俵:岡. 山 医 学 会,第62回. 日 本 ウ イ ル ス 学 会 総 会 講 演 要 旨.. 山 医 学 会 雑 誌,第69巻,第4号, 山 医 学 会 雑 誌,掲. 1957.. 載 予 定.. 22). 橋 本:岡. 山 医 学 会 雑 誌,第70巻,第7号,. Zbl. f. Bact. 159, 1953.. 23). 伊 藤:岡. 山 医 学 会 雑 誌,第71巻,. 3の1号.. Med. 92, 271, 1950.. 24). 浅 木:岡. 山 医 学 会 雑 誌,第71巻,. 5の2号,掲. 本 医 学,. 3407,. 京 医 事 新 誌, 6回. 4号,. 16). 103, 129, 1943.. G.: Zeitschr.. 6) Siede a. Luz:. 献. 15) 小 笠 原:岡. 3) Siede u. Meding: 4) Dresl,. 文. Acts, Med.. Scandin. 95, 497, 1938. F.;. を 賜つ た恩 師村 上 教 授 に感 謝 の 意 を 表す る.. 程 度 ま で 耐 え る に反 し,泉 熱. ウ イル ス に於 て は, 55ﾟ〜60℃30min.で れ,薬. 稿 を 終 る に当 り,御 指 導 を戴 き,且 つ 御校 閲 の 労. 66,. 146,. 1946.. 307,. 1949.. 日 本 ウ イ ル ス 学 会 講 演 要 旨,. 1958.. 載 予 定. 25). 鈴 木:岡. 26). 津 田. 山 医 学 会 雑 誌,掲. 載 予 定.. 岡 山 医 学 会 雑 誌,掲. 載予定..
(9) 精 製 肝 炎 ウイ ル ス に関 す る研 究. Studies Part. I. on the. Comparative. Purified. Studies. 5835. Heratitis. Virus. on Virological. IZUMI Fever. Properties. with. Virus. By Tetsuro. TSUDA. Department of Microbiology, Okayama University Medical School (Director: Prof. Sakae MURAKAMI) MURAKAMI virus virus. IZUMI. viruses. It. purified. was. of. either. by. virus. only. the. both. the. for. heating. to. less. 3). inactivated. By for. the 40 by. and. and. than. 55ß-60•Ž. virus. heat. 3 for. weeks; 30. irradiation min. only. was. or. oval. the. other. hand. action. of. rays,. irradiation.. the. powerful. of. purified. the. form. by. properties. by. the it. case,. is. as. the. whose. needed IZUMI. fever. 2. inactivate fever. in. 50-70. aginst. 0.01%. mar. inactivated. by. weeks. the. virus. different. stand or. was. that. mƒÊ.. much. could. virus for. to. was. formalin. of. study,. were virus. mouse. infection. infection. diameter viruses. disinfectant. of. latent. in. to the. electronmicroscopical. 0.2% IZUMI. efficiently. pathogenecity. hepatitis. the. and. however,. both. purified. in. hepatitis. virological. easily. infection;. form. disinfectant,. ultraviolet. the. similarity. in. the. obtainable. properties,. of. by. of some. viruses. detectable. And. the. of. min.. by. action. or. but. be. the. min.. out. on. showed. and. virological. disinfectant:. on. irradiation, 5-20. effect. round. the. against. could. informative.. minute of. both. changes. lethal. in. viewpoint. obtained. properties. obtained.. and. were. pointed. investigation. viruses. pathological the. observed. 70ß-75•Ž. were. the. they. further. ultracentrifuge,. findings. and. author. out. both. typical. render. the. resistance at. zonin,. not. were. From. heating. of. the. did. viruses 2). that. means. pathological. The. results. confirmed. already. detail,. carried. following. reported. in. virus. and. inducing. had. patient. fever. The. form. capable. collaborator. hepatitis. ultracentrifuge,. these 1). in. the. of. his. from. with. means of. and. isolated. purified it. was. hepatitis completely.
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