精 製 肝 炎 ウ イ ル ス に 関 す る 研 究
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(2) 5838. 津. 田. つ て は,マ ー ゾニ ンを10,000倍 の 割 に 添 加 して, 4℃ に1週 間 保 存 して,不 活 化 した もの を用 い た. iv). 抗 血 清 の 製 造:之. 等 精 製 ウ イル スの 抗 血. 哲. 郎. 合 反 応 に 於 て も,確 実 な成 績 が 得 られ た. 著 者 も同 様 の実 験 方 法 に よ り,泉 熱 ウ イル ス社株 を 孵 化 卵 漿 尿 腔 内 に 接 種 し,同. 清 を得 る には,家 兎 を用 意 して お き, 35,000 r. p. m.. イ ル ス の 精 製 純 化 を 試 み,抗. 沈 渣 を30.0mlの. し た.. 0.5ml,. 生 理 的 食 塩 水 に 浮 游 せ しめ,. 0.6ml,. 0.7mlと3日. 射 し,引 続 き0.5ml,. お き に腹 腔 内 に注. 1.0ml,. 1.5mlと. 漸 次 増量. 様 の 精 製 を 行 い,ウ. 原 と して の価 値 を検 討. 先 づ 精 製 過 程 に 於 け る 各 分 劃 即 ち4,000 10,000. r. p. m.,. 35.000. r. p. m.の 遠 心 沈 澱 よ り得 た. して 耳 静 脈 内 に接 種 して 免疫 を行 い, 3日 間隔10数. 分 劃 を 抗 原 と し て 用 い た.之. 回 接種 し,最 後 の 注 射 よ り, 3週 間 を 経 て心 臓 穿 刺. 4,000. に よ り採 血,免 疫 血 清 を分 離 して 用 い た.. が ら も抗 補 体 作 用 が 示 さ れ るが,血. v). 補 体 結 合 反 応 の術 式:補. 1:16と. は ア メ リカ陸軍 軍 医 学 校法 に做 つ た.即 ち倍 数 稀 釈. 10,000. した抗 血 清,若. 用 は 全 く認 め られ ず,抗. くは 患者 血 清を0.25mlに,等. 量の 添加 し. r. p. m.. 30min.分. 清 稀 釈1:4〜. 劃 を 用 い る に,抗. て 抗 原 価1:64,. 室温 に放 置 して,溶. 血 系0.5ml(3%緬. に 於 て1:8,. 1:20稀 1:80で. は1:8と. 注 目 さ れ た.最. 後 の35,000. す る 場 合 は,前. の 分 劃 と 同 様 に 抗 原 が,精. 応 確 実 に示 さ れて い る のが r. p. m.分. 清 液 と し て 得 られ ぬ た め,遠. 浅 木 の法 に做 つ た.即 ち夫 々の精 製 ウ イ ル ス稀 釈 液. を,少. に,夫 々 の抗 血 清 を添 加 し,37℃ 孵 卵 器 内 に所 要 時. 得 た.実. 釈. 血 清 稀 釈 に 伴 う抗. 原 価 の 漸 減 は あ る が,一. 和 試験 の術 式 も,当 教 室 の. 於. 1:40稀. よ く振 盪 混和 後37℃. 中 和試 験 の 判 定:中. 補体作. 清 稀 釈1:10に. 釈 で は1:16,. を3単 位 の 溶 血 系で 感 作 した血 球 浮 游 液)を 加 え,. を判 定 した.. に. 原 価 も ま た1:4〜1:64と. や や 上 昇 した 価 が 示 さ れ る が,血. 1夜 氷 室 に保 存 し,次 で30分 間. 浴 槽内 に30分 反 応 させ て 結果. 度な. 夫 々 抗 原 価 は 低 い が 発 現 して い る.次. て よ く混 和 した 後,. 羊 赤 血球. 等 の 分 劃 の 内,. r. p. m.遠 心 分 劃 を 抗 原 と し た 時 に は,軽. 体 結 合反 応 の術 式. 4単 位 の抗 原 及 び2充 単 位 の補 体0.5mlを. r. p. m.,. 劃 を 抗原と 製 し た上. 心沈 澱 に よ り得 た沈渣. 許 りの食 塩 水 に 更 に 浮游 して平 等 な抗 原液 を 験 に 際 して 斯 る ウ イ ル ス 浮 游 液 を も と の 原. 間 放 置 した後(実 験 に応 じて 時間 を24時 間 ま で延 長. 液 ま で 食 塩 水 に よ り 置 換 え,更. に 抗 原 稀 釈 を 行 つ た.. し た こ と も あ る)予 め 用 意 し た マ ウ ス腹腔 内 に. 補 体 結 合 反 応 を 行 つ た 結 果,本. 分 劃 に 於 て も抗 補 体. 0.25ml宛. 接 種 し, 14日 後 に屠 殺,夫. 々の臓 器 を と. 作 用 は 全 く認 め ら れ ず,抗. 原 の 稀 釈 域 の1:4〜1:. り,フ ォル マ リンに よ り固 定 して病 理 標本 を作 製 し. 64と 夫 々 に 確 実 抗 原 価 が 得 ら れ て い る.血. た.之 等 両 ウイル スと もに,精 製 純 化 した場 合で も,. の 稀 釈 に 於 て は1:10に. マ ウ スの 発症 致 死 は認 め られ ぬ の で,中 和 試 験 の 判. 1:32,. 定 には,厳 密 に対 照 を お き,肝 臓 を 中心 とす る病 理. 反 応 価 を 保 つ こ と が 認 め ら れ た(Fig.. 所 見 に従 つ た.. 1:40に. 於 て1:64,. 於 て1:8,. Absattigungsveruch:肝. 炎 ウ イ ル スの 血 清学 的. よ り,精. 1:20に. 1:80に. こ の 実 験 に よ つ て,ウ. 清の 夫 々 於て. 於 て も1:16と, 1).. イル ス感 染 孵 化 卵 漿尿腔 液. 製 ウ イ ル スを 得 るま で の過 程 にお け る分劃. 研究 に用 い られ た一 種 の 中 和試 験 で あ るが,実 験 の. に よ つ て は, 10,000. 都 合上, Wildfuhr. 方法 を改 変 して行 つ た.. 可 成 り に 使 用 に 耐 え 得 る 抗 原 を 得 る こ と が 明 らか で. お き2回 皮 下接 種 し,. あ る こ と が 判 明 し た が, 35,000. (1953)の. 即 ち抗 血 清0.25ml宛30分. 4時 間 後 に,精 製 ウ イル ス の各 稀 釈液 を,腹 腔 内 に. 原 と して 用 い る に,な. 0.25ml宛. る こ と を 確 認 し た.. 接種 攻撃 し, 2週 間 後 に おい て,屠 殺 後,. 夫 々の臓 器 よ り,病 理 標 本 を 作製 して,病 理学 的 所 見 を検 し,中 和 効 果 を 判 定 した.. 次 に 以 上3種 上 清 及 び35,000. r. p. m.の. 遠 心分 劃を 用い て も. r. p. m.の. 分 劃 を抗. お 一 層 の 有 意 な 成 績 が 得 られ. の 分 劃 中,. 10,000. r. p. m.. r. p. m.沈 渣 浮 游 液 が,補. 30min. 体結 合反. 応 抗 原 と して 用 い られ る こ と を 知 つ た の で,同. 実. 験. 成. 績. 1. 補 体 結 合 反 応 に よる 成績 先 に 伝 染 性 肝 炎 患者 よ り分 離 した ウ イ ル スを 用 い, 肝 炎 恢 復 患 者 血 清 及 び分 離 ウ イル ス免 疫 血 清 との間. 家 免 兎 疫 血 清 を 使 用 し,抗 る と と も に,抗. 様に. 原 及 び 血 清 の稀 釈域 を知. 補 体 作 用 若 くは 非 特 異 性 反 応 の 発 現. の 有 無 を 再 三 検 討 した. 本 実 験 に 於 て も, 10,000. に 行 つ た補 体 結 合反 応 に 於 て,有 意 な結 果 を 得11),. 清 は 抗 原 的 価 値 を 有 し,血. 更 に精 製 肝 炎 ウ イル スを 抗 票 と して 使 用 した 補体 結. 原 価 は1:64,. 1:16,. r. p. m,. 30min.処. 清 の 稀 釈 に 応 じ,夫. 1:8,. 1:8そ. 理上 々抗. れ ぞ れ抗原性.
(3) 精 製 肝 炎 ウ イル ス に関 す る研 究 Fig.. 1. Antigen. titer. of each. Note:. を 発 揮 して い る.又35,000 水 で 稀 釈 さ れ る が,抗 16,. 1:16と. 部 分 に 於 て,溶. 原 価 は1:128,. 0. Complete. 出 反 応 を 呈 す る 所 謂Zone. 結 合 反 応 を 行 い,両. fixation lesser. fixation. haemolysis. Fig.. 2. Antigen. titer. of each fraction. in the purification. of antigen. obtained (Yashiro. strain). pheno 2).. に 村上 等 に よ り分 様 の家 兎 免疫. 熱 ウ イ ル ス と交 叉 的 に 補 体. r. p. m.分. 劃 を抗 原 と. に 浅 木 の 報 告 に も示 さ れ た が よ く反 応. 種 抗 血 清 に 於 て は 血 清 稀 釈 に 応 じ1:128, 1:8,. も, 1:64, 認 め られ,同. 1:4と 1:16,. 示 さ れ,同 1:16,. 1:4と. 種 の石 原 株 血 清 に 確 実 に抗 原 価 が. 種 の ウ イ ル ス と 判 断 さ れ,新. に 仙 石21). に よ り 分 離 さ れ た 春 名 株 血 清 に 対 し て も1:32, 16,. of antigen.. ウ イ ル ス を 比 較 した.. 肝 炎 ウ イ ル ス小 川 株35,000 した 場 合,先. purification. 清 高濃 度. 如 き現 象 は 認 め ら れ な か つ た(Fig.. 血 清 を 用 意 して お き,泉. 1:. 々の 抗 原. in the. を 示 し て い る.之. 離 さ れ た 肝 炎 ウ イ ス ル を 精 製 して,同. し,同. propartionately. 1:32,. 特 異 的 反 応 と か,血. 次 に 之 等 の 実 験 と平 行 して,先. 1:32,. Complete. 3.2. r. p. m.沈 渣 も ま た 食 塩. dilutionは8〜16倍. 等 の 各 実 験 に 於 て,非. menonの. 4. 夫 々 有 意 の 成 績 で あ つ て,夫. のOptimal. fraction. 5839. 1:8,. 1:4と,殆. 1:. ん ど 遜 色 の ない 程 度 の反 応. を 示 して い る.. 反之 して,泉 熱 ウイ ル ス(社 株)の 免 疫 血 清 に対 して は,全. く反 応 を示 さず,陰 性 に終 つ た(Fig. 3).. 同様 な形 式 の もとに,石 原 株 を抗 原 と して 用 い た 実験 で も,同 種 石 原 株 血 清 に1:256,小. 川 株 に1:. 128と 強 い抗 原 価 を 示 し,春 名 株 に 於 て も1:64と 殆 ん ど大 差 の な い程 度 の反 応 を示 して い るに拘 わ らず, 社 株 に於 て は 全 く陰性 に終 つ て い る こ とが確 認 され た(Fig. 4)..
(4) 5840. 津. Fig.. 3. Note:. Complement. fixation. titer. purified. of. Purified. each. antigen;. test:. 田. 哲. Fig.. antigen. 35,000. r. p. m.. し,夫. 々 に1:64,. 1:16,. 原 価 を 認 め られ た が,小. 種 社 株 抗 血 清 に は よ く反 応 1:8, 川,石. 1:4と 原,春. 明 かに抗. 名 の肝 炎 ウ イ. ル ス 株 血 清 に は 反 応 は 発 現 し な い し, Ectromelia virus家. Complement. fixation. test.. 30min.. 々 の家 兎 免疫 血清 に対 す る補体. 結 合 反 応 を 試 み る に,同. 4. antigen.. 泉 熱 ウ イ ル ス社 株 精 製 ウ イ ル ス を 抗 原 と し て,同 様 の 術 式 に よ り,夫. 郎. 兎 免 疫 血 清 に も全 く反 応 が な い .先. の 肝炎. ウ イ ル ス を 抗 原 と した 実 験 と比 較 し て 見 る に,同 Fig.. 5. 種. Complement. ウイ ル ス間 に於 て よ く反 応す るが,異 種 ウ イル ス間 に 於 て は全 く反 応 しな い こ とが 明瞭 で あ る.た だ肝 炎 ウ イル ス と抗 血 清 の 間 の 抗 原価1:256と. 高 い価. を示 すが,泉 熱 ウ イル ス と抗 血 清 の間 の 抗 原価 はや や低 く,再 三 の実 験 に 於 て1:64以 こ とはな か つ た(Fig.. 上 の価 を認 め る. 5).. 最 後 に 肝 炎 患者 及 び泉 熱 患者 血 清 を 集 め,前 記 の 術 式 に よ り,補 体 結 合 反 応 を 試 み た. fixation. test..
(5) 精 製 肝 炎 ウイ ル ス に関す る研 究. た だ 表示 した患 者 血 清 に は,肝 炎 患 者 血 清 の殆 ん どは慢 性 に経 過 し た患者 の恢 復 血 清 若 くは 臨床 所 見. 5841. 実 験 の 結 果 で は,肝 炎 患者 血清 に対 して,肝 炎 ウ イ ル ス石 原 株 の精 製 ウ イル スを抗 原 と した 場合,低. 及 び臨 床 検 査 の結 果 疑 わ しい と診 定 され た血 清 を も. いが 陽 性 結果 を示 した 例 が あつ たが,社 株 に は反 応. 含 み,決. せ ず,泉 熱患 者 血 清 に これ も低 いな が ら も陽 性 結 果. して適 当 な血 清で はな く,泉 熱 患 者 血 清 も,. 散発 例 で あつ て,臨 床 家 に依 頼 して 採 血 した血 清で. を示 す ことが 認 め られ た.之 等 の 成績 はか な らず し. あ る ので,補 体 結 合反 応 に適 した 血 清 で な い ことは. も,よ い 成績 で は な いが,可 成 りの結 果 を 得 られ る. 遺 憾 であ るが,適 当 な血 清 を 得 難 い状 態 に あつ た の. よ う に推 測 され たが,な お 多 くの例 数 を 用 い て検 討. で,や む を 得 ず,参 考 ま で に実験 を行 つ た.. す る 必要 が あ る と判 断 され た(Fig.6).. Fig.. Note:. 6. C. F. T.. he.=hepatitis. using. serum•@. patients. Iz=Izumifever. serum. and. purified. serum•@. of antigen.. N.. S.. =Normal. 状 を詳 細 に追 究 し,従 来Havens 小 括 及 び 考 按 岡山 県 下 に発生 した 流行 性 肝 炎 患 者 材 料 を 用 い, 呼化 鶏 卵 培 養 を行 い,一 種 の ウ イル スの 分離 に成 功 した村 上 等(1955〜1958)は,本. ウ イル ス の 一般 性. serum. (1947)18)の 人 体. 実 験 に よ り推 定 され た 肝炎 ウ イ ル スの 性 状 とよ く類 似 した 性 状 を 具備 す る こ とを認 めた. 爾 来,本. ウイ ル ス の性 状 を更 に検 討 す る意 味 か ら,. 血 清 学 的 性 状 につ いて も実 験 を 重 ね た結 果,同 門 橋.
(6) 5842. 津. 本 は ウ イル スの精 製 に就 て 充分 な成 果 を挙 げ,こ. 田. 哲. 郎. の. 又 夫 々肝炎 及 び泉 熱 患者 血清 を用 い た 実験 で は,. 精 製 ウイ ル スを 抗 原 と して 用 い る に,補 体 結 合反 応. 未 だ例 数 が 少 く,充 分 な結 論 が得 られ な かつ たが,. に 於 て 有 意 な成 績 が 得 られ る ことは,浅 木 が 詳 細 に. 僅 少 な 例 数 な が ら可 成 り の結 果 が 得 られ た.こ れ等. 報 告 した.. の 所 見 は決 して満 足 す べ き もの で は な いが,両 種 の. 著者 はか つ て 高 田 が本 ウ イル ス と泉 熱 ウ イル ス と. 疾 病 と もに,定 型 的 な発 病 を 招 来 した とは言 い切 れ. の 比 較 研究 を行 つ た成 績 を,更 に詳 細 に検 討 す る意. な い篤 者 血 清 を 用 い た た め に.特 に肝炎 恢復 血 清 で. 味 か ら,橋 本 の ウ イル ス精 製 法 に做 い,両 ウ イル ス. は,慢 性 例 が 殆 ん どで あ つ て,従 来 藤 原,浅 木 の補. を精 製 純 化 して,補 体 結 合反 応 用 抗 原 と して の価値. 体 結 合反 応 の成 績 で も,慢 性 肝 炎 患 者 血 清 に於 て は. を 窺 い,併 せ て 両 ウ イル スの 性 状 を詳 細 に吟 味 すべ. 十 分 な成 績 が 得 られ な い 結果 を見 て も,満 足す べ き. く試 み た.. 肝 炎血 清 とは言 え な い.又 泉 熱患 者 も また,散 発 例. 既 に浅 木 の報 告 に示 され たが,前 記流 行 性 肝 炎 の 血 清学 的 研 究 は,未 だ確 認 され た ウ イル スが ない 現. て あ り,定 型 的 な発 病 と診 定 出来 な い もの で あつ た の で,有 意 な所 見が 得 られ ぬ もの と推 測 され た.. 状 で は,報 告 は乏 しい.た だ各 研 究 者 に よ り,夫 々. 元来 両疾 患 と もに,ウ イル ス学 的若 くは血 清学 的. に分 離 され た ウイ ル スを 用 い た血 清 学 的 研究 と して. に も,種 々異論 が あ り,た とえ ウイ ル スが共 に分 離. は, Henle et al(1950)12)13), Wildfuhr. さ れ た と して も,血 清学 的性 状,就 中疾 病 に罹 患 後. 村 岡(1958)14)等. G. (1953)6),. の報 告 が あ るが,之 等 の報 告 に於. に 於 け る抗 体 の 消長 とか,抗 体 の形 成 等 に 関 して は,. て,用 い られ た ウイ ル ス の性 状 は,夫 々異 つ た性 状. 詳 細 に 吟 味す る 必要 が あ る と思 わ れ るが,著 者 の補. を もつ ことが 推 測 され,い づ れ が肝 炎 ウ イル ス と も. 体 結 合反 応 の成 績 は,寧 ろ精 製 純 化 され た ウイ ル ス. 判 断 されな い 憾 が あ り,し か も之 等 の 研 究 成 績 が, 一 様 な 結果 を得 て い な い点 に就 て も ,未 だ論 議 す べ. を 抗原 と して 用 い,類 似 して2種 の ウ イル ス の,補. き余 地が残 つ て い る.. 補 体 結 合 反 応 に 於 け る詳 細 な検 討 とか,血 清学 的な. 況 して 県 下 に発 生 した 流行 性 肝 炎 の蔓 延 状 況 に於. 体 結 合 反 応 に一 応使 用せ られ 得 る こ とか 明か で あ り,. 面 に於 け る技 術 的 な 要 素等 に 関 して は,更 に克 明 な. て は,次 第 に病 状 は急性 経 過 よ り慢 性 経 過 を辿 る も. 追 究 が 必要 で あ る こ とは 言 を俟 た ない.. のが 時 に増 加 し,臨 床診 断 に よつ て は,ま す ます 診. な お,村 岡14)の 報 告 によ れ ば,自. ら分 離 され た. 断 を困 難 な ら しめ る事 態 に至 つ て い る ので,確 実 な. ウイ ル ス を用 い た補 体 結 合 反 応 を行 つ て,効 果 を挙. 血 清学 的 診 断法 の 確 立 は 急務 で あ る こ とは,充 分 に. げ て い るが,著 者 の 行 つ た 実験 と比 較 して,ウ イル. 納 得 され るの で あ る.. スの 一 般性 状 若 くは 補体 結 合 反 応 に就 て も幾 分 の差. 又 一 方泉 熱 ウ イル ス に就 て も,ウ イル ス学 的研 究 は多 数 の先 入10)15)is)17)に よ り行 わ れ た に拘 わ らず,. が あ り,一 様 に評 価 す る こ とは 出来 な い もの と推 測 され た.. 血 清 学 的研 究 は充 分 に行 わ れ ず,真 の 病 原 ウイ ル ス に就 て の 論議 は未 だ に行 われ て い る現 況 で あ る. 著 者 は 村上 等 の報 告 に従 い,分 離 ウイ ル スを橋 本. 2.. 中和試験における成績. 村 上 等 は,流 行性 肝炎 患者 よ りの 分離 ウイル ス を 用 い て,中 和試 験 を行 い報 告 して い る.そ の術 式 は,. の方 法 で精 製 し,補 体結 合反 応 用 抗原 と して 用 い ら. 従 来 他 の ウ イル スに 於 て行 わ れ た動 物 の生 死 に よ る. れ る と述 べ た浅 木 の 所 見 に做 い,補 体 結合 反 応 を 行. 判 定 が 出来 な い の で,専. うと同 時 に,類 似 の 性状 を有 す る泉 熱 ウイ ル スの 血. 和 効 果 を 判 定 す る方法 に よつ て い る.之 の術 式 は更. 清 学 的 研究 を行 う段 階 と して,同 様 な精 製 法 を 応 用. に 追 究 され5)11),詳 細 に検 討 され て い る.. し,充 分 に 補体 結 合 用抗 原 と して の 価値 を認 め た の で,両. ウイ ル スを 用 い交 叉 的 に補 体 結 合反 応 を 行 つ. た. 実 験 の結 果,夫. ら病 理 学 的 所 見 に よ り,中. 泉 熱 ウ イル スに 就 て も笠 原10)の 同 様 な研 究 が あ つ て,同 様 な 中 和効 果 の判 定 を試 み て い る. 著 者 は先 の 浅 木 の 方 法 に 做 い,両 ウ イル ス の中和. 々の ウイル ス家 兎 免 疫血 清 に対 す. 実 験 を平 行 して 行 い,夫. 々の 中和 現 象 を病 理所 見 に. る補 体 結 合 反 応 に於 て は,両 ウ イル ス の精 製 純 化 さ. よつ て 評 価 し,更 に 交 叉 的 中 和反 応 を行 う こ とに よ. れ た もの を 抗原 と して使 用 す るに,よ. り,夫 々の ウ イ ル ス の 中和 試 験 に 於 け る差 異 を窺つ. く使 用 に耐 え. 得 る こ とが 明 か とな り,補 体 結 合反 応 に於 て,両 ウ イ ル ス は容 易 に 区別 され,夫. 々に 独 立 した ウイ ル ス. で あ る ことが 推 測 され る所 見 を 得 た.. た. 実 験 に用 い た家 兎 免疫 血 清 は,前 記 補体 結 合反応 に 用 い た,精 製 ウ ィル ス に よ る 免疫 血 清 を 使用 した..
(7) 精 製 肝 炎 ウ イル ス に関 す る 研 究 肝 炎 ウイ ル ス抗 血 清 は1:256,泉 1:64の. Fig.. 熱 ウイ ル ス 血 清. 抗 原価 を示 す もの で あ り,夫 々3〜4頭. 5843 7 Neutralization. test.. の. 家 兎 血 清 を混 和 して 用 い た.. 実 験 に 用 い た精 製 ウ イル スは,超 高速 遠 心 沈 澱法 に よ り精製 純 化 され た35,000. r.p. m.沈 渣 を,少 許. の 食 塩 水 で稀 釈 を 行 い,更 に倍 数 稀 釈 を 重 ね た もの であ る. 以 上 稀 釈 さ れ た ウ イル ス液 に 同量 の 抗 血 清 を添 加 後,孵 竈 中 に2時 間 静 置 した 後接 種 した群 と, 24時 間 冷 庫(4℃)に. 放 置 し,充 分 に 接 触 せ しめ た 後接. 種 した群 と に分 ちて,夫. 々に病 変 を 判 定 す る こ と に. した. 病 変 の判 定 に 際 して は,厳 重に 対 照 を附 して 病 変 を 窺 い,そ の病 変 の種 類,程 度 に 応 じて,中 和 の 進 行 を比 較検 討 した.肝 炎 ウ イル スに於 て は特 に 肝臓 の病 変 に注 目 した.即 ち実 質 細 胞 の変 性 及 び 壊死, 壊 死 巣 周 辺 に於 け る細 胞 変 化,星 細 胞 の 肥 大 及 び 増 生,肝 素 の 解 離,実 質及 び間 質 の 細 胞 浸 潤等 が あ り, これ に 伴 う肺 臓 の病 変 が挙 げ られ た. 泉 熱 ウ イル スに於 て は,既 に 第1編 に述 べ た病 変 で あ るが,前 記 の肝 炎 ウ イル スの病 変 と比 較 して, 肝,脾,腎,肺. 等 の各 種 の 臓 器 に病 変が 存 在 した が,. Note:. (+++)•`(+) logical. 肝 臓 だ け に限 局 して 見れ ば,肝 臓 に よ く病 変 を 発 揮 す る肝 炎 ウ ィル スの 所 見 が 高 度 で あ る こ とが 指 摘 さ. Fig.. Indicate change. 8. the. (average. degree of. Neutralization. of. 4•`5. patho mice). test.. れ た. 先 づ 泉 熱 ウイ ル ス社 株 抗 血 清 に対 す る同 種 社 株 ウ イ ル ス との組 合せ で 行 つ た 実験 で は,2時. 間処置の. 場 合で も可 成 りの 病 変 の 阻 止が 認 め られ るが,稀 に ウ イル ス稀 釈域 に於 て は,軽 度 の病 理 所 見 が 示 され た例 が 認 め られ た.更 に24時 間 処 置 して 行 つ た 実 験 で は,病 変 は著 し く緩 和 され,抑 制 され た傾 向 が あ り,中 和 効果 が 明 か に 認 め られ た.之 等 の 実 験 に 於 て,時 に 稀 釈 域 が10‑1〜10‑4の. 限 界 に 於 て,軽 度. の細 胞 浸 潤 が示 され る こ と が あ つ た.こ の よ うな 判 定 に 於 て は,数 回 同 様 な 所 見 を得 る ことが 重 要 と 考 えた の で,同 様 な 実 験 を 反 覆 して判 定 した.之 等 の実 験 結果 で は,一 部 分 の 中和 効 果 が 見 られ るに 止 る例 が あつ たが,一 般 に社 株 免 疫 血 清 を 用 い れ ば, 病 変 の軽 減 或 は緩 和 が あ る事 実 が あ るの で,中 和 効 果 と判 定 して 大 過 な き もの と推 測 され た.反 之 して 肝 炎 ウイル ス株 と して用 い た小 川,石 原,春 名 の諸 抗 血清 に対 して 中和 が全 く認 め られ ず,部 分 に よつ て は寧 ろ病 変 が高 度 に な り,対 照 と した健 康 血 清 に 対 す る と同 様 な結 果 を 認 め た.既 に 補体 結 合反 応 に 於 て,再 三 の実 験 を 反 覆 した結 果 全 くの関 連 性 が な. Note:. (+++)〜(⊥) logical. Indicate change. the. (average. degree. of. 4〜5. mice). patho.
(8) 5844. 津. 田. 哲. 郎. か つ たが,中 和 実 験 に 於て も,関 連 は示 され ず,中. が 一 様 で な い 場 合 も示 され た.夫 々の 場 合,ウ イル. 和 効 果 はな い もの と判 定 され た(Fig. 7).. ス と抗 血 清 との接 触 に よ り,充 分 な 両者 の結 合が行. 次 に分 離 肝 炎 ウイ ル ス小 川 株 を用 いて,夫. 々の家. わ れ る場 合 もあ り, 24時 間 に 於 て漸 く均 等 な 結 合が. 兎 免 疫 血 清 との 中和 試 験 を 行つ た.肝 炎 ウイ ル ス と. 行 わ れ る場 合 も想 像 出来 るが,長 時 間 の 両者 の接 触. 抗 血 清 との間 の 中和 試 験 に於 て は,同 門 浅 木 の 成 績. で は,ウ イル スへ の 影 響 も考 え られ るの で,ウ イル. と同 様 に,病 理 所 見 は殆 ん ど緩 和 若 くは抑 制 が 見 ら. ス と抗 血 清 との 接 触 時 間 に就 て は速 断 す る ことは 出. れ,中 和 効 果 が示 され た.同 種 の 春名,石 原両 株 の. 来 な い.. 抗 血 清 に 於 て も,殆 ん ど完 全 な形 まで 中 和 が進 行 し. 以 上 を 綜 合 して,精 製泉 熱 ウイ ル ス及 び 肝炎 ウ イ. て い るが,泉 熱 ウ イル ス抗 血清 に於 て は,之 等 の 中. ル ス を 用 い た場 合 に於 て も,動 物 の生 死 によ る中和. 和 傾 向 は 窺 うこ とが 出来 な い(Fig. 8).. 試 験 の判 定 は不 可 能 な の で,専. ら病 理 所 見 の抑 制 の. 程度 に よ る判 定 を 行 つ た の で あ るが,家 兎抗 血 清 に 小 括 及 び 考 按. よ る 中和 試 験 の 結果 よ り見 て,容 易 に,し か も,有. 中 和試 験 が,既 に従 来 の ウイ ル ス の固 定 若 くは ウ. 意 な 鑑 別 が可 能 で あ り,両 ウイ ル ス とも に夫 々独 立. イル ス性 疾 患 の診 断 に応 用 されて い るが,そ の 目的. した ウイ ル ス で あ る こ とが 証 明 され た.た だ之 等 の. は,ウ イル ス と抗 血 清 との接 触 に よ り,中 和 抗 体 の. 中和 効 果 の判 定 に 関 して は,ウ イル スの稀 釈域 に 於. 証 明 す るに あつ た.. て は,軽 度 の 病 変 が 発現 す る例 が あ り,又 ウイル ス. 斯 る中和 試 験 の術 式 は,殆 ん ど ウイ ル ス と抗 血清. る. の高 度 稀 釈 域(10‑6〜10‑9)で. 病 変 が 残 存 す る等 の. を 一 定時 間 試 験 管 内 に於 て接 触せ しめて お き,動 物. 例 が あ つ て,納. 体 内 に接 種 し,動 物 の生 死 に よ り,特 異 な 中和 抗 体. い部 分 も指 摘 され た が,之 等 の病 変 は 夫 々対 照例 と. の産 生 を 証 明 す る法 が採 用 され た.若 し動 物 の生 死. 比 較 して 明 瞭 に 区 分 さ れ た.. で は判 定 出来 ず に終 る場 合 は,か つ て泉 熱 ウ イ ル ス の 中和 試験 に於 け る笠 原(1953)10)の. 如 く,病 理 変. 化 に よつ て,中 和 効果 を判 読 す る方法 も行 われ た. 村 上 等 の業 績 に 於 て は,分 離肝 炎 ウイル スが マ ウ ス に強 い病 理所 見 を示 す に拘 わ らず,等. し く不顕 性. 得 出来 ないclear. 3. "Absattigungsversuch"の Wildfuhr. G.. (1953)の. cutの 状態 で な. 成績. 創 案 にか か る本法 は,広. 義 の 中和 試 験 に外 な らな いが,ウ. イル ス と抗 血 清 の. 結 合が,動 物体 内 で行 わ れ こ とに特 異性 が あ り,従 来 の 中和 試 験 と 異 る こ とが 指摘 され た. Wildfuhr. 感 染 に終 る ため,中 和 試 験 の判 定 は,前 記笠 原 の病. の 原 法 に 於 て は, Goldhamsterを. 理 所 見 に よ る方 法 を採 用 す る外 な か つ た.著 者 は実. 生 死 を 長 期 間 観 察 して,判 定 す る 方法 を用 い,分 離. 験 に用 いた 両 精製 ウ イル ス と もに,動 物 に接 種 す る に,不 頭 性 感染 を示 し,病 理 変 化 の み 定型 的 に認 め. 用 い て,動. 物の. した 肝 炎 ウイ ル ス の型 別 を 証 明 して い る. 村 上等 は,斯 るWildfuhrの. 原 法 を 改良 して,ウ. られ る ので,病 理所 見 に よ る判 定 方 法 を行 つ た.. イル ス の性 状,感 受 性 動 物 の 選 択 等 に就 て,都 合良. 之 等 の中 和 試験 の術 式 は勿 論 討 議 すべ き こ とで は あ. い 変法 を試 み た.ウ イル スに よ る動 物 の 発症 及 び斃. るが,動 物 の生 死 に よ る判 定 と比較 して,判 定 の 困. 死 例が 認 め られ ず, Goldhamsterの. 難 性,若. 難 い事 実 が あ る ため で あ る.. し くは 難点 を多 分 に もつ こと は 否定 出来 な. い. 著者 の実 験 で は,実 験 の 条 件 と して,可 及 的 多 数. 容 易に入手し. 著 者 は先 の浅 木 の 報 告 に做 い,泉 熱 社 株 精製 ウイ ル スを 用 い,中 和 試 験 と同 様 に,社 株 抗 血 清(補 体. の対 照 を 附 す る こと,同 様 な 実 験 を 再三 行 い,実 験. 結 合反 応 に よ る抗 原 価1:64)を. 成 績 を綜 合判 定 す る こ と,等 を考 慮 して 実 験 を 重 ね. 精 製 ウ イル スを 接 種 し,両 者 を動 物 体 内 で 十分 に接. た.. 触 せ しめ,飽 和 の状 態 で維 持 し,爾 後 の 動物 の生 死. 之 等 の 所 見 で 見 るに,泉 熱 ウ イル スで は 同種 抗 血 清 に,肝 炎 ウイ ル ス で は,肝 炎 ウ イル ス抗 血 清 に夫 々 よ く中和 され,病 理 変 化 の 抑 制が よ く認 め られ た .. 動 物 体 内 に注 射 後,. に よ らず, 14日 後 に 於 け る病 理 所 見 に よ り,中 和 の 効 果 を確 か め た. 先 づ 社 株 抗 血 清 を マ ウ ス体 内 に処 置 し,稀 釈 した. ただ 判 定 の時 間 を2時 間, 24時 間 に 保 つ た場 合, 2. 精 製 ウ イル スを 用 い て 攻 撃 を 行 つ た成 績 に於 て は,. 時 間 で は多 少 と も病 理 所 見 が認 め られ る もの で も,. 可 成 りの 程 度 に病 変 の 抑 制 が示 され た.一 部 的には,. 24時 間 で は病 変 の抑 制が 認 め られ た 例 が あ り, 24時. 稀 釈域 に軽 度 の病 変 が 発 現 す る.之 等 の病 変 は,精. 間 で も殆 ん ど2時 間 の 抑 制 と異 らぬ例 が あ り,成 績. 製 ウイ ル ス を用 い た実 験 で あ る ため,組 織成 分若 く.
(9) 精 製 肝 炎 ウ イル ス に関 す る研 究 は細 胞 産 生 物 質 の混 在 に よ る影 響 は少 い と考 え られ. 5845. この 実験 成 績 よ り,社 株 と肝 炎 ウ イル ス の諸 株 と. るので,軽 度 の感 染 は あつ た こ とを意 味す る.補 体. の,飽 和 試 験 に於 て は,一 応 病 理 所 見 の上 で は,病. 結 合 反 応 に 於 て,あ る程 度 の 抗体 が産 生 され て い る. 変 の緩 和 若 くは抑 制 とい う面 よ り,中 和現 象 が判 定. 事 実 が あ るの で,寧 ろ この 実 験成 績 で は,体 内 に於. され た が,詳 細 に 病 理 所 見 を吟 味 す れ ば,泉 熱 ウイ. け る ウ イル ス と抗 体 との 結 合が充 分 で なか つ た こ と. ル ス対抗 血 清 の間 に 於 て,病 変 が 完 全 に抑 制 され る. を意 味す る もので,充 分 な 所 見 とは い い難 い.肝 炎. 所 謂 完全 に中 和 され た と結 論 す るに は,多 少 の 軽 度. ウ イル ス抗 血 清 と して は,石 原,小 川,春 名株 血 清. の病 変 が 残 存 す る こと よ り,納 得 出来 な い部 分 が あ. を 用 い たが,病 変 の 抑 制 は全 く認 め られ ず,対 照 と. るが,両 ウ イル ス の本 質 的 な 差 異 は認 め られ る こ と. 同 様 に,明 瞭 な 病 理 所 見 が示 さ れ た.. が 推 測 され た(Fig. 9).. Fig.. Note:. (++)•`(_??_). Indicate. the. 同様 な"Absattigungsversuch"を,社. 9. degree. Absattigungsversuch. of. histopathological. (1). change. (average. of. 4•`5. mice). 株 を 用い. 抗 血 清 の 如 く,比 較 的 補 体 結 合反 応 に於 て 抗 体 価 の. ウス の抗 血清 と,精 製 ウイル ス. 高 い場 合 は判 定 も比 較 的 容 易 で あ るが,海 〓 又 は マ. との組 合せ で試 み た.社 株 を 接種 す る場 合,海 〓 及. ウ ス 血清 の 如 く,抗 体 価 の 低 い例 で は,病 理 所 見 に. び マ ウ スに確 実 な病 理 所 見 を 示す こ とは,か つ て 大. 於 け る中和 効 果 の判 定 は 甚 だ 困難 で あ る こ とが 指 摘. 日方の 成績 に も詳 しいが,之 等動 物 抗 血 清 に於 て は,. され た.こ の所 見 は か つ て俵19),又 は藤 原11)の 患. 先 の家 兎 抗血 清 の成 績 と比 較 して,病 理 変 化 の 抑 制. 者 例 に つ い て得 られ た成 績 とよ く一 致 す る もの で あ. は著 し く弱 く,従 つ て 中 和効 果 は甚 だ少 い もの と判. る(Fig. 10).. て 免疫 した 海 〓,マ. 定 され た.本 実 験 に 於 て も痛感 され た こと は,家 兎. Note:. (++)•`(•Û). Indicate. Fig.. 10. the. degree. Absattigungsversuch. of. histopathological. な お,肝 炎 ウイ ル ス小 川 株 を 用 い た 夫 々の抗 血 清. (2). change. (average. of. 4•`5. mice). 間 に も病 変 が軽 度 に 認 め られ る事 実 が あつ て,軽 度. との組 合 せ で は,肝 炎 ウ イ ル スの 諸株 小 川,石 原,. の 感染 の あつ た こ とを示 す が,病 変 の程 度 よ り,一. 春 名 株血 清 との飽 和 試 験 で,同 種 小 川 株 抗 血 清 の 間. 応 肝炎 ウイル スの 諸 株 は,夫 々抗 原 性 を共 有 し,一. に も,多 少 の 病 変 が残 り,石 原,春 名 株 抗 血 清 との. 様 に 中和 効 果 が あ つ た こ とを示 唆 した(Fig.. 11)..
(10) 5846. 津. Fig.. Note:. (++)•`(•Û). Indicate. the. 11. 田. 哲. 郎. Absattigungsversuch. degree. of. histopathological. (3). change. (average. of. 4•`5. Mice). 免疫 血清 との 間 に,補 体 結 合反 応 を 行 つ た. 小 括 及 び 考 按 Wildfuhr(1953)の. 先 づ 精 製 ウ イル スに よ り,家 兎 を免 疫す るに,免. 原 法 に 做 い.中 和 試 験 と平行. 疫 力 価 の 高 い 抗 血 清 が 得 られ た.斯 る抗血 清 を 用 い. して,泉 熱 ウ イル ス社 株 と,肝 炎 ウ イル ス各 株 間 と. る と,社 株 で は1:64の. の間 の"Absattigungsvereuch"を. イル スの 抗 血 清 に は陰 性 の結 果 で あつ た.別 に 肝炎. 試 み た.. 著者 の実 験 で は,之 等 の 中和 形式 で は,ウ イル ス. 抗 原 価 を示 した.又 肝 炎 ウ. ウ イル ス と当 該抗 血清 に よ る補 体 結 合反 応 で は,石. の 動物 接 種 に よ る生 死 が 判 読 され ぬ憾 が あつ て,や. 原,小 川,春 名 の諸 株 に 夫 々1:128の. む な く病 理所 見 によ り判 定 す る方 法 に よ る外 なか つ. し,斯 る抗 血 清 に対 し社 株 は 全 く反 応 しな い.. た.. 抗 原価 を 示. 又 夫 々 の患 者 血 清 に於 て も,夫 々同 種 の 抗血 清 に. 斯 る病 理 所 見 の緩 和 若 くは 抑 制 に よ る.中 和 効 果 の 判 定 に は,動 物 の生 死 に よ る判 定 ほ ど明 確 で はな い.著 者 の実 験 で示 した 如 く,抗 体 の形 成 が 可 成 り. 反 応す るが,異 種 の 血 清 に は反 応 しな い こ とを 確 め た. 2). 中和 試 験 と,Absattigungsversuch. (Wildfuhr. 高 い 場 合 は,病 理変 化 の 発現 が,あ る程 度 に抑 制 さ. G.)の. れ,可 成 り 中和効 果 を 発 揮 した と推 測 され る所 見 を. 合 は よ く中和 反 応 が 惹 起 す る こ とが,病 理 所見 によ. 得 る こと も少 くな いが,抗 体 の形 成 が 極 めて 少 い 場. り推 測 され たが,異 種 の 場 合 は 中和 効 果 は全 く認 め. 合 は,病 変 の 上 で,中 和 効果 と推 測 す るに甚 だ 困 難. られ な い.之 等 の 実 験 の 結果 は,前 記 の補 体 結 合反. で あ る.従 つ て"Absattigungsversuch',に. 於 ける. 応 の如 く,明 瞭 な 判 定 が 困難 な部 分 で あ り,納 得 出. 病 理 所 見 で は,寧 ろ完 全な る中和 効 果 は望 み 難 い も. 来 な い結 果 も少 くな い が,病 理 所 見 よ りの病 変 の緩. の と判 断 され た.. 和 若 くは抑 制 と,補 体 結 合反 応 の結 果 と併 用 す る こ 結. 論. 村 上 等 に よ り肝 炎 患者 材 料 よ り分離 され た肝 炎 ウ. 実験 で は,精 製 ウ イル ス と抗血 清 が 同種 の場. とに よ つ て,有 意 な結 果 を 得 られ る もの と判 断 され た. 3). 以 上 の所 見を 綜 合 して 見 るに,両 ウ イル ス と. イ ル スの報 告 は,更 に 詳細 に検 討 が行 わ れ たが,そ. もに,類 似 性 を 示 す が,独 立 した ウイ ル スで あつ て. の 後 橋 本 に よ りウ イル スの精 製 が 容 易に行 われ る よ. ,ウ イ ル ス学 的 性 状 又 は 血 清学 的 性状 よ り検 討 す る. うに な つ た ので,爾 後 の研 究 は精 製 ウイ ル スに よ り. に,明 か に区 別 され る こ とが 証 明 され た.. 行 わ れ た. 著 者 は分 離 肝 炎 ウ イル ス と相 類 似す る性 状 を 有 す る泉 熱 ウ イル ス(社 株)を. 用い て,同 様 の精 製 が 比. 稿 を終 る に当 り,御 懇 篤 な る御 教 示 と御 鞭韃 を受. 較 的能 率 よ く,し か も容 易に 行 い 得 られ る ことを 証. け,且 つ 御 校 閲 の 労 を 賜 つ た 恩 師 村上 教授 に深 甚 の. 明 した の で,肝 炎 ウ イル スを 対 照 と し,血 清 学 的 研. 謝 意 を 表 す る.. 究 を 行 つ た.こ の 研 究 の 目的 は,も と よ り泉 熱 ウイ ル ス と,肝 炎 ウ イル ス の比 較 研 究 で あ るが,泉 熱 ウ イ ル ス を介 して,肝 炎 ウ イル スの 性 状 を 明瞭 に把 握 す る に あつ た.本 編 に 於 て は次 の結 論 を得 た. 1). 精 製泉 熱 ウ イル ス(社 株)を 抗 原 と し,家 兎.
(11) 精 製 肝 炎 ウ イ ル ス に関す る研 究. 参 1). 橋 本:岡. 山 医 学 会 雑 誌,第70巻,第7号,. 2). 村 上 等:第2回. 3). 村 上 等:第3回. ア ム,. 考 1958. 文 .. 日本 ウ イル ス 学 会 肝 炎 シ ン ポ ジ. 1954.. 5847. 献. 11). 藤 原:岡. 12). Henle. et. al.:. J.. 13). Henle. et. al.:. Proc.. 日 本 ウ イ ル ス 学 会 講 演 要 旨,. 73,. 山 医 学 会 雑 誌,第69巻,第4号,. 603,. Exp.. Med. Soc.. 1956. 92,. Exp.. 271,. Biol. &. 1950. Med.. 1950.. 1955. 4). 村 上 等:第5回. 14). 村 岡:日. 本 細 菌 学 雑 誌,第13巻,第4号,. 15). 黒 屋,吉. 成,石. 37〜43,. 1954.. 1958.. 日 本 ウ イ ル ス 学 会 講 演 要 旨, 田,野. 田,小. 野:ウ. イ ル ス,. 4,. 日 方,正. 岡:泉. 熱 研 究 協 議 会 プ リ. 1957. 5). 浅 木:岡. 山 医 学 会 雑 誌,第. 了1巻,. 5の2号. 掲 載 16). 予 定. 6). Wildfuhr,. G.:. Med.. 1953.. 573,. 7). 笠 原:第6回. 8). 高 田:岡. 9). 大 日 方:岡. 10). Zeitschr. f. d.. Ges.. 日 本 ウ イ ル ス 学 会 講 演 要 旨,. 4号,. Studies Part. II. 1956. 1957. 山 医 学 会 雑 誌,第65巻,第4号 イ ル ス,第3巻,. ン ト. inner.. 山 医 学 会 雑 誌,第69巻,第11号,. 笠 原:ウ. 村 上,俵,大. .. .. 17). 吉 岡:ウ. 18). Havens:. 19). 俵:岡. 21). 仙 石:未. イ ル ス,第1巻,号1号, J. A.. M.. A.. 山 医 学 会 雑 誌,掲. 134,. 1957. 653,. 1947.. 載 予 定.. 発 表.. 1953.. on. Comparative. the. Purified. Studies IZUMI. Hepatitis. on Fever. Virus. Serological. Properties. with. Virus. By Tetsuro. TSUDA. Department of Microbiology, Okayama University Medical School (Director: Prof. Sakae MURAKAMI) As has been reported in the part I, the author obtained the hepatitis virus, and IZUMI fever virus in purified form by means of ultracentrifuge method proposed by HASHIMOTO, and studied comparatively on some serological properties of these purified viruses. The results obtained were following. 1) The antiserum obtained by inoculation of the purified IZUMI fever virus (YASHIRO's strain) had high titer and showed the titer of 1:64 on the complement fixation test to the YASHIRO'S strain, but did not give the positive reaction to the purified hepatitis virus when it was used as antigen. Vis-a-vis, the antiserum obtained by inoculation of the purified hepatitis virus showed the titer of 1:64-1:128 to the hepatitis virus and negative reaction to the. IZUMI fever. virus.. Hence,. in the. view of complement. fixation. test,. the serological. properties of the viruses were evidently different. 2) Conerning to the results of neutralization reaction and "Absatigungsversuch" after WILDFUHR, it could be postulated by the pathological findings the occurence of effective neutralization reaction when the test conducted between a virus and the antiserum obtained by inoculation. of the same virus;. contrarily. to this. the. neutralization. reaction. between. a.
(12) 5848. virus and the antiserum obtained thus observed was not so evident. 津. 田. 哲. 郎. by the inoculation of other virus did not occur. Since the reaction as the complement fixation reaction described above, sometimes. it was hardly possible to identify the definite reaction. However, this reaction was still in formative, especially in referential use of the reaction to complement fixation test, because of the occurence of certain inhibition or mitigantion of pathological changes as the result of the neutalizing effect. 3) From the facts described above, it could be concluded that the evident difference of properties was noticeable in both viruses tested despite of the presence of some similarity on serological properties..
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