血液腫瘍細胞株における細胞死（necrosisとapoptosis）の細胞内Ca2+増加様式

93 果，リンパ球サブセットの代表的マーカーである CD3，4，8，19の陽性率では末梢血と生検組織との間に 相関および有意差はみられなかった，一方，活性化（分 化）抗原マーカー（CDlla，45RO，69， HLA−DR）の陽 性率においては生検組織の方が有意に高値であった が，末梢血における陽性率との間に相関はみられな かった．このことは移植腎組織内の免疫応答が必ずし も末梢血に反映していないことを示唆していると思わ れた．臨床的に有用性に関しては引き続き検討する予 定である．  4．異種心臓移植における自然抗体除去に対する安 定化ヘモグロビン溶液を用いた全血置換の効果    （第三外科）     劉  輝・寺岡 慧・         早坂勇太郎・阿岸鉄三・太田和夫  今回われわれは安定化ヘモグロビン（PHP）溶液を 置換液として用い，全血液交換後に心臓移植を行い， 移植心の拍動時間，異種抗体価などの変化を検索し， 若干の知見を得たので報告する．  体重250∼280gのLewis／seaラットをrecipientと し，200∼250gのHartley系モルモットをdonorとし て用いた．まず，常温下で血液ポンプを用いて，PHP 溶液を置換法として，recipientの全血液交換を行い， その後，24時間以内にOno−Lindseyの方法に準じて donorの心臓をrecipientの腹腔内に移植した．血液置 換前後の血中IgG， IgAとIgMの変化，心拍動時間， さらに，抗モルモットリンパ球毒性抗体および抗モル モット赤血球溶血抗体を測定した．移植後心拍動時間 は，無処置群（血液置換なし，n＝6）では15分前後で あったのに対して，血液置換群（n圭6）では平均400分 と有意の延長が得られた．IgG， IgAとIgMレベルは 血液置換後，初期値の10％以下へ減少を示した．さら にリンパ球毒性抗体および赤血球溶血抗体は，血液置 換後に消失した．  異種移植後に発現する超急性拒絶反応の抑制には術 前異種抗体除去が有効であると判断された．  5．端野が生体免疫反応に及ぼす影響    （東洋医学研究所）  吉川 信・代田文彦  〔目的〕灸刺激が人の免疫能に及ぼす影響について 検討する．  〔方法〕研究対象：健康な成人5名（28歳から72歳 まで，平均49．4歳）．施灸部位：中野・足の三里（各5 壮ずつ）．検査項目：IL−2産生能試験， IL2 receptor培

養，OKT4，0KT8，0KT4／OKT8， NK細胞活性．研

究期間：18週間．  〔結果〕IL2産生能試験， OKT4／OKT8， NK細胞活 性で施灸に由来すると思われる変化がみられたが，一 定の傾向はみられなかった．  〔結論〕パラメーター等の再検討をし，鍼灸治療が 健康維持にどれだけ関与するものなのか，今後も検討 して行きたい．

 6．EBウイルスの眼感染実験

   （第二病院眼科）   ・宮尾洋子・出海陽子・        亀井裕子・宮永嘉隆    （日本医科大学微生物免疫学）       高橋めぐみ・渡理英二  我々はすでにEpstein−Barrウイルス（EBV）を白色 ウサギ眼硝子体注入することによりVCA， EAに対す る抗体が上昇し免疫学的一次応答，二次応答が惹起さ れること，注入されたEBVは少なくとも3日目まで 眼局所にとどまっており，EBV注入眼を24時間後に摘 出しても，抗体上昇することを確認し，報告している．  今回はEBV 1回注入，2回注入による炎症の比較， 中和抗体の形成，ウエスタンプロット法による特異蛋 白の確認，末梢血単球へのEBV感染の検討を行った． その結果，炎症比較実験では1度感作をうけ’たウサギ への再注入で初回注入ウサギの約2倍の前房フレアー 値を示した．またVCA抗体の上昇した血清で中和抗 体が確認された．またウエスタンプロット法により， EA抗体の高い血清で特異蛋白が確認された． in vitro でのウサギ末梢血単球への感染実験ではEBVの取り 込みはみられなかった．これらの結果より，ウサギ眼

へのEBV注置によりVCA抗体， EA抗体などEBV

特異蛋白が形成されるが，末梢血のリンパ球に感染す るという結果は得られず，ウサギへの感染の証明が今 後の課題である．  7．血液腫瘍細胞株における細胞死（necrosisと apoptosis）の細胞内Ca2＋増加様式    （第二生理）     押味蓉子・宮崎俊一  細胞死には細胞膜の損傷破壊などに起因するne−

crosisとDNAの断片化を伴うapoptosisがある．血

液腫瘍細胞においてnecrosisは抗体と補体で誘導で

きapoptosisはFas抗原をもつ細胞に抗Fas抗体添

加で誘導できる．我々はCa画像解析装置を用いこれ らの細胞死の過程における細胞内Ca増加様式を単一 細胞で明らかにした．Necrosisに至る細胞は一過性の

高いCa2＋上昇（1∼3μM）を示し数分後Ca指示薬

fura・2の細胞外への流出で測定不能となった． Apoptosisでは最初顕著なCa2＋上昇は見られないが 一1537一

94 1∼2時間前後より小さなCa2＋増加（0．1∼0．7μM） と特有な形態変化，核断片化を示した．またnatural killer（NK）細胞の標的細胞傷害においてNK細胞は

K562にnecrosisをMOLT−4にapoptosisという異

なった細胞壁を誘導し，そのCa2＋増加には抗Fas抗 体添加とは違う様式も見せた．  以上，細胞死にはCa2＋増加様式や時間経過に差異が あり，細胞死のCa画像解析は細胞傷害の機序をより 明確なものにした．  8．B細胞におけるスーパー抗原    （膠原病リウマチ痛風センター） 箱田雅之・         林本さくら・鎌谷直之・柏崎禎夫

 ヒト末梢血B細胞をEBウイルスを用いてクロー

ニングし，培養上清中に産生されたmonoclonalな IgMの反応性を種々の細菌抗原について検討したと ころ，約30％の抗体がプロテインA（SPA）に結合し た．B細胞クローンよりRNAを抽出し， RT−PCR法 によって発現しているイムノグロブリンVH family を解析したところ，SPA結合IgMを産生する17個の クローンすべてでVH3が使用されていた．一方， SPA に結合しないIgMを産生するクローンでは，15個中 VH3を発現しているものはなかった． SPA結合IgM には，高親和性のものと低親和性のものがみられた．

高親和性IgM産生クローン4個，低親和性IgM産生

クローン3個より得られたPCR産物のdirect

sequenceを行ったところ， framework（FR）3のア ミノ酸配列に親和性によって異なる配列がみられ，

FR3がSPA結合部位と考えられた．このようなSPA

とIgMとの結合はスーパー抗原とTCR Vβとの相互 作用に類似している．  9．rers1η1∂ρseσdoωbercα’oslsからの新しいスー パー抗原の精製と解析一エルシニア感染症，川崎病， 泉熱の発症機序との関連性について一    （微生物学・免疫学）       内山竹彦・三好一片山 徹・加藤秀人・         藤巻わかえ・今西健一・厳 小傑  rヵsθ厩。’幼676π10sゴs（エルシニア）感染症の臨床症 状は多彩であり，TSSや狸紅熱と高い類似性が見られ る．この2疾患の原因外毒：素（TSST−1， SE， SPE）は スーパー抗原という概念で分類され，MHCクラスII

に結合し，TCRに特定のVβを表現するT細胞を一

括して大量に活性化する．我々は臨床症状の類似性か ら，エルシニア感染もスーパー抗原活性をもつ外毒素 によると想定し，｝乙ρSθ雇0励6γ0蜘爵びこついてその 検索を試み，21kDaのスーパー抗原活性をもつ分子 （｝こρε6π40伽加κ勿♂03凱∫一derived mitogen：YPM）の精 製に成功した．YPMはHLA DR， DQ， DPに結合し， Vβ3，Vβ9， Vβ13．1， Vβ13．2陽性ヒトT細胞を活性化 する．

 10．インスりン自己免疫症候群のHLA・DR4サブ

タイプ    （糖尿病センター）  内潟安子・大森安恵  〔目的〕27名の日本人インスリン自己免疫症候群 （IAS）患者がすべてHLA−DRB1＊0406／DQA1＊0301／ DQB1＊0302を持つことを昨年我々は発表した．今回， 日本人IAS症例数を37名に増やし，さらに韓国人IAS 2名，台湾人IAS 1名も加えて， DR4のサブタイプを 再度検討した，  〔方法〕DRB1， DQA1， DQB1遺伝子をPCR・SSO法， PCR−SSCP，さらに直接塩基配列決定にて確認した．  〔結果〕日本人IAS37名のうち， DRB1＊0406／DQA1＊ 0301／DQB1＊0302は34名， DRBI＊0403／DQA1＊0301／ DQB1＊0302は2名， DRB1＊0407／DQA1＊0301／DQB1＊ 0302は1名であった．また韓国人2名，台湾人1名の IASはともに， DRB1＊0406／DQA1＊0301／DQB1＊0302 であった．  〔考察〕一般日本人のDRB1＊0406はDRB1＊0403， DRB1＊0407に比べ頻度が高いため，日本人IAS患者 でDRB1＊0406の高い頻度が得られたのであろう．本研 究結果より，IASと強く相関する部位としてDRB1＊ 0406，DRB1＊0403， DRB1＊0407に共通なDRB1鎖の 70−75番アミノ酸部位をコードする遺伝子部位か， DQA1＊0301， DQB1＊0302遺伝子が示唆される．  11．ベーチェット病患者ロ腔粘膜のγ置細胞につ いて    （第二病理眼科）          徳田和央・長谷英樹・永富絵美・          原 里佳・氏原 弘・宮永嘉隆  ベーチェット病4例を1年間定期的に観察し，次の 結果を得た．  末梢血リンパ球サブセットでは，CD4／CD8比に著名 な逆転は見られなかった．CD45RO細胞は正常範囲で あった．KTH・1whole cellによるリンパ球幼若化試験 は症例1の1回，症例4の1回以外は陰性であった． γδT細胞は症例2で常に，症例4で休止期に軽度上昇 を示した．下唇粘膜のリンパ球サブセットでは，CD3が ベーチエット病に有意に多く認められた．γδT細胞は 正常粘膜では陰性，2例の口腔アフタでもわずかに認 一1538一