博 士 論 文 概 要

早稲田大学大学院 先進理工学研究科

博 士 論 文 概 要

論 文 題 目

アフリカツメガエル成体の造血生理に関与する 蛋白質群の生物学的特性に関する研究

Studies on biological properties of proteins involved in the physiology of hematopoiesis

in adult Xenopus laevis

申 請 者

永澤 和道 Kazumichi NAGASAWA

生命理工学専攻 分子生理学研究

2015 年 5 月

No. 1

生 体 分 子 研 究 は ， 単 一 分 子 の 性 状 と 機 能 や ， リ ガ ン ド － 受 容 体 ， 酵 素 － 基 質 な ど の 二 分 子 間 の 相 互 作 用 を 起 点 に し て 発 展 し て き た 。 そ し て ， ヒ ト 全 ゲ ノ ム 解 読 が 2 0 03 年 に 完 了 し て 以 降 ， ゲ ノ ム 情 報 の 蓄 積 と 分 析 ・ 解 析 技 術 の 進 歩 に よ り ， 生 体 内 分 子 群 の 「 総 体 」 を 包 括 的 に 調 べ る オ ミ ク ス （o m i c s） へ と 進 展 し た 。 す な わ ち ， 全 遺 伝 情 報 を 対 象 と し た ゲ ノ ミ ク ス ， 全 R N A を 対 象 と し た ト ラ ン ス ク リ プ ト ミ ク ス ， 全 蛋 白 質 を 対 象 と し た プ ロ テ オ ミ ク ス （p r o t e o m i c s）， 全 代 謝 物 を 対 象 と し た メ タ ボ ロ ミ ク ス な ど で あ る 。 さ ら に ， 多 数 の 生 体 分 子 が 相 互 に 作 用 す る ネ ッ ト ワ ー ク （ パ ス ウ ェ イ ） と し て 生 命 シ ス テ ム を 理 解 し よ う と す る 動 き が 加 速 し て い る 。 特 に ， 生 命 現 象 の 直 接 の 担 い 手 で あ る 蛋 白 質 は 解 析 対 象 と し て 重 要 で あ る 。 造 血 系 は ， 造 血 幹 細 胞 を 起 源 と す る 末 梢 血 液 細 胞 の 産 生 を 生 涯 に わ た っ て 恒 常 的 に 維 持 す る た め ， 外 部 環 境 に 応 じ て 動 的 に 調 節 さ れ る 。 広 範 な 脊 椎 動 物 の 造 血 系 の 普 遍 性 や 多 様 性 に 関 す る 科 学 的 理 解 は ， 重 要 で あ り な が ら 進 ん で は い な い 。 本 研 究 で は ， 両 生 類 ア フ リ カ ツ メ ガ エ ル （X e n op u s la e v is） の 造 血 生 理 に 関 与 す る 蛋 白 質 群 を 解 析 し た 。 赤 血 球 産 生 因 子 エ リ ス ロ ポ エ チ ン

（e r y t hr o p o i e t i n，E PO） に 関 す る 分 子 性 状 お よ び 構 造 活 性 相 関 の 解 析 を 研 究 の 端 緒 と し ， さ ら に プ ロ テ オ ミ ク ス を 適 用 し た 多 分 子 の 解 析 に よ り ， 造 血 系 の 環 境 応 答 で 誘 導 さ れ る 蛋 白 質 群 の 変 動 と パ ス ウ ェ イ を 明 ら か に し た 。

第 1 章 で は ，ゲ ノ ム 解 読 と そ の 後 の 生 命 科 学 研 究 の パ ラ ダ イ ム シ フ ト に つ い て ， 造 血 研 究 の 視 点 を 添 え て 概 説 し て い る 。 そ し て ， ツ メ ガ エ ル の 造 血 生 理 研 究 に プ ロ テ オ ミ ク ス を 適 用 す る に 至 っ た 経 緯 を 述 べ ，本 研 究 の 位 置 づ け を 提 示 し て い る 。 2 0 10 年 に は ， 両 生 類 で 初 め て ， ネ ッ タ イ ツ メ ガ エ ル （X e no p us t r op ic a l is） の 全 ゲ ノ ム が 解 読 さ れ ， ツ メ ガ エ ル 研 究 に お い て も ポ ス ト ゲ ノ ム と し て 蛋 白 質 科 学 的 解 析 の 重 要 性 が 増 し て き て い る 。 本 研 究 で 解 析 し た ア フ リ カ ツ メ ガ エ ル は ， モ デ ル 生 物 と し て 利 用 さ れ て 5 0 年 以 上 の 歴 史 が あ る 。 ゲ ノ ム 量 が 多 く 異 質 4 倍 体 の 染 色 体 も つ こ と か ら ， ゲ ノ ム 解 読 の 着 手 が 遅 れ た も の の ， 研 究 蓄 積 に よ っ て 遺 伝 子 配 列 の 登 録 数 は 豊 富 で あ る 。

第 2 章 で は ， ア フ リ カ ツ メ ガ エ ル の E PO（X . l a e v is E PO，x lE P O） に 対 す る 抗 体 の 作 出 と そ の 用 途 つ い て 述 べ て い る 。 抗 体 は ， 様 々 な 生 命 科 学 研 究 の ツ ー ル と し て 利 用 さ れ て い る 。 そ こ で ，x lE PO に 対 す る 抗 体 を 複 数 作 製 し ， 免 疫 学 的 手 法 に よ る x lE P O の 検 出 ・ 定 量 な ら び に 分 子 性 状 や 活 性 の 解 析 を 可 能 と し た 。ヒ ト E P O の 受 容 体 結 合 部 位 に 相 同 な 領 域 を 含 む 抗 原 ペ プ チ ド に 対 す る 抗 体 は 中 和 活 性 を 有 し ，こ の 部 位 は x lE P O に お い て も 活 性 に 重 要 な 領 域 で あ る こ と が 示 唆 さ れ た 。 さ ら に ， 作 出 し た 抗 体 を 利 用 し た 展 開 と し て ，x lE PO の 糖 鎖 修 飾 の 解 析 と 貧 血 時 の 血 中 に 存 在 す る 赤 血 球 産 生 刺 激 活 性 の 解 析 に つ い て 述 べ て い る 。

第 3 章 で は ，x lE P O の 分 子 性 状 と 構 造 活 性 相 関 に つ い て 述 べ て い る 。ヒ ト E P O

（h u m a n E PO，h u E PO） は ，3 本 の N 結 合 型 糖 鎖 と 1 本 の O 結 合 型 糖 鎖 を 有 す る 糖 蛋 白 質 で あ る 。蛋 白 質 分 子 に 陰 性 電 荷 や 親 水 性 を 付 与 す る 糖 鎖 は ，h u E PO の

血 中 半 減 期 や 分 子 安 定 性 に 重 要 で あ る 。し か し ，x lE P O に は N 結 合 型 糖 鎖 修 飾 部 位 が な い 。 ま た ，x lE PO は ，h u E P O と の ア ミ ノ 酸 配 列 相 同 性 が 約 3 8 %と 低 い に も 関 わ ら ず ，h u E P O 受 容 体 発 現 細 胞 の 増 殖 を 刺 激 す る 。 し た が っ て ，x lE PO と h u E PO は ，そ の 分 子 性 状 は 異 な る も の の ，受 容 体 へ の 結 合 に 重 要 な 活 性 領 域 は 保 存 さ れ て い る と 考 え ら れ た 。 そ こ で ，h u E P O と の 相 同 部 位 に 導 入 し た N 結 合 型 糖 鎖 が x lE P O の 分 子 性 状 と i n v it r o 活 性 に 与 え る 影 響 を 調 べ た 。野 生 型 お よ び 糖 鎖 付 加 x lE P O を C O S - 1 細 胞 で 発 現 さ せ ， ウ ェ ス タ ン ブ ロ ッ ト 法 で 検 出 し た と こ ろ ，h u E P O の A s n 8 3 に 相 同 な 部 位 の 糖 鎖 修 飾 を 欠 く 分 子 を 認 め た 。 ま た ， 陽 イ オ ン 交 換 ま た は 疎 水 性 ク ロ マ ト グ ラ フ ィ ー で の 分 画 に よ り ， 野 生 型 x lE PO は h u E PO よ り も 塩 基 性 お よ び 疎 水 性 が 高 い こ と ， 糖 鎖 付 加 に よ り 塩 基 性 は 低 下 し ， 親 水 性 が 上 昇 す る こ と が わ か っ た 。 さ ら に ， 各 糖 鎖 付 加 x lE P O は x lE P O 受 容 体 ま た は h u E P O 受 容 体 を 発 現 す る 細 胞 の 増 殖 を 刺 激 し ，i n v it r o 活 性 を 保 持 し て い た 。 以 上 よ り ，h u E PO と x lE P O は ， 物 理 化 学 的 性 質 お よ び A s n 8 3 付 近 の 立 体 構 造 は 異 な る も の の ， 活 性 領 域 は 保 存 さ れ て い る と 考 え ら れ た 。

第 4 章 で は ， ア フ リ カ ツ メ ガ エ ル と ネ ッ タ イ ツ メ ガ エ ル に お け る 血 漿 蛋 白 質 解 析 結 果 の 比 較 に つ い て 述 べ て い る 。 プ ロ テ オ ミ ク ス で は ， 全 ゲ ノ ム 情 報 を 利 用 で き な い ア フ リ カ ツ メ ガ エ ル よ り も ， 全 ゲ ノ ム 情 報 が 公 開 さ れ て い る ネ ッ タ イ ツ メ ガ エ ル の 方 が 有 利 で あ る 可 能 性 が あ っ た 。 そ こ で 等 量 の 両 ツ メ ガ エ ル 血 漿 を 液 体 ク ロ マ ト グ ラ フ–タ ン デ ム 質 量 分 析 装 置 （L C – M S / M S） で 分 析 し ， 蛋 白 質 同 定 数 を 比 較 し た 。 そ の 結 果 ， 予 想 に 反 し て 両 者 に 大 差 は な か っ た 。 次 い で ， 遺 伝 子 オ ン ト ロ ジ ー を 用 い て 分 子 機 能 情 報 を 参 照 し た と こ ろ ， 機 能 注 釈 が 付 与 さ れ て い る 蛋 白 質 が 占 め る 割 合 は ， ア フ リ カ ツ メ ガ エ ル の 方 が 高 か っ た 。 以 上 よ り ， プ ロ テ オ ミ ク ス で 同 定 し た 蛋 白 質 群 か ら 生 物 学 的 解 釈 を す る 際 に は ， ア フ リ カ ツ メ ガ エ ル の 方 が 適 し て い る と 考 え ら れ た 。

第 5 章 で は ， ア フ リ カ ツ メ ガ エ ル の 低 温 環 境 に 対 す る 初 期 応 答 に つ い て 述 べ て い る 。 ア フ リ カ ツ メ ガ エ ル は 低 温 環 境 下 で 汎 血 球 減 少 を 呈 し ， 赤 血 球 減 少 は 肝 臓 に お け る 赤 血 球 破 壊 の 亢 進 が 一 因 で あ る こ と が わ か っ て い る 。 し か し ， 関 与 す る 分 子 お よ び 栓 球 と 白 血 球 の 減 少 機 序 は 不 明 で あ っ た 。 ま た ， ヒ ト （ 成 人 ） で は 通 常 ， 血 球 産 生 は 骨 髄 ， 血 球 破 壊 は 脾 臓 ， 物 質 代 謝 は 肝 臓 が 主 に 担 っ て お り ， こ れ ら は 共 存 し な い が ， ア フ リ カ ツ メ ガ エ ル （ 成 体 ） で は 肝 臓 で 共 存 す る 。 し た が っ て ， 低 温 環 境 下 の 肝 臓 は 造 血 系 と 代 謝 系 が 連 鎖 し た 生 体 反 応 が 生 じ る と 考 え ら れ る が ， 不 明 で あ っ た 。 そ こ で ， 造 血 ・ 代 謝 器 官 で あ る 肝 臓 と 構 成 蛋 白 質 の 変 動 が 生 理 状 態 を 反 映 す る 血 漿 を 対 象 に ， 低 温 環 境 下 の プ ロ テ オ ー ム 変 動 を 解 析 し ， 低 温 環 境 に 応 答 し て 誘 導 さ れ る パ ス ウ ェ イ を 調 べ た 。対 照 群（2 2 ° C 飼 育 ）と 低 温 群

（5 ° C，2 4 時 間 飼 育 ） の 肝 臓 お よ び 血 漿 蛋 白 質 を L C – M S / M S で 分 析 し ， 蛋 白 質 の 網 羅 的 同 定 と 量 比 解 析 ， お よ び ヒ ト ホ モ ロ グ 候 補 分 子 を 利 用 し た 遺 伝 子 オ ン ト ロ ジ ー 解 析 と パ ス ウ ェ イ 解 析 を 実 施 し た 。 本 結 果 で は ， 低 温 群 の 肝 臓 で ヘ モ グ ロ

No. 3

ビ ン サ ブ ユ ニ ッ ト 鎖 の 増 加 を 認 め ， 赤 血 球 破 壊 の 亢 進 に 起 因 す る と 考 え ら れ た 。 ま た ， フ ェ ニ ル ア ラ ニ ン と チ ロ シ ン の 代 謝 に 必 要 な フ マ リ ル ア セ ト ア セ タ ー ゼ が 低 温 群 の 肝 臓 で 増 加 し ，“ フ ェ ニ ル ア ラ ニ ン 異 化 作 用 ”お よ び“ チ ロ シ ン 異 化 作 用 ” に 関 連 す る 遺 伝 子 オ ン ト ロ ジ ー が 低 温 群 の 肝 臓 蛋 白 質 群 特 異 的 に 抽 出 さ れ た 。 そ こ で 肝 臓 の 遊 離 ア ミ ノ 酸 量 を 両 群 で 比 較 す る と ， フ ェ ニ ル ア ラ ニ ン と チ ロ シ ン が 低 温 群 で 有 意 に 低 か っ た 。 パ ス ウ ェ イ 解 析 に お い て 両 群 に 共 通 し て 抽 出 さ れ た 糖 代 謝 系 に 着 目 す る と ， 低 温 群 肝 臓 で は 解 糖 系 律 速 酵 素 ピ ル ビ ン 酸 キ ナ ー ゼ と グ リ コ ー ゲ ン 合 成 系 酵 素 グ リ コ ー ゲ ン 分 枝 酵 素 の 減 少 ， グ リ コ ー ゲ ン 分 解 律 速 酵 素 グ リ コ ー ゲ ン ホ ス ホ リ ラ ー ゼ の 増 加 を 認 め ， 解 糖 は 抑 制 さ れ ， グ リ コ ー ゲ ン 分 解 が 亢 進 し て い る と 考 え ら れ た 。 そ こ で 肝 臓 中 グ リ コ ー ゲ ン 量 を 両 群 で 比 較 す る と ， 低 温 群 で は 低 値 傾 向 に あ り ， 分 解 が 亢 進 し て い る こ と が 示 さ れ た 。 グ リ コ ー ゲ ン は 分 解 後 に グ ル コ ー ス 6 リ ン 酸 と な り ，主 に 解 糖 と グ ル コ ー ス 産 生 に 利 用 さ れ る 。 そ こ で 肝 臓 中 グ ル コ ー ス 量 を 比 較 す る と 低 温 群 で 有 意 に 低 か っ た 。 し た が っ て ， 解 糖 と グ ル コ ー ス 産 生 に は 利 用 さ れ な い 。 他 に は ， ペ ン ト ー ス–リ ン 酸 経 路 に お け る N A D PH 産 生 へ の 利 用 が 挙 げ ら れ る 。 し か し ， 肝 臓 中 N A D PH 量 に は 両 群 で 差 を 認 め な か っ た 。N AD P H は 抗 酸 化 物 質 の 供 給 に 消 費 さ れ る 。 低 温 飼 育 時 の 肝 臓 で は 鉄 の 集 積 を 認 め る こ と か ら ， 酸 化 ス ト レ ス が 生 じ て い る と 考 え ら れ る 。 以 上 よ り ， 低 温 環 境 に 曝 さ れ た ア フ リ カ ツ メ ガ エ ル の 肝 臓 で は ， 破 壊 赤 血 球 に 由 来 す る 鉄 の 集 積 で 生 じ る 酸 化 ス ト レ ス に 対 応 し て 抗 酸 化 物 質 を 供 給 す る た め に ， グ リ コ ー ゲ ン の 分 解 を 亢 進 さ せ ，N A D P H 産 生 を 維 持 し て い る と 考 え ら れ た 。 こ の 他 ， 存 在 量 の 変 化 し た 分 子 は ， 肝 臓 内 の 造 血 を 直 接 的 あ る い は 間 接 的 に 調 節 す る 分 子 の 候 補 に な る 可 能 性 が あ る 。 低 温 群 の 血 漿 で は グ ロ ビ ン サ ブ ユ ニ ッ ト 鎖 の 増 加 を 認 め ，イ ム ノ グ ロ ブ リ ン と 補 体 が 減 少 傾 向 に あ っ た 。ま た ，α2–マ ク ロ グ ロ ブ リ ン と フ ィ ブ リ ノ ー ゲ ン の 減 少 を 認 め ， ア ン チ ト ロ ン ビ ン は 減 少 傾 向 に あ っ た 。 こ の よ う な 血 漿 蛋 白 質 の 変 動 は ， ヒ ト に お け る 血 球 貪 食 症 候 群 や 自 己 免 疫 性 溶 血 性 貧 血 ， 播 種 性 血 管 内 凝 固 症 候 群 で 認 め ら れ る 。 以 上 よ り ， 赤 血 球 減 少 は 赤 血 球 破 壊 の 亢 進 の 他 に 溶 血 に も 起 因 し ， 抗 体 や 補 体 が 関 与 す る 可 能 性 が あ る 。 ま た ， 栓 球 減 少 は 血 管 内 凝 固 に よ る 栓 球 の 消 費 が 一 因 で あ る 可 能 性 が あ る 。

最 終 章 で は ， 本 研 究 の 成 果 を 総 括 し ， 今 後 の 展 望 を 示 し て い る 。 本 研 究 で は ， ア フ リ カ ツ メ ガ エ ル に お け る 蛋 白 質 群 の 解 析 を 通 し て ， 造 血 因 子 の 活 性 領 域 が 種 を 超 え て 保 存 さ れ て い る 可 能 性 を 明 ら か に し た 。 ま た ， 造 血 系 と 連 鎖 し て 低 温 環 境 に 応 答 し て 変 動 す る 代 謝 系 の 蛋 白 質 群 と パ ス ウ ェ イ を 明 ら か に し ， ゲ ノ ム デ ー タ ベ ー ス が 未 整 備 の 生 物 に お け る プ ロ テ オ ミ ク ス の 有 用 性 を 示 し た 。 現 在 で は ゲ ノ ム や 全 転 写 物 の 配 列 と 発 現 頻 度 を 得 る こ と が 可 能 と な っ て い る 。さ ら に 今 後 も ， 遺 伝 子 や 蛋 白 質 の 解 析 手 法 の 著 し い 発 展 と 普 及 が 見 込 ま れ る 。 こ う し た 分 子 解 析 手 段 を よ り 多 様 な 生 物 を 対 象 に 波 及 さ せ る こ と が で き れ ば ， 基 礎 お よ び 応 用 の 両 面 か ら 生 体 調 節 系 理 解 の さ ら な る 深 耕 を 期 待 で き る 。

Ｎｏ.1

早稲田大学 博士（理学） 学位申請 研究業績書

氏 名 永 澤 和 道 印

（2015 年 7 月 現在）

種 類 別 題名、 発表・発行掲載誌名、 発表・発行年月、 連名者（申請者含む）

論文 ○

○

論文

（その他）

総説

講演

1. Nagasawa K, Meguro M, Sato K, Tanizaki Y, Nogawa-Kosaka N, Kato T. The influence of artificially introduced N-glycosylation sites on the in vitro activity of Xenopus laevis erythropoietin. PLoS ONE. 2015 Apr 21;10(4):e0124676.

2. Nagasawa K, Tanizaki Y, Okui T, Watarai A, Ueda S, Kato T. Significant modulation of the hepatic proteome induced by exposure to low temperature in Xenopus laevis. Biol Open. 2013 Aug 23;2(10):1057-1069.

3. Okui T, Yamamoto Y, Maekawa S, Nagasawa K, Yonezuka Y, Aizawa Y, Kato T.

Quantification and localization of erythropoietin-receptor-expressing cells in the liver of Xenopus laevis. Cell Tissue Res. 2013 Jul;353(1):153-164.

4. Nogawa-Kosaka N, Sugai T, Nagasawa K, Tanizaki Y, Meguro M, Aizawa, Maekawa S, Adachi M, Kuroki R, Kato T. Identification of erythroid progenitors induced by erythropoietic activity in Xenopus laevis. J Exp Biol. 2011 Mar;214(Pt 6):921-927.

5. Nogawa-Kosaka N, Hirose T, Kosaka N, Aizawa Y, Nagasawa K, Uehara N, Miyazaki H, Komatsu N, Kato T. Structural and biological properties of erythropoietin in Xenopus laevis.

Exp Hematol. 2010 May;38(5):363-372.

6. Hirose S, Takayama N, Nakamura S, Nagasawa K, Ochi K, Hirata S, Yamazaki S, Yamaguchi T, Otsu M, Sano S, Takahashi N, Sawaguchi A, Ito M, Kato T, Nakauchi H, Eto K. Immortalization of erythroblasts by c-MYC and BCL-XL enables large-scale erythrocyte production from human pluripotent stem cells. Stem Cell Reports. 2013 Dec 5;1(6):499-508.

7. Okamoto M, Kobayashi S, Ikeuchi H, Yamada S, Yamanouchi K, Nagasawa K, Maekawa S, Kato T, Shimizu I. Synthesis and bioassay of a boron-dipyrromethene derivative of estradiol for fluorescence imaging in vivo. Steroids. 2012 Jul;77(8-9):845-849.

8. 永澤和道，渡会敦子，谷合正，竹島功将，加藤尚志．プロテオーム解析による比較生 物学的ミッシングリンク探索の実際．比較内分泌学，第40巻，No.153，134-139頁，

2014年9月．

1. 永澤和道，奥井武仁，渡會敦子，上田しのぶ，加藤尚志．アフリカツメガエルの臓器 蛋白質変動の網羅的解析．第36 回日本比較内分泌学会大会及びシンポジウム．都道 府県会館，2011年11月．

2. 永澤和道，谷崎祐太，前川峻，加藤尚志．ツメガエルにおけるプロテオミクスの試行 と展望．第5回日本ツメガエル研究集会．熱海，2011年10月．

3. 永澤和道，前川峻，谷崎祐太，加藤尚志．低温環境に暴露したアフリカツメガエルの 血漿プロテオミクス．日本動物学会第82回旭川大会．旭川，2011年9月．

4. 永澤和道，須貝龍久，谷崎祐太，前川峻，別府実穂，小坂（野川）菜美，加藤尚志．

ツメガエルの血中に存在する赤血球産生活性の抗エリスロポエチン抗体による中和．

第35回日本比較内分泌学会大会及びシンポジウム．静岡，2010年11月．

5. Nagasawa K, Beppu M, Miyazaki H, Komatsu N, Kato T. Biological properties of N-glycosylated Xenopus laevis erythropoietin in comparison with the native form. ISEH – Society for Hematology and Stem Cells 39th Annual Scientific Meeting. Melbourne, Australia, Sep, 2010.

Ｎｏ.2

早稲田大学 博士（理学） 学位申請 研究業績書

種 類 別 題名、 発表・発行掲載誌名、 発表・発行年月、 連名者（申請者含む）

講演

(つづき) 6. 永澤和道，小坂（野川）菜美，上原信明，會沢洋一，加藤尚志．N結合型糖鎖を導入 したアフリカツメガエルのエリスロポエチンの生物活性．第70回日本血液学会総会．

京都，2008年10月．

7. 永澤和道，小坂（野川）菜美，上原信明，會沢洋一，目黒瑞枝，妹尾勇弥，加藤尚志．

アフリカツメガエルのエリスロポエチンを認識する抗ペプチド抗体の作製．日本動物 学会関東支部第60回大会．駒場，2008年3月．

8. 平田昭人，米塚友香，武藤洋史，藤山真吾，永澤和道，谷崎祐太，加藤尚志．アフリ カツメガエルエリスロポエチン受容体を認識するモノクローナル抗体による血球細 胞のフローサイトメトリー解析．第66回日本動物学会関東支部大会，東京，2015年 3月．

9. 佐藤圭，細沢咲湖，永澤和道，谷崎祐太，加藤尚志．アフリカツメガエルエリスロポ エチンの酵素免疫学的測定法の構築．第66回日本動物学会関東支部大会，東京，2015 年3月．

10. 谷合正光，藤山真吾，竹島功将，永澤和道，前川峻，加藤尚志．低温曝露アフリカツ メガエルにおける赤血球破壊と肝臓組織鉄の変動．第 66 回日本動物学会関東支部大 会．柏，2014年3月．

11. 入江達也，武藤洋史，永澤和道，奥井武仁，加藤尚志．アフリカツメガエル未熟赤血 球を認識するモノクローナル抗体の作出．第86回日本生化学会大会．横浜，2013年 9月．

12. 竹島功将，永澤和道，谷崎祐太，渡会敦子，加藤尚志．アフリカツメガエルの赤血球 膜蛋白質群の同定．第86回日本生化学会大会．横浜，2013年9月．

13. 竹島功将，永澤和道，渡会敦子，加藤尚志．超遠心法により分画したアフリカツメガ エル赤血球膜蛋白質群の検索．日本動物学会第65回関東支部大会．東京，2013年3 月．

14. 野村一騎，永澤和道，安川賢，一杉芽美，谷崎祐太，加藤尚志，多ヶ谷卓爾．ツメガ エルトロンボポエチンのポリクローナル抗体の作出および免疫に伴うニュージーラ ンドシロウサギの血小板数変動の解析．日本動物学会第 65 回関東支部大会．東京，

2013年3月．

15. 柏瀬奈央，谷崎祐太，永澤和道，前川峻，加藤尚志．低温曝露によるアフリカツメガ エル末梢栓球数減少における栓球膜糖鎖の関与．日本動物学会第 83 回大会．大阪，

2012年9月．

16. Meguro M, Adachi M, Nagasawa K, Beppu M, Okazaki N, Nogawa-Kosaka N, Tamada T, Kuroki R, Kato T. Implication of Molecular Diversity and Functional Conservation of Erythropoietin Based on a Comparison of Tertiary Structures of Humans and Frogs. The 53rd Annual Meeting of the American Society of Hematology. San Diego, California, USA. Dec, 2011.

17. 目黒瑞枝，永澤和道，小坂（野川）菜美，安達基泰，岡崎伸生，玉田太郎，黒木良太，

加藤尚志．赤血球造血因子エリスロポエチンの結晶構造から見える受容体結合部位の 種間保存．第 36 回日本比較内分泌学会大会及びシンポジウム．都道府県会館，2011 年11月．

18. 谷崎祐太，吉岡祐亮，永澤和道，小坂展慶，落谷孝広，小松則夫，加藤尚志．ヒト白 血病細胞株における網羅的遺伝子発現プロファイリング．第 73 回日本血液学会学術 集会．名古屋，2011年10月．

Ｎｏ.3

早稲田大学 博士（理学） 学位申請 研究業績書

種 類 別 題名、 発表・発行掲載誌名、 発表・発行年月、 連名者（申請者含む）

講演 (つづき)

講演 (招聘)

その他 (講演)

その他 (研究会等 講演)

19. 武藤洋史，廣瀬崇行，神保杏林，栗城遥，永澤和道，谷崎祐太，加藤尚志．アフリカ ツメガエル肺におけるエリスロポエチンの発現と作用．第 73回日本血液学会学術集 会．名古屋，2011年10月．

20. 黒瑞枝，別府実穂，永澤和道，安達基泰，岡崎伸生，玉田太郎，黒木良太，加藤尚志．

ツメガエルエリスロポエチンの性状解析と分子構造の進化的保存性．第 73 回日本血 液学会学術集会．名古屋，2011年10月．

21. 奥井武仁，神保杏林，永澤和道，米塚友香，加藤尚志．赤血球造血を支持するアフリ カツメガエル肝臓の組織微小環境における接着分子の発現．日本動物学会第 82回大 会．旭川，2011年8月．

22. 目黒瑞枝，安達基泰，黒木良太，谷崎祐太，田原彩香，別府実穂，永澤和道，加藤尚 志．大腸菌組換えタンパク質発現におけるC 末端配列への変異導入の効果．第11回 日本蛋白質科学会年回．大阪，2011月6月．

23. 一杉芽美，永澤和道，田原彩香，池田磨希，栗城遥，渡会浩志，加藤尚志．ツメガエ ル栓球産生因子受容体c-Mpl の発現系の構築．日本動物学会関東支部第63回大会．

2011年3月．

24. 遠藤信康，別府実穂，永澤和道，横田直樹，加藤尚志．ラウリル硫酸ナトリウムヘモ グロビン法による有核赤血球中のヘモグロビン定量法の検討．日本動物学会関東支部 第63回大会．2011年3月．

他13件

1. Kato T, Nagasawa K, Okui T, Tanizaki Y, Maekawa S. Environmental responses of hematopoiesis in Xenopus laevis. The 8th International Symposium on Amphibian and Reptilian Endocrinology and Neurobiology (ISAREN 2014). Okazaki, Japan, Nov, 2014.

2. 小坂（野川）菜美，前川峻，永澤和道，家村仁美，奥井武仁，加藤尚志．両生類造血 に学ぶ～アフリカツメガエル血球産生のダイナミクス～．日本比較免疫学会第 21 回 学術集会，シンポジウム「リンパ球の起源と分化」．神奈川，2009年8月．

1. Hirose S, Takayama N, Nakamura S, Kato T, Nagasawa K, Sameshima T, Nakauchi H, Eto K. Potential application of an immortalized erythrocyte-producing cell line derived from human pluripotent stem cells. ISSCR (International Society for Stem Cell Research) 10th Annual Meeting. Yokohama, Japan. June, 2012.

2. 廣瀬正一，高山直也，中村壮，加藤尚志，永澤和道，鮫島正，中内啓光，江藤浩之．

ヒト多能性幹細胞由来不死化赤芽球株の樹立．第11回日本再生医療学会総会．横浜，

2012年6月．

3. Iwai K, Nagasawa K, Kato T, Minamisawa S. Nov is a novel protein secreted by prostaglandin E2 stimulation from the rat ductus arteriosus. The 7th Japan-China-Korea Pediatric Heart Forum. Fukuoka, Japan. July, 2011.

4. 間舘一憲，上田しのぶ，永澤和道，加藤尚志，小林哲也．成長遅延症マウスにおける 顎下腺の機能解析．日本動物学会関東支部第63回大会．2011年3月．

5件