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ブタ体細胞核移植卵の発生能向上に関する研究

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Academic year: 2021

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(1)一44一. 文. 内. 容. の. 要. 旨. ろ ﹂ム ひ コ﹂﹂. 謎雅. 筋上. わー ⊥ 刀り. 氏. 論. 名. 本 研 究 では 、体 外成 熟 培養 卵子 を用い た体 細 胞 クロ… ンブタの作 出成 功率 の 向L. 学 位 の 種 類. 士(農. を 口的として 、ブタ体 細胞 核 移植 卵 の 発生 能 向 ヒに関す る諸条 件の検 討を行っ た。. 学). 化 学 的 染 色 体 除 去 法 が ブ タ体 細 胞 核 移 植 卵 の 発 生 能 に及 ぼ す 影 響. 学 位 記 番 号. ブ タ未 受 精 卵 の 染 色 体 除 去 を行 う際 に 用 い る薬 剤 の 最 適 な 処 理 条 件 を検 討 し 、体 細 胞 核 移 植 卵 の 体 外 発 生 能 と産 子 へ の 発 生 能 に つ い て 検 討 した 。そ の結 果 、第 二 減 数. 学位授与の 日付. 分 裂 中 期 卵 を0.1∼0.4μg/mlDelnecolclneで60分. 平 成18年3月22日. 0分 、又 は3μg/mlNocOdazoleで30∼60分. 、0,4μg/m}Demecolcineで3 間 処 理 す ると、染 色 体 が 凝 集 して 、卵 細. 胞 質 表 面 に 突 出 す る こ とが 明 らか に な っ た 。 最 適 濃 度 のDemecolcineま. 学 位授与の要件. 学 位 規 程 第4条. 学 位論 文 題 目. ブタ体細胞核移 植卵の発生能向上 に関す る研究. 第1項 該 当. NOcodazoleで. たは. 体 外 成 熟 卵 を1時 間 処 理 後 、凝 集 して 卵 細 胞 質 表 面 に 突 出 した 染 色 体. を 除 去 して 体 細 胞 核 移 植 に 用 い た 結 果 、核 移 植 卵 の 体 外 発 生 率 に 違 い は 見 られ な か った 。しか しな が ら 、○.4μg/mlDemecolcine処 植 した6頭 の 受 胚 雌 の うち 、2頭 か ら合 計4頭 μg/mlNocodazOle処. 理 後 染 色 体 を 除 去 した 核 移 植 胚 を移 の クロー ンブ タが 得 られ た の に 対 して 、3. 理 を 行 った 場 合 は 核 移 植 胚 を 移 植 した4頭 は 、い ず れ も分 娩 に. 至 らな か った 。本 実 験 結 果 か ら、染 色 体 除 去 操 作 に は 、Demecolcineを. 用 い る方 が 良. い ことが 明 らか とな っ た。. II.培 養 液 がブタ体 細胞 核 移植 卵 の 体外 発 生能 に及 ぼす 影 響 mNCSU37培. 地 とPZM-3培. 地 を用 い て、ブタ体 細 胞 核移 植 卵 の体外発 生 能 を比較. した。胚 盤 胞 へ の発 生 率 は 、PZM-3を 用 いた場 合12%で. あり、mNCSU37を. 合 の6%に 比 べ て高く、また得 られ た胚盤 胞 の細 胞 数 もPZM-3区. 体 細 胞核 移植 卵 の胚 盤 胞 へ の発 生時 期 を比 較 したところ、mNCSU37を 培 養 後7日 目に胚 盤 胞 へ の発 生 が観 察された が、PZM-3を. 用 いた場. で多か った。次 に、 用 いた場 合 、. 用い た場 合 は、培 養 後6. 日 目には じめ て胚盤 胞 へ 発生 した。以 上 の結 果 から、PZM-3培 地 の方 が体細 胞 核 移 植 卵 の培 養 液 として優 れ ていることが判 明 した。. 論 文 審査 委 員. 角. 幸. 雄. m,化 学 的 活性 化 法 がブタ体細 胞 核移 植 卵 の体 外 発 生 能 に及 ぼす 影 響. 保. 之. 発 生能 に及 ぼ す影 響 を検 討 した。その結 果 、単為 発 生 卵 ではイオノマイシンの処 理 濃. イオ ノマイシンを用 い た化 学 的 活性 化 法が 、ブ タ体 細 胞 核 移植 卵 と単為 発 生 卵 の. 櫻. (副 主 査). 谷. 度依 存 的 に発 生 率 が 向 七した。これ に対 して 、核 移植 卵 ではイオ ノマイシンの処 理 濃. (副 主 査). 教 授. 上. 野. 紘. 度 や 処 理 時 間 の違 い によって発 生 率 に大 差 は み られ なかった。次 に 、イオ ノマ イシン あるいは電 気 刺激 を用 いてブ タ体 細 胞 核移 植 卵 を活 性 化 し、発 生率 を比較 した。その.

(2) 一45一.

(3) 一46一. 論 文 審 査 結 果 の 要. 旨.

(4)

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