Cell
Exosome
Cell
細胞上清
（2 mL)
エクソソーム由来
RNA
エクソソーム由来タンパク質PureExo
ⓇCell KIT
（
品番：P100)
PureExo
（
品番：ⓇSerum KIT
P101)
DiagExo
（
品番：ⓇUrine KIT
P120)
DiagExo
（
品番：ⓇBodyFluid KIT
P121)
血清サンプル
（0.1 mL)
高純度エクソソーム！（in 100 uL PBS)
Exosomal RNA & Protein Extraction kit (
品番：P200)
25 uL エクソソーム
75 uL エクソソーム
尿サンプル
（2 mL)
体液サンプル
（0.1-2 mL)
Revolutionary Tools for Exosome Research
エクソソーム研究用製品カタログ
サンプル あります！
1
PureExo
®
Exosome Isolation Kit
特 長
構 成 内 容
使 用 例
商 品 リ ス ト
for cell culture media & serum
高純度エクソソームを高収率・迅速に単離 エクソソームは、細胞由来の直径 20-200nm の細胞外小胞で、広範囲の生体液（血液、尿、羊水、細胞培養培地など）に存在 しています。エクソソームは、細胞内情報伝達に重要な役割を果たし、ある種のヒトの疾病に対する予後、治療、バイオマーカー として使用できる可能性を持っています。本製品は、細胞培地（品番 P100）又は血清（品番 P101）から完全なエクソソームを、 迅速かつ効果的に回収するためのキットです。 ● 超遠心、煩雑な単離操作は不要、操作時間は 2-3 時間程度 ● 超遠心よりも高い回収率（5-10 倍） ● 抗体ベースの手法より低コスト ● 高純度のエクソソームを回収可能 ● 少量のサンプル（細胞培地：2-4mL、血清 0.2mL）から高 収率で回収 ● 回収したエクソソームは各種アプリケーションに適用可能 ● 溶液 A、B、C ● PureExo® カラム 品番 品名 包装 希望販売価格
P100 PureExo® Exosome Isolation kit (for cell culture media) 1 KIT ￥74,000 P101 PureExo® Exosome Isolation kit (for serum) 1 KIT ￥64,000
図 .1 NIH3T3 細胞培地から本製品を用いて回収したエクソソームの透過型電子 顕微鏡画像 得られたエクソソームは、膜に包まれた球状の粒子（直径 20-200nm）として 観察された。 （EM 研究、エクソソームラベル、エクソソームサブポピュレーション、エクソソー ム miRNAのqRT-PCRプロファイリング、エクソソームタンパク質のゲル分析など） 図 .3 粒度分布分析 NIH3T3 細胞（1 × 106細胞）の培地から、超遠心分離法（A）又は本キット（B） で、トータルエクソソームを単離し、BI 200SM Research Goniometer System （632.8nm レ ー ザ ー） を 用 い て 動 的 光 散 乱（DLS；dynamic light scattering）
を測定した。単離したエクソソーム群の DLS 分布は、単一ピーク（直径～ 150nm）を示した。本キットで単離したエクソソームは超遠心分離法で単離し たエクソソームと同様の分布を示した。 図 .4 エクソソーマルタンパク質マーカー分析 NIH3T3 細胞の培地 30mL から超遠心分離法で、又は同培地 5mL から本キットで、 それぞれエクソソームを単離した。回収したエクソソームを溶解し、得られたエ クソソームタンパク質を、Bio-Rad 4–20％グラジエントポリアクリルアミドゲ ルにロードして分離した。エクソソームのマーカー CD9 及び脂質ラフトマーカー フロチリンを、それぞれ抗 CD9 抗体（Life span Biosciences 社 品番 LS-B7794） 及び抗フロチリン抗体（Abcam 社 品番 AB41927）で認識させ、イムノブロッ ト分析した。本キットは、超遠心分離法と比べて、高純度、高収率のエクソソー ムを単離した。 図 .2 エクソソーム由来 RNA の定量分析 NIH3T3 細胞培地から本キットまたは超遠心分離法でエクソソームを単離した。 トータルエクソソーム RNA を NanoDrop 8000 分光光度計で計測した。本キッ トで単離したエクソソームは、超遠心分離法よりも、エクソソーム RNA 量が多 かった。 101 Bio, LLC メーカー略号：OBL 保存：常温
2
DiagExo
®
Urinary Exosome Isolation Kit
特 長
構 成 内 容
操 作 概 要
商 品 リ ス ト
尿サンプルから高収率でエクソソームを回収 本製品は、尿サンプルからエクソソームを迅速かつ効率的に単離するためのキットです。 ● 高純度のエクソソームを単離 ● 超遠心よりも高い回収率（約 10 倍） ● 超遠心、煩雑な単離操作は不要、操作時間は 2 時間程度 ● 抗体ベースの手法より低コスト ● わずか 1mL の尿サンプルから高収率でエクソソームを回収 ● 回収したエクソソームは各種アプリケーションに適用可能 1. サンプル調製：尿サンプル 3mL を、2000g、室温で 10 分 間遠心し、細片を除去します。 2. ペレットに触れないように、澄明な上清を新しいガラス管 1 に移し、氷上に置きます。 3. ガラス管 2 に溶液 A/B/C の混合液を調製します（溶液 A： 0.25mL、溶液 B：0.25mL、溶液 C：1.0mL）。* 溶液 C のボト ルは使用の都度蓋を閉めます。 4. ガラス管 2（溶液 A/B/C 混合液）を 5-10 秒間ボルテックス し、均一な溶液にします。 5. ガラス管 2（溶液 A/B/C 混合液 1.5mL）をガラス管 1（尿 サンプル 3mL）に加えます。 6. ガラス管 1 の蓋をしっかり閉め、30 秒間強くボルテックス し、4℃で 1 時間インキュベートします。 7. 混合液が 3 層に分かれます（右図参照）。中間の fluff 層に触 れないように、ピペットで上層をゆっくり吸引し、除去します （2 層（上層と fluff 層）しか見えないこともあります）。 8. 残りの層をマイクロチューブに移し、300g で 2-3 分間遠 心します。新しく 3 層が現れます（上層：培地の色、中層： fluff、下層：無色）。上層を注意深く吸引し、完全に除去します。 9. ピペットチップを下層に挿入し、無色の下層も完全に除去 します。fluff 層だけをチューブに残します。 10. マイクロチューブの蓋を解放し、室温で 5-10 分間乾燥さ せます（過乾燥させない）。 11. PBS 30-50 μ L を加え、ピペットで上下させて fluff を再懸 濁します。 12. 懸濁液を DiagExo® カラムに移し、カラムを 2000g で 5 分間遠心し、通過画分を回収します。 13. この通過画分が単離された高純度エクソソームです。単離 したエクソソームはそのまま使用するか、4℃で最大 1 週間、 又は -80℃で最大 3 ヶ月間保存できます。 ● 溶液 A、B、C ● DiagExo® カラム 品番 品名 包装 希望販売価格P120 DiagExo® Urinary Exosome Isolation kit 1 KIT ￥74,000
（EM 研究、エクソソームラベル、エクソソームサブポピュレーション、エクソソー ム miRNAのqRT-PCRプロファイリング、エクソソームタンパク質のゲル分析など）
3
DiagExo
®
Human Body Fluid Exosome Isolation Kit
構 成 内 容
反 応 容 量
各種体液サンプルから高収率でエクソソームを回収 本製品は、各種体液サンプル（脳脊髄液（CSF）、羊水、炎症性液、リンパ液、母乳、唾液、胃腸液（GI）、肺胞洗浄液など）か らエクソソームを単離するためのキットです。0.5-2mL のサンプルから高収率でエクソソームを単離します。単離したエクソソー ムは、各種アプリケーション（EM 研究、エクソソームラベル、エクソソームサブポピュレーション、エクソソーム由来 miRNA の qRT-PCR プロファイリング、エクソソーム由来タンパク質のゲル分析や ELISA など）に適用できます。 ● 溶液 A、B、C ● DiagExo® カラム 1. サンプル調製：下表を参照に、必要な量の体液サンプルを 採取します。2000g、室温で 10 分間遠心し、細片を除去します。 2. ペレットに触れないように、澄明な上清を新しいガラス管 1 に移し、氷上に置きます。 3. ガラス管 2 に溶液 A/B/C の混合液を調製します（サンプル 量に対する溶液 A/B/C の量は表 1 を参照）。* 溶液 C のボトル は使用の都度蓋を閉めます。 4. ガラス管 2 を穏やかに 5-10 秒間ボルテックスし、均一な溶 液にします。 5. ガラス管 2（溶液 A/B/C の混合液）をガラス管 1（体液サ ンプル）に加えます。 6. ガラス管 1 のキャップをしっかり閉め、30 秒間強くボルテッ クスし、4℃で 1 時間インキュベートします。 7. 混合液が 3 層に分かれます（p,2 の図参照）。中層の fluff に 触れないように、ピペットで上層を吸引し、除去します（2 層 （上層と fluff 層）しか見えないこともあります）。 8. 残りの層をマイクロチューブに移し、300g で 2-3 分間遠 心します。新しく 3 層が現れます（上層：培地の色、中層： fluff、下層：無色）。上層を注意深く吸引し、完全に除去します。 9. ピペットチップを下層に挿入し、無色の下層も完全に除去 します。fluff 層だけをチューブに残します。 10. マイクロチューブの蓋を解放し、室温で 5-10 分間乾燥さ せます（過乾燥させない）。 11. PBS 30-50 μ L を加え、ピペットで上下させて fluff を再懸 濁します。 12. 懸濁液を DiagExo® カラムに移し、カラムを 2000g で 5 分間遠心し、通過画分を回収します。 13. この通過画分が単離された高純度エクソソームです。単離 したエクソソームはそのまま使用するか、4℃で最大 1 週間、 又は -80℃で最大 3 ヶ月間保存できます。 各サンプル推奨容量（μ L） 血清 CSF 羊水 炎症性液体 リンパ液 母乳 唾液 胃腸液 肺胞洗浄液 溶液 A：20 μ L 100 100 100 100 100 200 400 400 400 溶液 B：20 μ L 溶液 C：80 μ L 溶液 A：40 μ L 200 200 200 200 200 400 800 800 800 溶液 B：40 μ L 溶液 C：160 μ L 溶液 A：60 μ L 300 300 300 300 300 600 1200 1200 1200 溶液 B：60 μ L 溶液 C：240 μ L 溶液 A：80 μ L 400 400 400 400 400 800 1600 1600 1600 溶液 B：80 μ L 溶液 C：320 μ L 溶液 A：100 μ L 500 500 500 500 500 1000 2000 2000 2000 溶液 B：100 μ L 溶液 C：400 μ L商 品 リ ス ト
品番 品名 包装 希望販売価格P121 DiagExo® Human Body Fluid Exosome Isolation kit 1 KIT ￥74,000
101 Bio, LLC メーカー略号：OBL 保存：常温
操 作 概 要
4
Exosomal RNA and Protein Extraction Kit
構 成 内 容
エクソソーム中の RNA 及びタンパク質を抽出 本製品は、各種エクソソーム単離キット（品番 P100、P101、P120、P121）で単離した高純度エクソソームから、エクソソー マル RNA 及びエクソソーマルタンパク質の両方を抽出するためのキットです。 ● エクソソーマルタンパク質溶解バッファー ● N1、N2、N3、N4 溶液 ● RNA 溶離バッファー サンプル調製 1. 単離したエクソソームを RNase フリーチューブに移します。 PBS を加え、100 μ L とします。 2. RNA とタンパク質の両方の抽出が必要な場合は、エクソソー ムサンプルを 2 つに分けます：75 μ L を RNA 抽出、25 μ L をタンパク質抽出。 エクソソーマル RNA の抽出 3. エクソソームサンプル 75 μ L を RNase フリーチューブに 移し、N1 溶液 250 μ L を加えます。ピペットで上下させて混 合し、室温で 5 分間インキュベートします。* エクソソームサ ンプル量が異なる場合は、N1 溶液の容量をサンプル量に比例 して調節してください。 4. N2 溶液 50 μ L をサンプルに加え、15 秒間強くボルテック スし、室温で 2-3 分間インキュベートします。 5. 12000g、4℃で 15 分間遠心します。 6. 境界面を乱さないように、上層（水層）を吸引し、新しい RNase フリーチューブに移します。 7. N3 溶液 125 μ L を加え、エクソソーマル RNA を沈殿させ ます。 8. 室温で 15 分間インキュベートし、12000g、4℃で 10 分間 遠心します。 9. エクソソーマル RNA のペレットは、チューブの底または側 部でゲルを形成します。上清を注意深く吸引し、除去します。 10. RNA ペ レ ッ ト に N4 溶 液 250 μ L を 加 え て 混 合 し、 7500g、4℃で 5 分間遠心します。RNA ペレットに触れないよ うに、上清を除去します。 11. ステップ 10 を繰り返します。 12. RNA ペレットを室温で 10 分間風乾させます。 13. RNA ペレットを RNA 溶離バッファー 10-15 μ L に溶解さ せます。そのままアッセイに用いるか、-80℃で保管します。 エクソソーマルタンパク質の抽出 14. エクソソーマルタンパク質溶解バッファーを室温で解凍 し、氷上に置きます。 15. エクソソームサンプル 25 μ L を新しいチューブに移し、 エクソソームタンパク質溶解バッファー 50-100 μ L を加え、 ピペットで上下させて混合します。 16. 4℃で 15 分間インキュベートし、14000g、4℃で 10 分間 遠心します。 17. この上清が抽出したエクソソーマルタンパク質です。上清 を新しいチューブに移し、氷上に置きます。タンパク質濃度を 測定し、そのままアッセイに用いるか、-80℃で最大 3 ヶ月間 保存できます。商 品 リ ス ト
品番 品名 包装 希望販売価格P200 Exosomal RNA and Protein Extraction kit 20 PREP. ￥48,000
101 Bio, LLC メーカー略号：OBL 保存：常温 & -20℃
操 作 概 要
5
DiagExo
®
Serum Exosomal Protein Extraction Kit
特 長
構 成 内 容
微量サンプルから高収率でエクソソーマルムタンパク質を回収 本製品は、ヒトの血清、母乳、唾液、腹膜流体、脳脊髄液（CSF）、胃腸液（GI）、羊水から、エクソソーム由来のタンパク質を 単離するためのキットです。わずか 100 μ L のサンプルから効率的にタンパク質を抽出します。 ● 高純度のエクソソームを回収 ● 超遠心法に比べて高い回収率（約 10 倍） ● 遠心操作も煩雑な単離操作も不要（操作時間は 2 時間以内） ● 抗体ビーズ法よりも低コスト ● 回収したエクソソームは各種アプリケーションに適用可能 ● 溶液 A、B、C ● DiagExo® カラム ● DiagExo® 溶解バッファー （EM 研究、エクソソームラベル、エクソソームサブポピュレーション、エクソソー ム miRNAのqRT-PCRプロファイリング、エクソソームタンパク質のゲル分析など）反 応 容 量
1. 体液サンプルを採取し、氷上で冷却します。 2. 4℃、4000g で 10 分間遠心し、細片を除去します。 3. ペレットに触れないように、澄明な上清を新しいガラス管 1 に移します。 4. ガラス管 2 に溶液 A/B/C の混合液を調製します（サンプル 量に対する溶液 A/B/C の量は下表を参照）。 * 溶液 C のボトルは使用の都度蓋を閉めます。 5. ガラス管 2 を穏やかに 5-10 秒間ボルテックスし、均一な溶 液にします。 6. ガラス管 2（溶液 A/B/C の混合液）をガラス管 1（体液サ ンプル）に加えます。 7. ガラス管 1 のキャップをしっかり閉め、30 秒間強くボルテッ クスし、4℃で 1 時間インキュベートします。 8. 混合液が 3 層に分かれます。（下層：無色、中層：“fluff（け ば状のもの）”、上層：橙色又は元々の体液サンプルの色） 中層の fluff に触れないように、ピペットで上層を吸引し、除 去します（2 層（上層と fluff 層）しか見えないこともあります）。 9. 残りの層をマイクロチューブに移し、300g で 2-3 分間遠 心します。新しく 3 層が現れます（上層：培地の色、中層： fluff、下層：無色）。上層を注意深く吸引し、完全に除去します。 10. ピペットチップを下層に挿入し、無色の下層も完全に除去 します。fluff 層だけをチューブに残します。 11. マイクロチューブの蓋を解放し、室温で 5-10 分間乾燥さ せます（過乾燥させない）。 12. PBS 10-50 μ L を加え、ピペットで上下させて fluff を再懸 濁します。 13. 懸濁液を DiagExo® カラムに移し、カラムを 2000g で 5 分間遠心し、通過画分を回収します。 14. この通過画分が単離された高純度エクソソームです。氷上 で保管します。 15. DiagExo® 溶解バッファーを解凍し、その 50-100 μ L を 単離したエクソソームに加えます。5 回ほどピペットで上下さ せ、完全に混合します。氷上で 15 分間インキュベートします。 16. 14,000g、4℃で 10 分間遠心します。その上清が抽出さ れたエクソソーマルタンパク質です。新しいチューブに移し、 -80℃で保存します。 各サンプル推奨容量（μ L） 血清 CSF 羊水 炎症性液体 リンパ液 母乳 唾液 胃腸液 肺胞洗浄液 溶液 A：20 μ L 100 100 100 100 100 200 400 400 400 溶液 B：20 μ L 溶液 C：80 μ L 溶液 A：40 μ L 200 200 200 200 200 400 800 800 800 溶液 B：40 μ L 溶液 C：160 μ L 溶液 A：60 μ L 300 300 300 300 300 600 1200 1200 1200 溶液 B：60 μ L 溶液 C：240 μ L 溶液 A：80 μ L 400 400 400 400 400 800 1600 1600 1600 溶液 B：80 μ L 溶液 C：320 μ L 溶液 A：100 μ L 500 500 500 500 500 1000 2000 2000 2000 溶液 B：100 μ L 溶液 C：400 μ L商 品 リ ス ト
品番 品名 包装 希望販売価格P300 DiagExo® Serum Exosomal Protein Extraction kit 10 RXN ￥88,000
操 作 概 要
6
エクソソームに small RNA(siRNA、miRNA など）を簡単導入
ExoFectin
®
sRNA-into-Exosome Kit
特 長
構 成 内 容
エレクトロポレーション法
本製品は、各種エクソソーム単離キット（品番 P100、P101、P120、P121）で単離した高純度エクソソームに、miRNA、 siRNA などの small RNA を導入するためのキットです。
● 高いローディング効率 ● エクソソームに対する影響は穏やか ● 扱いやすい ! エレクトロポレーション法用（品番：P400) ● ExoFectin®溶液 A、B ● エレクトロポーレーションキュベット ● 無菌ピペット ケミカル法用（品番：P401) ● ExoFectin® Reagent ● Supplemental buffer 1. 高純度エクソソームを単離します（エクソソーム単離キッ ト（品番 P100、P101、P120、P121 など）を使用）。単離し たエクソソームがペレットの場合は、PBS10-100 μ L に再懸 濁します（エクソソームペレットの大きさに応じて、ペレット の 10 倍容量の PBS を加えます）。エクソソーム懸濁液を氷上 に置きます。 2. エクソソーム懸濁液 2-5 μ L をとり、エクソソームタンパ ク質を定量します。トータルのエクソソームタンパク質濃度が エクソソームの定量値を示します。 3. ExoFectin® 溶液 A 65 μ L と ExoFectin® 溶液 B 35 μ L を 混合し、エクソソーム（10-100 μ g）及び small RNA（0.1-3 μ mol）に加えて、ピペットで上下させて混合させます。* 混 合液のトータル容量は、120 μ L を超えないようにしてくだ さい。 4. ExoFectin®- エクソソーム -smallRNA 混合液をキュベットに 移します（混合液でキュベットの底を覆い、気泡が入らないよ うにしてください）。キュベットに蓋をします。 5. 混合液の入ったキュベットを、エレクトロポレーターキュ ベットホルダーに挿入します。400mV、パルスタイム 10-15 秒で混合液をエレクトロポレートします。 6. エレクトロポレート完了後、キュベットを取り出し、PBS 500 μ L をキュベットに加えます。キットに添付の無菌ピペッ トを使用して、混合液を新しい無菌チューブ（予め 1％ BSA を含む PBS 1.5mL を入れておく）に移します。この時点でエ クソソームには smallRNA が導入されています。 7.（オプション） PureExo® エクソソーム単離キット（品番 P100）を用いてエクソソームを沈殿させます。 8. smallRNA を導入したエクソソームについて、下記のような アプリケーションに使用できます。 (1) エクソソームを使ってターゲット細胞に RNA をデリバ リー： 1％ BSA を含む PBS にエクソソームを懸濁します。ターゲッ ト細胞を 48 時間飢餓状態にします。もしくは、50％コンフル エントに達するまでターゲット細胞を FBS 枯渇状態で培養し ます。smallRNA を導入したエクソソームを加えます。48-72 時間培養を続けた後、細胞を回収し、リアルタイム RT-PCR で ターゲット遺伝子の発現を測定します。 (2) in vivo RNA デリバリー（動物への静脈注射（尾部注射など） 又は局所注射（筋肉内注射など）によるデリバリー）： 単離したエクソソームを 5％グルコース通常食塩水に再懸濁 し、レシピエント動物に注射します。注射を繰り返すことで、 エクソソームデリバリーの効果を増強することができます。免 疫抵抗を最小限に抑えるために、エクソソームの由来と同じ種 のレシピエント動物を選択することを推奨します。エクソソー ムデリバリー後、各種時点において、挿入した組織におけるター ゲット遺伝子の発現を、リアルタイム RT-PCR を用いて測定す るか、イメージングにてターゲット遺伝子の発現を検出します。
操 作 概 要
商 品 リ ス ト
品番 品名 包装 希望販売価格P400 ExoFectin® sRNA-into-Exosome Kit (Electro) 1 KIT ￥82,000 P401 ExoFectin® sRNA-into-Exosome Kit (Chemical) 1 KIT ￥45,000
● 希望販売価格 ･･･ 「希望販売価格」は参考であり、販売店様からの販売価格ではございません。 記載の希望販売価格は 2014 年 5 月１日現在の希望販売価格です。 予告なしに改定される場合がありますので、ご注文の際にご確認下さい。消費税は含まれておりません。 ● 使 用 範 囲 ･･･ 記載の商品は全て、「研究用試薬」です。 人や動物の医療用・臨床診断用・食品用等としては使用しないよう、十分ご注意ください。 (12053)
Revolutionary Tools for Exosome Research
エクソソーム解析
受 託 サ ー ビ ス
1
Normal cell exosome extraction service
お客様の細胞やその他のサンプル ( 血清、尿等 ) をお預かりし、精製エクソソームを納品
2
Exosome RNA and protein extraction service
精製エクソソームからトータル RNA (small RNA 画分含む ) 及びタンパク質を抽出
3
Disease cell exosome extraction service
101 Bio 社が所有する細胞培養液からエクソソームを抽出して納品
4
Exosome fluorescent labeling
蛍光色素によりトータルエクソソームを染色
5
Exosome Biotin labeling
蛍光色素によりトータルエクソソームを染色
6
Exosome antibody labeling
エクソソームをビオチン標識
7
Exosome FACS sorting
フローサイトメトリーを用いてお客様のご希望のエクソソームをソート
お問い合わせは…
技術サービス部 テクニカルサービスグループへ！ TEL：03-5632-9615 FAX：03-5632-9614 E-mail：jutaku_gr@cosmobio.co.jp
