金 沢 大 学十 全 医 学 会雑 誌 第
9 6
巷 第1
号 15
−2 9
く1 9 8 7
11 5
各 種の肝 . 胆 道 系 疾患に おける肝 細 胞 内鋼 頼 粒に 関する研 究
− その病 的および診断学的 意義を中心に 一
食 沢 大学 医学 部 第二病
理
学 許 座 く主任
こ太田 五 六
教 授1宮 村 輩
く
昭
和6
2年1月 6 日
受 付I各種の肝. 胆道 系疾 患
7 2 1
例の肝を
パ ラジ
メチ
ル ア ミ ノベ ンチ リ デ
ンロダ
ニ ン網検 出 法 くロダ
ニ ン糾 検 出 法1
で
染色し
, 肝 細 胞 内に沈 着す る
網 顆 粒を
検 索し た
.な お
, ロダ
ニ ン鋼 検 出 法 陽性の鋼 顆 粒の沈 着僅 度は
, 肝 組 織 内鋼 塵を
良く
反 映し た
. 網 棚 粒が
主に肝 小葉や
再 生 結節の辺
緑 部の
肝 細 胞の
核 周 囲に染ま る も の と
, 肝 細 胞の毛 細 胆 管 周 囲に
染ま る も の が あ
った
.W il
s o n 病の1
例で は
核 周 囲性の も
のと
毛 細 胆 管周
開性のも
のが
混在し
, 他の
鋼糟糠腸憮何個す
べて
核 周 囲 性の も
ので あ
った
. 銅 噸粒 陽 性 例を
,以
下の4
群に分頬
で き た
.1
. 原 発性 胆 汁惟 肝 硬 変, 原発 性 硬 化性 胆管炎,A l
agill
e 症 候 群で は
, 網 顆粒 沈 瀞は
高率で
榔 闇 系 疾 患 商 率群1
, 病 購の進 行し た
例で
高 度で あ
った
.2
. 肝 外 閉 塞性 黄 痘 くほ と ん ど が
急 性例うで は 低
率か
つ軽 度で あ
畑た い
胆道 糸痍 恩 低 率群1
.3
. 肝硬
変, 慢 性 情動 性 肝 炎,ア
ルコ ー ル性肝 線 維症で は
低 率かつ車削
針ごあ
ー十た く
肝疾 患 低率 郡上 いず れ も 小
熊改 築の進 行し た
例に み−1 れ た
.4
.W il
s o n 病の1
例で は
, 中 等 鷹山沈瀾が
み 一っれ た
. 胆 道 系疾 患 商 率群で は
, 黄痘 陽性 例 全例に中 等 度へ 高 度の鋼 顆 粒が
みら れ
, 無 煎頂 例で レ
半数以 上
の例に銅 噸 粒が
みら れ た
..方, 胆 道 系疾 患低 率群
で は
, 爵 痘例の−一郎に の み 錮粕 粋が
み−二Jれ た
. 肝 疾 患 低 率郡で は
, 繭膜状
有 無と
銅 顆 粒 沈着の間に関連 性は な か
った
. これ ら
の所 見よ
り, 胴 汁う
ぺ臥そ
の持続 期 間, 胆 管 糸の障 軍 部亜と そ
の程度, 肝 線 維 化, 肝細 胞 障 害が
複 合的に網 棚 拉沈 掛こ関 連す る と
思わ れ た
.以 ヒよ り
, 各種 肝■胆 道 系 疾 患で
, 種々
の頻度で
鋼 顆粒が
検 出さ れ
,そ
の 出現
状 態と
痛 的 悪戯に差が あ
り, 肝ノヒ検 診 断に郁亨 1 と
考え
られ た
.K e
y
w o rds 肝 細 胞 内 鋼 顆 粒, 胆 汁 うっ滞, 肝 生 検, 網 代 謝鋼
は 隼 理
的に体 内に存ノ亡
する 必
墳 微塵
金属の1
つで あ
り,主
二と し て
卜二指 腸かl−ノt吸
収さj
L,比
較 的 急速に 肝に取り 込 ま れ
, C e r ul
opl
a s mi
nや
cy to ch
r o m e o xi
.ぬ
s eな ど
の鋼 結 合 蛋 川二利用 さ れ る
.そ し て
,そ
刷ま
とん ど
が月り
汁 中に排粧 さ れ る
1 I コ,. 肝は
網 代謝の中心
的 臓帯
て凍
り, 銅い先人
仲 代 謝 異常いW il
s o ll嫡でf
lf二障 溝が
み−−ノj
L,ま た
, 掩ノ川J肝.J
jll
道糸
楳 患に おい ても
糾 代.削異
常が
出現 し
, 特に原隠
性胆 汁 性 肝幌
変げ B C う で 人 品
山鋼が肝 組 織 内に沈
賞す る
こと が
知−1Jれ て
い jム
l 卜 1 ニー.と
.く
に近 隼
,S i
p po n e n7 I,N
之1k
a n u m a章
一,によ
り, 肝 細 胞 内で
鋼が
メ タロナ オ ネ イ
ンと
結合し
, こ の錮 結 た 性
蛋
白頃が S hi k
ataら
刷Jjオ
ル セイ
ン染 色で
某ま る
こと が
明一二,かと な
り,ま た
肝 組 織 内鋼 塞が
原子
吸
光 法によ り 比
較 的容 易に定遠
出来る
様にな
って
, 肝 組 織 内の嗣 沈 着の機序と
意 義が
注目さ れ
て いる
1 卜 1 封し
かし
, 多く
の報 告は P B C や W il
s o n 病な ど
J12 , 3 の肝.胆 道 系疾 患に限ら れ て
いる
.そ
こ で今 臥 著 者は
,H
常し ば し ば
経 験す る
各棟山肝. 胆 道 系 疾 患
を
対 象と し
, 肝 細胞 内に嗣が
組 織 化ノア 的にど
の程 度,ど
の様に染ま る
かを知
り, 肝■ 胆道 糸 疾 患に おけ る
網代 謝の異 常の .端を知 ろ う と
試み,さ ニ
Lユに鋼の沈
着 像が
肝の病理 形
態 診 断に有用
かど
う かを
検 討し た
. 従 来, 肝 組 織 内の鋼の染 色 方法と し て
, 岡 本ら
の バ ラジ
メチ
ルア
ミ ノベ ンチ リ デ
ンロダ
ニ ン嗣 検 出法 く
ロダ
ニン鋼検 出法コ
, ルベア
ン鋼 検 出 法,T i
r1 1 n l嗣 検 出 法
な どが
知ら れ て
いる
1 0 I l 巾1 引. ル ベ
ア
ン嗣検 出A b br e via
t
io n s 二C A H , Chr o nic a ct
iv e hep
at
it
isi
C P H , Chr o nicp
e r sist
e nt
hep
at
it
isi
H BsAg
,hep
at
it
is B s u rfa c e a nt
ig
e nニ
m .士
S .D ., m e a n士
st
an da rd de viat
io nニ
P B C ,p
rim a ry
b ilia ry
cir rho sisi
P S C,P
rim a ry
s cle r o sing
ch ola ngit
is法
は
特 異性は
高いが
, 検 出感 度が
かな り
低い.ま た
,T i
m m 鋼 検 出 法は
, 検 出感 度は
非 常に高いが
, 鋼以
外の金 属, 例
え ば
鉄や 亜
鉛な ど も
可染さ れ る
1 0 H 吊.そ
こで
, 今 回の研 究で は
,あ る
程 度の
染 色 感 度と
特 異 性のあ る
ロダ
ニ ン鋼検 出 法を 用
し1た
.さ ら
に, 肝 組 織 内 銅 崖を
原子 吸
光 法によ り
化学 的に定 立し
川6 1,ま た
鋼 結 合 蛋 白を
染め る オ
ル セイ
ン染 色, およ び X
線微 少 部 分析 法31川も
同時に行い,肝 細胞に沈 着す る
嗣の病 的 意 義の検 討
を
行った
.対 象
お よ び
方 法昭 和
5 8
年1
月か ら
昭 和6 1
年9
月ま で
に, 金沢 大 学 医学 部第二病理
学 教室に診 断 目 的に送ら れ て
来た
肝生
検5 57
例 く針 生 検 肝5 52
例と
外 科 的 生 検 肝あ る
いは
部 分 的 外 科切 除肝5
例1お よ び
金 沢 大 学 医 学 部 中 検 病理
, 福 井 県 立病 院,黒
部 市民 病 院の最 近の仙.一部の生検 肝1 6 4
例 く針 生 検 肝7 7
例と
外 科 的 生 検 肝あ る
いは
部 分 的 外 科 切 除肝8 7
例うを
対 象と し た
.な
お,一部の症
例
で は
重 複し て
肝 生検が
行わ れ た
.生
後6
ケ月以
内の 新 生 児の肝 細 胞 内には
, 生理
的に銅 顆 粒が
染 色さ れ
,鋼顆 粒 沈着の病 的解 釈
が
困 難と さ れ て
いる
ので
2 1 鋸, 本 研 究で は
いずれ も 5
才以 上
の小 児 及び
成人
例を
対 象と し た
. いずれ も 1 0
% 中 性ホ ルマリ
ン固 定 後パラ
フィ
ン 包 埋さ れ た も の で あ り
,5
声切 片を
作 製し
, ル ーチ
ン のH E
染色,ア ザ
ン.マ ロリ
ー 染 色, ゴ モリ の
鍍 銀 染 色の 他に, 後 述のオ
ル セイ
ン染 色と
鋼 染 色を
行った
. 肝 生 検の病
理
形 態 学 的 診 断は
, 臨 床所 見およ び
生 化 学 的 所 見を
考慮し て
行った
.慢性 肝 炎は
国 際 分 類用に従い,慢 性 活 動性 肝 炎 くC A H
lと
慢性 持 続 性 肝 炎 くC P
拙 に 二分し
,C A H は さ ら
にS
ch
e u e r1 9 1に従い門 脈域 相互 あ る
いは
門脈 域と
中心
静 脈と を
結ぶ隔 壁の無い軽 度群と
種々
の程 度に これ ら の
隔 壁を 示 す
中等 度 へ高 度 群と し た
.ア
ルコ ー ル性 肝 障 害は
文 部 省 科 学 研 究 費 総 合 研 究班
く班 長 武 内 重五
郎 教 授う2 0Iに従い,月旨肪肝,ア
ルコ ー ル 性 肝 炎,ア
ル コ ー ル性 肝 線椎 症,ア
ルコ ー ル性 肝 硬 変と し た
.ア
ル コ ー ル肝 線 維 症を さ ら
に隔壁 形 成のな
い軽度 群
と
種々
の程 度の隔壁 形 成や
不完 全な
結 節 形 成を 示 す
中 等度 一高 度群に 二分し た
.な お
,ア
ルコ ー ル性 脂 肪 肝は
他の 原
因によ る
脂 肪 肝に含め
検 討し た
.P B C の
病 期は
, 太田 ら
2りに従い, 無線 維 化 期, 線 維 化 期, 肝 硬 変 期と し た
. 原 発 性 硬 化性 胆 管 炎 げS C
うの病 期に 関し て も
,P B C
のそ れ
に従い無 線 維 化期, 線椎 化 猟 肝 硬 変 期と し た
. 肝 外 閉 塞 性黄 痘は
, 黄 痘の持続 期 間が
一カ
月 未 満のも
のと
, 一カ
月以 上
のも
の に 二分し た
.オ
ル セイ
ン染色は S h ik
ataら の
変 法相に従った
. つま り
,5
ノ上の
パ ラ フィ
ン切 片を
型の如く
脱パラ し
,0
.3
%過 マ ンガ
ン酸 液で前 処理
く3 0
秒へ1
分うし
,1
.5
%修 酸で
脱 色 後,オ
ル セ了
ン溶 液け
くI%フ■ル コ 一山ル 溶 液1 0し
1n ll
十0
.2
g のオ
ル セイ
ン 十濃 塩 酸く1.8Il川
に2
時 間 反応さ せ
,7ぐ フ%
ア ルコ ー ルで 分
別し
, 脱 水. 封入 し
, 鏡検し た
.そ し て
, 肝禰川包内J鳩 界J う鋭 利な
漉く
染ま る 黒
褐 色伽 赤褐 色の顆 粒 物を
陽性と し
, 今回
の検 索 対 象
と し た
. 胴 染 色と して
ログ
ニ ン胴検 出 法川キ 剛
−た
.つ
ま り
,5
声 の パ ラフィ
ン切
片を
型の如.く
脱パ
ラ し
, 新 調し た
染 色 液く7
% 酢 酸ナト
リ ウ ム1
肛 ml
十 パラ ジ
メチ
ル ア ミ ノベンチ リ デ
ンログ
ニ ン 飽 和イルコ ー ル液
3
mり
に3 6
0C
で2
4 時間 叫柏
崎 間反
応さ
せた
.そ
の後, 蒸 留 水で水 洗 後, へ マト キ
シ リンで
柁 梁 色し
, 脱 水, 封入 を
行って
鏡 検し
, 赤褐 色 句赤 紫 色に 染ま る
顆 粒 物を
鋼 陽 性と し た
.な
お, 同 染色 法では
,鋼
以
外の水 銀, 鍛, パラジ
ウ ム, 金, 白 金等の 金属 化 合 物も
陽 性 反 応を 示 す が
, 蒸 留 水1 0 1H
l ll
+パ ラジ
メ チ ルア ミ
ノベ ンチ リ テ
ンログ
ニ ン飽 和アル コ ー ル柄 油5
m
l
十1 N
硝 酸3
ml
+3
%過 酸 化 水 素5
ml
の敏 也 洒で は
, 銅は
反 応せ
ず,そ
の他の上
述の金 属は 反
応する
川.そ
こで
, 化 学 定量
的およ び
ロ タ0
ニ ン嗣 検 出 法
で
大量
い鋼
を
認め た P B C 3
例と W il
s o n 病の1
例を と
記 対 照 反応 液 内で
反 応さ せ た が
, 陰 性で あ り
, ログ
ニン鋼検 出法で 反
応す る
物 質を
嗣と
判 断し た
.な
お, 肝 細 胞がび ま ん
性に淡く
赤 褐 色に染ま る 症
例が
,P B C
,P S C
,W il
s o n 病で し
ばし
ば見ら れ た が
, いず れ も
嗣 確 粒 沈着 高 度例
で
あり
, 媒 染の
可 能 性も あ り
, 今回
の研 究で は
陽 性と は し な か
った
. 鋼 染 色と オ
ル セイ
ン慄 色の陽 性 対 照と し て P B C
剖 検 肝 く後 述の化 学 的 定 量によ
り1 3 3 1
JLglgd
ryli
v e r の鋼 量を 示 す
.な
お,正
常 値は 2 2
.9
旬5 2
.1
JLgノgd
ryli
v e rlの
肝 切 片を 用
いた
.ま た
,鋼 頼 粒
と オ
ル セイ
ン陽 性 顆粒の沈 着 程 度を
,以
下の如く
半定量
的に表 現し た
.す な わ ち
, 全く
染ま ら な
いも
のを
陰性, 肝 小 葉あ る
いは
再 生 結節の辺
縁 部の 山 部の 肝 細 胞に陽性 頑 粒を
認め る も
のを
軽度, 肝 小 葉あ る
いは
再 生 結 節の辺
綾 部のほ と ん ど
の肝細 胞に陽 性 塀 粒を
認め る も の を
高 度と し
,そ
の 中間のも
のを
中等 度と し た
.組 織 化 学 的に中等 度へ 高度の鋼 顆 粒の沈 着
が
見ら れ た P B C 6
例で は
, 肝 生検 採 取 時に,肝 組 織 片の,一入一部を
冷2
.5
%グ
ルタ
ー ルア
ルデ
ヒド
内で
細切 し
, 同園
定 液で 1 へ
2
時 間 固 定. 冷オ
ス ミ ウ ム酸で後 固 定し
,型
の如
く
脱 水し
,酸 化プロピ
レ ン置 換 後,E P O N 81 2
に包埋 し た
.ト リ
ミ ング
後,L K 王 ヨ
ー48 0
く1 で
超薄 切 片を
作 製し
,ク
エン酸 鉛およ び
酢 酸ウ ラ
ニ ー ル の 二重
染 色を
行い,透 過
型
電子
顕 微鏡
くJE M l O O 別 で
観 察し た
.さ ら
に, これ ら
の6
症 例を 用
い,X
線微 少部 分析 法で 二次 X
線の分析
を
行った
.す な わ ち
,E P O N
包埋 ブ
ロ ックよ り
0
.5
ノJ 切 片を
作 製し
, 金メ
ッシ ュに載せ,H i
ta ch i
肝細 胞内 鋼 棚職
F i
g.1
.C
叩 Pe r gl−El 11 u
l
e sく
a r r o w sl
a r e s e e ni
l−th
eh
epato cy te s of
th
e pe ri
po rtal
a r e a.T h
e s e 即−a n ul
e sEl r e gZlth
e r ed
a r o u nd
th
e 王一u Cl
e u s−P
ri
l一一之Il−yb ili
a ry ci
r rh
D Si
sく fib
r oti
e St之l郡Ij
.王引
1 0d
a t血
e st加
町 X1 6
tl.F i
g.2
.C
op pe r gr a n ul
e sくa r r o w sl a r e s e e ni
n th
e cy topl
a s m, e Spe Ci
a11
y a r o u nd
th
e m l Cl
e u s− Of
th
eh
epato cy te si
n th
e pe ri
po rtal
a r e a.Li
v e r ci
r rh
o si
s くal
c oh
oli
cJ.R h
od
a ni
n e stai
n, X3 2 5
.1 7
K
e v e x7 0 0 0 く
加 速電圧 7 5 k
eV
l で 二次X
線を
検 出し た
引 用.P B C 4 4
例, 肝 外 閉 塞性 黄痘2
例,W il
s o n 病1
例で は
, 肝生 検 時の 一部の肝組 織を
, 対 照と し て 正
常成人
剖 検 肝6
例の
肝 組織を 用
い, 以 下の
如く
肝 組 織 内鋼 量の
定 量を
行った
411 61.採 取し た
肝 組 織を デ
シケ
一夕
内で
乾 燥さ せ
,乾 燥 肝 重 量を
求め た
のち
,乾燥 肝を
硝 酸. 過 塩 素 酸 く4
こ い 混 合液 中で
溶 解さ せ た
. これ を
脱イ オ
ン化し た
蒸留 水で 2 00
ml
に メ スア
ップ し
, これ を
試 量と し た
. 網 走 量 方 法と し て
, 鋼 標 準 液1
m gノml
く関 東 化学K K
製つを
,1 N
.H C l
で2
.5
,5
.0
,7
.5
声 gノm
l
に希 釈し
, 添加用
鋼 標準 液と し た
. 試 量よ り
,4
本の
試 験 管にそ れ ぞ れ 2
.O
ml
ずつ分 取し
,そ の
分 取 液に2
.5
,5
.0
,7
.5
月 gノml の
銅 棒 準 液を 1 0 0
声1
ずつ添 加し
, この
混 合 液を
原子
吸 光 分 光 光 度 計 く1
ntr u me nta− ti
o nL
ab
o r ato ry 社 製,l し2 5 1
型1 にか け
,そ れ ぞ れ
の吸 光 度を
波長3 2 4
.7
n mで
測 定し た
. 各 液の吸 光 度と
単 位 試量 当た り
の鋼 添 加 量を
方眼 紙にプ
ロ ット し
,試 料 中
の
鋼 添 加 量を
読み
取った
.な
お, 鋼の
測 定は メ デ ィ カ
ルサ イ
エン ス特殊 分 析 室 く東京 都フ の協 力を
得て
行った
.推 計 学 的 処
理 は
,X2検 定
お よ び S
pe a r m a n の順 位 相 関 係数で
行い,危険 率が 0
.0 5 以
下を も
って
有 意差 あり
と
判 断し た
.成 績
工
.肝
細 胞 内の鋼 顆 粒 沈 着ロ ダニ ン鋼 検 出 法
で
陽 性に染ま る
嗣 顆 粒の
染 色パタ
ー ン には
, 次の 2
種 傾が み ら れ た
. 第一山一のも
のは
, 核 周囲 性に数 個か ら
多数の
微 細な
いし
粗 剛な
顆 粒と し
て
見ら れ
, 主に肝 小 葉や
再 生 結 節 辺 緑 部に見られ た
く工
型っく図1
,2
う. 和 胆管 様に変 化し た
肝細 胞や
食 細 胞にも
同様の
鋼 顆 粒が わ
ずか
に認め ら れ た
.そ
の他の 細 胞は
陰性で
あった
.電 顕 的には
,大き さ 0
.5
へノ3
声 の電
子
密 度の
高い円 形句 楕 円形へ不
整 形の 二次ライ
ソ ゾー ムと し て
見ら れ
く図3
フ,明ら
かな
限 刷 莫を
持つも
のも
あった
.X
線 微 少 部 分析 法で
, この ラ イ
ソゾ
ー ムを
分析す る と
, 図4
a に示す
如く
, 鋼の
特 異 的二次X
線である K
a 線 く8
.0 74 k
eV
lが
検 出さ れ
,硫 黄の特 異 的二次X
線のK
a 線 く2
.3 0 7 k
eV
lも
同 時に検 出さd
Lた
.し
かし
, これ ら の
二次X
線の高さ は
, 頼 粒によ
り,ま た
同じ
顆 粒で も
部 位によ
って 異 な り
, 硫 黄は
検と 1
Mほ
れ る が
嗣が
殆ど
検 出さ れ な
いも
のも あ
った く
図4l
っ1.
な お
, 鋼と
硫 黄の
特 異 的二次X
練の他に,オ
ス ミ ウ ム, 金, マグ ネ
シウ
ム,ク
ロ ー ル の 二次X
線も
同 時に 検 出さ れ た
.Fi
g.3
.S
e c o nd
a ryl
ys o s o me sくa r r o w sI wi
th
a v a ri
ab l
e sh
ape and
el
e ctr o nd
e n si
t y a r e s e e ni
n th
e cy topl
a s m of h
epato cy te s−N
ニN
u cl
e u s of h
epato cy te s,B
こbil
e c a n ali
c ul
e s.P
ri
m a ryb ili
a ry ci
r rh
o si
s.U
r a nyl
−a c etate a n