ニワ トリの発 生 ,発 育 に伴 うグアニ ジノ化 合 物 の 変 動 に関 す る研 究
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(2) 1066. 角 Table. nmol/g *p<0. は,孵. wet. 司. compounds. in whole. embryo. (the. day. 6. v.s.. the. day. 20).. 〜20日 経 過 した 有 精 卵 よ り. threnequinone/dimethylformamide溶 温 度,. 臓,腎. 臓,心. 7日,. 3日,. 1日(孵. 臓 の各組 織 は孵化 前 卵 開 始 後14,. 18, 20日 後)の 胚,及 び卿 化 後3, 29, 39,. 隆. (mean±SEM).. **p<0.01. 得 た.脳,肝 5日,. Guanidino. weight. .05,. 卵 開 始 後6日. 1.. 谷. 59, 99日 及 び6ヵ. ト リ を 断 頭 した後,こ. 7,. 月 後(成. 16,. 量,. 60℃;溶 0.5ml/min.検. 型 蛍 光 光 度 計 を 用 い,. 鶏)の. で 測 定 し た.. れ ら の 組 織 を採 取 し,グ. 意 差 検 定 は,. で 保 存 し た. 2.グ. Em>460nm. wet. weightで. t‑検 定 を 用 い た.. 結. 果. ア ニ ジ ノ化 合 物 の 抽 出 操 作. 卵 黄 及 び 卵 白 は,半. 解 凍 され た段 階 で ホ モ ゲ. ナ イ ズ し,そ の 一 部 を 用 い た.胚,脳,腎. 臓及. 1.全. 鶏 胚 内 の グ ア ニ ジ ノ化 合 物. ニ ワ トリ全 胚 中 には,. び 心 臓 は 全 組 織 を 用 い,肝 臓 は 適 当量 一 部 を 用. Arg,. い た.こ. で はArgが. れ らの 組 織 は, 10倍 量 の1%ピ. 酸 で ホ モ ゲ ナ イ ズ し た 後,. 回 繰 り返 した 後,上 (Cl‑型)カ い た.カ. ク リン. 3000rpmで,. 間 遠 沈 し除 蛋 白 を行 っ た.こ. 20分. の 除 蛋 白 操 作 を2. 清 を合 せ てDowex. ラ ム に通 し,過. 2×8. 剰 の ピ ク リ ン酸 を除. の3種. 発 生 初 期,す. MGは,孵. G‑520型. ノ化 合 物 分 析 装 置 を用 い た. HPLCの. は,発. グアニ ジ 条件 は次. 目. 卵6日. 日目の胚 まで. び 増 加 した. GPA,. 10分 間, (4)pH. 10.0,. 分 間;反 応 試 薬, 2M. 15分 間, (5)1M NaOH及. び0.05%. 5.25,. NaOH, phenan. 10. よび 卵. 示 し,そ の 後 孵 卵14. day. 14 v. s. day. 16)を. 孵 卵10日 に 増 加 の ピ ー ク を示. や 減 少 し, 14日 か ら20日 に か け て再. で あ る が,胚 2.卵. 目 に 著 し い低. 増 加 の程 度 は わ ず か で あ るが, 16日. に著 し い増 加(p<0.05,. 20分 間(カ. 10分 間, (3)pH. 孵 卵8日. 達 に伴 い 増 加 を示 した. GAAは. 離 液, 0.4M. 3.5,. Gお. 目 の 胚 で は 検 出 され ず,孵. day 6 v.s. day 8)を. φ4.6×125mm;カ. ラム安 定 化), (2)pH. HArg,. の 発 達 に伴 う グ ア ニ ジ ノ化 合 物 量. した後,や. 3.0,. あ の. 示 した. HArgは. ラム温 度, 60℃;溶. GAAで. 類 の グ ア ニ ジ ノ化 合 物 は,胚. の 通 りで あ る.カ ラム, Guanidinopak(JASCO). クエ ン酸 ナトリウム緩 衝 液(1)pH. 検 出 され た(表1).胚. 8日 の 胚 か ら検 出 さ れ た.. 下(p<0.01,. 応 に 基 づ く, HPLC法13)に. CRN,. な わ ち,測 定 を行 っ た 孵 卵6日. の 変 化 を示 した. Argは. ア ニ ジ ノ化 合 物 の 測 定. グアニジノ化合 物 の定 量 分 析 は, 9, 10‑phenan. より行った.装 置 は, JASCO. っ た.こ. G, MGが. GPA,. 最 も 多 く次 い でCRN,. 図1に,胚. 溶 解 し,分 析 試 料 と した.. threnequinone反. HArg,. GAA,. の胚 か ら検 出 さ れ た. GPA.,. ラ ム流 出 液 は 減 圧 乾 固 し,残 渣 を希 塩. 酸(pH2.2)に 3,グ. FP‑110. Ex=365,. グ アニ ジ ノ化 合 物 量 は, nmol/g 示 し た.有. ア ニ ジ ノ化 合 物 の 抽 出 操 作 を行 う ま で,一20℃. 応. 応液流. 出 に はJASCO. 11, 15, 19, ニワ. 液;反. 離 液 流 量1.0ml/min;反. G, MGも,そ. の量 は わ ず か. の 発 達 に伴 い 漸 時 増 加 を示 した.. 黄 及 び卵 白 内 の グ ア ニ ジ ノ 化 合 物. 卵 黄 中 に は 全 期 間 を 通 じてGAA,. GPA,. CRN,.
(3) ニ ワ ト リの 発 生 ,発 育 に伴 うグ ア ニ ジ ノ化 合 物 の 変 動 に関 す る研 究. 1067. Incubation time (days) Fig.. 1.. Embryogenic embryo. changes (mean±SEM,. Table. nmol/g wet weight *p<0 .05, **p<0.01. 2.. (mean±SEM). (the day. nmol/g wet weight *p<0 .05, **p<0.01. Arg,. HArg,. 黄 中 に はArgが 合 物 の95%以. G,. MGが. (mean±SEM). (the day. v.. s.. Guanidino. 0. v. s.. the. 検 出 され た(表2).卵. 著 し く 多 く,全. guanidino. Guanidino. 0. Table 3.. of. compounds. in. whole. n=7‑8).. グ ア ニ ジ ノ化. 上 を 占 め て お り,次 い でCRNが. compounds. the. day. 20).. compounds. day. in yolk. in albumen. 20).. 多 く検 出 され た.有. 精 卵 に お い て は,. 除 くす べ て の グ ア ニ ジ ノ化 合 物 で は,著. し い 増 加 を示 して い た.無. GPAを. 孵 卵20日. に. 精卵 にお いて.
(4) 1068. Fig.. 角. 2.. Embryogenic *p<0.05,. changes. もArg,. CRN,. **p<0.01. Gが. of guanidino (unfertile. 谷. compounds egg. v. s. fertile. 孵 卵 により,わ ず か で は あ る. 出 され, GPA,. CRN,. HArgは. Arg,. G, MGが. 検. 検 出 され な かった(表3).. 卵 白 中 に お い て もArgが. 最 も多 く検 出 され た.. 有 精 卵 卵 白 で 検 出 さ れ た グ ア ニ ジ ノ 化 合 物 も, 孵 卵20日 で は, MGを. 除 い て増 加 し て お り,無. 精 卵 卵 白 に おい て も, CRN,. 司. in. yolk. and. Arg,. Gが 孵 卵 に よ. alubumen. (mean±SEM,. n=4‑8).. egg).. り増 加 を 示 し て い た. 図2に,卵. が 有 意 な増 加 を 示 して い た. 卵 白 中 に は, GAA,. 隆. 黄,卵. 白 内 グ ア ニ ジ ノ化 合 物 の,孵. 卵 に よ る 変 化 を 示 した.有 は,孵. 卵18,. 16 v. s. day 中 のCRNは の ち,そ 加(p<0.01,. 20日 18)を. 示 し た(図2A).有. 孵 卵2日. 〜8日. の 後 漸 時 増 加, day. 精 卵 卵 白,卵. 黄 内Arg. に 著 し い 増 加(p<0.01,. に か け て減 少 し た. 18日 〜20日. 16 v. s. day. day 精卵卵 黄. 18)を. で 著 しい 増 示 し た.有.
(5) ニ ワ トリ の 発 生 ,発 育 に伴 う グ ア ニ ジ ノ 化 合 物 の 変 動 に関 す る 研 究. Fig.. 3.. Developmental. 精 卵 卵 白 内CRNは,孵 い た(図2B).. changes. 卵 に よ り漸 時 増 加 して. GAAは,有. 精 卵 卵 黄,卵. 孵 卵12日 目 に 著 しく増 加(p<0.01, day. 12)し,そ. of arginine. day. 白 で, 10 v. s.. の 後 も漸 時 増 加 して いた(図2C).. (mean±SEM,. n=5‑15).. の ち,孵 化 直 前 よ り減 少 し始 め,孵. 化 後7日. 15日 に か け 低 値 を示 し た.そ の 後,肝 臓 でArgの. 増 加(p<0.05,. in liver: p<0.01,. day. day. 〜. 臓及 び腎. 15 v. s. day. 19 v.s. day. 19. 29 in kid. 有 精 卵 卵 黄 内HArgは. 孵 卵12〜16日. ney)が. み ら れ,孵 化 後39日 で一 時 的 な 減 少(p. 時 増 加 し, 18日 〜20日. で 著 し く増 加(p<0.01,. <0.01,. day. day. た(図2D).有. まで ほ ぼ 一 定 した値 を示 した.一 方,心 臓 で は そ. 16 v. s. day. 中 のGは,孵 day. 18)し. 卵18〜20日. 16 v. s. day. 精 卵卵 黄. に著 明 に増 加(p<0.05,. 18)し て い た.卵. 卵 に よ り漸 時 増 加 して い るが 精 卵,無. に かけ て 漸. in organs. 1069. 白 内Gも,孵. 増 加 の 程 度 は,有. 精 卵 で 同 じで あ っ た(図2E).. 3.脳,肝. 臓,腎. 臓 及 び 心 臓 内 の グ ア ニ ジ ノ化. CRN, 臓,腎 GAAの. 臓,腎. Arg,. 臓 及 び 心臓 内 で は, GAA,. HArg,及. 臓 で はArgが. びMGが. 最 も 多 く,次. 順 で 多 く存 在 した.脳,心. が 最 も 多 く,次 いでArgが. GPA,. 検 出 さ れ た.肝 い でCRN, 臓 で はCRN. 多 く存 在 した. GAA. は 月刊蔵,腎 臓 に 比 べ る と 少量 で あ っ た. 図3に 発 育 に伴 う諸 臓 器内Argの た.脳. 内Argは. 増 加(p<0.01,. 変 化 を示 し. 孵 化 後59日 目の 脳 で,一 時 的 な day. 39 v. s. day. 59)を 示 し た他. は,ほ. ぼ 一 定 な 値 を維 持 した.そ. の 他の臓 器 で. は,孵. 化 後15日 頃 ま で 類 似 した 変 化 を示 した.. す な わ ち,孵 卵14日 か ら18日 に か け て 増 加 した. 39)を 示 す 他 は,成 鶏. の 後 も低 値 を維 持 した. 図4にGAAの 内GAAは,鰐. 発 育 に伴 う変 化 を示 した.脳 化 後 漸 時 増 加 し,孵. 化 後29〜. 39日 の脳 で 最 高 値 と な っ た.そ. の 後 減 少 し59日. 以 後 で は 成 鶏 値 と な っ た.肝. 臓,腎. GAA量. 合物 脳,肝. 29 v. s. day. 臓 で は,. が 多 く,し. か も発 育 に伴 う変 化 は 著 し. い も の が あ っ た.す. な わ ち,孵 化 前 後 の 時 期 は. 低 値 を 示 し,孵 化 後11〜15日 に 増 加(p<0.01, した 後,漸. day. に か け て,一. 7 v.s. day. 時的. 15 in kidney). 時 減 少 し,孵 化 後59日 目 に 再 び 著 し. い 増 加(p<0.01,. day. 心 臓 に お い て も,緩. 39 v.s. day. 59)を 示 した.. や か で は あ る が,肝 臓. 腎. 臓 に類 似 した 変 化 を示 し た. 図5にCRNの. 変 化 を示 した.脳 内CRNは. 孵 化 前 に比 べ 孵 化3日 に著 明 に増 加(p<0.01)し 成 鶏 に な る ま で 多 少 の 変 動 を示 し な が ら も 高 値 を維 持 し た.心 臓 で は孵 化 前 よ りCRN量. が多. く,孵 化 後 は 増 減 を繰 り返 し な が ら成 鶏 値 まで.
(6) 1070. 角. Fig.. 4. Developmental (mean±SEM,. Fig.. 5. Developmental. n=5‑15).. changes. 谷. 隆. of. 司. guanidinoacetic. acid. in. organs. n=5‑15).. changes. of creatinine. in. organs. (mean±SEM,.
(7) ニ ワ ト リの 発 生 ,発 育 に伴 うグ ア ニ ジ ノ化 合 物 の 変 動 に関 す る 研 究. Fig.. 6. Developmental. changes. (mean±SEM,. Fig.. 7. や や 減 少 を 示 した.肝. acid. in. organs. changes. of. homoarginine. in. organs. (mean±. n=5‑15).. 臓 で は,孵. 卵18日 目及 び. 孵 化 後11日 目 に 一 時 的 に 増 加 した 他 は,あ 大 き な変 化 は み られ な か つ た.腎 後7日. β‑guanidinopropionic. n=5‑15).. Developmental SEM,. of. 1071. まり. 臓 で も,孵 化. 目 に一 時 的 な増 加 が あ っ た他 は,ほ. ぼ成. 鶏 値 を維 持 して い た. 図6にGPAの. 発 育 に伴 う変 化 を示 した. GPAは,. いず れ の臓 器 に お い て も,孵 化 直前 期 より減 少 し, 孵 化 後59日 目の臓 器 か らは 全 く検 出 され な かった..
(8) 1072. 角. Fig.. 8. Developmental. 谷. changes. of. 隆. 司. methylguanidine. in. organs. (mean±SEM,. n=5‑15).. 図7にHArgの. が 明 ら か と な っ た.哺. 発 育 に伴 う変 化 を示 した, HArg. も孵 化 後39日 頃 ま で 諸 臓 器 で 類 似 した 変 動 を示. 察 され るGSA,. し た.す. で は検 出 され ず,哺. な わ ち,孵 化 後3日. べ 著 し く増 加(p<0 後15〜29日. 目 は,孵. .01)し,そ. 化 前 に比. の 後 減 少,孵. に再 び 増 加 の ピー クを示 した.脳,心. 臓 で は,そ の 後 減 少 し成 鶏 値 と なった が 腎 臓 で は59〜99日 day. 化. 39 v. s. day. 図8に,発. 変 化 を示 した.脳. 化 後 漸 時 増 加 し, 39日 に 最 大 と. な った.そ. の後59日. 0.01, day. 39 v. s. day. と な っ た.腎. に 一 時 的 な 著 し い減 少(p< 59)を. 臓 で は,孵. 示 した 後,成. 鶏値. 化 前 よ り漸 時 増 加 し,. 乳動物 とは異 なる グアニ ジ. 鶏 胚 が孵 卵 開 始 後,孵 ほ ぼ21日 で あ るが,鶏. 化 ま で に 要 す る時 間 は. 胚 の発 生過 程 につ いては. Hamburgerら14)に. よ り詳 細 に記 述 が な され て. を降 下 し,そ の 間 に も か な り胚 発 生 が進 む.放. 卵 時 に は 原 条(primitive さ れ て い な い が,孵 し,さ 孵 卵6日. streak)は. 卵18‑19時. 察. ま だ形 成. 間 で 原 条 が完 成. らに孵 卵3〜4日. で 胚 の 躯 幹 が完 成 する.. 目 頃 に は,各. 種 の器 官の原 形 がで きあ. が り,以 後 は 成 長 分 化 の 過 程 に入 る. 胚 の 発 生 過 程 に必 要 な 栄 養,エ. 考. 度条. 件 下 で 孵 卵 す る と再 び 胚 発 生 は 開 始 さ れ る.放. ぼ 成 鶏 値 を維 持 した.肝 臓. 育 に伴 う大 き な変 動 は み られ な か っ た.. 間 を要 して 輸 卵 管. 卵 後 胚 発 生 は 一 時 停 止 し,適 当 な温 度,湿. 孵 化 後11日 で 最 大 値 と な り,以 後 は 減 少 し て ほ 心 臓 内MGは,発. で通 常観. ニ ワ ト リ組 織 内. ノ化 合 物 代 謝 系 が 示 唆 され た.. い る.受 精 さ れ た 卵 は 約24時. 59)を 示 し た.. 育 に 伴 うMGの. 内MGは,孵. 肝臓. に か け 再 び 高 い値(p<0.01,. 乳 類 の 肝 臓,脳. GBA10)‑12)は. ネル ギ ー源 は,. 酸 素 を除 い て す べ て 卵 内 に含 ま れ て お り,血 管. ニ ワトリの 諸組 織 内 グアニジノ化 合物 を, HPLCに. 系 を通 して 利 用 さ れ る.無 精 卵 卵 白,卵. 黄内に. よ り初 め て系 統 的 に 分 析 し,発 生 ・発 育 に伴 う変. は, Arg以. HArg,. 化 を調 べ た.い. ず れ の 組 織 内 に お い て も, Arg,. G, MGが. CRN,. 主 な グ ア ニ ジ ノ化 合 物 で あ っ た. べ て の グ ア ニ ジ ノ化 合 物 が,卵 内 構 成 成 分 と し. が,微 HArg,. GAAが. 量 成 分 と し て,胚 G,. MGが,卵. 臓 器 内 で はGPA,. 及 び 卵 黄 で はGPA,. 白 内 で はG. HArg,. MGが. MGが,諸 存 在 する こと. 外 に もCRN, 検 出 され,胚. GAA,. て 存 在 す る こ とが わ か っ た.初 で,こ. GPA,. の発 生 過 程 で み られ るす. 期 胚 発 生 の過 程. れ らの グ ア ニ ジ ノ 化 合 物 が 利 用 さ れ る可. 能 性 が 示 唆 さ れ た..
(9) ニ ワ ト リの 発 生 ,発 育 に伴 う グ ア ニ ジ ノ 化 合 物 の 変 動 に 関 す る研 究 全 胚 に 含 まれるグアニジノ化 合 物 は ,そ の 分 離 測. し く発 達 し,生 理 的 に も外 形 的 に も 大 き な変 化. 定 が 可 能 となった 孵 卵6日 目か らの胚 につ い て調 べ. が み ら れ る時 期 が あ る.孵. た が, Arg,. CRN,. 特 徴 と して は,孵. 出 され,発. 生 初 期 の段 階 で 取 り込 ま れ る か,あ. GAAは. す で にこの 時 期 か ら検. 1073. 始,. 化 後 の 著 し い発 育 の. 化2〜3日. 後 か らの 摂 食 の 開. 1週 間 後 に は 羽 変 り, 2週 間 後 に は トサ カ. るい は 胚 内 で 生合 成 されて い るこ とが 推 測 さ. の 成 長 な ど が み られ る.ま た,孵 化 後59日. れ る.そ の 他 の微 量 グ ア ニ ジ ノ 化 合 物 は,孵 卵. も,肝 臓,腎. 臓 のGAA,. 8日 目 の 胚 か ら検 出 さ れ,胚. 脳 内MGの. 著 明 な 減 少 が み られ る な ど,発. の発生分 化 が進 ん. HArgの. 目に. 著 しい 増 加, 育. だ後 に その 生 成 系 が 活 性 化 さ れ る もの と 思 わ れ. 過 程 で グ ア ニ ジ ノ 化 合 物 の 代 謝 系 に著 し い 影 響. る.胚. を 及 ぼ す 要 因 が 存 在 す る こ と が推 測 さ れ る.. が孵 卵8日. で 著 しく減 少 す る. 理 由 は 明 ら か で は な い が,こ. のArg量. の時期 におけ る活. 発 なArg代. 謝 を反 映 して い る もの と して興 味. 深 い も の が あ る.そ. の 後 のArgの. 増 加,ま. そ の他 の グ ア ニ ジ ノ 化 合 物 の 増 加 は,胚. た. の各器. 官 の 発 育 成 長 と 関 係 し て い る もの と考 えられ る. 卵 黄 内 及 び 卵 白 内Arg,. CRN,. Gは,無. 精卵. 鳥 類 で は, Arg生. せ ず16), Argは 臓,腎. 臓 でArg量. 存在. が減 少 す るの は,孵. 著 しい 発 育 に伴 う,急 速 なArgの 考 え ら れ る.鳥. 化後の. 利用の反映 と. 類 に おい て も腎臓 及 び肝 臓 に. arginaseが. た.卵. さ れ た 過 剰Argの. 白 及 び 卵 黄 の 水 分 含 量 は そ れ ぞ れ 約90%. synthetaseが. 必 須 ア ミノ 酸 で あ る.孵 化 後 肝. に お い て も孵 卵 に よ り増 加 す る こ と が 観 察 さ れ. 及 び50%で. 成 系の最初の段 階 の酵 素で. あるcarbamoylphosphate. 存 在 する16),17)が,食 餌 に よ り摂 取 分 解 に関 与 し, urea生. 成は. あ り,貯 臓 中 に も気 孔 を通 じ て の 水. 哺 乳 類 に 比 べ 非 常 に 少 な い. GSAの. 生成経路 と. 分 蒸 散 が 認 め ら れ, 28℃ で1カ 月保 存 した 時, 5. してureaを 前駆 物 質 とするguanidine. cycle18),19). %以 上 の 水 分 蒸 散 に よ る 卵 重 量 の 減 少 が 報 告 さ. が 提 示 さ れ て い る が,哺 乳 動 物 の 肝 臓 で 通 常 検. れ て い る15).し か し,こ の 増 加 は,か. れ ら グ ア ニ ジ ノ化 合 物. な り高 い 増 加 率 を示 して お り,水. 分 の 蒸 散 の み で は 説 明 で き な い.蛋 よ るArgの のCRNの. 増 加,. creatine. 非 酵 素 的 生 成 が,無. 白の分 解 に. phosphateか. ら. 精 卵 にお いて も. 孵 卵 中 に お こって い る可 能 性 が 考 え られ る. Gの 生 成 経 路 につ い て は,今 適 当 な 湿 度,温. 出 され るGSAが urea生. 鳥 類 で は 検 出 さ れ な い の は,. 成 が 少 な い こ と と関 連 するか もしれ ない.. ま た, GAA生 transferase活. 成 酵 素 で あるglycine 性 につ い て は,鳥. amidino. 類 にお いて も. か なり詳細 に検 討 されて お り20)〜22)肝臓 で 孵 卵5 日 目 の 胚 で す で に そ の 活 性 が 明 ら か に認 め ら れ. な お 明 ら か で な い が,. 度 条 件 下 で 生 成 す る機 構 が卵 内. て い る.胚 の 発 育 に伴 い その 活 性 は 増 加 す る が, 孵 化 直 前 期 に は低 下 する. Ramirezら22)は,さ. に存 在 す る こ と が推 定 さ れ る.有 精 卵 に お い て. ら に孵 化 後50日 ま で の肝amidinotransferase. は,胚. 活 性 を調 べ,孵. の 発 育 に伴 い,卵. HArg,. G及. 黄 内CRN,. び 卵 白 内Arg,. 加 が み ら れ る.特. に,胚. CRN,. Arg,. GAA,. GAAの. 増. の 成 長 が著 しい 発 生 後. 期 に そ の 増 加 が 著 し く,胚 を利 用 して い く過 程 で,血. び 減 少 することを報 告 して いる.こ. が卵 白 卵 黄 内 の 物 質. transferase活. 管 系 を通 して,逆. GAAの. に. 化 後 活性 が著 し く増 加 し, 10日. 目 に最 高 と な り,孵 化 後50日 の ニ ワ トリで は 再. 性 の 変 動 は,本. 変 化 は,amidinotransferase活. れ て い る こ とが 考 え られ る.. 因 す る もの と 考 え ら れ る.腎. 臓,腎. 臓 及 び心臓 内 グアニ ジノ化合物. の 存 在 パ タ ー ンは,測. 定 を 行 っ た 孵 卵14日 目 の. 胚 の 臓 器 で す で に確 立 さ れ て い る が,そ. の含 有. 量 は 成 鶏 に な る ま で に著 しい 変 化 を示 す.特. に. GAAの. 変 化 は 肝 臓 のGAAの. い る が,脳. 脳 内 に 独 自 のGAA生. い.孵. にGAAを. す る時 期 が あ り15),孵 化 後 も諸 器 官 の 機 能 が 著. 性 の変 化 に起 臓 及 び心臓 で の 変 化 に類 似 して. amidinotrans. 性 が 存 在 す るこ と が証 明 さ れ て い る23).. 孵 化 前 か ら,孵 化 後19日 ま で の 間 の 変 化 は 著 し 化 前 に は胚 が 尿 膜 呼 吸 か ら肺 呼 吸 へ 変 換. の. で は異 な る 変 化 を示 して い る.哺 乳. 動 物 脳 内 に は 活 性 は 低 い が, ferase活. 研 究 の肝 臓 内. 変 動 に よ く一 致 して い る. GAA量. 卵 白卵 黄 内 へ の グ ア ニ ジ ノ 化 合 物 の 移 行 が 行 わ. 脳,肝. の 肝amidino. 成 系 を も つ の か,特 異 的. 取 り込 む の か は 明 らか で な い が,鳥. 類 に お い て も,脳 内 に,他 の組 織 とは異 なるGAA.
(10) 1074. 角. 谷. 隆. 司. 代 謝 様 式 が 存 在 す る可 能 性 は 否 定 で きな い. GAAは,肝. 臓 で さ ら にcreatineに. 変 わ り,. そ の 後 血 流 に よ り,他 の 組 織 に運 ば れ,エ ギ ー 代 謝 に関 与 す る24). CRNはcreatine phateか. 臓 でCRN濃. れ ら臓 器 内 でcreatine. た が,そ. phos 2.卵. GPA,. HArg,. MGの. 生 理 機 能 は 不 明 で ある. と密 接 に 関 係 し,窒 素 代 謝 異 常 時 に著 明 に増 加 す る こ と が 報 告 さ れ る と と も に,そ. GPA25)及. びMG4)は. GPAは. 痙 攣 発 現 と関 係. す るこ と が示 唆 され て い る7).ま hyperargininemia5), 液,尿. たHArgは. hyperlysinemia26),な. れ て い る.一 方, HArgは line phosphataseの. 3.卵. 強 力 な抑 制 剤 で あ る こ と れ らグアニ. 常 動 物 体 内 に も存 在 し,し か. HArg,. 検 出 さ れ た.有. 精卵. 卵 後 期 に著 し く増 加 した.無 CRN,. 白 内 に は, Arg,. GAA,. Gは. Gは 孵 卵 に よ り わず. CRN,. GAA,. G,. 精 卵 卵 白 のArg,. MG CRN,. 孵 卵 後 期 に 増 加 して いた.無 精. 卵 に お い て も, CRN,. Arg及. びGが. 孵卵. に よ り わず か に 増 加 した. 臓,腎 臓 及 び 心 臓 内 には, Arg,. GAAの. 哺 乳 類,鳥 類 でalka. が 報 告 されて いる27),28).し か し,こ ジ ノ化 合 物 が,正. びGPAが. GAA,. か に増 加 した.. 4.脳,肝. 中 に増 加 して い る こ と が 報 告 さ. CRN,. 黄 内 の ほ と ん どの グ ア ニ ジ ノ化 合. が検 出 された.有. 尿 毒 症 患 者 血 中 に増 加 し,. 溶 血 現 象 と25), MGは. ど で,血. のtoxicな. くつ か 明 ら か に さ れ て い る.. 検 出 され. 目 に著 しい 減 少 を示 し. Arg,. 精 卵 で もArg,. 素代謝. びMGも. の 発 育 に伴 い著 し く増 加 した.. 物 濃 度 が,孵. れ ら微 量 グ ア ニ ジ ノ化 合 物 も,窒. 性 質 に つ い て,い. MG及. で は,卵. 発 で あ る た め と考 え ら れ る.. が,こ. 孵 卵8日. 黄 内 には, G,. 利 用が活. G及. の後 は その他 の グア ニ ジノ化合物. と と も に,胚 泄. 度 が 高いの は,こ. phosphateの. HArg,. た. Argは. ネル. ら非 酵 素 的 反 応 に よ り生 成 され,排. さ れ る が,脳,心. は, GPA,. ほ か,. GPA,. HArg,. され た.哺. 乳 動 物 の 肝 臓,脳. れ るGSA,. GBAは. 出 さ れ な か っ た.ま 化 合 物 は,発. CRN,. MGが. 検出. に通常 検 出 さ. ニ ワ トリ臓 器 内 に は検 た,臓. 器 内 グアニ ジ ノ. 育 に 伴 い 著 し い変 動 を示 す こ. と が 明 らか に なった.特. にGPAは. 胚 及 び,. も,発 育 に伴 い そ れ ぞ れ 特 異 な変 動 を示 す こ と. 幼 鶏 臓 器 内 に 存 在 し,成 鶏 で は 検 出 さ れ な. は 正 常 時 に お い て も何 ら か の 生 理 的 役 割 を担 っ. か つ た.. て い る こ と が う か が わ れ る.特. に,成 鶏 に比 べ. 胚 及 び 幼 鶏 で 多 く存 在 す るHArg, 態 は 興 味 深 い もの が あ る.ま. GPAの. た,こ. 動. れ らグアニ. 以 上 の 結 果 か ら,鳥 類 は 哺 乳 類 とは 異 な る グ ア ニ ジ ノ化 合 物 代 謝 系 を有 す る こ と,ま. た,こ. の 代 謝 系 は胚 の 発 育 に伴 な い 活 性 化 さ れ る こ と. ジ ノ化 合 物 の 生 成 系 に つ い て も い くつ か の 報 告. が 示 唆 された.ま た,孵. が な さ れ て い るが29)‑32),現. 生 理 的 要 因 が グ ア ニ ジ ノ化 合 物 の 代 謝 に影 響 す. 在 の ところ確 証 さ れ. て い る も の は な い. 発 育 に伴 う諸 組 織 内 グ ア ニ ジ ノ化 合 物 の 変 動 少 の考察 を試み た. れ ら グ ア ニ ジ ノ化 合 物 の 代 謝 系 路,生. 機 能 に つ い て は,い 経 路,生. 々の. る こ と が 示 唆 さ れ る と と も に,微 量 グ ア ニ ジ ノ. を も た ら す 要 因 に つ い て,多 が,こ. 化 後 にお いて も,種. 化 合 物 も,さ. ま ざ ま な 発 育 段 階 で,何. ら かの 生. 理 的 役 割 を 有 す る こ と が示 唆 され た.. 理. ま だ 不 明 の 点 が 多 く,生 成. 理 機 能 の 解 明 と と も に,今 後 の 課 題 に. 終 わ りに あた り,終 始 御 懇篤 な御指 導 と御校 閲 を 賜 わ りま した 森. 昭 胤 教授 な らび に,御 指 導御 協 力. い ただ きま した渡 辺 洋 子助 手 に深 く感謝 の 意 を捧 げ. な る も の と 思 わ れ る.. ます.さ ら に,実 験 遂 行 に あた り終 始 快 く御協 力下 結. 語. さい ま した枝 松. ニ ワトリの諸 組織 内 グ アニ ジノ化 合物 をHPLCに よ り系 統 的 に 分 析 し,発 生,発. 育 に伴 う変 動 を. 胚 内 に は,孵 CRN,. GAAが. 卵6日 目以 後 の胚 か らArg, 検 出 され,孵. り,終 始 御 助 言 と御 協 力 を賜 わ り ま した,神 奈 川 歯 科 大 学 口腔 生 理学 教 室,関. 調 べ 次 の 結 果 を 得 た. 1.鶏. 礼 嬢 をは じめ,研 究 室 の皆 様 に心. か ら御 礼 申 し上 げ ます.ま た,実 験 動 物 入 手 に あた. 卵8日 目以 後 で. 園 子 教授 な らび に研 究. 室 の 皆様 に厚 く御 礼 申 し上 げ ます..
(11) ニ ワ ト リの 発 生 ,発 育 に伴 うグ ア ニ ジ ノ 化 合 物 の 変 動 に関 す る 研 究. 文 1.. 森. 2.. Robin, B.. 昭 胤:天. 3.. D.. and. and. acid. acids from. guanidino. York,. 8.. Yamamoto,. Y.,. Hiraga,. Y.. and. 383‑438,. 1980.. Mori,. A ., Cohen,. 1985.. of. separation. identification. of. of. guanidino. guanidinosuccinic. 1964.. Cohen,. A.:. New. Saito,. in. J., Yoshino,. urine. uremia.. M.. of patients. B. D.. and. and. with. Arch.. Intern.. Loenthal,. A.:. argininemia. Lowenthal,. γ‑guanidinobutyric. acid. York,. A.,. A.,. as. compounds. disorders.. Maeda,. K. of. Post‑column. Med.. 131,. Determina. before. Plenum. and. during. Publishing. a convulsive. Corp.,. substance.. and. Neurosciences. Ohta,. guanidino. K.:. 9,. Nature. 149‑157,. Ion‑exchange. compounds. Mori,. 49‑58,. Deyn,. ninhydrin.. A.:. ed.. 1983.. chromatographic. in. of. guanidino. J. Chromatogr.. Developmental. Mori,. physiologic. fluids.. J.. A.,. changes. Cohen,. B. D.. compounds. 226, in. and. in. 43‑51,. guanidino. Lowenthal,. high. per. 1981. compounds. A.,. levels. Plenum. Publishing. 1985,. P., Wiechert, in. derivatization. using. Guanidines,. pp.. De. neurological. determination. S. and. In. guanidino. serum. P., Van. and. Gorp,. brain. L.. of mouse,. and rat,. Lowenthal, rabbit. A.:. and. man.. Comparative. study. J. Neurochem.. 46,. of 717‑. 1986.. Yokoi,. I., Edaki,. rabbit. brain,. Mori,. A.,. A., serum. Watanabe, and. Katayama,. in. V.. J. Morphol.. brain. and. 88,. 49‑92,. 16.. Tamir,. Ratner,. 249‑258,. 1963.. Tramello,. S., Barsacchi,. arginase.. Biochem.. Natelson,. S., Koller,. as. part. of. S. and. J. Neurochem.. 32,. H. L.: A. 田 琢 磨,田 S.: Enzyme. R., J. 145,. a. H.,. Fujii,. T.. Neurosciences. series. Kimura,. 643‑644, of. and. Mori,. 12,. 27‑32,. A.:. Guanidino. compounds. in. 1986.. S.: Fluorometrical. analysis. of guanidino. com. 1979.. normal. stages. in the. development. of. the. chick. embryo.. 1951.. 田 行 雄,森. and. Shiraga,. organs.. Higashidate,. Hamilton,. 田 先 威 和 夫,山 H.. Y.,. other. Y.,. mouse. Hamburger,. 960‑966,. A.,. and. T.:. Shindo,. organs.. B.,. liver. P., Letarte, and. chromatography. Marescau,. Cohen,. 232‑246,. ed.. 1979.. Kinoshita,. Y.,. mouse. T.,. 15.. 19.. method. G .: Methylguanidine. plasma. Mori,. Mori,. 327‑340,. and. Watanabe,. pounds. 18.. Deyn, in. fluorometric. liquid. 720,. De. ed.. Manji,. 162,. formance. 17.. pp.. the and. 371‑382,. Barsotti,. compounds. and. Chromatogr.. 14.. 8,. York, in. Isolation. J.. and. New. 9,. Guanidines,. 1985.. A.. Guanidino. separation. 13.. Corp.,. Improvements. 床 化 学,. In. 1966.. A.:. Corp.,. I.A.,. 171‑180,. Sawai,. 617,. Mori,. 12.. P.L.. Guanidines,. pp.. D.,. 7.. 11.. Microchem.. compounds. In. Jinnai.. in. J. E.:. chromatography.. urine.. B., Qureshi,. of. 212,. 10.. compounds.. 1973.. Marescau,. New. 9.. column. guanidino. Publishing. Bonus,. S., Balestri,. therapy.. 6.. by. 献. 合 物 の 存 在 と そ の 測 定 方 法 .臨. Natural. Plenum. I. and. human. Giovannetti,. tion. B.: A.,. S., Stein,. 709‑713, 5.. Marescau,. Lowenthal,. Natelson, organic. 4.. 然 界 に お け るGuanidino化. Y.. 1075. A.,. Magri,. E.. 153‑157,. Tseng.. metabolic. 中 克 英 編:養 of. and. ン ド ブ ッ ク,養. metabolism. Grazi,. E.:. in. 賢 堂,東. chicks.. Molecular. 京,. Arch,. 1982.. Biochem.. characteristics. Biophys.. of chicken. 102,. kidney. 1975.. H‑Yu cycle. 鶏 ハ. arginine. and in. which. Dods,. R. F.:. guanidino. Canaline. carbamoyltransferase. compounds. are. formed.. in Clin.. human. Chem.. 23,. 1977. B. D.. and. Patel,. H.:. Guanidinosuccinic. acid. and. the. alternate. urea. cycle.. In. Urea. Cycle.
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(13) ニ ワ ト リの 発 生 ,発 育 に伴 うグ ア ニ ジ ノ化 合 物 の 変 動 に関 す る 研 究. The embryogenic. and developmental in various. changes. of guanidino. 1077. compounds. chick tissues. Takashi. KADOYA. Department of Neurochemistry, Institute. for Neurobiology,. Okayama University Medical School, Okayama 700, Japan (Director: Prof. A. Mori) Guanidino. compounds. performance. liquid. studied. during In. the. were. the. chick. except. for. Arg. In. the. In. yolk,. the. the. detected. ble. after chick. tissues. analyzed. guanidino. compound. by levels. high were. (CRN), , guanidine. appeared. the. eighth. after. the. of. incubation.. day on. guanidinoacetic. the. (G) sixth. eighth. day. MG. were. of. acid. and. (GAA),. methylguanidine. day. of. incubation,. All. of. the. and. compounds,. incubation,. increased. as. G. and. embryogenesis. after. G and. A slight. kidney. and. detected.. A. slight. Most. of. them. in. Arg,. CRN. increase. incubation.. MG. were. increase. in. detected.. Arg,. Arg,. and. and. was. not. development.. were. CRN. at. CRN,. that. very. detectable. CRN,. GAA,. G and. G in unfertile. have. that factors. low. adult. levels,. a. this. might. HArg are. MG. eggs. was. chick. and. MG. were. commonly. organs.. development.. GPA. All. detecta guanidino. decreased. as. organs.. different. system. after. GPA,. which. in the. during. in the. birds and. GAA, acid,. greatly. physiological even. Arg,. not. detected. mammals,. various. heart,. fluctuated. suggest of. and. and ƒÁ-guanidinobutyric. brain,. organs. compounds, during. GAA,. acid. chick. that. by. of. observed. CRN,. liver. the. from. HArg,. stage. also. liver,. observations. affected. GPA,. late. incubation. brain,. mammalian. compounds. guanidino. was. Arg,. developed. These. creatinine. decreased. embryogenesis.. in. chicks. and. the. Guanidinosuccinic. in the. systematically. in. (HArg). GAA. after. GAA,. at. albumen,. compounds the. CRN,. eggs. during. observed In. Arg,. unfertile. increased also. changes. (Arg),. and. temporarily. increased. G in. CRN. were. progressed.. dramatically and. the. homoarginine. appeared. which. tissues. development.. arginine. (GPA),. Arg,. compounds. embryogenesis. and and. embryo, acid. detected.. other. chick. embryogenesis. ƒÀ-guanidinopropionic (MG). various. chromatography,. chick. whole. in. metabolic is activated. hatching. have. It some. system during. was important. also. of. guanidino. embryogenesis suggested roles. in. that animal.
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