第
1 0
表SHH
の各樋ハイブリドーマ抗体産生に与える影響1 )
ハイプリドーマ 親細胞 相対細胞数 相 対 抗 休
5 2
相対抗体生産量 クラスH84C5
N.A. T-~jO M1.26 2.82
:2.23
G4G7 NAT‑30 M 1.16 2.21
1. 8 DAF11D2 HO‑323 M 1.05 1.16 1 . 1 1
CD2C1G HO‑323 M 1.29
1.4111 . 1 1
EMK‑F7 HO‑323 M 1.50 1 .
f)O
1.02
EMK‑F7 HO‑323 G 1.50 1.61
1.07
D6 P3U1
MO. 94 1 . 67
1.77
F6 P3U1 M 0.91 1.52
1. 6 G1 ) S H H
は、終濃度で500μ g /ml
添加した。7 S "
った。 同 様 の 結 果 は 、 タ ン パ ク 質 性 1P S F に も 見 い だ さ れ て い る 。
第 4 節 考 察
実 験 に 供 し た
3
種 の 食 物 繊 維 の う ち 、 大 豆 種 皮 ヘ ミセ ル ロ ー ス ( S H H
) は 強 い 抗 体 産 生 増 強 を 示 し た 。 タ ン パ ク 質 性 1 P S F ( 抗 体 産 生 培 強 因 子 〉 は 、 こ れ ま で も 報 告 さ れ て い る が 、 そ の 活 性 増 強 に は 細 胞 数 の 顕 著 な 増 加 を 伴 う こ と が 知 ら れ て い る 。 し か し 、S H
H の よ う な 食 物 繊 維 の 増 強 で は 顕 著 な 細 胞 増 殖 を 伴 わ な い 点 が 興 味 深 い 。
S H H の 添 加 量 別 経 目 的 細 胞 増 殖 及 び 抗 体 産 生 量 を 調 べ た と こ ろ 、 細 胞 密 度 の 低 い 時 点 で の 抗 体 産 生 増 強 が 著 し か っ た (500μg/ml添 加 〉 。 タ ン パ ク 性 1 P S P も 細 胞 密 度 の 低 い 時 に 、 特 に 抗 体 産 生 が 増 強 さ れ る と 報 告 さ れ て い る 69) 0 H B 4 C 5 細 胞 は 、 細 胞 自 体 が 細 胞 性 1 P S F を 産 生 す る た め 67)、 細 胞 外 1 P S F の 効 果 が 高 い 細 胞 密 度 で 検 出 す る こ と が 困 難 に な る と 考 え
ら れ る 。
S H H を 熱 処 理 し た と こ ろ 、 8 0
O C
及 び 1 0 0O C
で 1 P S F 活 性 は 減 少 し 、 ト リ プ シ ン 処 理 で は 高 濃 度 添加 で 活 性 が 低 下 し た 。 タ ン パ ク 質 性 1 P S F は熱、 ト リ プ シ ン に さ ら に 感 受 性 が 高 く 、 多 糖 類 で は 熱 、 ト リ プ シ ン 処 理 で の 活 性 低 下 は 考 え ら れ な い こ と か ら 、
s
H H の 1 P S F は 多 糖 類 だ け で 構 成 さ れ て い な い こ と を 示 唆 し て い る 。 大 豆 に 含 ま れ る ヘ ミ セ ル ロ ー ス は 主 に ア ラ ビ ノ ガ ラ ク タ ン か ら 織 成 さ れ る と い う 報 告 も あ る。 レ ク チ ン 親 和 性 実 験 か ら 、 S H H が
0
ー ガ ラ ク ト ス 親 和 性 の 傾 向 を 示 し た こ と か ら 、 以 前 に 報 告 さ れ た よ う に S H H はP
ー ガ ラ ク ト ー ス ボ リ マ ー で あ る と 考 え ら れ る 4 . 2 2)。 ゲ ル 溶 過 ク ロ マ ト グ イ ラ フ ィ ー の 結 果 か ら 、 S H H の 1 P S F は 分 子 量 32 1< D a の 多 糖 に 若 干 の タ ン パ ク 質 が 含 ま れ て い る と 推 察 さ れ 、 β ー ガ ラ クト シ ダ ー セ 消 化 に よ り 活 性 が 消 失 し た こ と か ら 、
S H
H の 1 P S F は ボ リ ガ ラ ク ト ビ ラ ノ シ ド 主 鎖 に タ ン パ ク 質 を 含 ん で い る と 考 え ら れ る 。
また、 い く つ か の 細 胞 株 を 用 い て S H H の 抗 体 産 生 へ の 影 響 を 調 べ た が 、 H 0 ‑ 3 2 3 系 細 胞 で は 活 性 は 認 め ら れ ず 、 N A T ‑ 3 0 系 H B 4 C 5 細 胞 は 、 感 受 性 の 高 い 細 胞 で あ る こ と が 示 さ れ た 。
77
第 5 節 小 括
無 血 清 培 養 H B 4 C 5 細 胞 を 用 い て 、 い く つ か の 食 物 繊 維 に つ い て 、 抗 体 産 生 増 強 因 子 ( 1 P S F ) を 検 索 し た 。 調 製 し た 米 ぬ か ヘ ミ セ ル ロ ー ス (
R B H
)、 大 豆 種 皮 ヘ ミ セ ル ロ ー ス (S H H )、 大 麦 ガ ム 質 (BG ) の う ち 、 S H H は 強 い 1 P S F 活 性 を 示 し 、 1 "'g / ml 添 加 で 約 4 倍 増 強 し た 。 S H H を
Sepharose CL‑4B
によ る ゲ ル 減 過 ク ロ マ ト グ ラ フ ィ ー で 分 離 し た と こ ろ 、 1 P S F 活 性 は 炭 水 化 物 の 分 子 量 約 32kDa の ピ ー ク に 認 め ら れ 、 本 ピ ー ク は 少 量 の タ ン パ ク 質 を 含 ん で い た 。 また、 S H H の 1 P S F 活 性 は 、 1 0 0
O C
熱 処 理 、 ト リ プ シ ン やP
ー ガ ラ ク ト シ ダ ー ゼ 消 化 に よ り 弱 め ら れ る こ と か ら 、 S H H の 1 P S F は タ ン パ ク 質 を 含 ん だ 多 糖 類 で あ る と 推 定 さ れ た 。 さ ら に 、 他 の ハ イ ブ リ ド ー マ に つ い て も 調 べ た と こ ろ 、 S H H は、 N A T ‑ 30 系 ヒ ト 型 ハ イ ブ リ ド ー マ 及 び マ ウ ス 型 ハ イ ブ リ ド マ で 抗 体 産 生 を 増 強 し た が 、 別 の 親 細 胞 株 で あ る H 0
‑ 3 2 3 由 来 の ヒ ト 型 ハ イ ブ リ ド ー マ の 抗 体 産 生 は 増 強 し な か っ た 。
7
τ
第 5 章 キ ト サ ン に よ る 抗 体 産 生 増 強
第 1節 緒 言
キ チ ン は 、 2 ー ア セ ト ア ミ ド ‑ 2 ー デ オ キ シ ‑