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4) 結 合 し た も の で あ る 。 キ サ ン タ ン ガ ム は 微 生 物x
anthomonas campestri sが グ ル コ ー ス を 資 化 し て 菌 体外 に 産 生 す る
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ー く じ 4) 結 合 し た グ ル カ ン に マ ン ノ ー ス と グ ル ク ロ ン 酸 が 結 合 し た も の で マ ン ノ ー ス : グ ル コ ー ス : グ ル ク ロ ン 酸 は 2: 2: 1の 比 率 で あ る 3l。 4 種 の 多 糖 に 共 通 す る 構 成 糖 は マ ン ノ ー ス で あ り、 ロ ー カ ス ト ビ ー ン ガ ム が 最 も 強 い 1 P S F 活 性 を 示 し た が、 構 造 ま た は 粘 度 が 活 性 に 関 与 し て い る の か に つ い て は 今 後 検 討 し た い 。 また、 顕 著 な 1 P S F 活 性 を 示 し た キ ト サ ン に つ い て は 、 第 5 章、 第 7 章 で 詳 し く そ の 性 質 に つ い て 検 討 す る 。ロ ー カ ス ト ビ ー ン ガ ム 及 び ベ ケ チ ン 両 多 糖 と も 高 濃 度 で 抗 体 産 生 増 強 を 示 し 、 かっ、 顕 著 な 細 胞 数 の 増 加 を 伴 わ な い こ と か ら 、 細 胞 増 殖 を 促 進 す る こ と で 抗 体 産 生 を 増 強 す る タ ン パ ク 質 様 1 P S F 69lと は 作 用 機 作 が 異 な る と 考 え ら れ た 。 また、 両 多 糖 と も 高 濃 度ーで は 高 い 粘 性 を 示 す こ と か ら 、 立 体 構 造 の 他 に そ の 粘 性 が 細 胞 膜 に な ん ら か の 影 響 を 与 え て い る と 推 察 さ れ る 。
つ ぎ に 、 毒 性 試 験 の 簡 易 な 一 次 ス ク リ ー ニ ン グ と し て ハ イ ブ リ ド ー マ の 利 用 が 可 能 か ど う か を 検 討 し た 。 ヒ ト 型 ハ イ プ リ ド ー マ 細 胞 を 用 い て 調 べ た フ 工 ノ ー ル 化 合 物 の 細 胞 増 殖 や 1g M 産 生 へ の 阻 害 効 果 は 、 あ る
程 度 in v i t r o及 び 細 胞 内 D N A 切 断 試 験 6 6 ) を 反 映 し て い た が 、 い く つ か の 異 な っ た 結 果 も 観 察 さ れ た 。 毒 性 試 験 を す る の に 、 日 南 乳 動 物 細 胞 を 用 い た 細 胞 内 D N A 切 断 試 験 を 行 う の は 熟 練 を 要 し 、 一 度 に 沢 山 の サ ン プ ル も 扱 え な い こ と か ら 、 ス ク リ ー ニ ン グ テ ス ト に は 不 向 き で あ る と 思 わ れ る 。 そ の 点 、 ヒ ト 型 ハ イ ブ リ ド ー マ 細 胞 を 用 い て 行 え ば 、 毒 性 物 質 の ス ク リ ー ニ ン グ テ ス ト が 簡 易 に 、 多 検 体 出 来 る メ リ ッ ト を 持 つo 本 方 法 は、 ヒ ト 細 胞 へ の 毒 性 を 簡 易 に 検 査 す る シ ス テ ム と し て 利 用 で き る 可 能 性 が あ る と 考 え ら れ た 。
また、 コ ー ヒ ー 酸 添 加 の 経 目 的 変 化 を 調 べ た と こ ろ 、 500μM 添 加 で 、 3 日 目 ま で の 細 胞 増 殖 が 著 し く 抑 制 さ れ た の に 抗 体 産 生 は か え っ て 増 強 さ れ た と い う 非 常 に 特 異 な 曲 線 が 得 ら れ た 。 抗 体 産 生 増 強 の 作 用 機 作 を 調 べ る う え で 、 有 効 な 指 標 物 質 に 使 え る 可 能 性 が あ る と 考 え ら れ る 。
第 5 節 小 括
食 品 成 分 の 機 能 性 の 1つ で あ る 抗 体 産 生 増 強 能 を 倹 定 す る 方 法 を 策 定 す る 一 端 と し て 、 ヒ ト ー ヒ ト ハ イ ブ リ ド ー マ H B 4 C 5 細 胞 の 増 殖 、 抗 体 産 生 に 及 ぼ す 食
品 成 分 〈 糖 類 、 フ ヱ ノ ー ル 類 〉 の 影 響 に つ い て 検 討 し た。
H B 4 C 5 細 胞 を 培 養 す る 最 適 沼 地 を 検 討 し た 結 果 、 1 T E S ‑ E R D F 培 地 に お い て は 培 養 初 期 の 細 胞 増 殖、 抗 体 産 生 と も 最 も 高 い 値 が 認 め ら れ 、 H B 4 C 5 細 胞 を 用 い た 検 定 を 行 う に は 適 し た 培 地 で あ る こ と が 判 明 し た 。 E R D F 培 地 に 添 加 す る 糖 類 の 影 響 を 調 べ た と こ ろ 、 グ ル コ ー ス フ リ ー 培 地 で は 、 フ ラ ク ト ー ス 添 加 時 が 相 対 細 胞 数 、 相 対 抗 体 産 生 量 と も 最 も 高 く グ ル コ ー ス 代 替 と し て 利 用 し う る と 考 え ら れ る 。 グ ル コ ー ス 半 量 培 地 で は 、 各 糖 と も 増 殖 に は ほ と ん ど 影 響 が な く 、 ガ ラ ク ツ ロ ン 酸 及 び マ ン ニ ト ー ル 添 加 で 抗 体 産 生 が 増 強 さ れ る 傾 向 に あ っ た 。 グ ル コ ー ス を 含 む 培 地 で の 単 路 、 少 糖 類 の 1m門 及 び 10"，門添加は、 H B 4 C 5 細 胞 の 増 殖 及 び 抗 体 産 生 量 に は ほ と ん ど 影 響 を 与 え な か っ た 。
各 種 糖 類 を 20m門 グ ル コ ー ス を 含 む E R D F 培 地 に 1m 門、 10m門 濃 度 で 添 加 し た 場 合 、 多 く の 糖 類 は H B 4 C 5 細 胞 の 増 殖 お よ び 抗 体 産 生 量 に は 影 響 を 与 え な か っ た 。
つ ぎ に 多 糖 類 の 抗 体 産 生 へ の 影 響 を 調 べ た が 、 キ ト サン、 ロ ー カ ス ト ビ ー ン ガ ム 、 ベ ク チ ン が 抗 体 産 生 を 増 強 し た 。 特 に キ ト サ ン は 非 情 に 強 い 抗 体 産 生 増 強 効
果 を 有 し て い た 。 また、 キ サ ン タ ン ガ ム も あ る 程 度 産 生 を 増 強 し た 。 ロ ー カ ス ト ビ ー ン ガ ム 及 び ベ ク チ ン は 、 高 濃 度 で 抗 体 産 生 増 強 作 用 を 示 し 、 かつ、 細 胞 数 の 顕 著 な 増 加 を 伴 わ な い こ と か ら 、 他 の タ ン パ ク 質 様 1 P
S F と は 作 用 機 作 が 異 な る と 考 え ら れ た 。
また、 ヒ ト 型 ハ イ プ リ ド ー マ 細 胞 を 用 い て 、 D N A 切 断 試 験 と の 比 較 を 行 い 、 ヒ ト 型 ハ イ ブ リ ド ー マ を 用 い た 検 定 法 の 物 質 の 安 全 性 検 定 代 管 へ の 可 能 性 を は か っ た。 ヒ ト 型 ハ イ ブ リ ド ー マ 細 胞 を 用 い て 調 べ た フ ェ ノ ー ル 化 合 物 の 細 胞 増 殖 や 1 g M 産 生 へ の 阻 害 効 果 は 、 い く つ か の 異 な っ た 結 果 も 観 察 さ れ た が 、 あ る 程 度 i
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及 び 細 胞 内D N A
切 断 試 験 を 反 映 し て い た 。 本 方 法 は 、 ヒ ト 細 胞 へ の 毒 性 を 簡 易 に 検 査 す る シ ス テ ム と し て 利 用 で き る 可 能 性 が あ る と 考 え ら れ た 。コ ー ヒ ー 酸 添 加 試 験 で は 、 500μM添 加 で 、 細 胞 増 殖 を 抑 制 し つ つ 、 抗 体 産 生 が 増 強 さ れ る 特 異 な 曲 線 が 観 察 さ れ た 。