大 豆 は 中 国 農 試 産 タ マ ホ マ レ を 用 い 、 種 皮 〈 外 皮 〉 を 剥 皮 、 粉砕、
3 0
メ ッ シ ユ で 筒 別 後 、9 9
% エ タ ノ ー ル で よ く 洗 浄 し た 。 大 豆 外 皮 ヘ ミ セ ル ロ ー スB (S
H H
) の 調 製 は 、 綾 野 ら の 方 法 4) に 従 い 、 以 下 の よ う に 行 っ た 。外 皮 を 10倍 量 の 1N N
a
0 Hに 浸 潰 し 、 糖 鎖 の 切 断 を 避 け る た め 、 窒 素 ガ ス を 封 入 、o .
01% 水 素 化 ホ ウ 素 ナ ト リ ウ ム を 添 加 し て 、 振 と う し な が ら 1時 間 の 抽 出 を 行 っ た 。 遠 心 分 離(400gX 20min)
して、 沈 澱 を 除 き 、 上 清 液 に 酢 酸 を 加 え て 中 和 し た 後 、 ト リ ク ロ ル 酢 酸 を 終 濃 度 7% に な る よ う に 添 加 し て 1時 間 静 置 し た 。 そ の 後 、 遠 心 分 離 し た 上 清 を 蒸 留 水 で 3 日 間 透 析 後 、 4 倍 量 の エ
タ ノ ー ル を 加 え て ヘ ミ セ ル ロ ー ス B 画 分 を 沈 澱 さ せ 、 回 収 し て 凍 結 乾 燥 し た も の を
S H H
標 品 と し た 。 収 率 は 3.5%で あ っ た 。第 2 項 米 ぬ か ヘ ミ セ ル ロ ー ス (R B H ) の 調 製 法
米 ぬ か ヘ ミ セ ル ロ ー ス (
R B H
) の 調 製 法 は 、 で ん ぷ ん の 除 去 処 理 引 を 除 き 、 前 述 の 方 法 を 準 拠 し て 行 つ た。粉砕、 脱 脂 し た 米 ぬ か は 、 ヘ ミ セ ル ロ ー ス を 抽 出 す
る 前 に 、 脱 デ ン プ ン の た め 、 グ ル コ ア ミ ラ ー ゼ 処 理 を 行 っ た 。 グ ル コ ア ミ ラ ー ゼ 〈 長 瀬 産 業 〉 は 40，"門酢鹸バ
ッ フ ァ (p
H 4.8)
に 懸 濁 し て 用 い た 。 処 理 は3 7 o c
で 1晩 行 っ た 。第 3 項 大 麦 ガ ム 質 (B G ) の 調 製 法
大 麦 ガ ム 質 (
B G
) の 調 製 法 は 、Wood
ら の 方 法 6 5 ) に 従い、 以 下 の よ う に 行 っ た 。 精 白 大 麦 粉 に 10倍 量 の 10% 炭 酸 ナ ト リ ウ ム 液 を 加 え て 、 6 0
O C
で 1時 間 撹 は ん し な が ら 抽 出 し た 。 遠 心 分 離 し た 上 清 を 酢 酸 で pH 4 .
5に 調 整 し て タ ン パ ク 質 を 沈 澱 さ せ た 。 遠 心 分 離 後 、 上 清 に 4倍 量 の エ タ ノ ー ル を 添 加 し て ガ ム 質 を 沈 澱 さ せ て 回 収 し 、 標 品 と し た 。第 4 項 レ ク チ ン 結 合 ア ガ ロ ー ス ゲ ル に よ る 分 離
レ ク チ ン 結 合 ア ガ ロ ー ス ゲ ル は 、 豊 年 精 油 製 を 用 い た。 試 み た レ ク チ ン は 、 コ ン カ ナ バ リ ン A ( C 0 n A)
大 豆 凝 集 素 (S B A )、 ヒ マ マ メ レ ク チ ン (R C A 1 )、 小 麦 庇 芽 レ ク チ ン (W G A ) で あ る 。 S H H を
10
， " 門 リ ン 酸 ナ ト リ ウ ム 緩 衝 液 ( pH 7.0) (NaPB)
に 溶1 /
解 し て 、 各 レ ク チ ン ゲ ル に 負 荷 し た 。 10m門N
a
P Bで よ く 洗 浄 し た 後 、C
0 nA
ゲ ル で は 10m門 メ チ ル ー α ‑D
ー マ ン ノ シ ド 含 有Na P B
、S B A
ゲ ル で は10 n r
門N
ー ア セ チ ル ガ ラ ク ト サ ミ ン 含 有N
aP B
、R C A 1
ゲ ル で は10 0
m門メ チ ル ー ガ ラ ク ト ー ス 含 有N a P B
、W G A
ゲ ル で は1
00，"門 Nー ア セ チ ル グ ル コ サ ミ ン 含 有 Na
P Bで そ れ ぞ れ 吸 着 物 質 を 溶 出 し た 。 そ の 溶 出 液 を 濃 縮 し て 1 P S F 活 性 測 定 に 供 し た 。第 5 項 ゲ ル 漉 過 ク ロ マ ト グ ラ フ ィ ー
S H H 中 の 1 P S F 精 製 の た め に セ フ ア ロ ー ス C L
‑ 4 B カ ラ ム 〈 ベ ッ ド ボ リ ュ ー ム ; 800ml、 カ ラ ム サ イ
ズ; 32i .d.
X 1000mrn) を 用 い て ゲ ル 法 過 ク ロ マ ロ グ ラ フ ィ ー を 行 っ た 。 溶 出 液 は 50m門 リ ン 酸 緩 街 液 (p1 1 7.
7
) を 用 い 、lml/rnin
の 速 度 で 溶 出 し た 。 各 フ ラ ク シ ヨン の タ ン パ ク 質 含 量 は
280nm
の 吸 光 度 測 定 、 炭 水 化 物 含 量 は フ エ ノ ー ル 硫 酸 法 1o ) で 測 定 し た 。 マ ー カ ー は プ ル ラ ン ス タ ン ダ ー ド 〈 昭 和 電 工 〉 を 用 い た 。第 6 項 β ー ガ ラ ク ト シ ダ ー ゼ に よ る 消 化
P
ー ガ ラ ク ト シ ダ ー ゼ (ICN Biochemical) は 500μg /
m
Iの S H H 溶 液 に 51U添 加 し 、 370C
で 24時 間 保 温 し て、 1 P S F 活 性 測 定 に 供 し た 。 コ ン ト ロ ー ル は P RS 溶 液 に 同 量 の 酵 素 液 を 加 え た も の を 用 い た 。 反 応 液 は、 そ の ま ま 培 養 液 に 添 加 し た 。
第
3
節 結 果第 1項 S H H の 1 P S F 活 性
第 2 節 の よ う に 調 製 し た 3 種 の 食 物 繊 維 を 添 加 し て 1 P S F 活 性 を 調 べ た の が 、 第 7 表 で あ る 。 S H H は 500μg / m I添 加 で 2 倍 強 の 相 対 活 性 を 示 し た 。 大 麦 ガ ム 質 (B G ) は 増 強 す る 傾 向 を 示 し 、 米 ぬ か ヘ ミ セ ル ロ ー ス (R B H ) に は 見 ら れ な か っ た 。
S H H の 添 加 量 に 対 す る 細 胞 増 殖 及 び 抗 体 重 を 第 1 3 図 に 示 し た 。 S H H を 約 100μg/ rn I以 上 添 加 す る と 、 わ ず か な 細 胞 の 増 殖 を 伴 い な が ら 、 濃 度 に 応 じ て 直 線 的 に 抗 体 産 生 を 噌 強 し て い る こ と が 認 め ら れ た 。 1m g / ml添 加 で 、 S H H は 最 大 の 1 P S F 活 性 を 示 し た ( 4 倍 強 〉 。
つ ぎ に 、 S H H 添 加 時 の 細 胞 増 殖 及 び 抗 体 産 生 の 経
第7表 HB4C5細 胞 の 細 胞 増 殖 及 ひ 抗 体産 生 へ及ぼ す 食 物繊 維3種 の 影響
T . i
句::ts .
:r.•添 加 重 相 対 細 胞 数 相 対 抗 体量 相支、
l H c
体生 産 量 サンプル 〈μg/rnl)Barley gUIlI 10
o .
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