ヲ 3

第4表 フェニル化合物のヒト型ハイプリドーマHB4C5細胞 における抗体産生に対する影響とDNA切断能との比較

官能基 終 濃 度 相 対 相対 相対 DNA切断活性 3)

(共試物質 生育 IgM  Ig門 2)

R1  R2  R3  R4  R5  〈μM) 比 1)  濃度 2)生産量 In vitro  RFL細胞

Calechol  OH OH  H  H   11 10  0.91  0.19  0.63  +++  + 

100  0.61  0.06  0.32  1000  0.56  0.05  0.30  Rεsorcinol  OH  H OH  H  H  10  2.50  0.99  1.19  100  2.30  0.86  1.12  1000  1.08  0.21  0.59 

Hydroquinone  OH  H OH  10  2.95  0.67  0.72  +++  ^NT 

100  0.61  0.02  0.11  1000  0.53  0.01  0.05 

o‑Aminophenol  OH  NH2 NII2  H  H  10  1. 47  1.02  1.66  +  NT  100  0.84  0.14  0.40 

1000  0.59  0.06  0.25 

p‑Aminophenol  OH  1 1 H NH2  10  1.64  0.64  0.93  +  NT  100  0.27  0.02  0.22 

1000  0.27 

。 。

0・Phenylenediamine5) NH2  NH2 H  2.5  1.19  0.72  1.47  +  NT  25  0.91  0.15  0.41 

250  0.59  0.05  0.21 

m‑Phenylenediamine 5)  NH2  H NII2  H  2.5  2.07  0.81  0.96  NT  25  1.26  0.42  0.83 

250  1.12  0.22  0.48 

p‑Phenylenediamine  5)  NH2  H  H NH2  H  2.5  1.65  0.82  1.20  ++  ^NT 

25  0.98  0.20  0.51  250  0.35  0.06  0.48 

Pyrogallol  OH  OH  OH  H  H  10  1.92  0.74  0.65  +++  ^NT 

100  0.89  0.03  0.05  1000  0.54 

。 。

Ga 11 i c ac i d  OH  OH OH  COOH  10  2.80  0.59  0.64  +++  ^NT 

100  1. 34  0.03  0.06  1000  0.47 

。 。

Caffeic acid  5)  OH  OH  H  H CH=CHCOOH  5  2.55  0.80  1.00  +++  NT  50  2.34  0.82  1.11 

500  1. 57  1. 43  2.88 

0・Coumaricacid  5)  H  H OH CH=CHCOOH  2.42  1.02  1.03  NT  NT  10  2.10  0.81  0.95 

100  1.24  0.24  0.47 

F e ru 1 i c ac i d 5)  OCH3 OH  H  H CH=CHCOOH  5  2.42  0.85  1.15  +  NT  50  2.34  0.61  0.80 

500  1.95  0.32  0.52 

L‑Dopa  OH  OH  H H CH2CH(NH2)COOH  10  2.72  1.02  1.09  +++ 

100  2.02  0.98  1. 41  1000  1. 38  0.31  0.65 

nopamine  OH OH  H H  CH2CH2 NH2  10  3.02  0.76  0.80  +++  NT  100  2.77  0.56  0.53 

1000  0.66 

。 。

[Plnephrine  OH OH  H 1 1 CH(OH)CH2 NHCH3  10  3.22  0.85  0.77  +++  + 

100  2.52  0.64  0.74  1000  0.93  0.01  0.31 

¥on"'p I neph r i ne  OH OH  H H CH(OH)CH2NH2  10  3.04  0.89  0.85  +++  + 

100  3.00  1. 03  1.00  1000  2.09  0.86  1.20  可巳tanenhri ne  OH OCH3 H H CH(OH)CH2NH2  10  1.88  0.60  0.77  100  2.49  0.48  0.46  1000  2.29  0.44  0.46 

) )まきこみ時の細胞数の培養2日目の細胞数に対する比を表す。

2)培養2日目のコントロール抗体産生量に対するサンプルの産生量比を表す。

3)R F L :ラット胎児肝、文献 を参照せよ。

4)~ot tested. 

5)本サンプルは99%エタノールに溶解して使用した。

は 細 胞 株 に よ っ て 変 化 す る 。 ヒ ト

H e L a

細 胞 で は 、 エ ビ ネ プ リ ン は 弱 い

D N A

切 断 活 性 を 示 し 、 ノ ル エ ビ ネ プ リ ン は 示 さ な か っ た 。 H B  4  C  5 細 胞 の 細 胞 増 殖 及 び 1g M 産 生 で は 、 ド ー パ ミ ン と エ ビ ネ フ リ ン が 1 m M添 加 で い く ら か の 阻 害 を 示 し た が 、 こ の 毒 性 は 単 ボ リ フ ェ ノ ー ル 類 〈 カ テ コ ー ル や ハ イ ド ロ キ ノ ン 等 〉

よ り か な り 弱 か っ た 。 カ テ コ ー ル ア ミ ン 類 は 、 精 製 D N A や ラ ッ ト 細 胞 株 を 使 っ て 調 べ た D N A 切 断 試 験 で 期 待 さ れ た だ け の 毒 性 は な い と い う こ と を 示 唆 し て い

る。

第 6

r

頁 コ ー ヒ ー 酸 の 細 胞 増 殖 、 抗 体 産 生 パ タ ー ン へ の 影 響

Qニ ジ フ ェ ニ ル グ ル ー プ は 、 強 い D N A 切 断 能 66)を 持ち、 コ ー ヒ ー 酸 も そ の 仲 間 に 入 る の だ が 、 H  B  4  C 

5 細 胞 に よ る 試 験 で は 変 わ っ た 挙 動 を 示 し た 。 そ の た め、 異 な っ た 濃 度 の コ ー ヒ ー 酸 を 添 加 し て 7 日 間 培 養

し て そ の 挙 動 を 調 べ た 。 第 5 図 に 示 し た よ う に 、 500μ  M 添 加 に お い て 細 胞 増 殖 の 強 い 抑 制 が 認 め ら れ 、 3  目 以 降 は 細 胞 数 が 増 加 し な か っ た 。 また、 ま き こ ん で 3 日 目 ま で は 、 コ ン ト ロ ー ル よ り 1 g M 産 生 量 は 多 く 、

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第

5図 コーヒー酸添加培地での HB4C5細胞の増殖 (A)

及び抗体産生 (B) の経目的変化

0: 無添加、6.:  5 μ M、

A :

5 0 μ M、口 :500μMコーヒー酸。

ヲ 写

細 胞 増 殖 の 止 ま っ た 3 日 目 以 降 は 1 g M 産 生 も 横 は い 状 態 に な っ た 。

第 4 節 考 察

1 T E S ‑ E R D F

培 地 に 添 加 す る 糖 類 の 影 響 を 調 べ た と こ ろ 、 グ ル コ ー ス フ リ ー 培 地 で は 、 フ ラ ク ト ー ス 添 加 時 が 相 対 細 胞 数 、 相 対 抗 体 産 生 と も 巌 も 高 く 、 グ ル コ ー ス 代 替 と し て 利 用 し う る と 考 え ら れ る 。

グ ル コ ー ス 半 量 培 地 で は 、 増 殖 に 影 響 を 及 ぼ す 糖 質 は 見 い だ さ れ な か っ た が 、 ガ ラ ク ツ ロ ン 酸 及 び マ ン ニ

ト ー ル 添 加 で 抗 体 産 生 が 約 3 0 " ' 5 0 %増 強 さ れ た 。 グ ル コ ー ス の 半 量 添 加 に よ り 、 細 胞 の 基 礎 代 謝 が 維 持 され、 さ ら に 添 加 さ れ た 糖 質 に よ り 、 抗 体 産 生 が 増 強 さ れ た も の と 推 量 さ れ る 。

ロ ー カ ス ト ビ ー ン ガ ム は 、 マ メ 科 Ceratonia  sili Q ‑

旦 企 の 種 実 中 の ガ ム 質 、 ガ ラ ク ト マ ン ナ ン で 、 ガ ラ ク ト ー ス と マ ン ノ ー ス の 構 成 比 は 1: 3 '"  4:であり、 粘 性 が 非 常 に 強 い 3。) シ ト ラ ス ベ ク チ ン は ガ ラ ク ツ ロ ン 酸 が

α

ー く じ 4) 結 合 し た ガ ラ ク ツ ロ ナ ン が 主 体 で 種 々 の 糖 が 結 合 し た ヘ テ ロ 多 糖 で あ る 。 グ ル コ マ ン ナ ン 〈 コ ン ニ ャ ク 〉 は グ ル コ ー ス と マ ン ノ ー ス が 直 鎖 状 に β ー

( 1 

，

4) 結 合 し た も の で あ る 。 キ サ ン タ ン ガ ム は 微 生 物

x 

anthomonas  campestri sが グ ル コ ー ス を 資 化 し て 菌 体

外 に 産 生 す る

P

ー く じ 4) 結 合 し た グ ル カ ン に マ ン ノ ー ス と グ ル ク ロ ン 酸 が 結 合 し た も の で マ ン ノ ー ス : グ ル コ ー ス : グ ル ク ロ ン 酸 は 2: 2:  1の 比 率 で あ る 3l。 4 種 の 多 糖 に 共 通 す る 構 成 糖 は マ ン ノ ー ス で あ り、 ロ ー カ ス ト ビ ー ン ガ ム が 最 も 強 い 1 P S F 活 性 を 示 し た が、 構 造 ま た は 粘 度 が 活 性 に 関 与 し て い る の か に つ い て は 今 後 検 討 し た い 。 また、 顕 著 な 1 P S F 活 性 を 示 し た キ ト サ ン に つ い て は 、 第 5 章、 第 7 章 で 詳 し く そ の 性 質 に つ い て 検 討 す る 。

ロ ー カ ス ト ビ ー ン ガ ム 及 び ベ ケ チ ン 両 多 糖 と も 高 濃 度 で 抗 体 産 生 増 強 を 示 し 、 かっ、 顕 著 な 細 胞 数 の 増 加 を 伴 わ な い こ と か ら 、 細 胞 増 殖 を 促 進 す る こ と で 抗 体 産 生 を 増 強 す る タ ン パ ク 質 様 1 P S F 69lと は 作 用 機 作 が 異 な る と 考 え ら れ た 。 また、 両 多 糖 と も 高 濃 度ーで は 高 い 粘 性 を 示 す こ と か ら 、 立 体 構 造 の 他 に そ の 粘 性 が 細 胞 膜 に な ん ら か の 影 響 を 与 え て い る と 推 察 さ れ る 。

つ ぎ に 、 毒 性 試 験 の 簡 易 な 一 次 ス ク リ ー ニ ン グ と し て ハ イ ブ リ ド ー マ の 利 用 が 可 能 か ど う か を 検 討 し た 。 ヒ ト 型 ハ イ プ リ ド ー マ 細 胞 を 用 い て 調 べ た フ 工 ノ ー ル 化 合 物 の 細 胞 増 殖 や 1g M 産 生 へ の 阻 害 効 果 は 、 あ る

ドキュメント内 食品成分の抗体産生調節に関する研究 (ページ 36-40)