消化力試験法

消化力試験法は，消化酵素剤の原体及び製剤のでんぷん消化 力，たん白消化力及び脂肪消化力を測定する方法である．

1. でんぷん消化力試験法

でんぷん消化力の測定は，次のでんぷん糖化力測定法，でん ぷん糊精化力測定法又はでんぷん液化力測定法により行う．

1.1. でんぷん糖化力測定法

でんぷん糖化力は，でんぷんにアミラーゼが作用するとき，

グルコシド結合の切断に伴って増加する還元力を測定して求め る．その単位は，操作法の条件で試験するとき，1分間に1mg のブドウ糖に相当する還元力の増加をもたらす酵素量を1でん ぷん糖化力単位とする．

1.1.1. 試料溶液の調製

操作法により試験するとき，還元力の増加が試料濃度に比例 する範囲内の試料濃度になるように，試料に適量の水又は医薬 品各条に規定する緩衝液又は塩類溶液を加えて溶かし，試料溶 液とする．その濃度は，通例，0.4～0.8でんぷん糖化力単位 /mLである．必要ならばろ過する．

1.1.2. 基質溶液の調製

でんぷん消化力試験用バレイショデンプン試液を用いる．た だし，必要ならばpH5.0の1mol/L酢酸・酢酸ナトリウム緩衝 液10mLの代わりに医薬品各条で規定する緩衝液又は塩類溶液 10mLを加える．

1.1.3. 操作法

基質溶液10mLを正確に量り，37±0.5℃で10分間加温した 後，試料溶液1mLを正確に加え，直ちに振り混ぜる．この液 を37±0.5℃で正確に10分間放置した後，でんぷん消化力試験 用フェーリング試液のアルカリ性酒石酸塩液2mLを正確に加

え，直ちに振り混ぜる．次に，でんぷん消化力試験用フェーリ ング試液の銅液2mLを正確に加え，軽く振り混ぜた後，水浴 中で正確に15分間加熱し，直ちに25℃以下に冷却する．次に，

濃ヨウ化カリウム試液2mL及び薄めた硫酸(1→6)2mLを正確 に加え，遊離したヨウ素を0.05mol/Lチオ硫酸ナトリウム液で 滴定〈2.50〉する(a mL)．ただし，滴定の終点は，滴定が終点 近くなったとき，溶性デンプン試液1～2滴を加え，生じた青 色が脱色するときとする．別に，基質溶液の代わりに水10mL を正確に量り，同様に操作して滴定〈2.50〉する(b mL)．

でんぷん糖化力(単位/g)＝ブドウ糖の量(mg)×

10 1 ×

M 1 ブドウ糖の量(mg)＝(b－a)×1.6

M：試料溶液1mL中の試料の量(g) 1.2. でんぷん糊精化力測定法

でんぷん糊精化力は，でんぷんにアミラーゼが作用するとき，

でんぷんの直鎖成分(アミロース)の低分子化に伴うでんぷんの ヨウ素による呈色の減少を測定して求める．その単位は，操作 法の条件で試験するとき，1分間にバレイショデンプンのヨウ 素による呈色を10％減少させる酵素量を1でんぷん糊精化力単 位とする．

1.2.1. 試料溶液の調製

操作法により試験するとき，でんぷんのヨウ素による呈色の 減少が試料濃度に比例する範囲内の試料濃度になるように，試 料に適量の水又は医薬品各条に規定する緩衝液又は塩類溶液を 加えて溶かし，試料溶液とする．その濃度は，通例，0.2～0.5 でんぷん糊精化力単位/mLである．必要ならばろ過する．

1.2.2. 基質溶液の調製

でんぷん糖化力測定法に準じて調製する．

1.2.3. 操作法

基質溶液10mLを正確に量り，37±0.5℃で10分間加温した 後，試料溶液1mLを正確に加え，直ちに振り混ぜる．この液 を37±0.5℃で正確に10分間放置した後，この液1mLを正確に 量り，0.1mol/L塩酸試液10mLに加え，直ちに振り混ぜる．次 に ， こ の 液0.5mLを 正 確 に 量 り ，0.0002mol/Lヨ ウ 素 試 液 10mLを正確に加え，振り混ぜた後，水を対照とし，紫外可視 吸光度測定法〈2.24〉により試験を行い，波長660nmにおける 吸光度ATを測定する．別に，試料溶液の代わりに水1mLを正 確に加えて同様に操作し，吸光度ABを測定する．

でんぷん糊精化力(単位/g)＝

B T B

A A A－

×M 1

M：試料溶液1mL中の試料の量(g) 1.3. でんぷん液化力測定法

でんぷん液化力は，でんぷんにアミラーゼが作用するとき，

でんぷんの低分子化に伴う粘度の低下を測定して求める．その 単位は，操作法の条件で試験するとき，1分間にバレイショデ ンプン1gに相当する基質溶液の粘度を50％ショ糖標準液の粘 度の2倍から1倍に減少させる酵素量を1でんぷん液化力単位と する．

1.3.1. 試料溶液の調製

操作法により試験するとき，粘度の低下が試料濃度に比例す る範囲内の試料濃度になるように，試料に適量の水又は医薬品

4.03 消化力試験法 87 .

各条に規定する緩衝液又は塩類溶液を加えて溶かし，試料溶液 とする．その濃度は，通例，0.15～0.25でんぷん液化力単位/mL である．

1.3.2. 基質溶液の調製

あらかじめ，バレイショデンプン約1gを精密に量り，105℃

で2時間乾燥し，その減量を測定する．その換算した乾燥物 15.00gに 対 応 す る バ レ イ シ ョ デ ン プ ン を 正 確 に 量 り ， 水 300mLを加え，よく振り混ぜながら，徐々に2mol/L水酸化ナ トリウム試液25mLを加えてのり状とし，時々振り混ぜながら 水浴中で10分間加熱する．冷後，2mol/L塩酸試液で正確に中 和し，医薬品各条に規定する緩衝液50mL及び水を加えて正確 に500gとする．用時製する．

1.3.3. 50％ショ糖標準液の調製 白糖50.0gを水50.0mLに溶かす．

1.3.4. 操作法

50％ショ糖標準液50mLを100mLの三角フラスコに入れ，37

±0.5℃の恒温槽中に15分間放置した後，図4.03－1に示す粘 度計をその下端がフラスコ底にほとんど触れる程度に垂直に取 り付け，恒温槽の水を粘度計の外筒に循環させる．50％ショ 糖標準液を粘度計の上の球の中ほどまで静かに吸い上げた後，

重力により流下させ，上下の標線間の流下時間(t1秒)を測定す る．次に，基質溶液50gを100mLの三角フラスコに正確に量り とり，37±0.5℃の恒温槽中に20分間放置した後，試料溶液 1mLを正確に加え，直ちに振り混ぜ，粘度計をその下端がフ ラスコの底にほとんど触れる程度に垂直に取り付け，恒温槽の

A：球容量5mL B：標線 C：外径30mm

D：毛細管内径1.25～1.30mm E：外径8mm

図4.03－1

水を粘度計の外筒に循環させる．時々，反応液を粘度計の上の 球の中ほどまで静かに吸い上げた後，重力により流下させ，上 下の標線間の流下時間(t秒)を測定し，tがt1より短くなるまで 繰り返す．測定のつど，試料溶液を加えたときから液面が上の 標線を通過するときまでの時間(T′秒)を記録する．(T′＋t／2) をtに対応する反応時間(T )とし，tとTの曲線を描き，内挿に よりt1及び(2×t1)に対応するT1及びT2を求める．

でんぷん液化力(単位/g)＝

2 1

60 T T－ ×

M .5 1

M：試料溶液1mL中の試料の量(g) 2. たん白消化力試験法

たん白消化力は，カゼインにプロテアーゼが作用するとき，

ペプチド結合の切断に伴って増加する酸可溶性低分子分解産物 の量をフォリン反応で比色測定して求める．その単位は，操作 法の条件で試験するとき，1分間にチロシン1μgに相当するフ ォリン試液呈色物質の増加をもたらす酵素量を1たん白消化力 単位とする．

2.1. 試料溶液の調製

操作法により試験するとき，非たん白性のフォリン試液呈色 物質の増加が試料濃度に比例する範囲内の試料濃度になるよう に，試料に適量の水又は医薬品各条に規定する緩衝液又は塩類 溶液を加えて溶かし，試料溶液とする．その濃度は，通例，

15～30たん白消化力単位/mLである．

2.2. チロシン検量線

チロシン標準品を105℃で3時間乾燥し，その50mgを正確に 量り，0.2mol/L塩酸試液に溶かし，正確に50mLとする．この 液1mL，2mL，3mL及 び4mLを 正 確 に 量 り ， そ れ ぞ れ に 0.2mol/L塩酸試液を加え，正確に100mLとする．それぞれの 液2mLを正確に量り，0.55mol/L炭酸ナトリウム試液5mL及び 薄めたフォリン試液(1→3)1mLをそれぞれ正確に加え，直ちに 振り混ぜ，37±0.5℃で30分間放置した後，これらの液につき，

0.2mol/L塩酸試液2mLを正確に量り，同様に操作して得た液 を対照とし，紫外可視吸光度測定法〈2.24〉により試験を行い，

波長660nmにおける吸光度A1，A2，A3及びA4を測定する．縦 軸に吸光度A1，A2，A3及びA4を，横軸にそれぞれの液2mL中 のチロシン量(μg)をとり，検量線を作成する．吸光度差1に対 するチロシン量(μg)を求める．

2.3. 基質溶液の調製

(ⅰ) 基質溶液1：カゼイン(乳製)約1gを精密に量り，105℃で 2時 間乾燥 し，その減量 を測定する ．その換算 した乾燥 物 1.20gに対応するカゼイン(乳製)を正確に量り，乳酸試液12mL 及び水150mLを加え，水浴中で加温して溶かす．流水で冷却 した後，1mol/L塩酸試液又は水酸化ナトリウム試液で医薬品 各条に規定したpHに調整し，水を加えて正確に200mLとする．

用時製する．

(ⅱ) 基質溶液2：カゼイン(乳製)約1gを精密に量り，105℃で 2時 間乾燥 し，その減量 を測定する ．その換算 した乾燥 物 1.20gに対応するカゼイン(乳製)を正確に量り，0.05mol/Lリン 酸水素二ナトリウム試液160mLを加え，水浴中で加温して溶 かす．流水で冷却した後，1mol/L塩酸試液又は水酸化ナトリ ウム試液で医薬品各条に規定したpHに調整し，水を加えて正 確に200mLとする．用時製する．

2.4. 沈殿試液の調製

(ⅰ) トリクロロ酢酸試液A：トリクロロ酢酸7.20gを水に溶か し，100mLとする．

(ⅱ) トリクロロ酢酸試液B：トリクロロ酢酸1.80g及び無水酢 酸ナトリウム1.80gに6mol/L酢酸試液5.5mL及び水を加えて溶 かし，100mLとする．

2.5. 操作法

医薬品各条に規定する基質溶液5mLを正確に量り，37±

0.5℃で10分間加温した後，試料溶液1mLを正確に加え，直ち に振り混ぜる．この液を37±0.5℃で正確に10分間放置した後，

医薬品各条の規定に従い，トリクロロ酢酸試液A又はB 5mLを 正確に加えて振り混ぜ，再び37±0.5℃で30分間放置し，ろ過 する．初めのろ液3mLを除き，次のろ液2mLを正確に量り，

0.55mol/L炭酸ナトリウム試液5mL及び薄めたフォリン試液(1

→3)1mLをそれぞれ正確に加え，よく振り混ぜ，37±0.5℃で 30分間放置する．この液につき，水を対照とし，紫外可視吸 光度測定法〈2.24〉により試験を行い，波長660nmにおける吸 光度ATを測定する．別に，試料溶液1mLを正確に量り，医薬 品各条の規定に従い，トリクロロ酢酸試液A又はB 5mLを正確 に加えて振り混ぜた後，医薬品各条に規定する基質溶液5mL を正確に加え，直ちに振り混ぜ，37±0.5℃で30分間放置し，

以下同様に操作し，吸光度ABを測定する．

たん白消化力(単位/g)

＝(AT－AB)×F × 2 11×

10 1 ×

M 1

M：試料溶液1mL中の試料の量(g)

F：チロシン検量線より求めた吸光度差が1のときのチロシ ン量(μg)

3. 脂肪消化力試験法

脂肪消化力は，オリブ油にリパーゼが作用するとき，エステ ル結合の切断に伴って生成する脂肪酸の量を滴定して求める．

その単位は，操作法の条件で試験するとき，1分間に1マイク ロモル(μmol)の脂肪酸の増加をもたらす酵素量を1脂肪消化力 単位とする．

3.1. 試料溶液の調製

操作法により試験するとき，脂肪酸量の増加が試料濃度に比 例する範囲内の試料濃度になるように，試料に冷やした適量の 水又は医薬品各条に規定する緩衝液又は塩類溶液を加えて溶か し，又は懸濁し，試料溶液とする．その濃度は，通例，1～5 脂肪消化力単位/mLである．

3.2. 基質溶液の調製

乳化液／オリブ油混液(3：1)200～300mLを乳化器(図4.03－

2)の 容器に入れ，10℃以下に冷却しな がら，毎分12000～

16000回転で10分間乳化する．この溶液は乳化後1時間冷所に 放置し，油層の分離しないことを確認した後に使用する．

3.3. 乳化液の調製

医薬品各条に規定するポリビニルアルコール20gに水800mL を加え，かき混ぜながら75～80℃で約1時間加熱して溶かす．

冷後，必要ならばろ過し，水を加えて正確に1000mLとする．

3.4. 操作法

基質溶液5mL及び医薬品各条に規定する緩衝液4mLをそれ ぞれ正確に量り，三角フラスコに入れて振り混ぜ，37±0.5℃

A：モーター箱 B：内柱 C：外柱 D：冷却槽取付板 E：モーター頭部 F：モーター軸 G：モーター上下レバー H：回転調節レバー I：コップ保持器 J：冷却槽 K：ツマミ L：コップのふた M：吹上げ止め N：刃 O：ねじ

図4.03－2 乳化器

で10分間放置した後，試料溶液1mLを正確に加え，直ちに振 り混ぜる．この液を37±0.5℃で正確に20分間放置した後，エ タノール(95)／アセトン混液(1：1)10mLを加えて振り混ぜる．

次に0.05mol/L水酸化ナトリウム液10mLを正確に加え，更に エタノール(95)／アセトン混液(1：1)10mLを加えて振り混ぜ た後，過量の水酸化ナトリウムを0.05mol/L塩酸で滴定^〈2.50〉 する(b mL)(指示薬：フェノールフタレイン試液2～3滴)．別に 基質溶液5mL及び医薬品各条に規定する緩衝液4mLをそれぞ れ正確に量り，三角フラスコに入れて振り混ぜ，37±0.5℃で 10分間放置した後，エタノール(95)／アセトン混液(1：1)10mL を加え，次に試料溶液1mLを正確に加えて振り混ぜる．次に 0.05mol/L水酸化ナトリウム液10mLを正確に加え，以下同様 に操作して滴定〈2.50〉する(a mL)．

脂肪消化力(単位/g)＝50×(a－b)×

20 1 ×

M 1

M：試料溶液1mL中の試料の量(g)