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■Lymphoprep TM チューブ

ドキュメント内 V W Q R a (ページ 123-127)

Lymphoprep 顆粒球・赤血球 単核球 血漿

(1) 抗凝固処理,またはフィブリン除去した血液をチューブに入れます。

(2) そのチューブに血液と等量の0.9% NaClを加えます。

(3) 12〜15#径の遠心チューブに35のLymphoprepTMを入れて,その上に(2)で調製した65 の希釈血液を注意深く重層します。層を乱さないよう注意してチューブにキャップを締めます。

(4) スウィングローターを用いて室温(約20℃)で800×2で20分間遠心します。もし,2時間以 上保存した血液を使用するときは遠心時間を30分間に延長します。

(5) 遠心後は上記の図のように,検体とメディウム(LymphoprepTM)の境界面に明瞭な単核球の バンドが形成されます。そのバンドをパスツールピペットを用いて採取します。

(6) 採取した単核球のフラクションを0.9%  NaClまたは他のメディウムを用いて希釈して溶液の密 度を下げ,250×2で10分間遠心して細胞をペレット化します。

性状 性状

・密度・・・1.077±0.0012/5

・浸透圧・・・290±15mOsm

・エンドトキシン・・・<1.0EU/5

使用方法 使用方法

コスモ・バイオウェブ→サポート情報→Q&A集ページに「遠心分離媒 体 Q&A集」がございます。どうぞご利用ください。

品名 品番 包装 希望販売価格 毒劇 貯蔵

LymphoprepTM 1114544

1114545 1114547

4×25052505 6×5005

¥ 13,000

¥ 38,000

¥ 92,000

QQ Q

[メーカー:AXS]

■Lymphoprep

TM

チューブ

Lymphoprep

TM

のチューブタイプ Ready-to-use

参考文献 参考文献

1) Boyum,  A.  (1968):  Separation  of  leucocytes  from  blood  and  bone  marrow. 

. 21 suppl. 97.

使用方法 使用方法 適用

適用

全血からのヒト単核球(リンパ球,単球)の分離

特長 特長

LymphoprepTM  Tubeは,LymphoprepTMがチューブに入っている状 態ですので,わずか20分で簡単に分離が可能です。

チューブ仕様 チューブ仕様

505または155のコニカルチューブ

希釈血液

顆粒球,赤血球 血漿

単核球

仕切り

Lymphoprep

仕切り Lymphoprep Lymphoprep 分離前             分離後

(1) 使用前にチューブを400×2で1分間遠心にかけ,仕切りより上に付着したLymphoprepTM 仕切りの下に落とします。

(2) 抗凝固処理,または線維素除去した血液を,チューブに注入します。

(3) 505チューブに12.5〜17.55の生理食塩水を加えます。加える生理食塩水の量は,血液の量 と等量にします。(計25〜355になるようにしてください)チューブを転倒混和させて生理食

114

細 胞 分 離

血球分離溶液 Polymorphprep TM  

(ポリモルホプレップ)

細 胞 分 離

血球分離

全血からのヒト多核顆粒球(好塩基球,好中球,好酸球)の分離 特長

特長

●PolymorphprepTMは,Sodium  diatrizoateとDextranの無菌調製 済溶液です。

●ヒト単核球・多核球を2層に分離します。

適用 適用

全血からのヒト多核顆粒球(好塩基球,好中球,好酸球)の分離(バ フィーコートからは分離できません)

組成 組成

・Sodium diatrizoate・・・13.8%(W/V)

・Dextran 500・・・8.0%(W/V)

性状 性状

・密度・・・1.113±0.001 2/5(20℃)

・浸透圧・・・445±15 mOsm

・エンドトキシン・・・<1.0EU/5

コスモ・バイオウェブ→サポート情報→Q&A集ページに「遠心分離媒 体 Q&A集」がございます。どうぞご利用ください。

品名 品番 包装 希望販売価格 毒劇 貯蔵

PolymorphprepTM 1114683 2505 ¥ 16,000 Q

[メーカー:AXS]

使用方法 使用方法

1.  12〜155の遠心チューブにPolymorphprepTM  5.05を入れ,EDTA,クエン酸などを用いて抗 凝固処理した採取後2時間以内の血液5.05を注意深く重層します。

2.  スウィングローターを用いて室温(18〜22℃)で450〜500×2,30〜35分間遠心分離しま す。(PolymorphprepTM量,血液量,又はチューブのサイズを指定以外にする場合は,遠心条件 をご検討ください)

3.  パスツールピペットで多核顆粒球浮遊液を採取します。

4.  多核顆粒浮遊液に同量の0.45% NaClもしくは2倍希釈したPBSを加え,混和します。

5.  更に,生理食塩水(0.9% NaCl)もしくはPBSを4.の同量加えます。

6.  室温(18〜22℃)で400×2,10分間遠心分離します。

7.  上清を除去し,多核顆粒球を0.9% NaClもしくはPBSで懸濁し,上記と同様に遠心します。

血球分離溶液 NycoPrep TM  1.077

(ニコプレップ 1.077)

細 胞 分 離

血球分離

全血からのヒト単核球の分離 適用

適用

全血からのヒト単核球の分離(密度 1.077)

組成 組成

・Nycodenz・・・14.1%(W/V)

・NaCl・・・0.44%(W/V)

・Tricine/NaOH(と7.2)・・・5mM

性状 性状

・密度・・・1.077±0.001 2/5(20℃)

・浸透圧・・・295±15 mOsm

・エンドトキシン・・・< 1.0 EU/5

品名 品番 包装 希望販売価格 毒劇 貯蔵

NycoPrepTM 1.077 1114550 4×2505 ¥ 48,000 Q

[メーカー:AXS]

使用方法 使用方法

図 単核球の分離

1.  等量の食塩水で希釈した血液をNycoPrepTM 1.077の上に重層します。

2.  6002で20分間遠心(20℃)後,層が形成されます。

3.  単核球の層をピッペットを用いて採取します。

細 胞 分 離

リンパ球分離溶液LSM ®

細 胞 分 離

血球分離

ロングヒット商品

LSM®は,ヘパリン処理あるいは脱フィブリン化したヒト血液から単 核細胞を迅速,かつ簡単に単離するために特別調製されています。ワン ステップの遠心で,赤血球,多核リンパ球や大部分の血小板サンプルか ら単核リンパ球を分離できます。それぞれのロットは,細菌のコンタミ ネーションがなく,適度な密度,収率を確認しています。室温で適切に 保存されていれば,少なくとも2年間は安定です。LSM®を用いて得られ た単核リンパ球は,リンパ球細胞培養の他,パンニング,FACS,細胞 表面マーカー染色やその他のアプリケーションにお使いいただけます。

また,異なる細胞の単離や他種のリンパ球を単離する場合には,密度を 調整しましょう。

使用目的 使用目的

本LSM®は,脱フィブリン化又はヘパリン化されたヒト血液中の単核 細胞(リンパ球)を,単離するのに用いられる溶液です。

品名 品番 包装 希望販売価格 毒劇 貯蔵

Lymphocyte Separation Media (LSMⓇ ) 50494 50494X

5×1005

1005 ¥ 27,500

¥ 11,500

QQ

[メーカー:CPL]

特長 特長

●ワンステップの遠心で分離が可能です。

●ろ過滅菌済です。

●高い回収率でリンパ球を分離できます。

●Ready-to-useです。

仕様 仕様

●形状:ろ過滅菌溶液

●組成:Ficoll 6.22/1005

●Sodium Diatrizoate 9.42/1005

●密度:1.0770-1.08002/5

●保存条件:暗所で,室温(18〜25℃)

●有効期間:約2年

※LSM®は使用前によく振ってからお使いください。

Biocoll細胞分離試薬

細 胞 分 離

血球分離

リンパ球分離に最適!

背景 背景

Biocoll細胞分離試薬は分子量約40万Daの親水性ポリマーを使用し て,密度調整がされています。

使用目的 使用目的

Biocollを用いたリンパ球分離の使用方法(例)

●Biocoll溶液(密度1.077  20℃)を155ないし255の遠心チュ ーブにそれぞれ75 ないし105いれます。

●ヘパリン処理血液(50IU/5,保存剤不含)と培地を同量混合して 慎重にBiocollの上に重層します。

●1200G 20分 遠心

●パスツール  ピペットで血漿とBiocollの間のリンパ球を密に含む層 をとり,培地で2度洗浄してください。

  1回目・・・300G 10分   2回目・・・200G 10分

●細胞をカウントしてください。

品名 品番 包装 希望販売価格 毒劇 貯蔵

Biocoll separating solution, density 1.077 2/5, isotonic L6113 L6115

10055005 ¥ 6,000

¥ 21,000

SS Biocoll separating solution, density 1.10 2/5, isotonic L6155 5005 ¥ 35,000 S Biocoll separating solution, density 1.077 2/5, buffered with 10mM 

HEPES

L6715 5005 ¥ 20,000 S

[メーカー:BCR]

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細 胞 分 離

赤血球溶解バッファー

細 胞 分 離

血球分離

白血球への影響が最小限の赤血球溶解バッファー 特長

特長

フローサイトメトリー等の研究において,赤血球のコンタミネーショ ンのない,高精度の白血球の分離は重要なステップとなります。これら は分離する際に,白血球への影響を最小限に赤血球を溶解する試薬で す。

品名 メーカー 品番 包装 希望販売価格 毒劇 貯蔵

Erythrocyte Lysing Kit (ヒトサンプル用) RSD WL1000 1キット ¥ 27,000 W Q Erythrocyte Lysing Kit (マウスサンプル用) RSD WL2000 1キット ¥ 27,000 W Q Erythrolyse (Red Cell Lysing Buffer) SRT BUF04B

BUF04C

100test 500test

¥ 24,800

¥ 59,100 Q Q

セダレーン社 免疫細胞濃縮カラム

細 胞 分 離

血球分離

セダレーン社(CL)の免疫細胞濃縮カラムは,ヒトやマウス,ラット の免疫細胞群を穏和に濃縮できる,簡単かつ迅速なアフィニティクロマ トグラフィーツールです。ネガティブセレクションをすることで,実質 的に不必要な細胞全てをイムノカラム(回収カラム)で除去でき,溶出 液中に必要な細胞の高濃縮サンプルが得られます。つまり,この方法で は,抗体またはビーズによる処理がされていない未処理の細胞が分離で きます。滅菌済みで,品質チェックがされているカラムと試薬がReady-to-useフォーマットになっています。

セダレーン社はこのカラムを改良し,さらに高感度で便利なキットに しました。新しい抗体をカラムと細胞試薬に追加することにより,およ そ10%濃縮率を上げました。この改良によりインキュベーション時間は およそ半分に短縮されました。その他,この濃縮操作に適した付属試薬 も追加され,さらに高濃縮なT-リンパ球の分離を可能にします。

回収率と純度

ヒト T細胞 エンハンスT細胞 CD4細胞 CD8細胞 CD3CD45RO細胞 CD3CD45RA細胞 CD4CD45RO細胞 B細胞

細胞収率 40% 30-35% 30% 15% 10% 11% 5% 8-10%

細胞純度 85% 95-97% 85% 80% CD3 87%

CD45RA 72%

CD3 96%

CD45RO 91%

CD4 80%

 CD45RA 69% 85%

マウス T細胞 CD4細胞 CD8細胞 B細胞

細胞収率 30% − 15% 10% − − − 30%

細胞純度 85% − 80% 70% − − − 85%

ラット T細胞 CD4細胞 CD8細胞

細胞収率 30% − 15% 10% − − − −

細胞純度 85% − 80% 70-80% − − − −

構成内容 構成内容

●回収カラム

●カラム試薬(Column Reagent)

●細胞試薬(Cell Reagent)

●ストップコック

●PBSバッファー(10×)

●Lympholyte®

●溶解バッファー(5×)

細 胞 分 離

品名 適用種 カラムにアプライできる細胞数量 品番 包装 希望販売価格 毒劇 貯蔵

T-細胞 回収 カラム, ヒト  T Cell Immunocolumns, High  Capacity CellectTM

Human 5.0-7.5×108 cells 1.0-1.5×108 cells 1.0-1.5×108 cells

CL100-2 CL100-5 CL100

2column 5column 10column

¥ 54,000

¥ 45,000

¥ 54,000

SS S T-細胞 回収 カラム,マウス 

T Cell Immunocolumns, High  Capacity CellectTM

Mouse 5.0-7.5×108 cells 1.0-1.5×108 cells 1.0-1.5×108 cells

CL101-2 CL101-5 CL101

2column 5column 10column

¥ 49,000

¥ 32,000

¥ 49,000

SS S T-細胞 回収 カラム , ラット 

T Cell Immunocolumns, High  Capacity CellectTM

Rat 5.0-7.5×108 cells 1.0-1.5×108 cells 1.0-1.5×108 cells

CL102-2 CL102-5 CL102

2column 5column 10column

¥ 49,000

¥ 32,000

¥ 49,000

SS S

[メーカー:CL]

■T細胞分離

ドキュメント内 V W Q R a (ページ 123-127)