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■細胞増殖アッセイキット 使用目的

ドキュメント内 V W Q R a (ページ 183-191)

セルベースアッセイ 実績のある細胞系

●膵がん細胞系 ●293T細胞 ● 小細胞性肺がん

(AL-780)

●単球細胞 ●HeLa細胞 ● マウスC3H10T1/2 前駆細胞

●Ehd-1胚性繊維芽細胞 ●HepG2細胞 ● 上皮直腸結腸腺がん 細胞系(HT-29)

●ヒト胚性293肝細胞 ●D145細胞 ● 前立腺がん細胞系

(DU-145,PC-3)

●マウス繊維芽細胞 ●A375細胞 ● ヒト前立腺がん細胞

(CL1,22RV1,

LNCaP)

●B細胞系 ●MCF-7細胞 ● 乳腺がん細胞系

(MCF-7α,MDA-MA231)

●筋繊維芽細胞 ●BXPC-3細胞 ● ヒト乳がん細胞

(T-47D,MDA,

MB-468)

●滑膜細胞 ●マウス造血系細胞 ● マウスマクロファー ジ様細胞系

(RAW 264.7)

●マウス骨髄細胞系 ●ケラチン生成細胞

● ヒト初代臍帯静脈上皮 細胞

●ヒトT細胞

●U937細部 ●HEK293細胞

●FDCP細胞系 ●CHO細胞

●CD3 T細胞 ●HIH 3T3細胞

※ただいまサンプルを配布しております。

XTT細胞増殖アッセイキット

セルベースアッセイ

増殖

品名 品番 包装 希望販売価格 毒劇 貯蔵

XTT Kit 20-300-1000 1000assay ¥ 21,700 R

放射性同位体を使うことなく安全に細胞増殖と生存率を定量します!

背景 背景

XTTの使用により増殖測定操作を非常に簡便化し,放射性同位体を使 わずに細胞の定量化や生存率を測定することができます。本キットは成 長因子,サイトカインや栄養成分に対する細胞の増殖応答をアッセイす るために開発されました。加えて,TNFや成長阻害因子のような物質の 細胞毒性をアッセイするのにも適しています。XTTは,細胞からの51Cr の遊離に基づく細胞毒性テストに代わる,高感度な非放射性の細胞増殖 アッセイに使用できます。

[メーカー:BLG]

構成内容 構成内容

●XTT 試薬(10×55) 

●活性化 試薬(2×0.55)

特長 特長

簡単:複数の試薬を加えたり,細胞を洗浄する必要はありません。

迅速:1ステップで結果が出ます。

高感度:細胞密度が低くてもアッセイできます。

正確:色素の吸光度は,ウェルごとの細胞数に比例します。

安全性:放射性同位体を使用する必要はありません。

簡便性:マイクロプレートリーダーで測定するのみです。

■細胞増殖アッセイキット

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セルベースアッセイ

CCKi-F細胞増殖アッセイキット

セルベースアッセイ

増殖

品名/内容 品番 包装 希望販売価格 毒劇 貯蔵

Cell Counting Kit-F [CCKi-F]

●構成内容

・CCK-F溶液

ALX-850-245-KI01 ALX-850-245-KI02

500test 5×500test

¥ 37,000

¥ 138,000 R R Cell Counting Kit-Fは生細胞数を蛍光検出するキットです。キット中

のCalcein-AMが細胞内エステラーゼによって産生されるCalceinと蛍光 色素は生細胞数に比例しています。[3H]-チミジン取り込み法のようにラ ジオアイソトープを必要としません。またMTTアッセイよりも可溶化の 操作がなく迅速に測定ができます。比色アッセイに比べ高感度です。

50〜少なくとも25,000細胞数を測定できます。

蛍光波長:Ex/Em=490±10/530±15!

使用目的 使用目的

このキットは細胞増殖能および生存率を迅速にかつ高感度で定量を行 うためのキットです。

[メーカー:ENZ]

細胞死検出 キット

セルベースアッセイ

増殖

品名/内容 メーカー 品番 包装 希望販売価格 毒劇 貯蔵

Live-Dead Cell Staining Kit

●使用目的

・ 細胞膜透過性の緑色蛍光色素(Ex/Em=488!/518!),

cyto-dyeを用いて生細胞を染色するためのキットです。死細胞は propidium iodide (PI)により赤色蛍光(Ex/Em=488!/615!)

に染色します。

●構成内容

・溶液A

・溶液B

・染色バッファー

ENZ ALX-850-249-KI01 1キット (50tests)

¥ 57,000 R

Bacteria Live & Dead Cell Staining Kit

●使用目的

・ 二種類のプローブ,DMAOとEtD-IIIを用いて生存バクテリアを赤色,

死亡バクテリアを緑色に染色するキットです。

●構成内容

・DMAO

・Ethidium Homodimer-III (EthD-III)

BTI 30027 1キット ¥ 78,000 S

LDH Cytotoxicity Assay Kit

●使用目的

・ 細胞膜の損傷によって細胞培養上清にリリースされるLDHを酵素反応 を利用して測定します。LactateはNAD存在下でサンプル中のLDH 活性によりPyruvateに酸化され,生じたNADHがTetrazolium INT を還元し,赤色のFormazanを形成します。生じた色素量はLDHに比 例します。

●構成内容

・Catalyst試薬 (Containg Diaphorase and NAD+)

・Catalyst Reconstitutionバッファー

・Dye溶液 (Containg tetrozolium INT and lactate)

・Lysis溶液 (10x)

・停止溶液

BCH K6330400 400assay ¥ 46,000 R

セルベースアッセイ

SensoLyte ®  

Calcein細胞生存アッセイキット

セルベースアッセイ

増殖

品名 品番 包装 希望販売価格 毒劇 貯蔵

SensoLyte Calcein Cell Viability Assay Kit *Fluorimetric* 72126 1キット  (1000assays)

¥ 39,000

[メーカー:ASI]

細胞内セルラーゼアッセイキット(蛍光)

セルベースアッセイ

増殖

品名 品番 包装 希望販売価格 毒劇 貯蔵

MarkerGeneTM Fluorescent Cellulase Assay Kit M1245 1キット ¥ 76,000 QS R

使用目的 使用目的

細胞内のセルラーゼを蛍光検出するキットです。

[メーカー:MGT]

構成内容 構成内容

●Reaction Buffer

●Substrate  Reagent(5mM  Resorufin  Cellobioside  in  DMSO)

●Reference Standard(5mM Resorufin in DMSO)

●Stop Buffer

●Dimethyl Sulfoxide(DMSO)

使用目的 使用目的

本製品はカルセインAMを用いて生細胞を検出するためのキットです。

構成内容 構成内容

●Component  A(Calcein  AM  in  anhydrous  DMSO  solution,  2mM)1004

●Component B(10X Assay buffer)1005

細胞老化検出アッセイ

セルベースアッセイ

老化・酸化ストレス

品名 検出 品番 包装 希望販売価格 毒劇 貯蔵

Cellular Senescence Detection Kit (SA-β-gal Staining) 光学顕微鏡 CBA-230 1キット

(50アッセイ)

¥ 67,000 SR 96-Well Cellular Senescence Assay (SA β-gal Activity) 蛍光 CBA-231 1キット

(96アッセイ)

¥ 98,000 SR

■酸性β-ガラクトシダーゼ染色  (品番CBA-230)

使用目的 使用目的

老化に関わるSA-β-ガラクトシダーゼはX-galの加水分解を触媒し,老 化した細胞中で青色を生成します。それぞれのキットには35#ウェル中 で50アッセイするのに十分な量が提供されています。

構成内容 構成内容

●100×固定溶液  ●染色溶液A  ●染色溶液B

●染色溶液C  ●染色溶液D  ●X-gal溶液

■酸性β-ガラクトシダーゼ活性測定  (品番CBA-231)

使用目的 使用目的

細胞老化アッセイキットは,細胞溶解液を老化に関わるSA-β-ガラク トシダーゼ活性の測定および細胞数の異なるサンプルの標準化のために 使用します。それぞれのキットには96ウェルプレートでアッセイするの に十分な量が含まれています。

構成内容 構成内容

●2×細胞溶解液    ●2×反応バッファー

●SA-β-Gal基質(×20)  ●反応停止液

[メーカー:CBL]

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セルベースアッセイ

OxiSelect TM  コメットアッセイ

(Single Cell Gel Electrophoresis)

セルベースアッセイ

老化・酸化ストレス

使用目的 使用目的

細胞内においては環境要因や代謝の過程によるDNAダメージは1日あ たり1細胞内で,1,000から1,000,000の分子が傷付いています。60 億塩基ある,ヒトゲノムの量からすればわずかな量かも知れませんが,

重要な遺伝子に対する修復不可能な障害は,その細胞の機能を果たすた めの能力を障害したり,癌のような顕著な増殖をさせたりします。

コメットアッセイ(single  cell  gel  electrophoresis  assay:

SCGE)は各細胞のDNA障害を調べるのによく知られた手法です。

ダメージを受けたDNA(フラグメントやstrand  breaksを含む)は,

障害されていないDNAと分離され,顕微鏡下でコメット(彗星)の尾の 形を呈します。DNAダメージの程度は通常彗星の尾の長さから視覚的に 見積もることができますが,画像解析ソフトウェアによりいくつものパ ラメーターを測定することもできます。

OxiSelectTM Comet Assayキットは迅速で感度の高い細胞DNAの障 害を測定するキットです。

構成内容 構成内容

■OxiSelect

TM

 3-Well Comet Assay Kit

●OxiSelectTM 3-Well コメットスライド

●OxiSelectTM コメットアガロース

●Vista Green DNA Dye

●EDTA溶液

●10X溶解液

■OxiSelect

TM

 96-Well Comet Assay Kit

●OxiSelectTM 96-Well コメットスライド

●OxiSelectTM コメットアガロース

●Vista Green DNA Dye

●EDTA溶液

●10X溶解液

■OxiSelect

TM

 Comet Assay Control Cells

●Jurkat T細胞(未処理)

●Jurkat T細胞(エトポシド処理)

品名 検出 品番 包装 希望販売価格 毒劇 貯蔵

OxiSelectTM 3-Well Comet Assay Kit 光学顕微鏡 STA-350 STA-351 STA-351-5

15アッセイ

(5スライド)

75アッセイ

(25スライド)

5×75アッセイ

(75スライド)

¥ 47,000

¥ 98,000 ご照会

QR QR QR

OxiSelectTM 3-Well Comet Assay Slides 光学顕微鏡 STA-352 STA-353 STA-353-5

5スライド 25スライド 125スライド

¥ 27,000

¥ 55,000

¥ 226,000

QQ Q OxiSelectTM 96-Well Comet Assay Kit  光学顕微鏡 STA-355

STA-355-5

96アッセイ

(1スライド)

5×96アッセイ

(5スライド)

¥ 70,000

¥ 310,000

QR QR

OxiSelectTM 96-Well Comet Assay Slides 光学顕微鏡 STA-356 STA-356-5

1スライド 5スライド

¥ 23,000

¥ 86,000 Q Q OxiSelectTM Comet Assay Control Cells ─ STA-354 1セット ¥ 37,000 A

特長 特長

●様々なタイプのDNAダメージをスクリーニング可能

●スライドは低融点アガロースが接着しやすいように特殊な処理済

●落射蛍光顕微鏡により簡単に観察可能

OxiSelectTM コメッ トアガロースと細胞 を 37℃で混合

細胞を OxiSelectTM  コメットスライドに 添加

アルカリあるいは中 性条件下で電気泳動

DNA Dye で染色

無傷細胞 損傷細胞

細 胞 を 溶 解 バ ッ ファー,アルカリ溶 液で処理

図2 OxiSelectTM Comet Assayキットの原理 図1 Jurkat細胞のEtoposide処理

J u r k a t細胞をe t o p o s i d eで処理したもの(右),していないもの(左)。アルカリ条件下で 33V/300mA,15分間反応させた。

[メーカー:CBL]

セルベースアッセイ

ELISpotキット

セルベースアッセイ

ELISpot

単一細胞レベルで,サイトカインを検出!

Enzyme-Linked  ImmunoSpot  (ELISpot)アッセイは,単一細胞レベ ルで分泌されたサイトカインを検出できる,非常に高感度なイムノアッ セイです。

100,000個中1個の細胞という低レベルでも検出可能なELISpotアッ セイは,単一細胞を検出する最も高感度な方法の一つです。分析対象の 物質にもよりますが,その感度は通常のELISAの20から200倍にもな ります。事実,mRNAの代わりに分泌されたタンパク質を検出するとい う違いはありますが,RT-PCRと同様の感度を示します。多くのサイト カインが翻訳段階で調節されていることから,これは非常に重要なポイ ントです。また,分析対象の物質は,分泌された後すぐにキャプチャー 抗体と結合するため,タンパク質の結合やプロテアーゼ活性により損な われることはほとんどありません。従って,特定の免疫応答で定期的に 見られるような小数の活性細胞を研究する際に,特に有用です。

構成内容 構成内容

U-CyTec社メーカー略号:UCT)

Black Spot(品番末尾 -PB2, PB5, -T2, -T5)

●固相用抗体

●ビオチン標識抗体

●φ-標識抗ビオチン抗体(GABA)

●アクチベーター I

●アクチベーター II

●ブロッキング溶液 B(10x)

●希釈バッファー B (10x)

●Tween-20

●PVDF  膜プレート(2プレートフォーマットのみ)又は96ウェル透 明ポリスチレンプレート

●接着カバースリップ(2プレートフォーマットのみ)

●低蒸発蓋(2プレートフォーマットのみ) Red Spot(品番末尾 -PR2, PR5, -PR20)

●固相用抗体

●ビオチン標識抗体

●ストレプトアビジン-HRP

●AECカラーシステム(AECストック溶液  II.  基質バッファーカプセ ル)

●ブロッキング溶液 R (10x)

●希釈バッファー R (10x)

●Tween-20

●PVDF 膜プレート+蓋(2プレートフォーマットのみ)

●接着カバースリップ(2プレートフォーマットのみ)

R&D Systems社(メーカー略号:RSD)

●抗体固相済みPVDFプレート

●ビオチン標識抗体

●ストレプトアビジン-ALP

●希釈液

●洗浄液

●発色基質(BCIP/NBT)

●コントロール用抗原

MABTECH社(メーカー略号:MAB)

ELISpotPRO Kit(品番末尾 -2APT, -2APW)

●抗体固相済みPVDFプレート

●検出用ALP標識モノクローナル抗体

●基質(BCIP/NBT)

●ポジティブ コントロール ELISpotPLUS Kit (品番末尾 -PLUS)

●PVDFプレート(4枚)

●固相用モノクローナル抗体

●検出用ビオチン標識モノクローナル抗体

●酵素(ALP又はHRP)標識ストレプトアビジン

●基質(BCIP/NBT Plus 又は TMB)

●ポジティブ コントロール

ELISpotPLUS Kit (品番末尾 -4○○○-4)

●抗体固相済み白色 or 透明プレート

●検出用ビオチン標識モノクローナル抗体

●酵素(ALP又はHRP)標識ストレプトアビジン

●基質(BCIP/NBT Plus 又は TMB)

●ポジティブ コントロール ELISpot Kit (品番末尾 -2A, -2H)

●固相用モノクローナル抗体

●検出用ビオチン標識モノクローナル抗体

●酵素(ALP又はHRP)標識ストレプトアビジン

※商品によって,ここに示した構成内容と異なる場合がございます。詳細は,商品ごとにご確認ください。

測定原理 測定原理

溶液ではなく細胞を測定対象にしている点でELISAとは異なります が,重要な操作ステップの多くが類似しています。

細胞を特異的キャプチャー抗体でコートされたウェル表面上で培養し ます。細胞を除去した後,分泌された分子をELISAの要領で検出しま す。沈殿基質を用いることにより,分泌細胞が位置していた場所にスポ ットが形成されます。従ってELISpotでは,溶液中の物質の濃度の代わ りに,分泌細胞の頻度を測定します。さらに,各スポットのサイズや発 色強度が,その位置にあった細胞から分泌されたサイトカインの量を表 します。

ELISpot技術が特異的免疫応答の解析に利用される場合は,T細胞が,

抗原攻撃後の活性化プロセスの一部として,サイトカインの産生を開始 するという現象を利用します。この方法では,ある抗原に応答する能力 がある全ての細胞は,それらのサイトカインを分泌するため同定するこ とができます。

ドキュメント内 V W Q R a (ページ 183-191)