実験的研究 学 栓 質 基礎的な 新 制癌化 塞 物

金 沢 大学 十 全 医学 会 誌 第9 4巻 第2号 1 93−^{2 07} く1 98 5J

新 ^しい 制癌 化

学

^塞

栓

^物

質

^の基 礎 的 ならび に実 験 的研 究

金沢 大学医 学 部 節^血外 科 学講座 は 任^二岩 喬 即劉

酒 徳 光 明

く昭和6 0年² 月⁴ El受 付1

化学 塞 栓療 法^{に お}け る抗 腫 瘍効 果の増 強を目 的と し て， 新し^い制癌 製 剤を開 発した^． す な わ ち， 有 機相^からの相 分 離 法を応用 し^て， 5^，Fl

u o r o u r a c

ile5⁻F Ul を芯物 質， ポ リ L風 酸を被膜と す る

^マ

イ ク

^ロ

カ プセ ル化制 癌 製剤を調 製し た． 本 製剤 く5^．F U⁻_p

O

l_y L⁻1

a c

ti

c a c

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朝

i

c r o c a

p

s

ul

e

，F U ⁻P L A ⁻

m C

l は直 径約 2 0 0J^L

m

の粒 状で あ り，5⁻F U は約40％含 有し ている■ I

n u

ii

r v

k おけ る F U⁻P L A ^．

m c

か らの5⁻F U 溶 出^の 時 間経 過を み る と， 5⁻F U は徐々に放 出さ れ， 5 0 時 間 後^には最 高 値に達し た． 7 5

m

g の F U⁻P L A ⁻

m C

C5⁻ F U 3 0

m

g含 郁 ， ま た は 3 0

m

g の 5^qF U 注 射 液を，正常 家兎の大 腿 動脈よ り注入 し，経時 的^に血 中5⁻F U 濃 度を測 定し た． 両 群と も^に， 15分 後に最高 値を 示 し， F U^．P L A⁻

m C

群で は1−0 3士0^．16j^Lglg， 5⁻F U 群で は 2^■2 8士0．22_J

J

glg で あ^った． ま た， V X 2 腫瘍 移 植 家 兎^に， 同量のF U ⁻P L A^．

m c

ま た は 5⁻F U 注射 液を大_腿 動脈 内 注入 し， 腫 瘍 内5⁻F U 濃度を測 定し た． F U ⁻P L A ⁻

m C

群^では， 72 時 間後に2．1士0．5_JLgノg を 示 し た の に対し， 5⁻F U 群^では 4 時 間 後に， 0⁻6 士0^．2_i^E_glg にすぎなかった． 1 h

v

i

v o

にお け る， F U⁻P L A ⁻

m C

化 学塞 栓 療 法の抗腰 瘍効 果は著 明^であ^った． す な わ ち， 7 5

m

g の F U ⁻P L A⁻

m C

C5⁻F U 3 0

m

g 含 郁 を， V X 2 腫瘍 移 植 家 鬼^に動 脈 内 注入 し た群^の移 植2 8 日後^の腫瘍重量比 TノC は 0^■0 1％であ

っ

た．

一 方， 30

m

g の

F U⁻P L A^．

m c

く5⁻F U 1 2

m

g含 有主 3 0

m

g の 5⁻F U 注 射 液， ま た は40

m

g のポ リ L胤 酸 小球 体 C5⁻F U 非 含 郁 注入群^の TノC はt そ れ ぞ れ 2 4^．6％， 2 2^．2％お よ び72．3％で あ

っ

た^． 次い で， 正常 家 鬼の肝^に与え る F U ⁻P L A⁻

m C

肝 動 脈 塞栓 術の影 響^を， 肝 機 能を測 定し， 検 討す る と と も^に， 組織 学 軌^こも検 討し た． 肝動 脈 塞 栓術 後の血清ト ラン スア ミ ナ^ー ゼ値， す な わ ち G O T 値と G P T 値は，

一過 性^の上昇を認め， 組 織 学的^に 肝 炎類 似 変 化を認め た^． 以 上によ り， 5⁻Fl

u o r o u r a c

il 封入

^マ

イ ク

^ロ

カ プセ ル F U^．P L A^q

m c

は， 癌 腫^に対す る化学 塞 栓療 法^の塞 栓物 質と して有用^であ る と考え ら れ た．

Eey ^{w o}

^r

ds che m o e mboli

z

atio n_，V X2 tu m o r_， mic

r

o c ap^{s u}le，5⁻Flu o r o u r a cil．

癌 化学 療 法に お い て は， そ れ ぞ れ作用特 性を も^った 多く^の制 癌 剤が開 発さ れ ているにもか かわ ら ず， 腫瘍 組織^に特異的^に作用 す る， いわ ゆ る 選択 毒性が付 与さ れ た薬 剤が， 見出さ れ て^いな

^い

現状^にあ る． し た が^っ て， 制 癌 剤の全 身 的投 与 法^によ る場 合， その副 作用の た めに_， 投与量 や投与 期 間な どに著し

^い

制 約^{を う け る}

ことにな る^{． 一}方， 副 作用 を 生 じ させない程 度の投 与 量や投与 期間 で は， 制 癌 剤^の有 効腫瘍 内濃 度が得ら れ ず， 充分 な治 療効 果を期 待す ること は，一一^一般に困難^で ある． こ のよ う な癌 化 学療 法の欠点^を補^い， 制癌 剤の 腫瘍組 織 内 到達 性や保 留 時間^の増 強， 延長を図る と と も^に， 副 作用^の軽 減を目 的と して， 制 癌 剤の剤型変

1 9 3

換^{1 ト}

^軋

や投 与 方 法の改 善⁹

^卜

¹

^り

な ど， 種々 の 工夫が試^み ら れて いる情 況^にあ る^．

こ の点に着 日し て， 岩ら^{1 2 ，}， 平野ら^{1 3}

^卜

^{1 5 −}およ び平 野^{工6 I}は， ポ リ グ リ

^コ

^ー

^ル

酸と制癌 剤5^{−フ ル}オ

^ロ

ウ ラン ルC5ゼ1

u o r o u r a c

il_，5⁻F Ulを複 合させ て強靭な針と し，

腫瘍に直 接刺入 す る徐 放性 制 癌 製剤^を開発し た^． さ ら に長期 間の徐 放 性を得る た めに_， 基剤と して， ポ リ し 乳 酸^の適用^に成 功して いる^{1 7}

¹

^刷． これ ら制 癌 剤の剤型 変換， 投与 方 法^の改 善^によ る使用拡 大の ^一 環と し て，

こ の度ポ リ L守L酸を被 膜と し て内 部に5^．F U を封入 し た

^マ

イク

ロ

カプセ ルく5⁻F U⁻_P

O

l y L⁻1

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m

i

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p

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l

e

，F U⁻P L A−

^{m C}

^{l を新し く}調製し， さ ら^に A b br e viati_{o n s ニ}5 ⁻F U， 5⁻Flu o r o u r a cil_i F u P L A⁻_{m C}

， 5⁻F l

u

o

r

o u r a cil⁻_POl_y L⁻la ctic a cid⁻

mic

r

o c ap^{s u}le三G O T， gluta mic o

x

alo a c etic t

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n

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， gluta m ic p y^{r u}vic tr a n s⁻ ami _{n a s ei}l Uノ^l，inte r

n

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n

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r

iTI^C， m e a n t um O

r W

ei_ght of te st g^{r o u}p p^{e r m e a n}

1 94 洒

本 製 剤によ る化 学 塞 栓 療 法^の基 礎 的， 実 験 的研 究を 行^っ た^．

材料およ び方法 工． 実験 材 料

1 ^． F U⁻P L A ⁻

m C

の調製

F U⁻P L A⁻

m C

は，以下^に述

べ

る よ うに_，有 機 相^からの

相分離^の原理 を応用 し， 調 製し た． 基剤と し て， 分子 量 3 0，0 0 0 ^へ47，0 0 0， 融 点1 6 0^日へ16 8⁰C， 分解 点2 6 5⁰Cの ポ リ し乳 酸を 用^いた． す な わ ち， ま ず 3％^のポ リ し乳 酸ジク

ロ ロ

メタン溶 液3 0

m

l に， 封入物質と し ての5⁻ F U 結 晶0^．5 g を懸 濁せ し め た後^に， こ の懸濁液を接 辞し な が ら

n

^，へブ タンを徐^{々 に}滴 下す る と， 相分 離が お こり， ポ リ し乳 酸が

^コ

アセ ル

ベ

^ー ト滴と な^っ て5⁻ F U 結 晶^のま わ り^に吸 着す る．

n

⁻ へプ タン の量 が 30

m

l になった時 点で添 加を 止 め， 控拝しつ

つ

こ の分散 液を 水 冷す る と， さ らにポ リ し乳 酸^の 5⁻F U 結 晶^への吸着 が増 大す る． これ は 温度を変 化させる と， ポ リ し乳 酸

の溶 解度が変 化^{す ることに}起 因す る． 次^いでこ の分散 液を 10 分 間 静置し， 上 澄 を除 去す る と， その沈澱 物は ス ラリ ^ー 状を呈 し^て残存し^て

^い

る． こ の沈澱物^に，

n

^ヘ

プ タ^ン3 0 血 を加え， 激し く捷 拝す る と 沈 殿物は徐々 に小球体 状と な る^． さ らに上澄を除 去し， 再び

n ペ

プ タン30

m

l を加え る と， ポ リ L^一乳酸の被 膜が完全^に硬 化し， 5^．F U を約⁴0％ 含む F U⁻P L A ⁻

m C

が調 製さ れ る． こ の F U⁻P L A⁻

m C

を

n

^．ヘ キ サンで数回洗 浄し た 後， 風乾し， 有 機 溶媒を完全^に除去す る． 次

^い

で網 目 番 号60 号 く1 4 9ノ^上

m

うおよ び10 0 号 ほ50_ノ上

m

ン^{の メ}

ッ

シュでふるいわ け た後，12 0⁰C で 2 4時 間 乾 熱滅 菌し た．

こ の よ うに し て調 製さ れ た F U ⁻P L A⁻

m C

は粒 径

19 5^．4 士3 5^L7J

L m

く

m e a n

士S E M ，

n

^ニ10 01 ^であ り， 5⁻F U 結 晶は ポ リ L⁻乳酸 被膜で完 全に被 覆さ れ，

マ

イク

ロ

カ

プセ ル化し ているく写 真 り． ま た， 5⁻F U を含ま な^い ポ リ L^一乳 酸小球 体 くp

o

ly し1

a c

ti

c a c

id p

a r

ti

c

l

e

，P L A p

^c

l は， F U ⁻P L A−

^{m C}

^{の調製 法に}準じ て調製し た．

F U⁻P L ん

皿 C

は，

レ

シチン分 散 液^に懸 濁し た．す な わ ち，

レ

シチ^ンく旭 化成， 精製 卵 黄

^レ

^シチンコ10 0

m

g を 超 音 波分散 器 くS

m

ith K li

n e

社製， S

o n

i fi

e r

^こ

m O

d

e

l 185J を用

^い

て生理的 食塩水1 0

m

l に分 散させ， こ の分 散 液

に F U⁻P L A⁻

m C

l O O

m

g を懸 濁^{せし め た．} 2 ． 実験 動 物な ら び^に実験 腫 瘍

全 実 験を通じて日本 白 色種 家 鬼く家 兎うを使用 し た．

血中5⁻F U 濃 度^の測 定^には， 体重約2 k_{g の}雄 性 家 兎 を， 正常肝^に対す る影 響^{に つ い}ての検 討 実験^には， 体

P h

o

t

o

l． S

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g

e

l

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u o r o u r a c

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くF U^． P L A⁻

^m C

l^．

5⁻F l

u o r o u r a c

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t2 0 0_JL

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u o r o u r a c

il

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t

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t

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b

o u

t4 0 ％ i

n w e

ight b

a s

i

s

．

垂約3 kg の雄 性 家 兎を そ れ ぞ れ使用 し た． ま た 腫瘍 内5⁻F U 濃度の測定及 び抗腫瘍 実験^には，V X 2 腫瘍^{1 9 I} を 以 下^の方 法^によ り 大 腿筋 肉 内に移植し た家 兎を 用

^い

た^．す な わ ち，大_腿筋 肉 内^にV X 2 腫瘍を移 植 後4 週 間 目^の家 兎く船橋 農 場うから腫 膚を摘 出し， 内 部^{の壊 死} 部分を選 別， 除 去し た^． 固塾 腰癌は 生 理的 食塩水^に浸 し たメ

ッ

シ ュ付円筒 状 容器^の中で細切 し， 滅 菌^{ゴ ム}栓 で軽く 圧迫， 濾 過す る． 腫瘍 細 胞を含む濾 鞭は70 0

r

p

m

， 10分 間遠心 し， 沈 溶^に適宜 量^の生 理的 食塩水を

加えて， 1 X l O⁷

c e

ll

s

ノ

^m

l濃度^の腫瘍細 胞 浮 遊 液を調製 し た． こ の細胞 浮 遊 液1

m

l を体重約2 kg の雄性 家兎

の大_腿筋 肉 内^に移 植し， 1 4 日後^に腫瘍^の長 径が約3

C m

にな^っ た時 点^で実 験^に供し た．

t um O r W eigh ^{t of c o ntr ol} g^{r o}

^u

p 三P L A _pc_，p^Ol_y L ⁻1a ctic a cid _pa rticle三S E M ，Sta nd a

r

d e r

r

o

r

of

m e a n ．

新し

^い

制 癌化 学 塞 栓物 質^の基 礎 的な ら びに実 験 的研 究 _{1 9 5}

工工． 九

H

崩れ に おける5^．F IJ の遊 離試験

F U^．P L A^．

^m c

15 0

r n

g を 上 下 面に孔 径 3 0_JL

m

の メ

ッ

シ^ュ を有す る容器^に入 れ，pH 7^．4 のリン酸績 衝 液30 0

m

l中^で3 7^OC， 2 0 0

r

p

m

で捜 拝し， 経時 的に 1

m

l 宛採 取し た． 採 取 試料 中の5^tF U 濃 度^は， 分 光 光度 計く島津 社製^{， 1 50 −2 型}ユを 用^い， 2 65

n m

波長で吸光 度を測定 し た後， 標 準 検量線^によ^って算 定し た．

工工I． 血中5^一軒U 濃度の測定

血中5 ゼ U 濃 度^の測 定には12羽の正常 家 兎を使用 し た．

ベ

ントパ ル ビタ ^ール5 0

m

g の静 脈 内注 射によ る 全 身麻 酔 下^に， 右 大 腿 動脈^を露 出し， 2 0 G

^エ

ラ スタ^ー 針を末楷 側^に向け留 置し た^．

^エ

ラスタ ^ー 針を介して，

5⁻F U 3 0

^m

g を含む F U ⁻P L A⁻

m C

懸 濁液， ま た は 5⁻F U C3 0

m

gl 注 射 液を注入 し， そ れ ぞ れ F U ^．P L A⁻

m C

群，

5⁻F U 群と し た^．

両群と もに， 薬 剤 注入¹5 分，3 0 分，6 0 分およ び 12 0 分後に_， 耳 静脈よ り約2

m

l づ

つ

採血 し， 直ちに血清分 離を行^い，凍 結 保存し た^． そ れ ぞ れ の 血清試 料 約1 g を 容量 5 0

m

lの振迫 管^に秤量 し て， 1N H C1 2．O

m

l， ク

ロ ロ

ホ ル ム 20

m

l を加え 6 0 分 間振 畳 後，2 0 0 0

r

p

m

，1 5 分間遠 心し， 水 屑を分 離し た^． こ の水 層^に1 N N

a

くうH を加えて pH 7^．0に調 整し，

エ バ

ボ^{レ ー} タ^ー で水分 を 溜 去 して得ら れ た残 漆^を， 適 宜量^の リ^ン酸 緩 衝 液

くpH 7．0う^に溶 解し被 検 液と し た．

5^．F U 濃 度^の測 定は，黄 色ブ ド ウ球 菌^{2 0 9 P} 株を検 定 薗と す る薄 層カ

ッ

プ法によった^抑． 検 定 薗を 1 ^XlO⁸ノ

m

l 濃 度^に混じ た^{ミ ュ ー} ラ^ー ヒ ントン寒天培 地5

m

l

を， 直径9 0

m m

の プラスチ

ッ

ク製シ ャ ^ー

^レ

に流しこ み， 薄 層 寒天 平板を作 成し た． その薄 層平 板に， 外 径 8

m m

の

ペ

ニ シリンカ

ッ

プ を 立て， 被 検 液30 0_ノノ1 を カ

_ッ

プ内に注入 し， 4 ⁰C で⁴ 時間予備 拡 散^させた後，

3 7⁰C で 16時 間培 養し た． その結果生じ た阻止 円直 径を 測定し，5⁻F U 標 準 検量線から各被 検 体 中^の5⁻F U 濃 度 を算出し た^．

両群 間の有 意差 は C

o c

h

r a n

−^C

^{o x}

^t−t

^{e S}

^{t によ}

^っ

^て検 定し た．

IV ^． 腫瘍 内5⁻F IJ 濃 度^の測定

艦瘍 内^5，F U 濃 度の測定には 60 羽^の V X 2移 植 家 兎を使用 し た．

ペ

ント

^パ

ル ビタ ^ー

^ル

5 0

m

g の静 脈 内注 射^によ る全 身麻 酔下に， V X 2 腫瘍 移植 側大 腿動脈 を 露出し，2 0 G

ェ

ラスタ ^ー 針を末梢 側^に向け留 置し た^．

エ

ラスタ^ー 針を 介 し^て， 5−^{F U 3 0}

^m

^{g を}含む F U⁻P L A−

m c

懸濁液， ま た は 5−^{F U く3 0}

^m

gl注射 液を注入 し， そ れ ぞ れ F U ⁻P L A ⁻

m C

群， 5⁻F U 群と し た．

F U−^{P L A ．}

^{m c}

^{群で は薬 剤を注入 して 15} 分， 1 時間，

24 時間，7 2 時 間及 び12 0時 間後^に， ま た 5⁻F U 群では 薬 剤を注入 して1 5分， 1 時間， 2 時 軌 ⁴ 時 間及び 6

時 間 後^にそ れ ぞ れ腫 瘍を摘 出し，直ち^に凍結 保存し た．

腫瘍 試料^の約2 _g を容 量5 0

m

lの振返管^に秤 取し， 細 切し た後^{に 1} N E C1 4．O

m

l を加えホ モジ ナ イ ズ し た．

これ^{に ク}

^{ロ ロ}

ホ ル ム2 5

m

l を添加し，6 0分 間藻 漫 徽 2 0 00

r

p

^m

^，15 分間遠 心し た． こ こ に得ら れ た 上澄 液に 1 N N

a

O E を加えて pH 7^．0 に調 整し た後，

エ

バボ レ ^ータ ^ー く6 5⁰Cう ^で水 分を溜 去し た^． 浅 漬に酢 酸緩 衝 液 くpH 4．01 2^．O

m

l を加え捷拝し，

n

プ

ロ

パ ノ^ー ル^．

エ

^ー テル混液 く¹5こ8 5う2 0 血及び無 水硫 酸ナ ト リ ウ^ム 1．Og を加え て 6 0 分 間振生 後，2 00 0

r

p

m

， 15分 間遠心 し，

n

⁻プ

ロ

パ ノ ^ー ル．

エ

^ー テル層を分 取した． これ を

^エ

バ

ボレ^ー タ^ー で低温乾 固^{し た}後， 適 宜 量の リ^ン酸 緩 衝 液 くpH 7．OI を加え て溶解し， 被 検 液と し た．

5⁻F U 濃 度の測 定は， 前 述し た薄 層カップ法によ

っ

た．

両 群 間^の有 意差 は C

o c

h

r a n

⁻C

o x

t⁻t

e S

t によ

っ

て検 定し た^．

V^． 抗 腫 瘍実 験

V X 2移 植 家 蒐3 0 羽 を使用 し た． 移 植 後1 4 日日

に_， ベ ント

^パ

^{ル ビ}タ ^ー ル50

m

g の静 脈内 注射^{によ る}全 身麻 酔 下^にV X 2 腫瘍 移植 側 大腿 動脈を露 出し， 2 0 G

エ

ラ^スタ^ー針を介し^て薬剤を注入 し た． 使用薬剤^の種 類^によ り， 以下の5 群^に分け， 抗腫 瘍 性を検 討し た二¹¹ I 群

^ニ

F U⁻P L A⁻

m C

懸 濁液^を注入 し， 大 腿動 脈^お よ び， そ れ よ り分枝す る腫 瘍 動脈を完 全に塞 栓し た瓢 F U⁻P L A⁻

m C

の投 与量は 7 5

m

gく5⁻F U 3 0

m

g含 有l で あ り， 体重当りの5⁻F ロ 量 は 1 5

m

gノk_g である．

II群

こ

F U ⁻P L A ⁻

m C

懸濁 液を注入 し， 大腿動脈お よ び， そ れによ り分 枝す る腫 瘍 動 脈を部分的に塞 栓^{し た} 群．F U ^．P L A⁻

m C

の投与量 は 3 0

m

gく5⁻F U 1 2

m

g 含 郁

であ り， 体重当り^の5⁻F U 量は 6

m

glkg であ る．

III群

二

5⁻F U く3 0

m

gコ 注 射 液を注入 し た群． 体重当 り^{の 5}−^{F U 量 は15}

^m

gノkg であ る．

王V群

こ

P L A p

c

懸濁 液を注入 し， 大腿動脈およ び，

そ れ よ り 分枝す る腫 瘍 動脈を完 全^に塞 栓し た群． P L A P

C

の投 与 量は40

m

g であ る が，5⁻F U は含有さ れ てい

な^い．

V群

二

大艇動脈を結 染， 切離し た群 く対照群コ．

各 群^{に お}

^い

て， V X 2 腰瘍 移植14 日後，1 5 日後， 17 日後， 1 9 日後， 21 日後， 24 日後^およ び 28 日後に体 表 よ り腫瘍^の長径と短 径を測 定し， 次式^{2 1}りこよ り腫 瘍重 量 を算出し た．

腫 瘍^{重 量}く^gう^ニ 長 径く

c m

ト^ト亡短 径く

c m

り² 2

ま た， 移植2 8 日後の対照群 くV 群i Cうに対す る実 験群くI 群， II群， II僻， およ び VI群i TJの腫 瘍重量 比 TノCく％ユを求め， 各 群 間の抗 腫瘍 効 果^の対比^にお け