単個 培 養 され た 二 倍 体 性 肝 細 胞 の3′-Me-DAB に よ る試 験 管 内癌 化
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(2) 408. 白. DL‑5,. DH‑10な. 石. 昌. ど).. 之. 2.. 3′‑Me‑DABに. (図2)に 結. よ るAc2F細. 胞 の癌 化:. 示 され た様 に,最 初 か ら80γ/ml添 加 で. 果. 進 め た場 合 に は毒 性 効 果 が 著 し く,細 胞 は,途 中 で 1.. Ac2F細. 胞 の 増 殖 に 対 す る3′‑Me‑DABの. 影 響. 断 え て しま い, 5γ/mlで 進 め た もの を 利 用 し新 た に 80γ/ml処理 を進 め た.し か しこ の場 合 も最 初 か らの. に つ い て.: Ac2Fの. 増 殖 に 対 す る3′‑Me‑DABの. 効 果 を検 討. す る と,. 2日 間 処 理 で は 阻 害 は 殆 ん ど 認 め ら れ な い. が,. 間 処 理 で は80γ/mlで66%程. 4日. し た.. 0は. トロ ー ル で あ る.以. 腫 瘍 形 成 は,実 験 開始 後140日 目の3´‑Me‑DAB. 度 の 阻 害 を示. 処 理 細 胞 で認 め ら れ,以 後 低 濃度 の3´‑Me‑DABで. 溶媒 コン. 連 続 的 に処 理 され た 系,な い しは, 3′‑Me‑DABを. 濃度 とし. 含 ま な い正 常 培 地 に置 き換 え られ た系 で 認め られ た.. 溶 媒 と し て 使 用 し たDMSOの. て5γ/ml,高. 場 合 よ りは,延 長 した もの のや は り死 滅 した.. 下 の 癌 化 実 験 に は,低. 濃 度 と し て80γ/mlの3´‑Me‑DABを. 尚,高 濃度 の3′‑Me‑DABで. 使. 連 続 的 に処 理 さ れ た 系. で は,細 胞 数 の増 加 が 殆 ん ど な く,動 物 接 種 に 必要. 用 し た(図1).. な細 胞数 が か せ げ ず,実 験 は少 な くな っ て い る.本 実 験 は一 般 に腫 瘍 死 迄 観 察 せ ず,腫 瘤 を認 め た場 合, 動 物 を殺 し,病 理 組 織 学 的 に判 定 した ものが 殆 ん ど で あ る が,腫 瘍 死 迄 を見 た例 では, 288日 〜360日 程 度 の 日数 を要 して い る.腫 瘍 組 織 像 は,肝 細 胞 癌 の 像 を呈 した.又 正 常 培 地 並 びにDMSO添 対 照群 で は,. 加 培地の. 3′‑Me‑DAB処. 理 細 胞 の 殆 ん ど に癌. 化 を確 認 した 時点 の232B迄. に 腫 瘍 形 成 を認 め なか. った が,実 験 開始 後269日 の 細 胞 の 復 元 移 植 で その 1/4の 動 物 に腫 瘍 の発 生 を認 め た. 3.癌. 化 過 程 に お け る種 々 の特 性 の 変 化 につ い て. (A)形 態. 3´‑Me‑DAB処. 理 細 胞 で は,巨 大 細 胞. の 出 現 な ど コン トロー ル とは明 らか に 異 な る様 相 を 呈 して い る(写 真1, (B)染. 2).. 色体 分 析. 3′‑Me‑DAB連. 続 投 与 し た もの. に つ い て の み調 べ た結 果 が 図3で あ る.当 初(実 験 Fig.. 1. Effect of. of. Ac2F,. 3′‑Me‑DAB. on. untreated. rat. the. 開 始 後, 20日)は. proliferation. liver. cells. 低 濃度,高 濃 度 処 理 と も対 照 と殆. ん ど変 りな い が,動 物 接 種 で癌 化 を認 め た140日 近 い所(123日)で. 特 に高. 濃度 処 理 群 で二 倍 体 性 の減 少 を認 め た. (C)増 殖.多 少 のバ ラ ツ キ は あ るが, 3′‑ Me‑DABで. 増殖率 が. 高 ま っ た とい う例 は認 め な い もの の細 胞飽 和 密 度 につ い て は,若 干 の 増加 の傾 向 を示 す も の もあ る(表1). (D)血 ‑‑‑ ▲ A. Fig.. Basal rat. medium with. 2.. tumor. Culture. ,. ‑ △A. ・3′Me‑DAB rat. course. without. of. (Sμg/ml),. ‑. tumor. Ac2F. 〓 Chromosomosome. rat. liver. cells. after. analysis. 3′‑Me‑DAB. 清要 求 性.ウ. イ ル ス で トラ ンス フ ォ ー ム した 細 胞 系 な どで. ・3′Me‑DAB(80μg/ml),. treatment. トラ ンス フ ォー メー シ.
(3) 単 個 培 養 さ れ た 二倍 体 性 肝 細 胞 の3′‑Me‑DABに. よ る 試験 管 内癌 化. 409. 有 無 を検 討 した(図5).実. 験は. 細 胞 増 殖 に 対 す る 阻害 度 を対 照 と比 較 して 行 っ た.対 照 に 比 し DH‑10に3′‑Me‑DABに. 対す る. 若 干 の 耐 性 を認 め た.尚 こ れ は 我 々 の 従 来 のDAB処 DABに. 理 過 程 で,. 対 す る 耐 性 を認 め た実. 験 結 果 と合 致 す る もの で あ る. 考. 按. 培養 内 化 学 発癌 機 構 の解 明 を 目的 と して,上 皮性 で か つ正 常 核 型 を 有 す る 肝 細 胞 の長 期 間 培 養 が数 多 く試 み ら れ て い る13〜25. しか しなが ら それ らの培 養 肝 写 真1.コ. ン ト ロ ー ル(実 明 瞭 で,細. 験 開 始 後279日. 目),ク. 胞 形 態 も 均 一 で あ る.. ロー ン 様 増殖 の 周辺 部 は ×100.(位. 相 差 顕 微 鏡). 細 胞 の 多 くは ク ロー ニ ン グさ れ て い な い混 合 培 養 系 に関 す る も の で あ りー ヶの 細 胞 か ら由 来 し か つ 正 常 核 型 を有 し た正 二 倍 体 性 単 個 ク ロー ンの 培養 に 関 す る 報告 は非 常 に 少 な い.常 盤 ら は 先 に正 二 倍 体 性 を高 率 に保 有 す る単 個 ク ロ ー ン の分 離 樹立 に つ い て報 告 した .そ れ らの ク ロ ー ンは 形 態 的 に,あ る い は機 能 的 に未 熟 な肝 細 胞(幹 細 胞)9)由 来 と考 え られ た. 本研 究 で は ア ゾ色 素 に よ る 培 養 内 細 胞癌 化 機 構 の解 明 を 目的 とす る研 究 の一 環 と して,上 記 の 多数 の クロー ン の 中,成 熟 ラ ッ ト肝 に 由 来す る単 個 クロー ン. 写 真2.. DH‑10す. なわ ち高 濃 度 処 理 後 正 常 培 地 に 置 き換 え られ た もの で あ. る.巨 大 細 胞 が 認め られ,コ ン トロー ル と明 らか に 異 な る様 相 を 呈 して い る. ×100.(位 相 差 顕 微 鏡). を使 用 し, 3′‑Me‑DABに. よる. 癌 化実 験 が試 み られ た.高 濃 度 3′‑Me‑DAB処. 理 に よ ってはそ. ヨン の マ ー カー と して 利用 さ れ る こ と もあ る低 い血. の 強 い毒 性 の た め,長 時 間 の 添加 は細 胞 数 の激 減 を. 清 濃度 での 増 殖 性 につ い て,化 学 発癌 剤 で トラ シス. 来 た し,実 験 の遂 行 を 困難 に したが, 140日 の処 理 期. フ ォー ム した 系(培 養200日 前後)で の 効 果 に つ いて. 間 で低 濃 度処 理 細 胞 と共 に復 元実 験 に よ り癌 化 を 認. 検討 した(図4).細. め た.ア ゾ 色素 に よ る癌 化 は一 般 に長 期 間 の 添加 を. 胞 は対 照 とDH‑10な. らびに そ. の再 培 養 株 を使 用 した.対 照は 最 も低 濃 度 血 清 の2.5. 必要 とす る と考 え られ て い るが6),宮. %で 十 分 増 殖 可 能 で あ り,本 結 果 か らは3種 の 細 胞. ml. 系間 で の血 清 要 求 性 の 差 異 は殆 ん ど認 め られ な か っ. め た.. た.. 今 回 の結 果 は それ に比 べ る と相 当 の長 期 間処 理 に. (E)薬 剤 耐 性.高 濃 度3′‑Me‑DABで 系 の 内DH‑10に. 原 ら は7), 5γ/. l7日 又は20γ/ml 12日 の 処 理 で 細 胞 の 癌 化 を認. つ いて3′‑Me‑DABに. 処 理 され た 対 す る耐 性 の. な るが,こ. れ は140日 以 前 に復 元 実 験 を実 施 して い. な い事 や,宮. 原 らの使 用 した コ ン トロー ル の細 胞 は.
(4) 410. 白. 石. 昌. 之 DAB処. 理 では染色体数の変. 化 は 皆 無 に 近 い 事 が 明 らか と な っ た が 更 に3′‑Me‑DAB処 理 が 続 け られ,最 初 に 癌 化 を 確 認 した 前 後 の 染 色 体 分 析 の 結 果 で は,高 濃 度3′‑Me‑DAB 処 理 で二 倍 体 性 細 胞 の 減 少 及 び 四倍 体 性 附近 の 細 胞 の 増加 が 認 め られ た が,低 濃 度3′‑ Me‑DAB処. 理 で は コ ン トロ. ー ル と殆 ん ど変 らなか っ た. 星 加 に よれ ば28), in vivoで 短 期 間 ア ゾ色 素 を ドン リュ ウ 系 ラ ッ トに 投 与 した場 合,染 Fig.. 3.. Distribution. of. 3′‑Me‑DAB‑treated. chromosome. numbers. in. control. 色 体 の 変 化 が 現 われ る現 象 と. and. cells. 関 連 して い る と も考 え られ, 少 くと も3′‑Me‑DABの. Table. I.. Growth treated. characteristics. of. control. and. 場 合,. 本 実 験 に お いて も染 色 体 変 化. 3′‑Me‑DAB‑. を うけ た 細 胞 が 前 癌 か 癌 化 細. cells. 胞 で あ る可 能 性 が 強 い. 癌 化 の 爪 痕 とい う概 念 か ら 耐 性 化 と癌 化 との 関 係 が しば しば 議 論 され て い るが29〜31), 多 くの デ ー ター は 両 者 の 間 の 直 接 的 な 関 連 を否 定 して い る. 常 盤 らは,癌 化 との 直 接 的 な 関 連 は不 明 と しな が ら も ク ロ ー ン化 され た 肝 細 胞 に 対 しア ゾ 色 素 長 期 間 添加 に よ り,ア. *Mean±SD. ゾ色 素 に 対 す る細 胞 の 感 受性 が 低 下 す る 事 を見 い出 して い 染 色体 上,か. な りの変 異 を既 に起 して い る もの で あ. り,そ の 意 味 で,前 癌 状 態 に近 い細 胞 と い え,正 二. る8).今. 回 の 結 果 も 又,上. 記 の 事 実 を 支 持 し た.耐. 性 細 胞 の 出 現 に 関 し て は,次. の 様 に考 え られ るか も. 倍 体性 細 胞 を使 用 した今 回 の実 験 とは,そ の 意 義 が. 知 れ な い.す. 基 本 的 に 異 な る と考 え られ る.細 胞 の 特 性 の 変 化 の. 生 じ そ の 結 果,細. 中 で 増 殖率 に つ い て は コン トロー ル と3′‑Me‑DAB. Me‑DABの. 処 理 回数 の 異 な る細 胞 との 間 に差 は殆 ん ど見 られ な. の 代 謝 活 性 化 に 必 要 な 酵 素 成 分 の 減 少32)な ど を 来 し,. いが,細 胞飽 和 密度 は 多少 と も増 加 を示 す もの が 認. 耐 性 化 が 起 こ り,こ. め られ た.飽 和 密 度 の 増加 に 関 して は,線 維 芽 細 胞. 択 的 に 増 殖 す る.. の 悪 性 化 で は,し ば しば 認め られ る現 象 で あ るが26},. な わ ち, 3′‑Me‑DABに. よ り,変. 異が. 胞 膜 の 変 化 に よ る と 考 え ら れ る3′‑. と り こ み の 減 少,あ. る い は3′‑Me‑DAB. の 様 に して 生 じた 耐 性 細 胞 が 選. 癌 化 に 伴 な っ て 血 清 要 求 性 に 変 化 が 生 じ て ぐ る33.34),. 上 皮 細 胞 で は 悪 性 化 とは必 ず しも関 係 が な い とい う. と い う報 告 が 特 に ウ イ ル ス で トラ ン ス フ ォー ム し. 報 告 が あ る27).. た 細 胞 系 の 例 で 見 ら れ る.今. ア ゾ色 素 に よ る培 養 内癌 化 過 程 の 染 色 体 変 化 を経 時 的 に 追 跡 した デー ター は比 較 的 少 な い.今 回 の デ ー ター で は ま ず ,一 継 代 期 間(10日 間)の3′‑Me‑. 回の実験結果は コン ト. ロ ー ル と トラ ン ス フ ォ ー ム し た 細 胞 と の 間 に 顕 著 な 差 は な く,血. 清 要 求 度 の 相 違 か ら,ト. ラ ン ス フ ォー. メー シ ョ ン を 論 ず る 事 は 必 ず し も 出 来 な い と 言 え る ..
(5) 単 個 培 養 され た 二 倍 体 性 肝 細 胞 の3′‑Me‑DABに. よ る試 験 管 内 癌 化. 411. 本研 究 の特 徴 は正 二 倍体 性 を有 す る単 個 ク ロー ン が3′‑Me‑DAB処. 理 に よ って 比 較 的 早 く癌 化 を認 め. た 事 実 で あ る.正. 二 倍 体性 細 胞 の ア ゾ色 素 に よ. る癌 化 は 従 来か ら比 較 的 困 難 とさ れ て 来 た が,こ の 理 由の 一 つ と して培 養 細 胞 に おけ る 薬物 代 謝 活性 化 酵 素 の質 的 な い しは量 的低 下 が考 え ら れ る35).す な わ ち,ア ゾ色 素 の, proximate型. な い しは, ultim. ate型 へ の 活 性 化 が 不 十 分 で あ る事 に よ っ て い る と 思 わ れ る.今 回使 用 した細 胞 系 に は 多 少 な り と も上 記 の酵 素 系が 存 在 して い た可 能 性 が あ る.現 在 こ の 方 面 で の追 求 が な され つ つ あ る. 要. 約. 正 二 倍 体 性 単 個 ク ロー ン を使 用 し, 3′‑Me‑DABに よ る正 常 ラ ッ ト肝 細 胞 癌 化 の 可 能 性 を追 求 した. 1). 5γ/mlな い しは80γ/ml 3′‑Me‑DAB,. 140日 間 連. 続 処 理 に よ り,細 胞 の 癌 化 を認 め,以 降, 3′‑Me‑ DAB処. 理 後, 3′‑Me‑DABを. 含 まな い正 常 培 地 に 置. き換 え られ た系 で も癌 化 を認 め た.尚 対 照 群 で は, 3′‑Me‑DAB処 Fig.. 4.. Growth. of. treated. cells. by ous. control, and. reculturing. 点 の232日 迄 に 自然 癌 化 は,認 め な か った.. 3′‑Me‑DAB‑ those. of. concentrations. of. 2)癌. obtained. tumors. at bovine. 理 細 胞 の 殆 ん どに癌 化 を確 認 しだ 時. vari serum. 化 過 程 に お け る3′‑Me‑DAB処. 理細 胞の特. 性 の変 化 と して は,形 態 異 常 染 色 体 上 の 変 化, Me‑DABに. 3′‑. 対 す る 耐 性 の 獲得 な どが認 め られ た が,. 増 殖性,血 清 要 求 性 につ いて は対 照 群 との 差 は 認 め られ なか っ た. 謝. 辞. 稿 を終 るに あた り懇篤 な御 指導 と御校 閲 を賜った恩 師 佐藤二郎 教授,折 田薫三教授 に深甚 な る謝意 を表す とと もに,本 研究 を直接 御指導下 さいま した常盤 講師に 深謝 致 します.又 本実験 につ いて御援助 を頂 いた癌 源研 究所 病 理部 の所員 各位 に深 く感謝 します.. Fig. 5.. Comparison cells. to. of. DAB‑untreated treated. the. 3′‑Me‑DAB. cells. sensitivity between. and. 3′‑Me‑DAB‑. of 3′‑Me‑.
(6) 412. 白. 石. 昌. 之. 文 1.. Katsuta, on. 2.. H.. and. Takaoka,. and. Takaoka,. DAB-induced. Katsuta,. T.:. liver T.:. 4-dimethylaminoazobenzene 3.. Katsuta,. H.. with. Univ.. Sato,. J.:. on 5.. Takaoka,. Sato,. cells J.. Sato,. press,. Carcinogenesis. liver. and. J.:. Yabe. , T.:. rats.. Jpn.. Malignant. pp.. 335-350, Y.. cloned. Nanba,. rat. T. line. T.. clones 10.. 12.. H.. cells. 14.. of. 16.. to 18.. Coon,. epithelial Res.. 20.. Gerschenson, dexamethasone. Med.. 35,. of. 209-230,. cells. Culture,. on. 35. Tissue. liver. cells. ed.. 1965.. by. ed.. DAB. treatment. H.. and. 433-444,. culture. treated. H.. Katsuta,. five. in. tissue. culture. of. with. Katsuta,. 3•Œ-Me-DAB. 1965. liver. and. Tokyo,. cells. from. without Univ.. 3•Œ-MethylTokyo. press,. cell. Malignant. of. 67,. Sato,. lines.. lines. transformation. and. properties. of. the. 1974.. Gann and. cell. 22.. 4-dimethylaminoazobenzene. administration. liver. Oishi,. Siminovitch,. L.:. An. Stain. tech.. K. S.:. 879-883,. J.: In. from. 4-dimethylaminoazobenzene. and. (in. normal. liver. 1976.. Isolation vitro. on. characterization. of. diploid. press).. adult. rat. livers. in. vitro.. Actor. Med.. T.:. and. studies. Med.. 33,. Surface. menbrane. the. cultivation. 19-29,. of. fibroblasts. in. the. sim. 1957.. technque. 73-77,. development. on. 27,. air-drying. The. cells. P. J.. Gunn,. M.. parenchymal. J. M.. vitro. Cancer. Steinglass,. liver. cell. 139-142,. Further Exp.. for. flattering. chromosoms. in. mammali. 1958. of. normal. rat. liver. culture. for. carcinogenic. stu. 1975.. 35,. In. Y.: J.. Schaffer,. Bi.. H. G.:. and. Orenstein,. G. M.. 19.. rat. 99-109,. M.. Jpn.. rat. and. with. chemical.. rat. epithelial. of. J.. 89,. 1965. effect. liver. in. effect. Exp.. VI.. Culture,. long-term. this. of. Higgins,. Cancer. Aflatoxin. Res.. in. 28,. culture.. 340,. liver. I. B.. Williams,. 231-248,. 1965.. Carcinogenesis. Miyazaki,. newborn. vitro.. established. Weinstein,. Bausher,. J.. culture. of. Cell. culture. of. fed. Okigaki,. E.. properties. 17.. tissue. culture. J.:. in. H.. Narayan,. and. cultured. tomas.. treatment's. 1975.. 10,. S.. of. 35,. Med.. rat. Cells. inducing. Jpn.. 491-511,. Okayama.. Effect. T.. in and. Borenfreund, ation. rats. and. vitro. Karasaki, ty. 15.. from. tissue. T. In. J.:. Takaoka,. grown. Okigaki,. in. Cancer. Establishment. K. H.. dies.. Med.. 137-145,. replicate. Rothfels, an. 13.. treated. and. T.: 29,. plified. second. Med.. J. Exp.. normal. Cancer. Proliferation culture.. 35.. Sato,. Acta Sato,. adult. Tsutamune,. Katsuta,. and. Nakabayashi,. from. Okayama 11.. and. derived. Tokiwa,. in. in. cells. cells.. Tokiwa, cell. 9.. M.. liver. transformed 8.. In. J. Exp.. the. Proliferation-inducing. Jpn. of. culture.. N.. Med.. In. culture.. of. 1968.. Carcinogenesis. tramsformation. Jpn. II.. transformation. rats. Exp.. in. Effects. culture.. culture. cells. NAGISA. culture. Donryu. J.. liver. in. tissue. III.. 1968.. Miyahara, of. rat. culture. rats. in. 321-334,. tissue. normal. tissue. normal. Cytobiological. pp.. in. from. of. normal. T.:. 4-dimethyl-aminoazobenzene.. 7.. cells. after. Tokyo. DAB-feeding 6.. on. and. in. Carcinogenesis. 4-dimethylaminoazobenzene. Tokyo, 4.. Carcinogenesis. proliferating. H.. 献. Gebert,. cultures. 36,. and. Bendlich,. A.:. cuture.. J.. cells R.. triphosphate. Res.. in. Kaighn,. established. 253-263, W.. nucleoside 4491-4499,. M. E. from. and. activity. and. tumorigenici. 1976. Properties Natl, Stadler,. normal. rat. and. Cancer. liver. malignant. Inst.. 55,. U. C.:. Growth. and. chemically. tramsfom 375-384, and. 1975.. structural. induced. hepa. 1975.. I.:. A. diploid. 9 , 286-293, J. M.:. rat. liver. cell. culture.. I.. Characterization. and. sensitivity. 1974.. Long-term. cell. culture. of. adult. rat. liver. epithelial. cells.. J.. Cell. Biol.. 39,. cells.. Exp.. cell. 1974.. Clonal L. E. in. cultures. of. Andersson, a. new. rat. differentiated M.. Molson,. liver. cell. rat J. line.. and. liver Okigaki,. Science. 170,. T.:. Tyrosine. 859-861,. 29a.. transaminase 1970.. 1968. induction. by.
(7) 単 個 培 養 され た 二 倍 体 肝 細 胞 の3′‑Me‑DABに. 21. Iype,. P. T.:. normal 22.. Cultures. liver.. Williams,. G. M.. thelial-like 23.. C.:. Cell. adult. from. cells. liver. 78,. and. liver.. I.. Cell in. conditions. Establishment. of. 413. monolayer. cell. cultures. from. 1971.. Weisburger,. Exp.. transformation under. cells.. 281-288,. E. K.. rat. Neoplastic. hepatome-like. rat. Physiol.. Weisburger,. cells. Borek,. from. J.. よ る試 験 管 内癌 化. vitro. of. J. M.:. Res.. 69, of. a. nutritional. Isolation. 106-112, clone. and. long-term. cell. cultures. of. epi. 1971. adult. stress.. liver. Proc.. epithelial. Natl.. cells. Aced.. into. Sci.. U. S. A.. cell. lines. differentiated 69,. 956-959,. 1972. 24.. Diamond,. L.. ansformed 25.. 26.. Masuji,. H.. derived. from. Smith, wth. 27.. H. S. factor. Montesano, by. McFall,. R.. derivatives. Nakabayashi,. H.. normal Scher, by. rat C. D.. SV40.. R.. Vincent,. dimethylnitrosamine. 28. 星加 輝 毅:ア. Tashiro,. Y.. Cancer. liver and. and. Todaro,. L. S.. 44, and. Satatini,. 33,. Sato,. cells.. Virology. and. and. Res.. J.:. Med.. G. J.:. Induction. 359-370,. WIRL-3. rat. liver. and. their. tr. cultivation Okayama of. of. 28, cell. two. diploid. 281-293, division. epithelial. cell. lines. serum. gro. 1974. in. medium. lacking. 1971.. Tomatis,. L.:. Malignant. transformation. N-methyl-N•Œ-nitro-N-nitrosoguanidine.. in Br.. J.. vitro. Cancer. of. rat. 28,. liver. cells. 215-220,. 1973.. ゾ色 素 短 期 飼 育 ラ ッ ト肝 か ら培 養 され た5細 胞 株 の 性 状 に つ い で,岡 医誌, 90, 1978(即. ture 214, 732-734,. alterations. in the. potentials. cultured. animal cells.. E. Krim, M. and Sanders, F. K. Sternberg, S. S. and Bendich, A.: Malignant. 31. Dipaolo, J. A. and Donovan, P. J.: Properties hydrocarblons.. Proc. Natl. Aced. Sci. U.S.A. 56, 672-679, of Syrian hamster. Exp. Cell Res. 48, 361-377,. Na. cells transformed. 33. Burk, R. R.: Growth inhibitor of hamster fibroblast 34. Dulbecco, R.: Topoinhibition. and serum requirement. conversion 1966.. in presesence. of. 1967.. 32. Laishes, B. A. Roberts, E. and Farber, E.: In vitro measurement of carcinogen-resistant during hepatocarcinogenesis. Int. J. Cancer 21, 186-193, 1978.. Nature 227, 802-806,. 刷 中).. 1967.. of cells in vitro by carcinogens and viruses. carcinogenic. The 1973.. Long-term. Acta. 29. Alfred, L.J.: Chemical Carcinogen-induced 30. Borenfreund,. D.:. 2627-2636,. cells. Nature. 212, 1261-1262,. of transformed. liver cells. 1966.. and untransformed. cells.. 1970.. 35. Williams, G.M.: The use of liver epithelial Pothology, 85, 739-754, 1976.. cultures for the study of chemical carcinogenesis.. Am. J..
(8) 414. 白. Malignant. 石. 昌. transformation treated. of. with. Department Division. of. of. Surgery,. Pathology,. A. diploid. in. 140. normal. cells. clone. for. did. after. and no treated. from. tumors. were. definite and. differences. untreated-control. Orita. cells. and. was. be. in. as growth cells.. well. as. J.. in. also. The resistance. potential. and. with. became. the. serum. 3•ŒMe-DAB.. malignant.. malignant. 232nd. transformed to. School. Sato). became at. Medical. culture. 3•ŒMe-DAB. malignant.. School,. University. treated. of. 3•ŒMe-DAB. changes,. cells. Medical. Prof.. back-transplantation to. liver culture. Okayama. 80ƒÊg/ml. with on. confirmed. chromosomal. K.. liver. or. tissue. University. Institute,. rat. 5ƒÊg/ml. rat. SHIRAISHI. Prof.. treatment. produce cells. phological. tween. with. medium not. DAB-treated. However,. derived. days. in. Okayama. Cancer. (Director:. treated. diploid. 3•ŒMe-DAB. Masayuki. 之. the. stage,. effects. requirement. control when. showed. some of. were. cells. cultured. Untreated day. cells toxic. The. Cells. 3•ŒMemor. 3•ŒMe-DAB. found. be.
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