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生物資源科学専攻 植物育種科学講座 植物育種学研究室 齋藤 希

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Academic year: 2021

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北海道大学 大学院農学院 修士論文発表会,2017 年 2 月 7 日

アジアイネとアフリカ稲を用いたツングロ病の罹病性緩和に働く内在性 RTBV 様配列の作用機構の比較解析

生物資源科学専攻 植物育種科学講座 植物育種学研究室 齋藤 希

1. 背景と目的

イネツングロ病は南アジア・東南アジアで流行しているイネのウイルス病で,生育不良や葉の 黄化を起こし,収量減の大きな原因となっている。イネツングロ病の原因となる

Rice tungro bacilliform virus (RTBV)に似た配列断片(endogenous RTBV like sequence: eRTBV)が,過去に

アジアイネ

(O. sativa)のゲノムに取り込まれ100

箇所以上散在していることが明らかとなってい るが,機能の有無は不明である。一方、アフリカイネには

eRTBV

はほとんどない。アフリカイ

(O. glaberrima)の数系統はRTBV

に対し非常に脆弱であり,アジアイネはそれよりも明らか

に強いことが知られている。

eRTBV

の有無とイネツングロ病の罹病性に着目して本研究を行い,

接種試験と

siRNA

発現解析により,eRTBV とイネツングロ病の関係について調査した。

2. 方法及び材料

O. glaberrima

23

系統と,

O. sativa ssp. indica

を用いて

RTBV

に対する接種試験を行っ た。また,接種試験の結果より,

siRNA

発現解析に用いる個体を選抜し,葉から

total RNA

を 抽出した。その

total RNA

サンプルに対し,次世代シークエンサー技術による

siRNA-seq (illumina)を行い,種間および接種試験区間でsiRNA

の発現を比較した。

3. 結果と考察

アフリカの

6

か国から収集した

O. glaberrima23

系統に

RTBV

接種試験を行った結果,

O.

glaberrima

は非選択的に

RTBV

に対し脆弱であり,全ての系統は最も感受性の高い

O. sativa

TN1

系統よりも顕著に弱かった。この結果から,

eRTBV

の有無がこの病徴との関連性に意味 を持つ可能性が示された。また,アフリカイネとアジアイネに

RTBV

を感染させ,siRNA の発 現を観察すると, 両種共に, 感染個体からは

RTBV

由来の

siRNA

が大量に検出されたが,

eRTBV

siRNA

はアフリカイネでは検出されなかった。一方,アジアイネでは感染・非感染に関わら

ず恒常的に

eRTBV

からの

siRNA

の発現が見られた。

eRTBV

と相同な

siRNA

RTBV

IGR

ORFⅣ領域に対応した。O. sativa

特異的に検出された

eRTBV

由来の

siRNA

は,全リード

のうち

0.1%程度であり,IGR

領域と呼ばれる転写開始点や複製開始点を含む配列と,宿主のサ

イレンシング因子である,細胞間移行を妨害する

P4

遺伝子

ORFⅣのmRNA

転写領域を含んで いる。この結果より,二つの領域で恒常的に発現している

RTBV

と相同性の高い

siRNA

が,病 徴の緩和にはたらいている機能部位として注目する必要が示された。

4.まとめ

本研究により,化石ウイルスとして知られていた,内在性ウイルス様配列

eRTBV

が転写され

siRNA

を生産していることが初めて明らかとなった。また,ウイルスの病徴緩和にはたらく

2

つの候補を得ることができた。今後はそれらの

siRNA

産生領域に焦点を当て,内在性ウイルス

配列のツングロ病に対する機能を明らかにしたい。

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