哺 乳 動 物 の 胃 粘 膜 の 上 皮 細 胞 は,既 形 態 学 的 に,表 胞,
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(2) 662. 大. 沢. 小 微 絨 毛 を有 す る もの も認 め られ る(図1矢. 水 分 は 自 由 に させ た. こ の 絶 食 ラ ッ トを 正 常 群 と し,他. 方 こ の24時 間 絶. 水 製 薬 株 式 会 社 製)125μg/kgを 60,. な お 割 断後,イ. 腹 腔 内 注 射 後,夫. 90分 後 に エ ー テ ル 麻 酔 下 に て 開 胸 ・開 腹. し た の ち,胸. ル タ ー ル アル デ ヒ ド, 2.5%パ. ド 固 定 液,. pH. ラア ル デ ヒ. 行 な わ なか っ た標 本 の間 に は差 異 が み られ た.す な. 核 は一 般 に その 表 面 に軽 度 の凹 凸 が観 察 され る にす ぎな いが,割 断 表 面 に 軽 度 の イ オ ンエ ッチ ン グを行. 7.4カ コ ジ ー ル 酸 緩 衝 液 注 入 固 定 後,. な うと,核 の 表 面 に は 凹 凸 以 外 に直 径0.03‑0.06μ. 胃 を 摘 出 し た. SEM用. オ ン エ ッチ ン グ を行 な っ た標 本 と. わ ち,イ オ ン エ ッチ ン グ を行 な っ て な い標 本 で は,. 部 大 動 脈 よ り リ ン ゲ ル 液 に て 還 流,次. い で2%グ. 印).. また 直径 約4μ の楕 円 形 の 核,直 径 約0.6μ の 類球 型 の 糸 粒 体 が 多 数 堆 積 して 存 在 す る(図1).. 食 ラ ッ ト に 胃 液 分 泌 刺 激 剤 と し てtetragastrin(日. 々30,. 亙. 標 本 と し て は,摘. 出 し た 胃 は,上. 述 の固. 定 液 で 数 日 間 固 定 す る.固 定 し た 胃 体 部 粘 膜 は,徳 永 らの 方 法26)に 準 じ40%. dimethyl. sulfoxide. ル で 置 換 後,日. 立HCP‑1型. 臨 界 点 乾 燥 し た.な. 酸 イソア ミ. 臨 界点 乾 燥 機 を用 い て. な い が,そ の他 の胞 体 内成 分 は か な りイ オ ン エ ッチ ド され て い る(図2).な. お この イオ ンエ ッチ ン グ. 法 の有 効 性 は,主 細 胞 の 観察 に 際 して発 揮 され る. す な わ ち割 断 の み で は観 察 は 困難 で あ るが,イ オ ン. お 一 部 の 割 断 標 本 に はEIKOイ. オ ン コ ー タ ーIB‑1型. さ らに細 胞 内分 泌 細 管 お よ び そ の細 管 内 に存 在 す る 微 絨 毛 は イ オ ン エ ッチ ン グ に対 して影 響 を受 けて い. (DMSO). に 浸 し た の ち,液 化 窒 素 中 で 凍 結 し た の ち割 断 し た. 次 い で 上 昇 ア ル コ ー ル 系 列 に て 脱 水,酢. の 多数 の小 孔 す な わ ち核 孔 が 認 め られ る(図2).. で イオ ンエ ッチ ン グ を行 な っ. エ ッチ ン グ を行 な う と容 易 に認 め られ る.約4μ. の. た が,エ. ッチ ン グ を 行 な わ な か っ た 標 本 も い ず れ も,. 楕 円形 の核,そ. EIKOイ. オ ン コ ー タ ーIB‑3型. 孔 が 認 め られ る と と もに,こ の 核 を取 り囲 む か の ご. で 約20nmの. 厚 さに金. の 核 の表 面 には 凹 凸 以 外 に 多数 の核. 蒸 着 を 行 な い,電 界 放 射 型 走 査 電 子 顕 微 鏡(Hitachi,. と く,巾0.07‑0.1μ,そ. HFS‑2)(FE‑SEM)で. 造 物,す な わ ち よ く発 達 した粗 面 小 胞 体 が観察 され. 観 察 した。. ま た 走 査 電 顕 所 見 と比 較 検 討 す る 目的 で 上 述 の 固 定 切 片 を, 浄 後,同. pH 7.4の0.2Mカ. じ緩 衝 液 の2%オ. し,ア. ル コ ー ル 脱 水 の 後,. thick. sectionは. thin. sectionは. HU‑11型. コ ジー ル酸 に て数 回 洗 ス ミウ ム 酸 で1時 Epon. 812に. 間 固定. る(図3). 細 胞 内分 泌 細 管 は,割 断 され る方 向,部 位 に よ り, そ の大 き さ ・型 ・走 行 が異 な っ て観 察 され る.細 胞 内分 泌 細 管 が縦 の 方 向 に割 断 され た場 合 は,図4の. 包 埋 し た.. トル イ ジ ン ブ ル ー で 染 色 光 顕 し, 酢 酸 ウ ラ ン 鉛 に て 重 染 色 し,日. 電 子 顕 微 鏡(TEM)で. の 間 隔 が約0.02μ の層 状構. 立. ご と く,細 胞 内分 泌 細 管 は 胃腺 腔 に直 接 開 口 し,一 方 で は 胞体 内 に深 く彎 入 し細胞 基底 部 近 くま で,途 中分 岐 を しな が ら達 して い る.ま た 細 胞 内分 泌 細 管. 観 察 し た.. が 輪 切 りの方 向 に 割 断 され た 場 合 に は,図5の 第3章. 観 察 結 果. 正 常 お よ びtetragastrin刺. 激剤 投 与 後の ラッ ト. 胃 壁 細 胞 の 超 微 細 形 態,す. な わ ち 細 胞 内 分 泌 細 管,. 微 絨 毛,. ど の 所 見 は個 々 の 壁 細 胞. tubulovesicleな. ごと. く,そ の 割 断 面 は 原 則 と して 円 型 で あ る.. に よ り 多 少 の 差 異 は み ら れ た が,壁. 細 胞 の 割 断像 に. なお 細 胞 内 分 泌 細 管 は,塩 酸 分 泌 の サ イ クル 等 と 呼 応 して,そ の 大 き さや 微 絨 毛 の大 き さ等 に変 化 が み られ る よ うで あ る.す な わ ち図6で 右 下 の 細 胞 内 分 泌 細 管 は密 在 す る長 い微 絨 毛 を有 し,こ の微 絨 毛. よ る 走 査 電 顕 的 お よ び透 過 電 顕 的 所 見 に よ り平 均 的. に よ りそ の 内腔 は閉 鎖 され て い るが,中 央 の細 胞 内. と考 え ら れ る所 見 を 記 載 す る.. 分 泌 細 管 は微 絨 毛 も非 常 に少 な く,細 管腔 の 直径 も. 第1項. 広 く あた か も この 両 者 間 を分離 して いた 隔壁 が 消失. 正 常 壁 細胞 の割 断 像. 壁 細 胞 は,特 徴 的 な 細 胞 内 分 泌 細 管 の 存 在 に よ り, 他 の 胃 腺 外 分 泌 細 胞 と はFE‑SEM像. で も容 易 に 鑑. 細 胞 内 分 泌 細 管 は,そ の 内 腔 に 多 数 の 長 さ約0.6μ, の 密 在 す る 微 絨 毛 を 有 し,胞. 彎 入 し て い る(図1).一 周 辺 に は,. つ の 大 き な細 胞 内 分 泌 細 管 と して 観察. され た と推定 され る.さ. らに左 上 部 の細 胞 内分 泌 細. 管 は,数 個 の 隔 壁 に よ り分 割 され た種 々 の大 き さの. 別 し え た.. 巾 約0.2μ. した 結果,一. 方,胞. tubulovesicleに. 小 孔 が 多数 存 在 し,こ. 体 内 に深 く. 体 内 特 に分 泌 細 管. 一 致 す る と考 え ら れ る. のtubulovesicleの. 中 に は,. 細 胞 内分 泌 細 管 に分 割 され,あ た か も.「蜂 の巣 」 状 の 外 観 を呈 す る.一 般 に分 割 され た比 較 的大 きい分 泌 細 管 は微 絨 毛 も比 較 的長 い が,中 程 度 の 大 き さの 分 泌 細 管 で は微 絨 毛 の長 さ も中 程度 で あ る.さ. らに. 小 さい分 泌 細 管 で は微 絨 毛 は よ り一 層 短 か い.特 に.
(3) 正 常 お よ びtetragastrin刺. 激 後 の ラ ッ ト胃壁 細 胞 の走 査 お よ び透 過 電 子 顕 微 鏡 的 研 究. 中央 の太 矢 印 で示 す 直 径 約0.2μ の非 常 に小 さい 細 胞 内 分 泌 細管 内 に は,胞 体 内 のtubulovesicleが. そ. の中 に有 す る小 微 絨毛 と同 じ形 態 を示 す 約0.12μ の. 663. 観察 に よ り極 め て興 味 あ る所 見 が み られ た.す な わ ち,ま ず このtubulovesicleは. 細 管 腔 に直 接 開 口 し. て い る と考 え られ る像 が 観 察 され た(図7).ま. た. 極 めて 小 さい微 絨 毛 が存在 す る.ま た細 胞 内分 泌 細. このtubulovesicleの. 管 と この 細管 に隣 接 したtubulovesicleが. る 小 微 絨 毛 を有 す る もの も存 在 す る.こ の所 見 は. 融 合 し,. 相 継 いで 起 こ る融 合 膜 の 消失 に よ り,さ らに大 きい 細 胞 内 分 泌 細管 が形 成 され て い るか の ご と く観察 さ. 中 に は,細 管 腔 に直 接 突 出す. tubulovesicleのTEM像. その 内 に はcristaeが. れ た(図6矢 印). 一般 に細胞 内分 泌 細 管 腔 に は 多数 の微 絨 毛 が み ら. 観 察 で は,直 径 約0.6μ. れ る が,そ の大 き きや 方 向,分 布 密 度 等 は差 異 が み. れ る(図12).. られ る.す な わ ち一般 に長 さは約0.5‑0.6μ,そ. の巾. 第2項. 観察 され るが,割 断 像 に よ る の ほ〓 球 形 像 と して 観 察 さ. tetragastrin刺. 激後 の壁 細胞 の超 微 細. 構 造 の変 化.. は0.1‑0.2μ で あ り,先 端 に行 く程 太 くな り,あ た か も棍棒 状 を呈 す る.し か し微 絨 毛 の大 き さに はか. で も観 察 され た.. な お透 過 電 顕 的 に壁 細 胞 の糸 粒 体 は小 楕 円 形 で,. 胃 液 分 泌 刺 激剤 で あ るtetragastrin投. 与後の ラ. な りの差 異 が み られ,走 行 も必ず し も一 定 でな く,. ッ ト壁 細 胞 を経 時 的 に観 察 した が, tetragastrin投. 先 端 が屈 曲 した り,途 中 で枝 分 れ を す る微 絨 毛 も存. 与30分 後 に著 明 な変 化 が観 察 され た(図13, 14, 15).. 在 す る(図9).細. 胞 内 分 泌 細管 内 に密 在 す る微 絨. 毛 を透 過 電顕 で比 較 観 察 す る と,図8の. ご と く,一. すな わ ち,一般 に細 胞 内 分 泌 細 管 腔 の 直径 は増 し, 微 絨 毛 の長 さは約0.7μ. とや 〜長 くな る.正 常 壁 細. 定 方 向 に走 る密 在 す る微絨 毛 が観 察 され る. 一方 ,割 断 され た壁 細 胞 で 細胞 内分 泌 細 管 の 周辺. 胞 の胞 体 内 に散 在 して い たtubulovesicleは,細. に は,通 常 の 細胞 内分 泌 細 管 腔 に み られ る微 絨毛 よ. 常 に増 加 す る.ま た そ の 大 きさ は, 0.04μ よ り0.2μ. りや〓 小 さい微 絨 毛 が,密 に 堆積 して い る よ うな像. 位 で,型. が観 察 され る こ とが あ る.す な わ ち図10を み る と,. られ る(図14)‑一. 細 胞 内 分 泌 細 管周 辺 に は長 さ約0.6μ,巾0.05μ. 胞体 内 の増 加 したtubulovesicleは,直. の. や〓 小 さい微 絨 毛 様 構 造 物 が密 に配 列,堆 積 し,そ の先 端 は丸 味 を帯 び て い る像 が 観察 され る.ま た こ. 胞. 内分 泌 細 管 お よ び糸 粒 体 周 辺 の胞 体 内 に その 数 が非. も球 型 に近 い もの や全 く不 規 則 な もの もみ 方,細. 胞 内分 泌細管 腔に接 した 接細管腔 に. 開 口 して い る像 が認 め られ る(図14). またtetragastrin刺. 激 後30分 の 壁 細 胞 を強 拡 大. の微 絨 毛 様 構 造 物 の間 に は間 隙 も存 在 す る.図10の. で観 察 す る と, tetragastrin刺. ご と く観 察 され る細 胞 内分 泌 細 管周 辺 の微 絨 毛 様 構. sicleの 膜 の 動 態 と考 え られ る興 味 あ る所 見 が え ら. 造 物 を水 平 に割 断 し,そ の 割 断 表 面 を観 察 した と考. れ た(図15).す. え られ る像 が 図11で あ る.す なわ ち図11の 右 下 方 に. に接 近 が起 こ り,そ の 結 果 両 者 の 膜 の 融 合 す な わ ち. は,通 常 の 細 胞 内分 泌 細 管 と微 絨 毛 が観 察 され るが,. 膜 の 五 層 形 成(図15太. その周 辺 の胞 体 内 に は直 径 が約0.04‑0.08μ. を経 過 して 融 合 膜 の 消失 の 結 果 起 こ る膜 の 三層 形 成. の半 球. 形 の顆 粒 状 構 造 物 が密 に詰 ま った か の ご と く観 察 さ. (図15小 矢 印)を. 激 に よ るtubulove. な わ ち,隣 接 したtubulovesicle間. 矢 印),あ. るい は,こ の過 程. な して い る と推 察 され る.こ れ ら. れ るが,こ の 顆 粒 状構 造 物 は 図10で 示 した微 絨 毛 様. 膜 の 融 合,相 継 ぐ膜 の消 失 の過 程 の結 果,さ. 構造 物 が水 平 に割断 され た結 果 観 察 され た もの と推. 層 大 き くな ったtubulovesicleや,こ. 察 され る.ま た図11の 矢 印 で示 す 小 孔 は,図10で. らに一. の融 合 膜 が 消. 示. 失 に は い た らず 途 中 で 回転 様 屈 曲 を お こ した りす る. した微 絨 毛 構 造 物 の 間 隙 に一 致 す る所 見 と考 え られ. の も観 察 され る.た だ この所 見 を解 釈 す る場 合 これ. る.こ の こ とよ り,細 胞 内分 泌 細 管 の 周辺 には,細. らのFE‑SEMの. 胞 内分 泌 細 管 腔 に突 出 す る微 絨 毛 に生 長 す る と考 え. 施 行 して お り,こ の蒸 着 膜 の 表 面 を観察 して い る こ. 試 料 表 面 は約20nm厚. の 金 蒸着 を. られ る正 常 微 絨 毛 よ りや1細 い小 微 絨 毛 が,比 較 的. とを忘 れ て は な る まい.し か し,普 通,膜 の厚 さ は. 密 に 堆積 して 存 在 して い る と推 察 され る. 一方 ,胞 体 内 特 に細 胞 内 分 泌 細 管 周 辺 に直 径 約. 約5nmと. 0.05μ の多 数 の 小 孔 が み られ る が(図1),そ. astrin刺 激 を行 な って な い対 照 標 本 で は,膜 の融 合. の型,. され,蒸 着 膜 が20nmと. は平 均 膜 の厚 きが25nmで. す る と,本 研究 で. 観 察 され た点 や, tetrag. 大 き さ,分 布 状 態 か らして透 過電 顕 で報 告 され て い. や 消失 所 見 が乏 し い点 を考 慮 す る と,一 応FE‑SEM. るtubulovesicleに. 一 致 す る と考 え られ る.さ て こ. 像 を通 して 膜 の 融 合 ・消 失 を強 く推 定 す る こ とは可. のtubulovesicleに. つ い て, FE‑SEMの. 能 で あ ろ う.ま た,こ の拡 大 したtubulovesicleに. 三 次元的.
(4) 664. 大. は 各 々0.08‑0.12μ. の 小 微 絨 毛 が 存 在 し,こ. 絨 毛 膜 とtubulovesicle膜. 沢. の 小微. との 間 に は直 接連 続 性 が. 上 記 の ご と く, FE‑SEM像. の み で は,膜. の 解 釈 は 不 十 分 で あ る の で 同 時 期 のTEM像 な わ ち, tetragastrin刺. 激30分. を透 過 電 顕 で 比 較 検 討 して み る に,走 同 様,特. 融 合,す. を 観察. 合膜 の消 失 の結 果, tubulovesic1eと. 後 の 壁 細胞. 査電 顕 所 見 と. 数 や 大 き さ が 増 して い る(図16).さ. 図15で. 膜は. 接 近 ・融 合 す るよ うに な る.そ して 次 第 にtubulo. の融 合. み ら れ たtubulovesicle膜. と,そ. な わ ち五 層 膜 を形 成 す る.続 い て起 こる融. ら に,. の中に存す. 細胞 内分 泌細. 管 膜 との間 に三 層 膜 を形 成 し,次 い で起 こ る膜 の消 失 の 結 果, tubulovesicleは し, tubulovesicleが. に 細 胞 内 分 泌 細 管 周 辺 に 著 明 にtubulove. sicleの. 絨 毛 が 出現 し,ま た隣 接 したtubulovesicleの. vesicleと 細 胞 内 分 泌 細 管 膜 が 接 近 し,そ の 結 果 膜. 存 在 す る.. し た.す. 亙. 細 胞 内 分 泌 細 管 に開 口. 小 微 絨 毛 を有 して い る場 合 に. は分 泌 細 管 内 に新 しい微 絨 毛 が 出現 し,微 絨 毛 を有 しな いtubulovesicleが. 分 泌 細 管 に開 口 した場 合 に. る 小 微 絨 毛 膜 の 直 接 の 膜 の 連 続 性 を透 過 電 顕 で 観 察. は,分 泌 細 管 縁 の切 れ込 み と して観 察 され る.さ. し て も,図17の. に胞 体 内 で数 個 のtubulovesicleが. ご と く,明. らか に 膜 の 連 続 性 が 証 明. 大 き く複 雑 な外 観 を呈 す る よ うに な っ たtubulove. さ れ た. 刺 激30分. 後 の 壁 細 胞 の 胞 体 内 に,既. っ たtubulovesicleに (V1とV2)が (図18).す とV3で. に 大 き くな. 合 し て い る像 が 観 察 さ れ る. 方V2とV3で. の 間 に は,お. 示 すtubulovesicle間. で は,膜. わ ゆ るunit. を形 成 し て い る か の ご と く観 察 さ れ る.こ. た,細. 第4章. の融 合. membrane の隣接膜. 出 法 には,組 織 を安 全 カ ミソ リの刃 等 で 切断 す る方. の結果隣. い て 起 こ る 融 合 膜 の 消 失,. る 場 合,. "central. 継 ぐ膜 の 消 失 に よ り開 口 す. knob"を. 示 す こ とが あ る こ と も. この う ち,固 定 組 織 を カ ミソ リの刃 で 切 った 切断. が 得 られ難 い 欠 点 が あ り,ま た 固定 試 料 を折 っ た り,. 官 の 境 界 面 や 膜 面 に沿 っ た面 が 得 られ 易 い長 所 が あ る. ま た割 断 法 と して 凍 結 割 断 法 が 開 発 さ れ て い る. 観 察 され た(図20). ,胞. ッチ ン グ法 の. 三 つ が あ る.. ひ き さい た りす る方 法 は,細 胞 あ る い は細 胞 内小 器. 胞 内 分 泌 細 管 と こ れ に 隣 接 す るtubuloves 間 の 膜 の 融 合,相. 法,種 々 な 条件 下 で 割断 す る方 法,エ. 面 の 構 造 は,組 織 細 胞 の破 壊 が 大 き く良 好 な 観察 面. のtubulovesicle. は 細 胞 内 分 泌 細 管 腔 に 直 接 開 口 す る よ う に な る(図 19).細. 細胞 の 内部 の 立体 構 造 の 観察 へ と進 ん で きた.そ の た め に工夫 きれ た実 質 性臓 器 内 部,細 胞 内構 造 の剖. さ ら に 起 こ る膜 の 消 失 の 結 果,こ. icleの. 走 査 電 子 顕 微 鏡 に よ る組 織 の観 察 は,初 期 の段 階. 形 成 さ れ る もの と 推 定 さ. 分 泌 細 管 に 接 近 し,そ. 接 膜 の 融 合 が 起 こ り,続. 察. ら. 胞 内分 泌 細 管 周 辺 の 胞 体 内 に存 在 す. るtubulovesicleは. 考. で は主 に表 面構 造 に限 られ て い た が,次 第 に組 織 や. ら に 相 継 ぐ膜 の 消 失 の 結 果,さ. に 大 き なtubulovesicleが れ る.ま. 互. な わ ち 五 層 形 成 を な し,他. ・消 失 の 結 果 三 層 形 成,い. の 融 合 ・消 失,さ. 分泌 細 管 は複 雑 な切 れ込 み を有 した細 胞 内分 泌 細 管 と して観 察 され る.. な わ ち, V1で 示 す 小 さ なtubulovesicle. 示 す 大 き なtubulovesicleと. sicleが 細 胞 内 分 泌 細 管 に 開 口 した場 合 に は,既 存 の分 泌 細 管 よ り も一 層 大 き く,微 絨 毛 の数 も増 し,. 二 つ の 小 さ なtubulovesicle. 接 近,融. い に 接 近 し膜 の 融 合,す. 一方. ら. 融 合 し た結 果,. 体 内 の 糸 粒 体 の 大 き さ は,約0.6μ. と正. が,こ の 方 法 で は,凍 結 乾 燥 後 の観 察 面 の氷 晶 形 成. 常 群 と 比 較 し て 大 き さ ・型 の 変 化 が 認 め ら れ な い.. に よ る障 害 が 問 題 とな って くる.こ の た め,田 中24). こ の 所 見 よ りtetragastrin投. はCemedine. 与 に よ り糸 粒 体 は 影. 液 分 泌 刺 激 剤tetragastrin投. 細 胞 の 変 化 に つ き述 べ た が, tetragastrin投. 与 後 の壁 与後 の. ラ ッ ト壁 細 胞 の 割 断 像 に よ る走 査 電 顕 的 観 察 と透 過 電 顕 的 観 察 に よ り得 ら れ た 所 見 を 模 式 図 で 示 す と 図 22の ご と くで あ る.す. な わ ち,壁. 在 す るtubulovesicleは,胃. 細 胞 の胞 体 内 に存. 液 分 泌 刺 激 が 加 わ る と,. 細 胞 内 分 泌 細 管 膜 に 移 行 し始 め る と同 時 にtubulo vesicleは. 大 き く な り,そ. resin)を. 利 用 す る凍 結. 樹 脂 割 断 に よ り犬 膵 臓 を割 断,観 察 し,ま た最 近 に. 響 を 受 け な い と 推 定 さ れ る(図13). 以 上,胃. 1500 (epoxy. の 中 の あ る もの に は 小 微. な り室 温 で行 な え るス チ レ ン樹 脂割 断 法25)を報 告 し て い る.一 方,徳 sulfoxide. 永 ら26)は,凍 結 防 止 剤dimethyl. (DMSO)を. 使 用 して の 凍 結 割 断 法 に よ. り,ラ ッ トの腎 臓 と ヒ ト脾 臓 を割 断 し,観 察 し た結 果, DMSOを. 用 い て の割 断 は,細 胞 表 面 や 細 胞 内. の膜 系 に沿 って 割 れ る傾 向 が 強 い と報 告 して い る. そ こで本 研 究 で は,徳 永 ら26)によ る凍 結 割 断 法 を 用 い て,ラ. ッ ト胃 粘 膜 を割 断 し,外 分 泌 細 胞 の一 つ.
(5) 正常 お よ びtetragastrin刺. 激 後 の ラ ッ ト胃壁 細 胞 の 走 査 お よ び透 過 電 子 顕 微 鏡 的 研 究. で あ る壁 細 胞 の三 次元 的 な微 細 構 造 と, tubuloves. 665. れ は 細 胞 間 質 と同 じ電 子 密 度 を有 し, unit. membrane. icle,微 絨 毛,細 胞 内 分 泌細 管 の関 係 につ いて,特. で 囲 ま れ て い る と報 告 し て い る が,お. に 胃液 分泌 刺 激 剤 投与 後 の変 化 等 につ き,電 界放 射. 小 微 絨 毛 の 横 断 像 を 観 察 し た もの と推 定 され,本. 型 走 査電 顕 を用 い高倍 率 で観 察 し,ま た透 過 電 顕 に. 究 のTEM像. よ る観察 も同時 に行 な った.. で も,同. ら れ る 像 や,ま. なお 一部 の標 本 には イオ ンエ ッチ ン グ を行 な った 後 観 察 した が,壁 細胞 の 割断 面 に弱 い イ オ ンエ ッチ ング を行 な う と,イ オ ンエ ッチ ン グ を行 な わ な い 場 合 に凹 凸 の み観 察 され た核 の表 面 に多 数 の 核 孔,あ るい は イオ ン エ ッチ ン グ施 行 例 の み主 細 胞 が 観察 さ れ る よ うにな る.こ れ は イ オ ン衝 撃 に よ り試 料 の局. そ ら く こ れ は, 研. 様 の 小 微 絨 毛 の 横 断 像 と考 え. た 縦 断 と考 え ら れ る像(図17)も. 察 さ れ た.な. 観. お 今 回 の 走 査 電 顕 的 観 察 に よ り, tub. ulovesicle中. の小 微 絨 毛 膜 はtubulovesicle膜. 続 性 を 有 し(図15),透 ulovesicleの. と連. 過 電 顕 像(TEM)で. もtub. 中 に 存 在 す る 小 微 絨 毛 は,お. 互 いの 膜. の 連 続 性 を 有 し て い る こ と が 確 認 さ れ た(図17). Ito. &. Schofield13)に. 所 的 な緻密 性 や物 質 構 成 の差 に よ る もの で あ り32),細. あ るpentagastrin腹. 胞 内の 膜 構造 が イ オ ンエ ッチ ン グ に対 して比 較 的 抵. 以 内 に 起 こ り2時. よ る と,胃. 液 分 泌 刺 激剤 で. 腔 内 注 射 後,そ 間 持 続 し,細. の 影 響 は40分. 胞 形 質 内 のtubule. 抗 が強 く,細 胞 質 の 方 は抵抗 が弱 くエ ッチ ン グ され. は 完 全 に,あ. や す い た めで あ る33)と考 え られ る.. 細 管 は 一 般 に 著 明 に 長 くな っ た 微 絨 毛 で 被 わ れ て い. 壁 細 胞 の最 も大 きな形 態学 的特 徴 は,胞 体 内 に 深 く入 りこん で い る細 胞 内 分 泌細 管 と され て い る.こ. る い は 殆 ど完 全 に 消 失 し,細. る と述 べ て い る.著 与30分. 後 で は,. の 細胞 内分 泌 細管 を走 査 電 顕 で三 次 元 的 に観察 す る. が,. と,細 管 腔 に突 出 した密 在 す る微 絨 毛 を有 し,胞 体. る こ と よ り,マ. 内 に深 く,時 に細 胞 底 部 近 くま で,時 に分 岐 しな が. に し て も,瀬. &. Fawcett34)は,透. 者 の 研 究 で は, tetragastrin投. tubulovesicleの. 増 加 が 観 察 され た. 60分 後 で はtubulovesicleが. 減 少 して い. ウ ス と ラ ッ トの 実 験 動 物 の 差 が あ る. 尾 ら95)に よ りHeidenhain. pouch. に お け るpentagastrinとtetragastrinの. ら彎 入 し,一 方 で は 胃腺 腔 に直 接開 口す る. Bloom. 45分,. 胞内分泌. 過 電 顕 的 観察 に よ り,. 実 験 に よ る酸 分 泌 量 には差 が み られ な い と報告 して. この細 胞 内分 泌 細管 周 辺 の 胞体 内 に小 さい渦 巻形 の. い る こ とか ら,刺. tubuleの 存 在 を報告 して い るが,こ れ はItoら13)の. わ ち 投 与 し ば ら く はtubulovesicleが. 報 告 したtubulovesicleに. 相 当 す る.走 査 電 顕 的 に. そ の 後 は 次 第 に 減 少 す る もの と 推 定 さ れ た.. は,こ のtubulovesicleは. 円形 や不 整形 の 直径 約. 0.05aか. ら0.1μ の小 孔 と して胞 体 内,特 に細 胞 内. dog. 連 続 投与. 激 剤 投 与 に よ る 時 間 的 影 響,す. tubulovesicleと. な. 増 加 す る が,. 細 胞 内 分 泌 細 管 の 関 係 は,現. な お 不 明 で あ る が,特. 在. に細 胞 の 塩 酸 分 泌 機 能 に お け. 分 泌 細管 周 囲 に多 く存 在 して いた.本 研 究 の走 査 電. る両 者 の 関 係 は 重 要 な 問 題 で あ り,そ. の解明の ため. 顕 的 観 察 で は,胃 液分 泌 刺 激剤 を 用 い な い正 常 の 壁. に細 胞 内 分 泌 細 管 とtubulovesicleの. 関 係,膜. 細 胞 で もtubulovesicleが. 続 性 に つ い て の 研 究 が 種 々 な され て い る.. 細 胞 内 分 泌 細管 腔 に直 接. 開 口 して い る像 が少 数 認 め られ た が,こ の問 題 は後 で詳述 す る.. Leeson17)は dy)に. な お,壁 細 胞 の走 査 電 顕 的 観 察 で極 め て注 目す べ き所 見 は, tubulovesicle内. に しば しば大 き さは細. 胞 内 分泌 細 管 中 の微 絨 毛 に比 較 す る と小 さい が,形 態 は 全 く同様 の 小微 絨 毛 の 出現 が 観 察 され た こ とで. 凍 結 エ ッチ ン グ 法(freeze‑etch. よ り, tubulovesicleの. 由 来 し,微. 原 形 質 膜 のin. 絨 毛 は 細 胞 形 質 のcoreを. す る 原 形 質 膜 の 管 状 のeversionで さ ら にtubulovesicleは. stu. 膜 面 は微 絨 毛 の 膜 面. の 逆 転 で あ る と し, tubulovesicleは versionに. の連. 原 形 質 膜 由 来 の もの で あ り,. あ る.一 般 に この小 微 絨 毛 の 出現 は,胃 液 分 泌休 止. 細 管 内 の 微 絨 毛 と 細 胞 形 質 内 のtubulovesicleの. 期 で は散 発 的 で あ るが,特 に 胃液 分 泌刺 激 剤 で あ る. 体 の 膜 の 表 面 は,. tetragastrin投 与30分 後 で は, tubulovesicleの. 数,. 範 な 表 面 で あ る と報 告 して い る.さ ら にLeeson16)は,. 大 き さが増 しその 中 の 小 微 絨 毛 の 出 現 頻 度 も増 す. 液 体 窒 素 を 用 い た 急 速 凍 結 に よ り分 泌 細 管 とtubu. (図15).こ. のtubulovesicle中. の 観察 は,今 ま でのTEMの. の小微 絨 毛の出現. 論 文 で は全 く記 載 され. lovesicleの. ion‑exchangeの. 原 形 質 膜 由 来 で あ り,壁. の こ とは 細 胞 の分. て お らず,今 回 の走 査 電 顕 に よ り初 め て 明 らか とな. 泌 サ イ ク ル 時tubulovesicleと. った もの で あ る,た だRubinら3)は,ヒ. が 起 き て い る こ と を 確 証 し た と述 べ て い る.ま. のtubulovesicleの. ト胃壁 細 胞. 中 に小 顆 粒 の 存 在 を観 察 し,こ. Helander. &. Hirschowitz8)は,透. 全. た め に 必 要 な広. 膜 の 間 の 連 続 性 を 指 摘 し,こ. tubulovesicleが. 有. あ る と報 告 し,. 分 泌 細 管 の膜 の 流動 た. 過 電 顕 的 に犬 を.
(6) 666. 大. 使 用 しhistamine刺. 沢. 激 に よ り, tubulovesicleの. 膜. は 分 泌 細 管 膜 に 結 合 さ れ る こ と を 観 察 し,酸. 分泌は. 亙 て, Palade. & Bruns42)は,ラ. ッ ト舌 の毛 細 血 管 お. よ び リン パ細 管 内皮 細 胞 の膜 の融 合 等 に関 して報 告. 主 に 分 泌 細管 表 面 で行 な われ るだ ろ う と報 告 して い. して い る.す な わ ち,形 質 内 空 胞 膜 とplasmalemma. る.. の膜 融 合(五 層 膜),二. T. Forte. &. J. Forte36)は,組. 織 化 学 的研 究 よ. 細 胞 内分 泌 細 管 表 面 の形 質. 消 失(三 層 膜 形 成,す. れ ら両 者 の 膜 の 間 に は 移 行. brane),さ. り細 胞 形 質 内tubuleと 膜 に は 類 似 性 が あ り,こ. &. unit mem. 胞 内 分 泌 細管 膜 と. の 間 の拡 散 す る障 壁 を取 り除 くた め に層 の 破 裂 が起. 膜 の 連 続 性 を見 つ け るた め. こ り,こ の よ うな機 転 に よ り,空 胞 内容 の 放 出が 行. Schofield13)は,細. 形 質 内tubulovesicleの にlanthanumあ. な わ ちasingle. らに起 こる膜 の消 失 に よ り一 層 膜 に囲 ま. れ た空 胞 を形 成 す る.次 い で空 胞 内容 と外 面 の媒質. が あ る と述 べ て い る. ま たIto. つ の 融 合 膜 の 連 続 す る膜 の. る い はperoxidaseを. 用 い て の実 験. さ ら に 凍 結 割 断 に よ るreplica法. で 研 究 し た が,こ. の 連 続 性 は 明 ら か に され え な か っ た.ま lanthanumをtracerと. し て 用 い,細. た彼 等 は. 胞 基底 部 層 と. な わ れ る と推 察 す る と して い る. 本 研 究 のSEM像 は約25nmで 5nmと. で は, tubulovesicle膜. あ り, DeRobertisら47)は. の厚 さ. 膜 の 厚 さを約. して い るが,こ れ は走 査 電 顕 観 察 標 本 の導 電. 同 様 に 細 胞 内 分 泌 細 管 腔 に 存 在 す る微 絨 毛 間 隙 に. 性 のた めに標 本 表 面 に約20nmの. lanthanumが. め,そ の厚 さが追 加 きれ た た め と考 え られ る. Hel. icleの &. 侵 入 す る こ と を示 し た が, tubuloves. 中 に 入 る こ と は 証 明 で き な か っ た. T. Forte. J. Forte37)に. 表 面,あ. よ れ ば, lanthanumは. 壁 細 胞 の管 腔. る い は 浅 く表 面 と 交 通 の あ る陥 凹 に お い て. の み 観 察 さ れ る と報 告 し て い る. Karpinski,. Mueller. horseradish. &. lanthanum,. peroxidaseをtracerと. して用 い た. 中 に は 観 察 され ず,ま. たtubule. と分 泌細 管 膜 とは直. 接 の 連 続 は な い こ と を 示 唆 す る と報 告 し て い る. さ ら にSedar39))は,両 tracerは. 生 動 物 の 壁 細 胞 に お い て, 胃 腺 腔 か らsmooth. る い はvesicotubular ず し もsmooth. surfaced. systemに. surfaced. tubuleは. らに. reticulumか 泌期 間 中 は. も っ たtubulovesicle膜. plasmalemmaか. のever 泌休 止 期 では. ら起 こ るtubulovesicleの. 再 生 で. 細 胞 内 分 泌 細 管 との 関係. に つ き過 去 の 業 績 を 述 べ た が,何. れ の研 究 もこ の問. 題 に つ い て 決 定 的 な 結 論 を う る に は 至 っ て な い. 一方. ,電. は融 合 を起 こ し,そ の 結 果 厚 さ約50nmの. 顕 的 に膜 の 融 合 に つ い て は,既. 融 合 膜,す. な わ ち膜 の 五 層 形 成 が な され て い る こ とを強 く示 唆. させ る像 が 観 察 され た(図15).上 は, TEMで. もtubulovesicle膜. に諸 家 に. 述 の 同様 の過 程 が細 胞 内分 泌 細 管. 膜 に明 らか に融 合 し,次 い で この融 合 膜 の 消失 が起 こっ て い る像 も認 め られ た(図19).こ 接 近,融 合,消 失 の過 程 は, Palade. の隣 接 膜の & Bruns42)に. よ り報 告 され た と同 じ過 程 で あ る.し か し既 述 の ご と く,観 察 標 本 表 面 に 約20nm厚 て い るた め,膜 の 五層 形 成,あ. あ る と し て い る. tubulovesicleと. 厚 さの膜 を. 互 い に接 近 し,つ い に. な わ ち三 層 膜 に 移 行 して い る と推 定. お け るendoplasmic. し て 融 合 で あ り,分. す な わ ち,二 つ の 隣 接 した約25nmの 有 す るtubulovesicleは,お. る い は この 融 合 膜 の消 失 の結 果, unit. plasmalemmaに. あ り,そ. して これ ら融 合. 膜 の相 継 ぐ消 失 が立 体 的 に認 め られ た(図15).. membrane,す. tubulovesicleが. plasmalemmaを. 膜 の細 胞 内分 泌 細 管 腔 へ の 融 合,そ. す る所 見,あ. 気 細 胞 化 学 的 に,. 否 か の 問 題 に つ い て 研 究 し た 結 果,分. 激30分 後. 互 間 の 膜 融 合, tubulovesicle. 細胞 の. Rubin40)は,電. 以 上,. 激 後 の膜 移 動 に関 して の 機 構 を推 定 させ る結 果 が 観. 侵入 す. 胃 腺 腔 表 面 と は 連 続 性 が な い と し て い る.さ. sionで. 高 分 解 能 に よ りtubulo. の 三次 元 的構 造,さ らにtetragastrin刺. に, tubulovesicle相. か し こ れ らの 物 質 は,. を 用 い て の 研 究 で は, tubule膜. tubule,あ. vesicle膜. 察 され た.す な わ ち,特 にtetragastrin刺. 細 胞 形 質 内tubuleの. る が,必. 膜 の厚 さは概 略 同 じで あ る. と報 告 して い る.. 存 在 す る が,し. 膜 と形 質 膜 は 形 態 的 に 類 似 し て い る が,こ のtracer. peroxidase. 細 管 とtubulovesicleの. 腺 腔 と壁 細 胞 の細 胞 内分 泌 細管 腔 に. 研 究 の 結 果,胃 こ のtracerが. ander48)に よ る と,マ ウス の 壁 細 胞 で は細 胞 内 分 泌. 本 研 究 で は, FE‑SEMの. Ito38)は,. 金 蒸 着 を施 行 したた. の 金 蒸着 を施 行 し る い は三 層 形 成 を な. して い る とい う確 実 な情 報 所 見 を得 る こ とは走 査 電 顕 下 で は 困難 な 問 題 とな り,透 過 電 顕 所 見 との対 比 等 が必 要 とな って く る. 本 研 究 の透 過 電 顕 お よ び走 査 電 顕 所 見 を総 合 す る. よ り報 告 さ れ て い る41)‑46).この う ち, D. Lagunoff44). と, tetragastrin刺. は,ラ. よ び融 合膜 の相 継 ぐ消 失 の過 程 は,形 質 内 の 小 さ い. ッ トのmast. cellの. 分 泌時 の膜 の融 合 に つ い. 激 に よ り隣 接膜 の 接近 ・融 合 お.
(7) 正 常 お よ びtetragastrin刺 tubulovesicle,あ の 融 合,次. る い は 小 さ いtubulovesicle同. 士. い で 起 こ る 融 合 膜 の 相 継 ぐ消 失 の 結 果 大. き く な っ たtubulovesicleが,細 接 近,融. 激 後 の ラ ッ ト胃壁 細 胞 の走 査 お よ び透 過 電 子 顕 微 鏡 的 研究. 合 し,次. 失 が 起 こ り,そ. 胞 内分 泌 細 管 膜 に. い で 融 合 膜 の 消 失,相 の 結 果,. 継 ぐ膜 の 消. tubulovesicleは. 泌 細 管 と連 続 性 を 有 し,新. 細胞 内 分. しい微 絨 毛 を生 ず る よ う. 激 後 の ラ ッ ト胃 壁 細. 胞 を凍 結 割 断 し,三 次元 的 微 細 構 造 を電 界放 射 型走 査 電 子 顕 微 鏡 に よ り観察し,ま. た併 せ て透 過 電 子顕. 微 鏡 で観察 し,次 の 結 果 を えた. 1). 正 常 ラ ッ ト胃 壁 細 胞 は,楕 円形 の核,多 数 の. 球 型 の 堆 積 す る糸粒 体 の ほ か,胞 体 内 に 深 く彎 入 す る細 胞 内分 泌 細 管 が 存在 し,こ の細 胞 内分 泌 細 管 腔. に な る と推 察 さ れ た. Ito &. 正 常 お よ びtetragastrin刺. 667. Schofield13)は,. tracerと. に は,直 径 約0.6μ,巾0.2μ. し てlanthanum. の 多数 の棍 棒 状 の微 絨. を使 用 して の実 験 で, lanthanumがtubulovesicular. 毛 が密 在 す る.塩 酸 分 泌 の サ イ クル等 に 呼応 して,. systemに. 細 胞 内 分 泌細 管 の大 き さや微 絨 毛 の大 き さ等 が 異 に. 侵 入 し な か っ た と報 告 して い る が, tubu. lovesicleが. 細 胞 内 分 泌細 管 に開 口す る とい う著者. の 結 果 に 矛 盾 す る が,こ. の 差 異 は,細. 胞 内 分 泌細 管. と膜 融 合 の 状 態 に あ るtubulovesicleへ numの. 侵 入 は,な. 止 さ れ る か,融. お 残 存 し て い る 膜 に よ り侵 入 を 防. 中 に 侵 入 す る.し. か し,こ. 細 胞 内 分 泌 細 管 周 辺 の 胞 体 内 に は,直 径 約. は,も. は やtubulovesicle腔. し て み な さ れ ず,細. と. 胞 内分 泌 細 管 の 一 部 と して み な. 細 胞 内分. には,出 現 す る頻 度 は低 い が,小 微 絨毛 の 出 現 像 も 観察 され た. 3). tetragastrin投 与 後30分 で は,胞 体 内のtub. ulovesicleの. さ れ た た め と 考 え られ る. ま た 胃 液 分 泌 刺 激 時 のtubulovesicle中. な わ ちtubulove. sicleが 存 在 す る.こ のtubulovesicleは. 泌 細 管 腔 に直 接 開 口 し,ま た このtubulovesicle中. のよ う. なtubulovesicle腔. 毛 の 出 現 頻 度 の 増 加,細. 2). 0.05μ の 円形 や不 整 形 の 小 孔,す. のlantha. 合 膜 の 消 失 の 後 で はlanthanumは. tubulovesicleの. す る と推察 され た.. の小 微 絨. 胞 内分 泌 細 管 内 の微 絨 毛 が. 数,大. き さが増 し,そ の 中 に出現 す る. 小微 絨 毛 の 頻 度 も増 して くる.さ らに隣 接 す るtub ulovesicle同. 士 の接 近 お よ び膜 の 融 合(膜 の 五層 形. 長 く な る と い っ た 所 見 の 重 要 性 は 不 明 で あ る が,. 成)が 起 こ り,次 い で起 こ る融 合 膜 の 消失(膜. の三. tubulovesicle膜. 層形 成,す な わ ちunit. の 多 くは細 胞 内 分 泌 細 管 内微 絨 毛. 形 成),さ. らに. 相 継 ぐ膜 の消 失 の 結 果,大. きなtubulovesicleと. な. の 相 継 ぐ消 失 の 過 程 で 消 失 す る が,そ れ 以 外 のtubu. り,こ のtubulovesicleが. さ らに細 胞 内 分 泌 細 管 膜. lovesicleの. と膜 融 合(膜 の 五 層形 成),融. の 膜 に 変 換 さ れ,勿. 論 そ の う ちの い く ら か は 融 合 膜. 膜 は,細. 胞 内 分 泌 細 管 膜 と し て 維 持,. 保 存 さ れ る も の と推 定 さ れ る.そ で は,お. そ ら く微 絨 毛 膜 はtubulovesicleの. 換 さ れ る で あ ろ う が,こ は,さ. して 酸 分 泌 休 止 期 膜 に変. の 膜 の 変 換 過 程 を示 す 研 究. らに 今 後 の 詳 細 な 検 討 を 必 要 と し よ う.. こ の 研 究 に お い て, はtubulovesicleと. tubulovesicle相. るい. 細 胞 内 分 泌 細 管 の 膜 融 合,そ. し. て この 融 合 膜 の 引 き続 い て 起 こ る 膜 の 消 失 に 関 し て 報 告 し た.仮. にtubulovesicleが. 臓 す る 場 で あ る な ら ば,細 泌 す る 形 態 は,上. 合 膜 の 消失(膜 の 三層. 形 成),相 継 ぐ膜 の消 失 の過 程 を経 た結 果,胞 体 内 の tubulovesicleは 4). 細 胞 内 分 泌 細 管 に 直 接 開 口 す る.. 以上 の所 見 よ り,胃 液 分 泌刺 激 時 に は, tubu. lovesicle膜. 互,あ. membraneの. の 多 くは細 胞 内 分 泌 細 管 内 の 微絨 毛 膜. に変 換 され,維 持,保 存 され る が,酸 分 泌 休 止 期 で は,細 胞 内 分 泌細 管 内 の微 絨 毛 膜 はtubulovesicle 膜 に変 換 され る こ とが推 察 され た.. 塩 酸 を 合 成 し,貯. 謝. 胞 内分 泌 細 管 へ 塩酸 を分. 述 の 機 構 に よ りな さ れ る と考 え ら. 辞. 稿 を終 るにのぞ み,御 指導,御 校 閲 を賜 わった田中早. れ る 。 も し こ の 仮 説 が 真 実 で あ る と す れ ば,塩. 酸排. 苗教 授 に感謝 を棒 げ るとと もに,本 研究 に直 接 御 指導下. 出 の 機 構 は,膵. 粒の. さった緒 方 卓 郎博士 に深謝致 します.ま た電顕 お よび走. 同 じ分 泌 形 式 を 示. 査電 顕 撮影 に協力 頂い た林,中 村技官,標 本作 製 に協 力. 分 泌 細 胞 に お け るzymogen顆. よ う な 蛋 白 分 泌 のexocytosisと す と 考 え られ る が,今. 後tubulovesicleの. 内容 の解. 析 等 の さ ら に 詳 細 な 研 究 が 必 要 と な っ て こ よ う. 第5章. 結. 語. された 山本,難 波,尾 崎,白 谷の諸嬢 に感謝致 します. 本論文 の要旨 は,第7回. 日本臨床電 顕 学 会,第32回 日. 本電 顕 学会 及 び第18回 日本 消化器病学 会秋季 大会 におい て発表 した..
(8) 668. 大. 沢. 亙. 参 考 1) Heidenhain,. R.: Untersuchungen. 2) Dalton, A. J.:Electron Anat. Rec.,. fiber den Bau der Labdrusen.. microscope. studies. on cells. Arch.. Mikr.,. of the gastrointestinal. M. H. Sleisenger. and G. H. Jeffries:. and after. 斉 藤 裕:ヒ. 6: 368, 1870. tract. and kidney.. The normal human gastric. elia. A fine structural study. Lab. Invest., 19: 598-626, 1968. Rosa, F.: Ultrastructure of the parietal cells of the human gastric state. 5). 献. 109: 395, 1951.. 3) Rubin, W., L. L. Ross, 4). 文. stimulation. with histalog.. Gastroent.,. 45: 354-363,. ト胃粘 膜 に関 す る電 子顕 微 鏡 的研 究‑Histalog刺. epith. mucosa in the resting. 1963.. 激 後 の 壁 細 胞変 化.日 消 会 誌, 71: 24‑41,. 1969. 6). 大 林 正 彦,奥 田芳 明,大 川 茂敏,杉 本 博,岩 井 法 彦,兼 松 雄 象,三 好 秋 馬:ヒ. ト胃粘 膜 の電 子 顕 微 鏡 的 研. 究.日 消 会誌, 63: 1177, 1966. 7). 堤 俊 夫:胃 液 分泌 機 構 に関 す る実験 的研 究 一 各種 薬 剤 の 胃粘 膜 内電 解 質 及 び胃 腺 壁 細胞 微細 構 造 に及 ぼす 影 響 につ い て:日 消 会 誌, 64: 32‑53,. 8) Helander, 9). 1967.. H. F. and B. I. Hirschowitz:. cells.. Gastroent.,. 63: 951-961,. Sedar,. A. W. and M. H. F. Friedman:. cell (dog) with functional. Quantitative. ultrastructural. studies. on gastric. parietal. of the gastric. parietal. 1972.. activity. Correlation. of the fine structure. of the stomach.. J. Biophys.. Biochem.. Cytol.,. 11: 349-363,. 1961. 10) Sedar,. A. W.: The fine structure. stomach. 11) Juan,. D. V. and H. Orrego:. tal cells. 12) Forte,. of the oxyntic. Ann. N. Y. Acad. Sci., J. Biophys.. Electron. Biochem.. T., T. E. Machen. oxyntic. 99: 9-28,. microscope. Cytol.,. cell in relation. 7:. observations. 367-381,. stimulation. activity. of the. on the fine structure. of parie. 1960.. and J. D. Forte: Ultrastructural. cells during histamine. to functional. 1962.. and physiological. and metabolic. inhibition.. changes. Gastroent.,. in piglet. 69: 1208-1222,. 1975. 13) Ito, S. and G. C. Schofield: nges. Studies. in the tubulovesicular. secretion. 14) Sedar,. J. Cell Biol.,. 16) Leeson,. T. S.: Parietal. 18) Steinberg,. of gastric. cell canaliculi: electron. 143: 451-463,. M. M. and J. P. Revel: of transporting. I. Corvin: Scanning. oxyntic. cell.. fundus glands. Fed.. Proc.,. of refed mice.. of rat parietal. electron. by scanning. electron. G. H.: Cryofracture. a freeze-etch. microscopy. acid. 24: 1360-1367, J. Ultrastruct.. 1974. Res.,. cells (1).. Amer.. J. Anat.,. 136. study.. Cytobiologie,. of the bullfrog's. retina. 5: 352-362,. 1972.. and pigment epitheli. 1973.. Scanning. epithelia. 20) Motta, P. and K. R. Porter: 21) Haggis,. and cha. to gastric. 1974.. and tubulovesicles. R. H.: Scanning. um. Z. Zellforsch,. vealed. of microvilli. in relation. 1973.. 17) Leeson,. surfaces. cells. 1973.. T. S.: Canaliculi. : 541-547,. and accumulation. of mouse parietal. of the stimulated. H. F.: Ultrastructure. 10: 160-175,. 19) Miller,. 63: 364-382,. A. W.: Fine structure. 15) Helander,. on the depletion. compartment. electron. microscopy. in mature and embryonic. microscopy Structure. IIT Res. Inst., of rat liver. microscopy.. Cell Tiss.. of biological. material.. of the apical, tissue.. Chicago,. sinusoids Res.,. (p. 549-556),. and associated 148: 111-125,. In: (ed. by) O.. lateral. and basal. In: (ed. by) O. Jahari. Jahari:. and. 1974. tissue. spaces. as. 1974. Scanning. electron.
(9) 正 常 お よ びtetragastrin刺. microscopy. IIT Res.. 22) Germinario,. as a technique. 46: 249-252,. 23) Brooks,. Chicago,. (p. 97-104),. L. T. and J. H. McAlear:. Freeze-fracturing Technol.,. Inst.,. 激 後 の ラ ッ ト胃 壁 細 胞 の走 査 お よ び透 過 電 子 顕 微 鏡 的 研 究. of freeze-fracture. Preparation. materials.. of tissue. for scanning. visibility. electron. of structural. microscopy.. relationships.. resin. drying. electron. techniques.. cracking. Naturwissenschaften,. microscopy. Lab. Invest.,. method for scanning. of rat's. liver.. 29: 60-64,. 1973.. electron. microscopy. Application of biological. 59: 77, 1972.. 25) Tanaka, K., A. Iino and T. Naguro: Styrene resin cracking method for observing materials by scanning electron microscopy. J. Electron Microscopy, 23: 313-315, 26) Tokunaga,. J., M. Edanaga. specimens.. Stain. 1971.. and freeze. K.: Freezed. 1970.. for enhancing. S. E. H. and G. H. Haggis: Scanning. 24) Tanaka,. 669. and T. Fujita:. Freeze. A study of the kidney and spleen.. cracking. Arch.. of scanning. histol.. jap.,. electron. 37: 165-182,. biological 1974. microscope. 1974.. 27) 大 沢 亘,緒 方 卓 郎:走 査 電 子 顕 微 鏡 の 世 界.消 化管 の微 細 構 造 一 割 断 法 に よ る壁細 胞 内 面 の走 査 電 子 顕 微 鏡 的観 察.医 学 の あゆ み, 97: A 619‑A. 620,. 1976.. 28) 大 沢亘,緒 方 卓 郎:走 査 電 子 顕 微 鏡 の 世 界.消 化管 の微 細 構 造 一 壁 細 胞 細 胞 内 微細 小管 の立 体 的観 察.医 学 の あゆ み, 97: A 625‑A. 626,. 1976.. 29) 大 沢亘,緒 方 卓 郎:走 査 電 子 顕 微 鏡 の世 界. Tetragastrin投 学 の あゆ み, 98: A 631‑A. 632, 1976.. 30) Osawa, W. and T. Ogata: A scanning structure of the fundic gland cells -6 , 1975. 31) Osawa, 32). electron. of the fundic gland cells. 永 谷 隆,山. 田 満 彦:生. 33) Tanaka,. microscopic. of the rat stomach.. W. and T. Ogata: A field emission. structure. electron. materials.. 34) Bloom, W. and D. W. Fawcett: ia-London-Toronto,. Arch.. A textbook. 38) Karpinski,. jap.,. Microscopy,. 8:. 5. study of the. intracellular. Microscopy,. 25: 211, 1976.. 136‑142,. 1975.. observation. 39: 165-175,. on intracellu. 1976.. 10 th ed., W. B. Saunders,. ス ト リン様 ペ ン タペ プ タ イ ドの 基礎 と臨床‑こ. cells of frog stomach.. Philadelph. J. Cell Biol.,. R. H. S., J. S. Mueller. studied by thin section,. staining. and characterization 47: 437-452,. of the extracellular. 47: 782-786,. space. of glycoproteins. in. 1970. in secreting. and nonsecr. 1970.. and S. Ito: Cytoplasmic. tracer,. とに 臨床 的 な. 1971.. J. Cell Biol.,. T. M. and J. G. Forte: Definition cells.. 7:. microscopic. of histology.. T. M. and J. G. Forte: Histochemical. eting oxyntic cells,. 胞,. histol.. 胃 液 分泌 促 進剤 と して の 評価.総 合 臨 床, 20: 303‑308,. acid-secreting. of the intracellular. 1975.. 35) 瀬尾 功,植 松寿 樹,三 好 正 人,川 井 啓 一:ガ. 37) Forte,. microscopic. of the rat stomach. J. Electron. 物 試 料 の イ オ ン エ ッ チ ン グ の 応 用.細. of ion-etched. observation. J. Clin. Electron. K., A. Iino and T. Naguro: Scanning electron. lar structures. 36) Forte,. 与 後 の 壁 細 胞 の走 査電 子 顕 微 鏡 的 観 察,医. and freeze-etch. tubular. techniques.. system. of gastric. Anat. Rec.,. oxyntic. 169: 352-353 ,. 1971. 39) Sedar,. A. W.: Uptake of peroxidase. acid-secreting. cell.. J. Cell Biol.,. 40) Rubin, W.: Enzyme cytochemistry Biol., 41). 42: 332-338,. 金 関悳:細. 42) Palade,. into the smooth-surfaced 43: 179-184, of gastric. tubular. system. of the gastric. 1969.. parietal. cells. at a fine structure. level . J. Cell. 1969.. 胞 の 膜 構 造.細. 胞,. 1:2‑14,. 1969 .. G. E. and R. R. Bruns: Structural. 37: 633-649, 1968. 43) Satir, B., C. Schooley. and P. Satir:. modulations. Membrane. of plasmalemmal. fusion. vesicles . J. Cell Biol.,. in a model system . Mucocyst. secret.
(10) 670. 大. ion in tetrahymena. 44) Lagunoff, 45) Silva,. J. Cell Biol.,. D.: Membrane. observation. 73: 161-181,. palmivora. J. Cell Biol., secretion.. zoospores. and E. M. F. DeRobertis,. Philadelphia-London-Toronto,. during encystment.. 1977. on ele J. Cell. Nature,. 253. H. F.: Ultrastructure (supple. 4):. 1-123,. Jr: Cell biology.. of fundus glands. of the mouse gastric. 腺腔. mucosa.. J. Ultrastru. 1962.. 図. 説. 明. 常 ラ ッ ト壁 細胞 の走 査 電 顕 像.胞 体 内 に は細 胞 内分 泌細 管 が存 在,そ. 糸粒 体L:胃. 6 th ed., W. B.. 1975.. る.細 胞 内 分 泌細 管 周 囲 のtubulovesicleの. 図2:正. 73: 161-181,. Hypothesis based. W. Tampion and J. A. Lucy: Mechanisms. of cell fusion.. 附. 図1:正. fusion during. of phytophthora. E. D. P., F. A. Saez. Saunders, ct. Res.. Membrane. 1978.. 47) DeRobertis, 48) Helander,. 1973.. mast cell secretion.. 1977.. 46) Ahkong, Q. F., D. Fisher, : 194-195,. 亙. 56: 153-176,. during. P. P. and M. L. Nogueira:. ctron microscope Biol.,. fusion. 沢. の 内腔 に は微絨 毛 が 密 在 して い. あ る もの は小 微 絨 毛 が 存 在 して い る(矢 印). N:核M:. ×15000. 常 ラ ッ ト壁細 胞 に イ オ ン エ ッチ ン グ施 行 後 の走 査 電 顕像.核(N)の. 表 面 には 凹 凸 以外 に 多数 の核 孔. (矢印)が 認 め られ る.×11000 図3:正. 常 ラ ッ ト主細 胞 の走 査 電 顕 像.イ. オ ンエ ッチ ン グ施 行 例 で,核 の 周 囲 の 胞 体 内 に は 粗 面 小 胞体 が観 察. され る.×15000 図4:縦. 方 向 に割断 され た細 胞 内 分 泌細 管 の走 査 電 顕 像.細 胞 内分 泌 細 管 は一 方 で は胃腺 腔(L)に. 直 接 開 口,. 他 方 で は胞体 内 に深 く彎 入 して い る.矢 印: tubulovesicle×14000 図5:正. 常 ラ ッ ト壁 細 胞 の細 胞 内 分 泌細 管 の横 断 像.円 形 と して観 察 され る.×11000. 図6:種. 々 な外 観 を呈 す る細 胞 内 分 泌 細 管 の横 断 像(正 常 ラ ッ ト).右 下 の 分 泌 細 管 は 長 い 微絨 毛 が密 在 す る が,中 央 部 の細 管 の 直 径 は広 く微 絨 毛 も非 常 に少 な い.左 上 部 の分 泌 細 管 は膜 様 の 隔 壁 に よ り.あ た か も蜂 の 巣 状 に 分離 され て い る.×12000. 図7:割. 断 した 細 胞 内 分 泌 細 管 の 表 面 か らの 観 察像. tubulovesicleは. 直 接 細 胞 内 分 泌細 管 腔 に 開 口 して い る. (正常 ラ ッ ト壁 細 胞).×25000 図8:正. 常 ラ ッ ト壁細 胞 の細 胞 内 分 泌細 管 内 の微 絨 毛 の透 過 電 顕 像.微 絨 毛 は密 在 し,一 定 方 向 に走 行 して い る.×31000. 図9:正. 常 ラ ッ ト壁 細 胞 の 細 胞 内 分 泌細 管 腔 に突 出 した微 絨 毛 の拡 大 像.先 端 が 屈 曲 した り,途 中 で枝 分 れ を 示 す 微絨 毛 が観 察 され る.×53000. 図10:細. 胞 内 分 泌細 管 周 辺 の 割 断 像.微 絨 毛 様 構 造 物 が密 に配 列,堆 積 して い るが,間 隙 も認 め られ る(正 常 ラ ッ ト壁細 胞).×28000. 図11:図10で. 示 した微 絨 毛 様 構 造 物 の水 平 方 向 の割 断 像.細 胞 内分 泌 細 管 周 辺 の 胞 体 内 に は,あ た か も小 石 を. 敷 い た か の ご と く印 象 を与 え る小 顆 粒 構 造 物 が密 に並 置 して い る.×73000 図12:正. 常 ラ ッ ト壁 細 胞 の 糸 粒 体.球 形 像 と して観 察 され る.×7000. 図13: tetragastrin投. 与 後30分 の壁 細 胞.胞 体 内 のtubulovesicleの. 図14: tetragastrin投. 与 後30分 の 壁 細 胞.細 胞 内 分 泌細 管 周 辺 のtubulovesic1eの. さが増 して い る.矢 印 はtubulovesicleの 図15: tetragastrin投 ulovesicle膜. 著 明 な数 の増 加 が 認 め られ る .×22000 数 の 増 加 と と もに その 大 き. 細 胞 内 分 泌 細 管 腔 へ の 直 接 の 開 口 を示 す .×58000. 与 後30分 の 壁 細胞.拡 大 したtubulovesicleの と小 微 絨 毛 膜 は連 続 性 を有 して い る(白 矢 印).太. 中 か ら各 々小 微 絨 毛 が 出現 し,こ のtub 矢 印 は 隣 接 したtubulovesicle同. 士の.
(11) 正 常 お よ びtetragastrin刺 融 合 の 結 果 五 層 形 成,小 図16:. tetragastrin投. 激 後 の ラ ッ ト胃 壁 細 胞 の走 査 お よ び透 過 電 子 顕 微 鏡 的 研 究. 671. 矢 印 は 融 合 膜 の 消 失 の 結 果 三 層 形 成 を示 し て い る.×150000. 与30分. 後 の 壁 細 胞 の 透 過 電 顕 像.胞. 与30分. 後 の 壁 細 胞 の 透 過 電 顕 像.. 体 内 のtubulovesicleは. 大 き くな り数 も増 加 し て い. る.×42000 図17:. tetragastrin投. tubalovesicleと. 小 微 絨毛 との 間 に は直 接 膜 の連 続 性. が 認 め ら れ る.×85000 図18:. tetragastrin投. 与30分. 後 の 壁 細 胞 の 透 過 電 顕 像.. に は 五 層 形 成 が, V2で 示 すtubalovesisleとV3で. V1で 示 すtubulovesicleとV3で 示 すtubulovesicleの. 示 すtubulovesicle. 間 に は 三 層 形 成 が 起 き て い る.. ×134000 図19:. tetragastrin投 矢 印).融. 図20:. 図21:. knob. tetragastrin投 も減 少 し,直. 図22:. 後 の 壁 細 胞 の 透 過 電 顕 像.. 合 膜 の 相 継 ぐ消 失(太. tetragastrin投 central. 与30分. tetragastrin刺. 矢 印)も. 与60分. 細 胞 内 分 泌 細 管 に 開 口 し て い る(小. 認 め ら れ る.×76000. 与30分 後 の 壁 細 胞 の 透 過 電 顕 像. (K)を. tubulovesicleが. tubulovesicleが. 細 胞 内 分 泌 細 管 に 開 口す る場 合 の. 示 す.×160000 後 の 壁 細 胞 の 走 査 電 顕 像.. tubulovesicleは. 著 明 に 減 少 し,微. 絨 毛 は 短 か く,数. 径 も拡 大 し て い る.×11000 激 に よ る 壁 細 胞 の 変 化 の 模 式 図.微. 内 分 泌 細 管 に 融 合,開 な っ たtubulovesicleが. 口 す る過 程 を,右. 絨 毛 の 左 側 は 胞 体 内 の 一 つ のtubulovesicleが. 側 に は 小 さ なtubulovesicle同. 細 胞 内 分 泌 細 管 に 融 合,開. 口 す る 過 程 を 示 す.. 細胞. 士 の 融 合 等 の経 過 を経 て大 き く.
(12) 672. 大 大 沢. 沢. 亙. 亙 論 文 附 図.
(13) 正 常 お よ びtetragastrin刺. 激 後 の ラ ッ ト胃壁 細 胞 の 走 査 お よ び透 過 電 子 顕 微鏡 的研 究. 大 沢. 亙 論 文 附 図. 673.
(14) 674. 大. 沢. 亙. 大 沢 亙 論 文 附 図.
(15) 正 常 お よびtetragastrin刺. 激 後 の ラ ッ ト胃壁 細胞 の 走査 お よ び透 過 電 子 顕 微 鏡 的 研 究 大 沢. 亙 論 文 附 図. 675.
(16) 676大. 沢. 亙. 大 沢 亙 論 文 附 図.
(17) 正 常 お よびtetragastrin刺. 激 後 の ラ ッ ト胃壁 細 胞 の 走 査 お よ び透 過 電子 顕 微鏡 的研 究. 大 沢 亙 論 文 附 図. 677.
(18) 678. 大. 沢. 亙. 大 沢. 亙 論 文 附 図.
(19) 正 常 お よ びtetragastrin刺. 激 後 の ラ ッ ト胃壁 細 胞 の走 査 お よ び透 過 電 子 顕 微 鏡 的 研 究 大. 1. 3. 22. 沢. 亙. 論. 文. 附. 2. 4. 図. 679.
(20) 680. 大. A. scanning on. and. the. 沢. 亙. transmission. fractured. electron. rat. and. after. parietal. microscopic. cells. tetragastrin. in. study. resting. state. stimulation. by. Department. of. Surgery,. Wataru. OSAWA. Okayama. University. (Director:. Parietal of. the. cells control. electron. state. the. Typically,. grow. up. the. Thirty. the. small. In. a. In. method. observed. were. by. compared. under. field. with. conclusion,. membrane. of. although. the. conditions. emission. those. scanning. by. numerous. transmission. microvilli. of. the. and. then. Some appeared. invagi. the. in. thickness tended. bent. during. to. or. twist. secretory. in diameter. and. tubulovesicles. cycle.. distributed. directly. opened. in tubulovesicles.. tubulovesicles. membranes. the. successive. membrane. open. 0.2ƒÊ microvilli. increased. in. size. and. in. found.. by. the. to. size. 0.05ƒÊ. microvilli. formed of. the. appearing. and. about. the. and. of. sometimes. cytoplasm.. frequently. length. tops. shape. of. stimulation. result. believed. in. in. the. lumen,. holes. tiny. was. of. gland. differed. more. procedure,. the. of. a. depletion. the. of. the. and. fused. dia. fused. membrane canaliculi. changed. 5-layered. apparently. fused. secretory. tubulovesicles. membranes. tubulovesicle. of the. adjacent. the. elimination. of. into. between. fusion. seemed and. to. to to. that. occur.. contribute. to. microvilli. the. the. stimulated. membrane. tubulovesicles. some. the. small. approximation. in to. by. 0.6ƒÊ. Most. pericanalicular. diaphragm. thus. new. to. many. were. as. lined. about. base.. tetragastrin. canaliculi,. of. structure. Occasionally,. close. were. transformed. fused. or. after. similar. secretory. formation. culi,. cracking. canaliculi. microvilli as. apical. diaphragm. Tubulovesicles. the. were. revealed. narrowed. and. a 5-layered. a 3-layered. club-like. canaliculi. microvilli a. and. the. the. canaliculi.. Furthermore,. 4). of. minutes. the. phragm.. a. appeared in. occurred. was. freeze. cytoplasm.. slightly. canaliculi. secretory. number,. the. had. Tubulovesicles. the. of. by. stimulation thus. Okayama. S.Tanaka). fractured. intracellular. basal. and. direction. predominantly. to. structures. the. tip. Intracellular. 3). tetragastrin. The. microvilli. a bulbous. into. mucosa. cytoplasm,. towards. with. 2). gastric. and. fractured. deeply. ed.. rat. School,. microscopy. In. nated. the. microscopy.. electron 1). in. Prof.. Medical. of. state of. would. them. are. the be. believed. some. amount. microvilli. in. preserved to. as. disappeare. of the. the. membrane. secretory. the. membrane in. of. tubulovesicles. canaliculi.. the. of process. Consequently,. the of. secretory the. canali. depletion. of. membrane.. Possibly tubulovesicles,. after. cessation but. further. acid. secretion,. investigation. the would. microvilli be. membrane necessary. would to. demonstrate. be. retrieved this. to. the. process..
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