研究 影 響 関す 腺 腫 瘍 及 す各種性 高 症雌 乳

高^{プ ロ ラ ク チ ソ} 血症雌^ラ ッ ト の乳腺腫瘍^に及^ぼす 各種 性^{ス テ ロ イ ドの}影響^に 関す^る研究

金 沢 大 学 医学 部 産 科 婦人 科 学 講 座 く主 任^こ西 田悦 郎 教授う

小 清 隆 文

乳 腺^の発 育と機 能^に深く関 与 する と され^{て い}る プ^ロ ラ ク チン くpr ola ctin，P R Ll ^と性^{ステ ロ}イ ド^につい て ，7，1 2−^{ジメチ ル}

ベ ンズく^al アン トラ セソ く^{7，1 2−dim eth}yl be n zく^al ^{a nth}r a c e n e，D M B AH 誘 発乳 腺 腫瘍^の発 育経 過と組 織 型東及 ぼす 影響を ウ イス タ ^ー く^{W ista r}上糸雌ラッ ト で検 討し た^■2 1 日齢よ り^{ピ モ}ジ ドくpim o zide，P M Zトを継 続 投 与して高^{P R L 血}症 状 態^{と し}，7 3 日掛^こ D M B A を局 所 投 与し た⁻ D M B A 局 所 投 与 後に， 無 処 置 く^{D P 毒}削， エス トラジオ ^ー ル ^． ジ プロ ピ オ ネ ^ー トく1 7−J3 e str ad iol d ipr opio n ate，E 21^1m gノ^{1 0 0}g 体 重^を週1 回皮 下 注 の^{P ＋ E 2} 群上 ^{テ ス トステ ロソ ． エ ナンテ ー ト}く^te sto st_{e r o n e e n a n}tate，T E1 6m gJIl O Og 体 重を週1 回皮 下 往 くD P ＋T 群I， プ^ロ ゲス テ ^ロ ン くpr og^{e s}te r o n e， Pr ogl ^lmgl^{l OO}g 体 重を週 3 回皮下 注

のP ＋ Pr og 郡， デ^ヒド^{ロ エ ビ ア} ンド^ロス テ ^ロ ソ ^． アセテ ^ー トく^dehydr o epia ndr o ste r o n ea c etat_e，D H A−^Ac1 5mgJ^{l OO}g 体 重を週 3 回皮 下 往 くD P ＋ D H A 葺削 した 5 群と^{ピ モ}ジ ド非 投 与^に D M B A を局 所 投 与し た群 くD 群う^について， 乳腺 腫 瘍^の腫 瘍 径 測 定 と光 学お よ び電 子顕 微 鏡^によ る組 織 像^の観 察を行なった．腫 瘍 発 育^{につい ては}一 厘 瘍径^{が 1 0m m} 前後^で停 滞する時期が認め ら れ， その後 急 速^に増 大 す^る経 過を 示 し た^． 腫 瘍急 速 増 大 開 始日 は， D 群の 8 5^．2 土2 臥7 日に比し て， D P 群ほ 61^．8 土 蝕 2 日 と有 意に短 縮 くpく0^．0 51^．D P ＋ D H A 群ほ 1 1 8^．1 士1 6^．8 日， D P ＋E 2 群は 9 9^．9 土2 3^．3 日 と D P 群に比して， 有 意^ケこ延 長^{し ていた} くpく0^．0 5J． 腫瘍急 速増 大 速 度^{は D} 群と D P 群^の間^に有 意^の差^を認め な か^っ た が， D P ＋D H A 群^でほ D P 群^に比し有 意^に増 加し ていたくpく0−0 5l^一 度瘍^の組織 型分 類にお^いて は， 上皮 性 腫 瘍^の占め る割 合ほ， D 群25 ％，D P 群9 1 ％，D P ＋ Pr og 群^{4 6 ％}，

D P ＋ E 2 群2 8 ％， D P ＋T 群 2 5 ％，D P ＋ D H A 群0 ％ であり， D P 群^に比^べて各 種 性^{ス テロイ ド}投 与 群^{で は}低下 し て^いた くpく0．0 5l^． 腺 痛^が認^{め ら れ た}割 合^ほ ， D 群 ^{1 3 ％}， D P 群^{8 2 ％}， D P ＋Pr og 群^{4 6 ％}， D P ＋E 2 群 2 8 ％， D P ＋^Jr 群 2 5 ％，

D P ＋ D H A 群0 ％ で， Pr og 群を除く す^べての性ス テ ^ロイ ド投 与 群^では D P 群と比 較し て有 意^に低 下^{し ていた}くp く0．0 5I^． 以 上 よ り， P R L は D M B A 誘 発 乳腺 腫 瘍^の上皮 性 腫 瘍， 特^に腺病^の発 生^に促進 的^に作 用^し， E 2，T， お よ び D H A は腺 痛の発 生^に 抑制 的^に作用す^ること が 示唆さ れ た^．

K ey ^{w o r}ds aden oca rcin o m a_， deh_ydr o epia ndr oste r on e_， D M B A−^{indu ced m a m m a r}y tu m o r，

p^{r o}la ctin

子宮 内膜^と乳 腺^{は と}も^に性^{ホ ル モ ン}依 存性^の組 織^であり， い

ずれの組 織 も^エス ト^ロ ゲ^ンくe str oge n s，El ^の増 加^によ り肥大 ^． 増殖し， そ^の低 下^に伴って萎 縮 ^．退縮 する． こ のよ う な変 化^は 思春 期^{お よ び}更年 期^{におい て}明確^に認め ら れ る^． し か し更年 期 以降^{で は E の}分泌ほある程度 保た れ るも^{の の}， 卵 巣 機 能^の低 下

によ り プ^ロゲス テ^ロ ソ くpr oge ste r o n e，Pr ogl ^の分 泌^はほと ん ど 消失 する た め， いわ ゆ る無 抵 抗^{エス トロ}ゲ^ンくu n op po s ed E l ^の 状態と な る． こ のよ う な状態 下で は 子宮 内膜ほ か えって過 形成 と な ること が知ら れ^{て い}る^． ま た， 同 様^の変化は乳 腺におい て

もみ ら れ， 更年 期^に乳 房 痛な ど^の症 状と な^って現わ れ てくる^． 子宮 内 膜や乳腺^の腫 瘍 組腰 も^{ま た}， E， Pr og， テス トス テ ^ロ ン

く^{te sto st}e r o n e， Tl な ど各 種 性^{ホ ル モ ン}濃 度^の多 寡^によ り増 殖ま た は退 縮 する^こと が知ら れ て^いる． し か し， 副 腎性^{アン ドロ ゲ}

ンである デヒド^{ロ エ} ビ アン ド^ロ ス テ^ロ ソ く^dehydr o epia ndr o ste− 平 成⁶ 年³ 月^{3 日}受 付， 平 成⁶ 年⁴ 月7 日受 理 A b b re viatio n s 二 D H A ， deh_ydr o epiandr o ste r oL

n e ニ

1 2⁻dim eth_ylbe n zく^al ^{a nth}r a c e n eニE ， eSt_rOg^{e n S}I E 2，

r o n e， D H Al と^の関係を検 討し た報 告ほ極めて少な^い．

本 研 究で ほ， 各種 性^ホルモンと女 性 性器腫 瘍と^の関連 性^につ

い て考 究 する 目的^で， 高^{プロ ラ ク チ ン}くpr ola ctin，P R い 血症雌

ラ ッ ト^の乳 腺^に 7^，1 2−^{ジメチル ベ ン ズ} くaフ^{ァ ン ト ラ} セ ン く7，

1 2⁻d im ethylbe n zくala nthr a c e n e，D M B A トを局 所 投 与 す^ることに よ り乳 腺 腫蕩を高 率^に発 生さ せ， つ い で腫瘍^の発 生 ^．発 育お よ び そ^の組 織型^に及ぼす各 種性ステ ^ロイ ドの影 響^に ついて比 較検 討^した．

材 料^{お よ び}方 法 I ． 実 験動 物

生 後21 日齢^の体 重4 0^〆−5 0g のウ イス タ ^ー くW istaり 系雌ラ ッ

トく^日本^チ ャ ^ー ルズ ^ー リ^{バ ー} ， 厚 木1 ^を購^{入 し}実験^に供^{し た．} 飼 育 条 件^{と し て ほ}王 室 温を 2 3 士2 C に保ち， 人工照明 は午 前5 時

D H A ⁻A c， deh_ydro epia ndr ostero n e a cetate3 D M B A， 7，

17⁻B ^{estradiol di}p^{r o}pio n ateニH． E ^．， he m ato xylin and e o sin ニ

P M Z， pim o zide ニP R L， p^{r O}la ctinI Pr og，p^{r O}g^{e S}te r O n e iS D， Sp^rag^ue⁻Da wley ニT，te StOSte r O n e ニT E ，teStOSte r O n e e n anthate

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よ り午後⁷時ま^{で の}1 4時 間^{と し}， 飼 料は オ リ^エ ンタ ル N M F ラ ット繁 殖用くオリ^エ ン タ ル酵母 工業， 東 京I を用^い， 自 由摂 取 と し た． 飼 育^{には 3 5 x3 0x1 6c 皿 の ケ ー ジ を}用^い ， 1 ケ ^ー ジあ た り^．の ラ_ット数ほ 2 な^い し 3 匹 と した^．

正． 実験 方 法 1 ^． 薬剤 裏^{よ び}投 与 法

ビモジ ドくpim o zi de，P M Zト溶液は， A d vis ら^の方 法^IJを改 良 し たものを用^いた． すな わ ち，P M Zく藤 沢 薬 品工業， 大 阪I 原 末 1 0mg^， ブ ド ウ糖 く和 光 純 薬， 大 阪1^{1 0}g を， 0■1 M 酒石酸 く和 光 純 薬I5 0ml と と も^に水 9 5 0m Hこ溶 解し た^． ま た，P M Z を含ま な^い対 照液 も 作 成^{し た． な お， P M Z} 溶 液お よ び対 照 溶 液は毎 日交 換し， 実 験 群ご とに2 1 日齢よ り自 由飲 用^{さ せ た．}

D M B Aく和 光 純 薬1 は， ゴマ拙 く半 井化 学 薬 品， 京 都 ト^に溶 解 し， 4 0mgノ^{mlの溶 液と し て使 用し た． 投 与 方 法は， 7 3 日齢に，}

ラット を^{エ ー} テ^ル麻 酔し． 右鼠 径 部^の剃毛 後 皮 膚^に約 ^{1c m の} 切 開^を加^え， 直 視下^に発 育^した乳腺^を確 認し たのち，D M B A 溶 液^0．1mlくD M B A 4^m g 含 有I を，2 7 ゲ ^ー ジ針 付 微 量 注射 器^を用

いて局 所に注 射した^． そ^の後切 開創を綿 糸で縫 合 閉 鎖し， 3 日 後^に抜 糸した^． 性^{ステロイ ド}剤^は11 7^一声^{エ ストラジ オー ル ． ジ} プ^ロ ピオ ネ ^ー トく1 7⁻B e str adiol d ipr opio n ate，E 2，5m gl ^{ml こ オバ}

ホ ル モ ン デ ポ ^一っt テ ^ス トス テ ^ロ ソ ^{． エ} ナ ン テ ^ー ト くT

e n a nthate， T Eニ1 2 5m gJ^{ml ニュ ナ ル モ ンデ ポ ー1， Pr og l Om g}ノ

ml ニ^ルテ ウム の各 製 剤 く帝 国 臓 器製 薬， 東 京1 と， 帝 国 臓 器 製 薬 作 製^{のデヒドロ エ ビ ア ンドロ ステロ ソ ． ア セ テ ー ト}溶 液 のH A

a c etate，D H A⁻Acニ5 0mgノ^miトを使用^した． な お． ホ ル モ ン剤^の 投 与^は． 背部 皮下^に針を刺入部位よ り約1c m 通し た後^に注入 し， そ^の後しぼらく 刺入部 位を圧 迫^し漏れ^のない こと を確 認^し た^．

2 ． 実 験 群^の作 成

り P M Z 投 与 下の乳 腺 阻織^の観 察

2 1 日齢^の雌ラッ ト1 2匹を各6匹 ず^つ， P M Z 投 与 群と P M Z 非 投 与群^の2 群^に分け た^． 両 群^のラットの3 7 日齢^{と7 3 日}齢^に，

そ れぞれ 3 匹 ずつ断 頭 屠殺し， 右 鼠径 部 乳 腺^の組 織 学 的 観 察^を 行^った，

21 ^{D M B A} 誘 発乳 腺 腫 瘍^の観 察

2 1 日齢^の雌^ラッ ト6 9匹を， P M Z 非 投 与 D M B A 投 与 群 くD 群， 1 6匹I， D M B A ^．P M Z 投 与 群 く^{D P} 群， 1 1 匹ン， D M B A ^． P M Z ^．E 2 投 与群 くD P ＋E 2 群，1 1匹1，D M B A ^．P M Z ^．T E 投 与 群 く^{D P ＋ T} 群， 1 0匹I^{， D M B A．P M Z．Pr o}g 投 与群 くD P ＋ Pr og 群，

1 1 匹1，D M B A ^．P M Z ^．D H A⁻Ac 投 与群 くD P ＋ D H A 群，1 0匹1 ^の 6群に分 け， P M Z 又 ほ対 照 溶 液 投与を開始し た^． 7 3 日齢^に乳 腺 組 織 内^{へ D M B A を}局 所 投与^し， ま た， 性^{ステロ イ ド}投 与群

に対し て は， E 2 ほ 1m g J¹1 0 0g 体 重を週1 回， T E ほ 6r ngl

l O Og 体 重^を週^{1 回} ， Pr og は 1 mgJ^{l O O}g 体 重を週 3 回 ，

D H A⁻Ac は 5^m gl^{l O Og 体 重を週3 回 それ ぞれ 皮 下に投 与し た．}

3 ^． 腫 瘍^の計 測と そ^の発 育段 階

乳腺^の観 察^はt D M B A 投 与 後 視 診^． 触 診^{によ り}行^{っ た．} 腫 瘍 を触知した場合^には， 遇3 回その長 径^と短径^{をノギスを}用^い測 定し， 両 者の平均 値をもって腫瘍 径と し た^． 腫 瘍^の発 育に関し て は， 腫瘍 径 測 定^の後 方 祝 的 く^{r etr o s}pe ctiv el 検 討^から， 次^のよ うに発育 段 階を定義し た^． すな わ ち，D M B A 投 与日 を第0 日 と し， 鷹疹 径^{が 1 0m m} 前 後^{で 一}時 的^に腫 瘍^の増 大^が停 滞^{し たの} ち急 速に増 大し始め た 日 を腫 瘍 急速 増 大 開始^{日 と した． ま たt} 腫 瘍 急速 増 大 開 始^{日 か ら}屠 殺日 ま で を腫 瘍急速増 大 期 間と し，

こ の期 間^にお け る腫 瘍 径^の1 日平 均 増加 量を腫 瘍 急 速 増 大速 度 と した^． な^お 巨 瞳瘍 急 速 増 大^の開 始^{日 は} ぃ 瞳瘍 径^が測 定 毎^に増 加し， か^つ 2週 間で 5m m 以上の増 大を 示 した最 初の測 定日 と し， 腫 瘍 径^{が 5 0m m} 以上 に な った とき， ある^いは腫 瘍 径が 3 0m m 以上 で か^つ潰 瘍を伴 うとき^に断頭 屠 殺し た^．

4 ^． 光 学顕 微 鏡 く光 顕1 お よ び電 子 顕微 鏡 く電 顧1 試 料^の作 製 摘 出^{し た}腫 瘍を細 切^し試 料^の作 製^に供^{し た．} 光 顕 用 試 料^ほ1

1 0 ％ 中性緩衝^{ホ ルマ} リ^ン液で固定後， パ ラ フ ィ ン切 片を作 製 し，

へ マ トキ^シリン ^{． エ} オ ジン く^{he mato x}ylin a nd e o sin， H．

E．I 染 色を行った． 透 過 電 顕用試 料^は．1 ％ グル タ ^ー ル アルデ^ヒ ド と 4 ％ ホ ル ^マ リ ン の混 合 液 く0^．1 M カ ^コ ジ^ル酸 緩 衝 液^で P H 7^．4 に調 製I ^{で 1} 時 間 固 定， さら^{に 2 ％ オス ミウム}酸 く0^．1 M カ ^コジ^ル酸 緩衝 液^{で P H 7．4 に}調製I で 1 ^ヘノ2時 間 固 定し

たのち， 上昇^{エ タ ノー ル}系 列^で脱 水し，

エ ボンで包 哩し た． 試

料を ウ^ルトラ ト^ー ムで超 薄 切片^{と し}， 酢 酸^{ウラニ ー ル ．}硝 酸鉛

の 二重 染 色を施し た ^． 観 察^に は H U ⁻6 0 0 く日 立， 東 京一，

J^{E M −1 21 0} 型一_{く日本 電 子}

， 東 京1 電^子顕 微 鏡^を用い， 6 0 0 ⁻ 2 0，00 0倍^の直 接 倍 率^で観察し た^．

5 ． 腫 瘍^の鼠 織 学 的 分類

腫瘍^の阻 織 塾^の分 類^は， 乳癌 研 究 会^の分 類 基 準^斜に従^った． 各 群^において認め られた腫 瘍を 上皮 性 腫 瘍と非上皮性 腫 瘍^に分 け， その割 合を求め た． さ らに， 各 群におい て腺 癌を認め た ラット^の割 合を求め比 較 検 討し た^．

6 ^． 統 計 学 的 検 討

F ig^．1^． Ligh^t mi c r o s c opic findings of the m a m m a ry tis s u e of 3 7⁻day⁻Old c o ntr olr at a nd pim o zide⁻tr e ated r at．くAIT h^e

c o ntr olr at． Po o rly de v eloped alv e ola r c ells a r e s e e nく^火84， H^．E^． stainl^． くBI T he pim o zide⁻tr e ated r at^． T he r e a r e

m a rkedly de v eloped alv e ola r c ellsく^X8 4，H^．E． staiⁿl⁻

F ig^．2^． E le ctr o n mi c r ogr aph of the m a m m ay gla nd of 7 3⁻day⁻01d pim o zide⁻tr e ated r at． T hr e r e a r e m a ny li_pid dT Opletsin the cy t^opla s m ^． Sc ale ba rindic ate s 2 pm ^．

ハ

己 己

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5 0 100 1 5 0

D ay^{s a}fte r D M B A ad minis tartio n Fig^．3^． D ia r n ete r s of tu mo r s in D M B A ＋_pim o zid_e くD Pl

gr o up a nd D M B A くDl gr o up^． T he d ia m ete r oftu m o r sin

D P gr o up w a s la rge r tha n that in D gr o up o n 3 0 days afte r D M B A administr atio n^． 砂，D P gr o up こ0 ， D gr o up^．

ヰp く0−05 v s^． D g^ro up^． く_Tl a nd く^J−^{1 ind ic ate sta nda rd}

de viatio n．

5 0 10 0 1 50 0 50 10 0 150

D ay ^{s a}ft^{e r} D M B A ad m inistartio n

F ig⁻4． T he effe cts of ste r oid o n the gr o wth of tu mo r s in D M B A ＋pim o zideくD Pl gr o up a nd ste r oid tr e ated gr o ups^． A fte rthe O n S et Of ^tu mo r gr o wth in D P gr o up^，the d ia m ete r s oftu m o r sin all ste r oid tr e ated gr o ups w e r e s malle r tha n thatin D P gr o up

く^{r efe r to F i}g^．31^{． A}，D P ＋1 7 B ^{e str adi}olニB，D P ＋te sto ste r o n eこC，D P ＋pr oge ste r o n eニD，D P ＋dehydr o epia ndr o ste r o n e⁻a C etate^{． ホ} pく0．0 5 ⁻V S． D P gr o upく^{r efe r to F i}g^．31^．