大腸腫瘍における腫瘍組織テロメラーゼ活性に関する検討

原 著 ( 東 女 医 大 誌 第 腕 第4号 頁 除 問 平 成82 年8

月

)

大腸腫蕩における腫蕩組織テロメラーゼ活性に関する検討

1東京女子医科大学中央検査部 2東京女子医科大学東医療センター検査科 3埼玉医科大学医学部生化学教室 4東京女子医科大学総合研究所 5東京女子医科大学東医療センター外科 6東京女子医科大学東医療センター病理診断科 7南千住病院 キ ク ノ アキラ カ ト ウ ヒロユキ コ タ ニ ノリヒロ サカモト 菊野

晃

.

1

3 . 加 藤 博 之 2 ・ 小 谷 典 弘3 .坂本 シ ミ ズ サトル オオツカ ヒ ロ コ ヤ マ ダ リ エ コ ナリタカ 清水 悟4 ・ 大 塚 洋 子2 ・山田理恵子2 ・成高 フ ジ パ ヤ シ マ リ コ ワタナベシンイチロウ ムラコシ タカユキ 藤 林 真 理 子6 ・渡辺伸一郎7 ・村越 隆之3 (受理 平成82 年7月4日)

輝彦

2 義彦5 Tumor Tissue Telomerase yitvticA Cnilatecrolo aisNlpoea

Akira KIKUN0 1・_{3，Hiroyuki KAT0} 2_{， oirrhioN KOTANr ， Teruhiko SAKAMOT0} 2_， Satoru SHIMIZU¥ Hiroko OTSUKA 2

， Rieko Y AMADA 2_{， Y oohikhis NARITAKA} 5_， Mariko FUJIBA YASHr ori， hci-nihS WATANABE 7 and Takayuki MURAKOSHr

1 ntrtmeepaD Cfolartne lacinilC seirotarobaL ， Tokyo Women's lacideM ytisrevinU 2 entartmepD Cfloacinil yrotarobaL ， Tokyo Women's lacideM ytisrevinU lacideM renteC tsaE 3 D e p a r t m e n t Bfoyrtsiemhcoi yt， lucaF Mfoenicide ， aamtiaS lacideM ytisrevinU 4 cideM a l chreaseR etutitsnI ， Tokyo Women's lacideM ytisrevinU 5 mentpartDe Sforygeru ， Tokyo Women's lacideM ytisrevinU laicdeM renteC tsaE 6 tnrtmepaeD Dfocitsongai ygolohtaP ， Tokyo Women's lacdieM ytisrevinU lacideM retneC tsaE 7 M i n a m i s e n j y u tipsoH 1a I n oerdr otetagitsevni ehtecnacifingis tfoesraemole ytivitca nilatceroloc adenoma pa(sueoracncer )noisel and ylrae latceroloc rencac ， we measured eht easeromlet ytivitca tfo he tumor eussit and lamron mucosa 2fo p9 -a t

i e n t

s who had been detaret yllacipcosodne rof laa ctcerolo tumor .e， .i ， p71stneita detaert rof an adenoma -wol( g r a d e aipyta ni 7 cessa and edarg-hgih aipyta ni c01)sesa and p21stneita detaert rof an eylra latceroloc rceanc ( m u c o s a

l erancc ni 8 csesa and submucosal rnceca ni 4 c.)sesa The detecser msneeicps were duse ot make a p a t h o l o g i c a

l sisongaid and measure ot eht esaermolet ytivitca tfo eh noisel and normal mucosa by remit-lae PCR performed ithw ea qvitatitnau esrameloet noitceted i tk.

Telomerase ytivitca (mean 土SD) ni eht normal mucosa and tumor eussit :was :!::450.0 460.0 amo /lμg pnietor and 04:.: :72!: 625.0 amo /lμg pnietor ylevit， cepser ， and ti was nacifingis 1ty hrheig ni eht tumor eussit p( く.)50.0 e-T l o m e r a s

e ytivitca tni eh normal mucosa was low ， tbu.elbatceted The stluser a ROC fo sisylana showed taht het o p t i m a

l ffo-tuc aesermolet ytivitca level rofgnihisugnitsdi between normal mucosa and tumor eussit was 01.64

図 : 菊 野 晃 干6668-261 東京都新宿区河田町1-8 E -m a i l : en-os.2ak@onukik-a . nptj.e 東京女子医科大学中央検査部

amo /1 μg p.nietor esraelemoT ytivitca ni eht adenoma eussit was 04.86t::205.0 amo /1 μg pnietor ， and was tosmla same tsa eh 04.67t::085.0 amo /1μg pnietor ， ni eht ylrae latceroloc rencac .eussit There were to snnacifingi -alerroc t

i o n

s between esaermolte ytivitca and dreneg ， ega ， tumor noitacol ， cpicooscram eypt ， tumor ro ezis ， utb ereht was a weak noitalerroc between eag and searmeolte ytivitca tni eh suotamoneda .eussit

These sgnidnif tseggus taht esaermolet ytivitca sidetalguerpu ni eht asuotemonda egats erofeb latceroloc c a n c e

r and taht tumor noitazilatrommi sitouba botnige ttasih egats evitceps， erri any fo rehtolacigolohtapocinilc f a c t o r s .

Key Words: esarmeolet ytivitca evitati， tnauq esraemloet noitceted i tk，latceroloc tumor ， ylrae latceroloc -icrac noma latce， roloc adenoma 緒 言 「細胞分裂時計citotim( )kcolc

J

と呼ばれる染色体 末端のテロメア配列はヒトではTTAGGG の塩基配 列の繰り返しで，その長さは51----2 kb 程度である. 正常細胞では

1

回の細胞分裂，つまり

DNA

複製に 伴い002----05 塩 基 が 短 縮 し 十 分 に 短 く な る と 細 胞 は分裂を停止しアポトーシスに陥る.そのため，正 常細胞では細胞寿命が存在する. 一方，生殖細胞やがん細胞ではテロメアを伸長す る酵素であるテロメラーゼが発現する.テロメラー ゼは，テロメア反復配列の

G

連 続 部 分 を 認 識 し こ れを起点に反復配列を

'

5

→

'

3

方向に伸長する.した がって，特にがん細胞では細胞分裂を繰り返しでも テロメアが短くならず 長いままのテロメア配列が 維持できるため，テロメア短縮による細胞寿命は， 短縮するとされる. これらテロメアーゼ活性と各種がん形質の関連性 については，多くの医学研究が行われてきた.テロ メラーゼ活性測定は，従来よりcrieomlet peatre am-p l i f i c a t i o n olcootrp (TRAP) アッセイ1)や ELISA 法)3)2 が用いられている.これらは測定に時間がかか り，煩雑かっ特殊な装置が必要である上，解析に必 要な組織量が多いため 臨床研究においては患者へ の負担も多いなどの欠点があった.これに対し，テ ロメラーゼ活性測定にリアルタイム PCR を用いる 測定法が近年開発された)5)4 本法は，簡便かつ迅速に 結果が得られ，コンタミネーションのリスクが低く， 高感度で広いダイナミックレンジ解析ができる.こ の理由より，上記既存法の弱点を克服し患者組織 を使用した臨床研究が容易に実施出来るようになっ た. 大腸癌組織のテロメラーゼ活性測定と診断につい ての研究は数多く報告されておりω，他の癌と同様 にテロメラーゼ活性は高いことでコンセンサスが得 られている)6 また，大腸癌には腺腫という前癌病変 が存在し遺伝子の変異が蓄積して異型度が増すこ とでがん化が起こり，さらなる変異で転移能を獲得 するようになるというtih-itlum eoryth が提唱され ている)7 前癌段階である大腸腺腫の段階でのテロメ ラーゼ活性レベルが，どのようになっているのかは， 癌の発生の上でも重要と考えられる.しかし従来 のTRAP 法を用いた研究ではテロメラ}ゼ活性に ついて定量的に測定できず 10mm から20mm の 大腸腺腫でも 20% 程度の陽性率でしかなかったと の報告がある)8 また異型度が増すにつれ段階的に テロメラーゼ活性を獲得していくが，テロメラーゼ

RNA

コンポーネントの発現は，腺腫の時点ですでに 起こっているとの報告もあり)9 大腸癌発生段階での テロメラーゼ活性については議論の多いところであ る. 今 回 わ れ わ れ は ， 定 量 的 な 測 定 が 可 能 で あ る SYBR Green I を利用したリアルタイム PCR によ るテロメラーゼ活性測定法を用いて，主に内視鏡的 治療標本から得られた大腸腺腫と早期大腸癌の病変 組織と正常粘膜のテロメラーゼ活性値を解析し腫 蕩の臨床病理学的特徴とテロメラーゼ活性値の関連 性を検討したので報告する. 対象および方法 1 . 対象 東京女子医科大学東医療センターで内視鏡的に大 腸腫蕩と診断され，文書で同意の得られた大腸腫蕩 患 者29 例(男性 21 例，女性 8 例 ， 平 均 年 齢 68.6 歳)である ble(Ta 1).大腸腫蕩の肉眼型は，隆起型 2 0 例，表面型 9 例で，切除標本の病理学的診断によ る内訳は，良性腫蕩7 例(低異型度腺腫 7 例，高異1 型度腺腫10 例) ，早期大腸癌 12 例(粘膜内癌 8 例， 粘膜下層浸潤癌

4

例)である 0)1 上記のうち，良性腫 蕩および粘膜内癌の全例，粘膜下層浸潤癌の2例は， 内視鏡的摘除標本の腫蕩部分と正常粘膜部分を採取 し内視鏡的摘除不能であった粘膜下層浸潤癌の2

-153-Table 1 P'tsneiat lacigolothapocinilc sctisiretcraach C h a r a c t e r i s t i c s Number tfo eh stneitap Sex Male 12 8 Female Age -4 9 )ry( A吐 1 i a 生 唱 Ei 唱 E ム 5 0 -6 9 7 0 司 ( A verage 8.66 )ry L o c a t i o n R i g h t noloc L e f t noloc q d q J n J 唱 E 4 1 E i Rectum M a c r o s c o p i c eypt E l e v a t e d pety 02 9 S u p e r f i c i a l talf pety D i a m e t e r tfo eh tumor (mm) 1 0 -2 0 8 2 1 -3 0 41 3 1 - 7 H i s t o l o g i c etyp Tubular adenoma dera-gghhi Tubular adenoma dera-glow Carcinoma M)( Carcinoma M)(S ゥ ' n u o o d 生 可 Ei 例は，生検で腫蕩部分と正常粘膜部分を採取し分析 のための標本とした内視鏡的に採取した標本は， リン酸緩衝生理食塩水(PBS) で血液成分を可及的に 洗浄したのち，直ちに-20 o Cのフリーザーで凍結保 管した. なお，本研究は埼玉医科大学倫理委員会(承認番 号)II-057 および東京女子医科大学倫理委員会(承認 番号)R2-3992 の承認を得ている. 2 . 方法 1)組織の溶解 内視鏡的治療により得られた腫蕩組織10mg と 正 常 粘 膜 組 織10mg そ れ ぞ れ にevitatitnauQ Te -l o m e r a s e niocteetD キ ッ トdeillA( chteioB ， 以 下 QTD キット)山)2中のsisyL Bu 妊e'r 50μl を入れ， 03 分氷上で放置後， 21 ，000 rpm ， 4 oC ， 30 分で遠心し， 上清を採って検体溶液とした 2 ) BCA 法によるタンパク質量の測定・調整 検 体 溶 液 はReducing Agent atibleComp キット (Thermo 社)を用いて，キット中のピシンコニン酸 ( B i c i n c h o n i n i c )dica 試薬と混和， 7 o3 C ， 30 分恒温槽 でインキユベートし， N a000op2-drno (Thermo 社) を用い波長562nm における吸光度を測定し，スタ ンダードの標準直線からタンパク質濃度を求めた. すべての検体のタンパク質量は， sisyL Bu 妊re をも ちいて希釈し， 005 μng/l に調整した. 3 ) テロメラーゼ活性値の測定 QTD キット中のxPre-mi μ5.21 1，組織上清検体 l μ! と水1

.

1

5μl をチューブに入れ， 96 ウェルトレイ に20μl ずつ分注し， tepS One suPl dieplAp( -sysoiB tems ，以下StepOne) で25 0 C，02 分間テロメア伸 長反応を行った.次に伸長したテロメアを SYBR Green 1によるインターカレーション法を用いたリ アルタイム PCR 法で増幅した. PCR の条件は初期 熱変性を95 oC ， 01 分，サイクリングは，熱変性を 9 5 0 C， 03 秒，アニーリングを06 oC，30 秒，伸張反 応を27 0 C，30 秒で40 サイクルとした増幅曲線に T h r e s h o l d neLi を引き交点をCt 値とした 検体と同時に QTD キット中のテロメアプライ マーに類似した連鎖を持つオリゴヌクレオチドであ る標準物質(TSR : 05. amo /lμの)1 ssiyL Bu 佐rで希 釈した液を用いて増幅を行い，標準曲線を作製した 最後に検体のCt 値を標準曲線にプロットし，検体 の タ ン パ ク 質 量 あ た り の テ ロ メ ラ ー ゼ 活 性 値 (amo /lμg p)nietor を求めた. 4 ) 測定結果の評価 分析結果から同一症例の腫蕩組織と正常粘膜組織 のテロメラーゼ活性値を比較検討した.次に，腫蕩 におけるテロメラーゼ活性値のカットオフ値を，各 腫蕩組織と正常粘膜組織の値からROC 曲線-eR( c e i v e r tnigarepO citsiretcarahC )vercu を用いて設 定した. 続いて，臨床病理学的因子別にテロメラーゼ活性 の活性値と陽性率に関しての評価を行った腫蕩組 織型は，病理学的所見により，低異型度腺腫，高異 型度腺腫，粘膜内癌，粘膜下層浸潤癌に分け，腫蕩 組織のテロメラーゼ活性値を比較検討したまた， 大腸腫蕩におけるテロメラーゼ活性値と年齢の関係 については，ピアソン法で相関性を検討した. 統計学的処理は平均値±標準偏差または95% 信 頼区間で記載し同一症例の腫蕩細胞と正常細胞の テロメラーゼ活性値の比較は マッチドペアでの

t

検定，臨床病理学的因子別の比較では，

2

群聞は

-

l

i

W

coxon 検定， 3群の比較には分散分析 (ANOVA) ， 陽性率の比較にはカイ 2乗検定を用いて検討し p <0.05 をもって有意差ありとした.なお，統計処理ソ フトはJMP11 (SAS 社)を使用した.

( a m o /1μ)nigetorp pく50.0

土

•

•

2 . 0 1 . 6

b

〉

B

.12 r o Q) ∞ r o 包 08.

E

。

Q)

こ

04. 0 ω 〉

.

3

0.0 N ormal mucosal eusist 0 . 0 5 4 t:9)=24(n.060 Tumor eussti 04.72 t:92)n=26(.05 F i g . 1 semeraTelo ytivitca fo tumor eussit and alrmno losaucm eussit rsBa tciped eht mean t:SD S i g n i f i c a n

t ecnereffid between tumor and malron mucosa was detceted by teh tset-t fo m a t c h e d -p a i r .sisylana

i

T

N.S

i i

(amo Vμg )neitopr 2.0 を1. 6 〉 Z g .12 U rJ) 国

E

08

。

. B 04. 斗4 O ~ 0.0 < 1 ) ι Cukoff Value -: 0 . 1 4 6 amo /lμg pinetor n u -b 〉 .~ 6.0 吋 ロ ( l ) Vコ 0 . 8

AUC=O.8

04. γ A ρ し w p し v 、_， J n ロ ω

一

r l ( 凶 O F L V O O 戸 し w z J W 凡 O 出 + 一 α ぱ U Y 4 1 ・ M O 戸 U F i g . 3 rsaemoleeT ytivitca eulav cfolatcerolo -oneda mas and ylrae latceroloc rcenac B a r s tciped eht mean t:SD e. cnereffiD was ton -ed t e c t e d by set-noxcoliW .t A d e n o m a 04.6t8::O.502 =17)(n 1 . 0

1

04. 6.0 8.0 F a l s e -P o s i t i v e noictaFr ハ U 1 i AU 02. 0.2 叫 腫蕩組織のテロメラーゼ活性値と正常粘膜組織の テロメラーゼ活性値から ROC 曲線を描くと，カッ トオフ値として 0

1

.

46 amo /lμg protein が設定でき，

1

-

特異度(偽陽性率)は 0

1

.

.0 感度は.96.0

AUC

値は 0 . 8 であり，比較的特異度の高い結果となった.giF( .)2 腫蕩組織を腺腫および早期大腸癌の2群に分類し 比較したところ，腺腫ではテロメラーゼ活性値は 0

4

.

68 t:02.50 amo /lμg pn.eitro 陽性率は 65.0% で，早 期大腸癌では，それぞれ0

4

.

76 t:085.0 amo /l μg -rop t e i n . 0.57 %であり. 2群聞には有意差はなかった ( F i g . .)3 さらに，病理学的に低異型度腺腫，高異型 -155-ハ U ハ U F i g . 2 ROC veurc by eht esaremolet ytivitca fo ut -mor eussit and mlaron losamuc eussit 結 果 大腸腫蕩患者29 例の大腸腫蕩組織と正常粘膜組 織のテロメラーゼ活性値を測定した結果，腫蕩組織 では0

4

.

72 t:652.0 amo /l μg protein で，正常粘膜組織 では54.00 t:406.0 amo /lμg protein であり，テロメ ラーゼ活性値は正常粘膜組織に比べ腫蕩組織では約

1

0

倍程度高く，両群間で有意差が認められた

<

p

(

0 . 0 5 ) .giF( .)1

-I

T

4

•

N.S

•

•

- ・

7 T

-(amol /μg )inetorp ハ リ バ V 今 ん O O A 『 A U 今 ん 1 1 唱 1 ハ リ ハ リ ハ U

k

p

τ

Z

Q

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ω

∞

d

H

ω

g

。

- S

M c

- ω

包

凶

Carcinoma ( SM) 0 . 3 5 4 :t:: O.354 ( n = 4 ) Carcinoma (M) 0 . 5 3 6 :t::80O.6 ( n = 8 ) T u b u l a r amnoeda h i g h -g r a d e T u b u l a r maondea l o w -g r a d e 0 . 3 0 6 :t:: O.360 ( n = 7 ) 0 . 5 8 2 :t:: O.570 ( n = 1 0 ) F i g . 4 Palcioglhota noitacifissalc and esaremolet ytivitca ealuv

Bars ctiepd het mean t::SD. tnacifinigS ecnereffid was ton tedtecde by sisylana vfo ceianar

(ANOVA). ( a m o V μg )nietorp

••

•

_工

L

'

p=0 2.4 2 . 0 -〉、1. 6 -〉

B

2.1 -c ' d

。

g

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-O E

.

.

s

04. -( j ) ~ . . : : 0.0 -( j ) 〉 ( j ) 凶

一全一

70 < (Yr) 0 . 5 7 6 :t::)(n=14.624O 5 0 -6 9 04.:86t:: 04.28(n=1 )1 F i g . 5 The pihsnoitaler tfo esaremole ytivitca and nitoeragne

Bars tcpied eth mean t:: SD. tnacifingiS ecneerffid was ton dectedet by sislyana vfo encriaa

(ANOVA). < 49 0 . 0 6 6 :t:: O.074(n=4) 係数0

4

.

4 で相関関係を認めたが，早期大腸癌では-0 . 0 7 であり，相関関係はなかった.giF( .)6 考 察 大腸癌は. 2013 年の統計によると，本邦のがんの 部位別死亡率において女性で

1

位，男性で

3

位であ り，その対策が急がれている? 大腸癌の治療成績は 他のがんと同様に早期癌では良好であり. eStag が 進行するにつれ5年生存率は悪くなるので，早期発 見・早期治療が重要である.また 大腸癌では正常 度腺腫，粘膜内癌，粘膜下層浸潤癌に分けても，テロ メラーゼ活性値，陽性率ともに差はなかった.giF( .)4 また，年齢，性別，肉眼形態，腫蕩の大きさ，占 居部位でそれぞれ，テロメラーゼ活性値，陽性率を 検討したが差はなかった.giF( .5 Table )2 .年齢にお いては，高齢者でテロメラーゼ活性がやや高い傾向 があったので，さらにテロメラーゼ活性値と年齢の 関係についてピアソン法で相関性を検討した.結果， 年齢とテロメラーゼ活性値の相関は，腺腫では相関

Table 2 Level tfo resameole ytivitca and evitisop tear Number fo leevL foesarmeolet anMide _eulav-p evitisoP t h e stneitap ytivitca ::!::naem( )SD eulav etar G e n d e r M a l e 12 0.4:: :25!:055.0 462.0 S.N 76 % Female 8 425.0::!::0.4 68 0.482 57 % M a c r o s c o p i c eypt E l e v a t e d epty 9 255.0::!::047.0 0.l 66 S.N 65 % S u p e r f i c i a l talf epyt 02 ::!::634.0 414.0 3.0 23 57 % D i a m e t e r foeht tumor (mm) 1 0 -2 0 8 073.0 士282.0 283.0 S.N 57 % 2 1 -03 41 224.0::!::0.4 09 612.0 46 % 3 1 - 7 686.0::!::877.0 064.0 17 % L o c a t i o n R i g h t noloc 31 805.0::!::055.0 02.33 S.N 26 % L e f t noloc . Rectum 61 244.0::!::225.0 003.0 57 %

.

一

一

一

Adenoma

.

.

.

. . . . . . - 同 個陣剛・圃瞳角・町‘ ...

、

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( a m a νμprogn0016匂2 )寸寸 A

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ylraElatceroloc c a n c e r 主

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t 0 . 0 0 J I ~。・4 _J 百 コ〉 0 4 0 J / ¥ lr=-O07 -0 . 8 0 崎 』輔 悟 島 岡 圃 - 圃 圃 同 岬 4 匝 3 0 40 05 60 70 08 90 (Yr) F i g

. 6 The pihsnoitaler between age and eht esrameeolt ytivitca lueva

Weak noitalerroc between age and rsaemoleet ytivitca suealv ni adenoma group was -ed t

e c t e

d by Pearson method. but tno niylrae latceroloc ercanc p.urog

粘膜から腺腫，そしてがん化へ段階的な病理学的変 化が起こると考えられている.そして腺腫もしくは 早期癌の段階で発見することにより低侵襲な内視鏡 治療を行うことは，大腸癌の治療成績の向上や患者 の

QOL

向上の面からも非常に重要とされている円 本研究では，予防的腺腫摘除の妥当性を考える上で の一つの知見を得るため，腺腫を含む大腸腫蕩とテ ロメラーゼ活性に注目しネ食言すした. テロメアは染色体末端にある特殊な構造を持つ

DNA

の繰り返し配列で，染色体の融合や変質を防 ぎ安定化に重要な役割をもっー ヒト細胞のテロメ アは，

DNA3'

末端の

TTAGGG

塩基配列の繰り返し である.

DNA

ポリメラーゼは

'

3

末端の

DNA

を完全 に複製できないため，細胞分裂の

DNA

複製時にテ ロメアが短縮していく凡 ある程度短縮するとテロ メアを保護するタンパク複合体であるシェルテリン が機能できずアポトーシスが起き細胞死が起こると されているべ しかしがん細胞ではテロメアを伸長 する酵素であるテロメラーゼを発現することによ り，細胞分裂を安定化していると言われている. し たがって，がんの増殖にとってテロメラーゼ活性の 獲得は，がん細胞がいわゆる不死化を起こし増殖を し続けるために重要である. 大腸癌におけるがん化やその進展には様々な分子 的経路が考えられており，多くの遺伝子やエピジェ ネティックな変化が関わる.例えば，がん抑制遺伝

-157-子である adenomatous sisopylop iloc (APC) や p53 の機能障害，

s

a

r

-

K

のようながん遺伝子の機能獲得と いった多段階の遺伝子変化が関与しているといわれ ている))1918 その過程で，大腸腫蕩が細胞分裂を安定 的に行うことに寄与するテロメラーゼ活性の獲得 は， どのようなメカニズムで， どの時点で起こるの か議論のあるところである. ardtelhEng ら)7および Tang ら)8は大腸癌と大腸正常粘膜組織のテロメア 長とテロメラーゼ活性を測定し正常粘膜組織では テロメラーゼ活性はみられないこと，大腸癌ではポ リープや炎症組織よりテロメア長は短縮し，テロメ ラーゼ活性は高い値であり さらに進行癌の方が早 期癌よりテロメラーゼ活性が高いと報告している. 従来のTRAP 法による測定では，腺腫の段階ではテ ロメラーゼ活性はあるが陽性率は少なく，浸潤がん になると高くなるとの報告が多い加.すなわち，腺腫 の段階では不死化の獲得を示唆する所見は少ないと いうのが定説であった. 今回われわれは，感度が高く，わずかな活性値も 測定可能である QTD キットを用いたリアルタイム PCR 法で大腸腺腫と早期癌の29 例の腫蕩組織と正 常粘膜のテロメラーゼ活性値を測定した.大腸正常 粘膜において平均450.0 amo /lμg pnietor と低い値 であるが，わずかに活性値が検出された. Hiyama ら)20 もヒトの正常腸管粘膜の下

3

/

1

の腺管に局在し てテロメラーゼ活性が存在すると報告しており，こ れは腸管幹細胞由来と推測されている.また，大腸 腫蕩92 例のテロメラーゼ活性は0

4

.

2 amo7 /l μgpro-t e i n と正常粘膜組織の01 倍近くであり，有意に高 かった. 定量法によるテロメラーゼ活性値には，これまで 腫蕩判別のカットオフ値が設定されていないため， ROC 曲線を用いて検討したところ，腫蕩と正常粘膜 の聞に

0.

1

6 amo4 /lμg pnietor という値が便宜的に 設定できたこのカットオフ値は，正常粘膜の平均 値の約3倍弱で，腫蕩判別の特異度90% ということ になる.腫蕩部を腺腫と早期大腸癌の 2群でそれぞ れのテロメラーゼ活性を比較すると，腺腫でもテロ メラーゼ活性は平均

0.

4

8 amo6 /lμg pnietor と高く， 陽性率は65.0% であり，早期大腸癌組織のテロメ ラーゼ活性0

4

.

6 amo7 /lμg pnietor (陽性率 0.57 %)と 比較しでも差がないことが分かつた.giF( .)3 対象に した腺腫は， 10mm 以上であったが，内視鏡的摘除 の対象となるレベルの腺腫において，すでに高頻度 にテロメラーゼ活性が十分高くなっていた.これま での報告では間，腺腫ではテロメラーゼ活性がない， もしくは弱く検出されるという報告が多かったが， 早期大腸癌の活性とほぼ同じ活性が検出されたこと は興味深い点である.otiaN らは異型度が増すにつ れ段階的にテロメラーゼ活性を獲得していくが，テ ロメラーゼRNA コンポーネントの発現は，腺腫の 時点ですでに起こっており 異型度が増しでも変わ らない，と報告している)9 また， human esrameoelt r e v e r s e esatpircsnart (hTERT) の値はテロメラーゼ 活性の信頼できるマーカーとされているが， リアル タイム PCR 法を用いて測定されたhTERT の値は， 正常大腸粘膜に比較して有意に大腸腫蕩で高値であ り，腺腫と癌との差はないと報告されており2へ腺腫 の時点でテロメラーゼに変化が出ていることは，確 かであると考える. また患者の性別，肉眼形態，腫蕩の大きさおよび 占居部位に関してテロメラーゼ活性とは関連がな かった年齢が高齢になると体細胞のテロメア長は 短くなるとされており，高齢者では，テロメラーゼ 活性が賦活されやすいと考えられる.年齢ごとに腫 蕩のテロメラーゼ活性をみると高齢の方が高い傾向 にあった.そこで，腺腫と早期癌に分けて年齢とテ ロメラーゼ活性値との相関をみると，早期癌では年 齢とテロメラーゼ活性との関連はなかったが，腺腫 では，弱い相関が認められた高齢者の腺腫発生に おいては，テロメラーゼ活性は上昇しやすい傾向が 考えられたが，症例数が少ないので，更なる検討が 必要であると考える. このように，大腸腫蕩においては，腺腫の時点で 正常粘膜組織と比較して有意に高いテロメラーゼ活 性を持っているがその他の因子とは関連がないこと が分かつた.これは，大腸癌の発生過程を考える上 で，腫蕩として発生した腺腫はすでに不死の状態を 獲得する準備ができていることが示唆された腺腫 は細胞分裂を繰り返してもアポトーシスに陥ること なく，その状態で大きくなり，さらに遺伝子異常が 蓄積されるにつれてその異型度が増しがん化すると いう，nietselgoV ら却のAdenoma-Carcinoma -euqes n c e の概念を裏づける結果と考えられた.aarhishiN ら却は，約87 ，000 名を対象とした22 年にわたるコ ホート研究により大腸癌の内視鏡検診受診者は未受 診者よりも大腸癌の死亡率が低く，さらに腺腫性ポ リープを切除した群は大腸内視鏡検査を受けない群 に比較し大腸癌の死亡リスクが43% 低いと報告し ている.また，近年患者への身体的負担が軽いとさ

れる

EMR(

内視鏡的粘膜切除術)削)や

ESD

(内視鏡 的粘膜下層剥離術)など却の内視鏡技術が進歩し大 きな腺腫性ポリープや早期大腸癌でも安全，確実な 治療が可能となってきている.腺腫の時点でテロメ ラーゼ活性が高くなり すでに不死化が始まってい ると考えると，腺腫や早期大腸癌に対する内視鏡的 治療法は，妥当性のある予防的治療法となることが 強く示唆された. 結 器ゐ 白岡 大腸腫蕩患者

9

2

例の正常組織と腫蕩組織のテロ メラーゼ活性値を測定した結果，テロメラーゼ活性 は 大 腸 腺 腫 で す で に 高 く ， 年 齢 病 理 組 織 や 大 き さ に関わらず腫蕩の不死化の準備が始まっていること が 示 唆 さ れ た 開示すべき利益相反状態はない. 文 献 1 ) ihsabihsI K， erosHi K， Kato H e at:l gninrmieetD t h e easremolet ytivitca efodetailofx e lc1 s in-itsetni n a l l a v a g e noitulos ottceted latceroloc .amoncirac A n t i c a n c e r esR :91 6382-1382 ， 9991 2

) Hoos A ， Hepp HH ， Kaul S e at:l esrameloeT -vitca i t y setalerroc thiw tumor ssenevissergga and -er f l e c t s yaperht tceffe nitsaerb .recnac tnI J Cceran 7 9 : 8 -1 2 ，8991 3 ) igzI A， Gunal A， Gunduz S:Uecnacifingi Tfo m-elo e r a s e ytivitcA and Gene noisserpxE nilatceroloC C a n c e r . chearRes nI rencaC and Tumor :2 49-56 ， 2 0 1 3 4

) Akare S， Jean 圃uisLo S， Chen W e at:l y-eoxodUrs

c h o l i c dica esatulodm enotsih noitalyteca and -ni d u c e s noitaitnereffid and .ecnecsenes tnI J Crance 1 1 9 : 2 9 5 8 -2 9 6 9 ，0602 5 ) Lanca V， Zee RY ， Rverai A e at:levitatitnauQ -et l o m e r a s e ytivitca nignitalucric human :setycokuel u t i l i t y foemit-laer ciremolet staeper noitacifilpma p r o t o c o l (RQ-TRAP) ni a cacinil lac/ligoloimedipe s e t t i n g

. nilC Chem Lab Med :74 3780-87 ， 0902 6 ) Shay JW ， ittehccaB :S A syevur tfoesaremole -ca t i v i t y ni human .recnac Eur J Cernca :33 79787- ，1 1 9 9 7 7 ) thardngelE M， yknslilurD P， melliuG J e at:l -eT l o m e r a s e and ermeoelt htgnel ni eht tpmenvelode and noissregorp pfotnangilamer snoisel ot-ceroloc t a l .recnac nilC ancerC sRe :31491-1391 ， 7919 8

) Tang R， Cheng AJ ， Wang JY e alt : esolC -alerroc t i o n between esareomlet noisserpxe and -adenoma t o u s pylop noissergorp nipetsitlum latceroloc -rac c i n o g e n e s i s . erancC Res :85 45042-054 ， 8991 9 ) toNai Y， Takagi T， Handa 0 alte : raselomeTe -ca t i v i t y and noisserpxe foesaermoelt RN A co-omp n e n t and citylatac stinubus nisuorenccaerp and -159-c a n c e r o u s latceroloc .snoisel Tumour loiB :22 4-37 3 8 2 ，1002 1 0 )

I

大腸癌取扱い規約(第 8版)J (大腸癌研究会編) ，金 原出版，東京)3102( 1 1 ) Yamaza T， Miura Y， Bi Y e at:l icgoloacrmahP stem llec sedba noitnevretni a new sa hcaroapp ot o s t e o p o r o s i s tnmeatert ni.stnedor PLoS One :3 e 2 6 1 5 ，8002 1 2 ) elizeatM 1， stipS C， seolreV A e at:l-aziretcarahC t i o n CD30 fo noisserpxe ni human yonicembr stem c e l l senil derutluc nieefr-murse media and -sap s a g e d .yllacinahcem Hum Reprod :42 4892477-2 ， 2 0 0 9 1 3 ) 厚生労働省3012 年人口動態統計(確定数)の概況. h t t p : / / w w w . m h l w . g o . j p / t o u k e i / s a i k i n / h w / j i n k o u / k a k u t e i I 3 / d /l.fpd7hL1 (参照 0 日年 12 0 月27 日) 1 4

) Kato H ， Haga S， Endo S e at:l gnitfiL fosnoisel d u r i n g cipcosoden lasocum noitceser (EMR) fo e a r l y latceroloc :recnac snoitacilpmI rof eht a s s e s s m e n t .yt rifliobatcese ondEscopy :33 3578-56 ， 2 0 0 1 1 5 ) Blackburn EH ， ereidrG CW ， stakSzo JW: T e l o m e r e s and :esaremolet eht hatp omfr zemai ， Tetrahymena and tsaey ot human rcenac dan a g i n g . N a Med t :21 8311-3311 ， 6002 1 6 ) Harley CB ， rehctuF AB ， rdeierG CW: eslomerTe s h o r t e n ngiurd ngieag human fo .stsalborbif eturNa 3 4 5 : 4 5 8 -4 6 0 ，0991 1 7

) Palm W ， de Lange T: How niretlehs stcetorp mammalian .seremolet Annu Rev netGe :24 01-3 3 3 4 ，8002 1 8 ) Markowitz SD ， Billognatre MM: raulceolM o r i g i n s fo :recnac raulcleoM sisab folatceroloc c a n c e r . N Egln J Med 63:104629-442 ， 0902 1 9 ) inoP MS ， Chung DC: The lamosomorhc ytilibatsni pathway ni noloc .recnac ygolroetneortsaG :831 2 0 5 9 -2 0 7 2 ，1002 2 0

) Hiyama E， Tatsumoto N， Kodama T e at:l T e l o m e r a s e ytivitca human ni .enitsetni tnI J Olcon 9 : 4 5 3 -4 5 8 ，6991 21) hleSa S， Lam AK ， Ho YH: emit-laeR PCR q u a n t i f i c a t i o n fo human esaremolet esrever t r a n s c r i p t a s e (hTERT) nilatceroloc .recnac P a t h o l o g y :04 0-352 ， 8002 2 2 ) neitlseogV B， Fearon ER ， Hamilton SR e at:l G e n e t i c snoitaretla ngirud romut-latceroloc -oleved pmen .tN Elng J Med :913 32-5552 ， 8891 2 3 ) aharhiNis R， Wu K， Lochhead P e at:l rmg-teLon c o l o r e c t a l -c a n c e r ecnedicni and ytilatrom retfa l o w e r y.poscoden N El，gn J Med :963 1505-1091 ， 2 0 1 3 2 4

) Kato H， Sakamoto T， Yamada R e at:l -osndE c o p i c alcosum noitceser (EMR) rosnfoisellatceroloc a n detfil-noisel d noitidnoc asa inrotacidn tfoeh ut幽

mor .noisavni Ann racenC Res Ther :61 035-2 ， 8020 2

5

) Kato H， Sakamoto T， Otsuka H e at:l icopscdoEn D i a g n o s i s and Treatment roflatceroloC .recnaC nI C o l o r e c t a l Cancer - From noitneverP ottneitaP C a r e hrattE( R e)d ， 83427-p3p )2102(