カニ中腸腺の蛋白質分解酵素
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(2) . Ｖｏ ｌ ．２１ ，２ ， Ｎｏ. Ｉ Ａ） Ｓｅｃｔ ｉ ｉ ｄｏ Ｕｎｉｖｅｒ ｉ ｉ ｌｏ ｆ Ｈｏｋｋａ ｏｎ ｌ ｔｙ ｏｆ Ｅｄｕｃａｔ ｏｎ（ Ｊｏｕｒｎａ ｓ. Ｆｅｂｒｕａｒｙ ｌ９７１. 種々のカニ類中腸腺の蛋白質分解酵素 １ ，. カ ラ ム ク ｐ マ ト グラ フ ィ ー と 電 気 泳 動曽. 伊 藤 格 三・小 沢 成 子・帆 保 図 雄 北海道教育大学釧路分校化学教室. ｈｅ Ｈｅｐａｔｏｐａｎｃｒｅａｓ ｏｆ Ｖａｒｉｏｕｓ Ｃｒａｂｓ． Ｐｒｏｔｅｏｌｙｔ ｉ ｃ Ｅｎｚｙｍｅ ｆｒｏ・ｎ ｔ ｄ Ｅ１ ｓ １ ｌ ｅｃｔ ｒｏｐｈｏｒｅｓ ． Ｃｏｌｕｍｎ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ａｎ Ｙａｓｕｚｏ 工Ｔｏ， Ｓｈｉｇｅｋｏ ｏｚＡＷＡ ａｎｄ Ｋｕｎｉ ｏ ＨＯＢｏ ｆ Ｅｄｕｃａｔ ｉ ｋ ｉ ｈ ｋ ｉ ｄ Ｕ ｉ Ｈ ｔｙ ｏ ｈ Ｂ ー Ｋ ｉ ｏｎ ｃｈｅｍｉ Ｌ ｂ ｅｒ ｓ ｏ ｎ ｖ ｒ ｏ ａ ｎ ｃ ａｓ。ｒｙ ｃａ ａ ｏｒ ， ｕｓ ｒｏ ａ ，. Ａｂｓｔｒａｃｔ ｌ ｄｅ６ｎｅｄ． ｉｎｓ ｈａｖｅ ｂｅｅｎ ｗｅｌ ｉ ｉ Ｔｈｅ ｐｈｙｓ ｉ ｒｙｌ ） ｓ ａｎ ｔ ｅｓ ｏｆ ｍａｍ ｍａｌ ｃａｌ ｐｒｏｐｅｒｔ ｃａｌ ａｎｄ ｃｈｅｍｉ ＤＥＡＥ．Ｓｅｐｈａｄｅｘ ．ｈｉ ｔｈ ｔｈｅ ｃｈｒｏ ーｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ｄｏｎｅ ｂｙ ａ Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ一５０ ｓ ｗｉ ｓ ｒｅｐｏｒｔ ｄｅａ１ ， ｉ １ｕ１ｏｓｅ ｍｅｍｂｒａｎｅ－ ｅ１ｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓ ｓ ｔｈ ａ ｄｉ Ａ－２５ ａｎｄ ＣＡ小Ｓｅｐｈａｄｅｘ ｃ－２５ ａｎｄ Ｗｉ ｓｃ－ ａｎｄ ａｃｅｔｙｌ ｃｅ１. ｉ ｉ行ｅｄ ｐｒｏｔｅｏｌｙｔ ｔ ｓｏｌ ｅｄｆ ｒｏｍ ｔｈｅ ｈｅｐａｔｏＰａｎｃｒｅａｓ ｏｆ ｖａｒｉｏｕｓ ｃｒａｂｓ （Ｐの′””－ ｃ ｅｎｚｙｍｅ ｉ ａ ｏｆｔｈｅ Ｉ ）ｕｒ Ｇ郷） 物ｏｄｅｓ ｍブ Ｚ ｓ（打． Ｍ”犯 Ｅｄｚ加γｄＢ鰹Ｚ ム‘ ） ｓ タ ２ ｃ棚疑似 （丁”錦粥ｓ ，ａｎｄ β〆””の ， Ｐαγα妨兎ｏｄｅｓ ｂ焔諺Ｐｅ Ｚ（＆ ｍｉ ｄｆ 省 言 ． ） ） び那 ‐ ｓのめｅＣ虚 ・. 論. 緒. ｉ ｉｎ ｒｙｐｓ ｎ 等 の 物 理 的， 化 学 的 諸 性 質 は 古く か ら多 く 陸棲哨乳動物， 特に高等動物の ｔｒｙｐｓ ，ｃｈｙｍｏｔ ｉ ｈ れた また の研究者達によって詳細に研究され報告さ ， 水棲哨乳動物の鯨の腫 臓の ｔｒｙｐｓ ｎ， ｃ ｙｍｏ‐ ． ）の一連の研究があり その諸性質及び既知哨乳動物の ｔｒｙｐｓｉｎ， ｉｎ については 松岡・小出等１ ｔｒｙｐｓ ， ， ｉ ｔ ｓ ｎ の性質との比較結果も報告された． 更にまた， 魚類について各臓器中の蛋白質分解 ｃｈｙｍｏ ｒ ｙｐ ）等 により討論された． 一方 無脊椎動物の アメリカザリガニ ） 小出４ ） 大城８ 酵素について 新井２ ， ，. ）に よ り ｉｎ－様 酵 素 の 分 離 精 製 は 矢 後５ ｒｙｐｓ ） の中 腸 腺の ｔ ｓ ｃ超γ厩 （ＧＺＲＡＲＤ） ７ ２蹴 れ‘ （Ｐｍ ｍ７ ， ま た ） Ｒ Ｚ ｌ ｌ ｈ ｉ ｉ ｉｎｇ６ な 酵 素 の 詳 細 研 究 ｔ －様 は 溺 Ｚ Ｚ ｔ ｅ ｓ ｎ ｃ ｒ ａ ｓ ｎ ０ 中の ｒ ｗ ６ ｈ ｅ ） ａ ｏ ａ ） の ｄ Ｓ れ ｙ ｐ （ の ｚ β ｓ ｌ ｐ ｒ ′ ｅ ． ｃ ａｙ ｓ. 略字 Ｌ動物の 等によ って行なわれ， この酵素の１. ｉｎ ｔｒｙｐｓ. の性質との比較検討もなされた． 更にまた，. ｉｎ－様 酵 素 に つ い て の 精 製 及 び唖 乳 動 物の ｔ ｒｙｐｓ ） の ｈｅｐａ ｅａｓ 中 の ｔ ｓ ｏｐａｎｃｒ ｚ ｆ ⑦”ｇ ｓｓ郷がｅｒ エ ビ （Ｐｅ ’ ｚ ‘ ７ ） ｉｎ の性質との比 較は Ｂ． Ｔ． Ｇａ ｔ ｅｓ 等 に よ っ て 速 報 され た． 更 に， 無 脊 椎 動 物の 昆 虫， 微 生 ｔｒｙｐｓ ） ｉｎ－様 酵 素 に つ いて も報 告 さ れ た８ 物類の ｔｒｙｐｓ ．. ・ ！ ・ Ｚ 粥ｓ Ｚ ２ ｓ物鰭Ｚｍ （丁 ） ） の中 腸 ｏｄｇｓｃの’ ｅ ｓ ， 著 者 等 は， １９６４ 年 以 来， 甲殻 類特 に タ ラ バ ガニ （Ｐの 〆訪ね. 腺中に含まれる蛋白質分解酵素について研究を行ない， その酵素を結晶状に分離し， 二， 三の性 質. ） 更 に ハ ナ サ キ ガニ （Ｐαγ餌Ｚ物ｏｄｅｓ るだ災Ｐｅ ｚ ムに”ｓ ｓ（且． 肌”りｅ Ｅ叱りαγｄｅｓｅ ） ） に つ い て 報 告 した９ ， ， ，. ※ この報告の一部は， 日本化学会北海道支部大会・函館（昭和４３年７月）に於いて発表した， （６６）.
(3) . 第２１巻 第２号. ・. 北海道教育大学紀要 （第２部 Ａ）. 昭和４６年２月. 〆 ） の中腸腺中に含まれる蛋白質分解酵素をタラバ ガニの場 ケ ガニ （β〆 ； ”αｃ〆 ｚ ‘ ｓＺ ｇ物αを”（Ｂγαれ端） ｓ. ‐ プリ 合と全く同一の条件で分離精製し， 得られた酵素のカ ゼイ ンに対する分解の様子をフィ ンガ ． ｏ ｌ ） ント法で検討し， これら三種類の酵素について比較を行なった ．. この報告はハナサキガニ及 びケ ガニの中腸腺中に含まれる蛋白質分解酵素を従来通りの方法でア. セ ト ン粉 末 と した も の を 試 料 と し， セ フ ァ デ ッ ク ス Ｇ－５０ ， ＤＥＡＥ－セ フ ァ デ ッ ク ス Ａ‐２５ 及 び ＣＭ‐セ フ ァ デ ッ ク ス‘Ｃ‐２５ の カ ラ ム ク ロ マ ト グラ フィ ー の 結 果 と， ア セ チ ルセ ル ロ ー ス 膜 電 気 泳 動 及 び デイ ス ク 電 気泳 動 の 結 果 に Ｏ い て 述 べ た も の で あ る， 比 較 対照 と して カ ラ ム ク ロ マ ト グ ラ フ. ィ ー で は タ ラ バ ガニ よ り 精 製 した ア セ ト ン粉 末 を， ま た， ディ ス ク 電 気泳 動 に は 市 販 の ｔｒｙｐｓｉｎ を 用 い た，. 実験試料及び方法 ｒ ６８露” 云卿ｄｅ ）及 び ケ ガニ（Ｅ卿 伽ｃｒ ） ｓｉ ｓ ｅ ’ ２ ｓ 彰 の 幼β ｓ（互． Ｍｄｗ解ｄｅｓｅＺＬＺに“ｓ ｚ 【 ハ ナサ キ ガニ（Ｐα加島. ｄ ｚ ） ） は１９６８年９月から１０月にかけて白糠町沖で漁獲されたもので， 水揚げ後直ちに ドライ （βγα ２ ７. アイ スで凍結 して研究室に持ち帰り中腸腺を採取し， 再び ドライ アイ スで急速に －２０ｏＣ で凍結貯 ）方 法 蔵 した も の で あ る． アセ ト ン粉 末 に ま で 調 製 す る 方 法 は， タ ラ バ ガニ に つ い て 既 に 報 告 した９. ２ ８～７ １５リ ン酸緩衝液 （ ）を 加 え ２４ と全く同一の操作によった， 即ち， 中腸腺に３倍量の Ｍ／ ＰＨ ６， ， ｏ ～４８ 時 間 １ｏ Ｃ 以下で抽出， 次いで酢酸鉛処理， 硫安分別， アセトン分別を行なって得たもので あ る， こ の よ う に して 得 られ た標 品 は タ ラ バ ガニ の も の と ほ ぼ 同 一 の 活 性 を 有 して い た， こ の 標 品. ｒ Ｚ ・ ） ） の 酵 素 は 当研 ｓ ｅｓ ｚ ｚ ｆ を 今 回 の実 験 試 料 と して 用 い た． タ ラ バ ガニ（Ｐ解α産物ｏαｅｓｃの”高弟 鰭Ｚｍ （四ｒ. ｌ ｉｎ は Ｍｅｒ 究 室 で先 に 調 製 した 標 品 を用 い た， ｔ ｒｙｐｓ ｃ （ 製品 を用 い た．. ｔ 酵素 活 性 の 測 定； Ｋｕｎｉ ｚ のカゼイ ン消化法を用い ２８０ｍ” の 吸 光度 で 求 め た． 即 ち， Ｍ／捲 り ｌ に １ ％ カ ゼイ ン（ ８ １５ リ ン酸緩衝液 ｌ ｍｌ を加え ３７０ ） －Ｍ／ ｌ ン酸緩衝液に溶かした酵素液 ｌｎ ＰＨ ６ ，. Ｃ で１ １１ を加え ４４Ｍ 三塩化酢酸 ５１ １ ０分間反応を行なった． 次に ０ ， ， 室温で数時間放置後櫨遇. ８０ｍ” における吸光度を求めた． 酵素の比活性は酵素蛋白質 ｌ ｍｇ 当り ２８０ ｍ” し， そ の 鹿 液 の ２. で１分間に変化 した吸光度で表わ した． 吸光度の測定は日立製分光光度計１３９にて測定した， 蛋 白 質 の 定 量； ミ ク ロ ゲル ダ ー ル 法 及 び ２８０ ｍ〆 における吸光度から求めた．. ｄ， 製 Ｓｅｐａｒａｘ を用 い， ベ ロ ナ ー ル 緩 衝 ア セ チ ルセ ル ロ ー ス 膜 電 気 泳 動；Ｊ６ｋ６ Ｓａｎｇｙｏ Ｃｏ ， Ｌｔ ０ ０ ６ 及び ８ ） で 行 な っ た． ０ ） 及びクエ ン酸緩衝液 （ ） リ ン酸緩衝液 （ 液（ ＰＨ ６． ＰＨ ７ ＰＨ ８． ． ．. ， ３ ） ディ スク電気源動； ミツミ科学産業株式会社製の装置を用い， トリスー グリシン緩衝液 （ ＰＨ８ ，. で 行 な っ た．. ０ ８ｘ２０ｃｍ） は 予 め Ｍ／１５ カ ラ ム ク ロ マ トグラ フイ ー 用 力 ラ ム の調 製； セ フ ァ デ ィ ク ス ー Ｇ－５０ （ ，. ８ ）で２０分 ８ ） で平衡に保った後に用いた， 溶出は Ｍ／馬 リン酸緩衝液 （ リ ン酸緩衝液 （ ＰＨ６ ＰＨ ６ ， ． ｌ ８ ０ ２ ５ の吸光度を日立製分光光度計で測定 溶出液の蛋白質は ｍ の流出速度で行ない 間に ｍ ” ， ，. し， 酵素活性は溶出液の ｌ ｍｌ を 用 い て 前 述 の 方 法 で 測 定 した， ＤＥＡＥ－セ フ ァ デ ッ ク ス Ａ‐２５ 及 １５ リ ン酸緩衝液で平衡にさ び ＣＭ－セ フ ァ デ ッ ク ス Ｃ－２５ は セ フ ァ デ ッ ク ス Ｇ‐５０ と同様に Ｍ／ ８ ）及びこれに順次食塩を加えて行 なっ せた後に用いた． カラムからの溶出はリ ン酸緩衝液 （ ＰＨ ６ ， た， 蛋白質の定量及び酵素活性の測定はセファデックス Ｇ－５０ のときと同様である， １ ５リン酸緩衝液に溶か しその全量をまずセフ ァ カ ラ ム ク ロ マ トグラ フ ィ ー； 試 料 の 一 定 量 を Ｍ／. デ ッ ク ス Ｇ‐５０ のカラムに供した， 溶出液中の活性区分を集め， 低温で減圧濃縮し， その濃縮液を ＤＥＡＥ－セ フ ァ デ ッ ク ス Ａ‐ ２５ に供した． 前記同様溶出液中の活性区分を集めて濃縮し， 更に ＣＭ－ セ フ ァ デ ッ ク ス Ｃ－２５ に 供 した．. （６７）.
(4) . ＶＯ１ ，２１ ，２ ， Ｎｏ. ｄｏ Ｕｎｉ ｉ ｉ ｉｏｎ （ Ｓｅｃ ｉ ｔ Ｊｏｕｒｎａｌｏｆ Ｈｏｋｋａ ｔｙ ｏｆ Ｅｄｕｃａ ｔ ｏｎ 口 Ａ） ｖｅｒ ｓ. Ｆｅｂｒｕａ・ｙ ｌ９７１. 実験結果並びに考察 第１表 実験試料として用いた酵素の種類. 本 実 験 に 供 した 三 種 の 力 二 の 標 品 の 詳 細 は 第 １ 表 に 見 る 通 り で あ る． 第 １ 表 か ら， ア セ ト ン分 別. 種 類 ３ ｍｇ で 得 た タ ラ バ ガニ の 酵 素 は， ９ ， ， 比 活 性 ２１．６ タラバガニ ４ ｍｇ 皿ｉｑｍｇ 加 記ｍ， ハ ナ サ キ ガニ の 酵 素 は １０ ， ，. 比活性 ２０．９ｕｎｉｔ／ｍｇ ｐｒｏｔｅｉｎ， ケ ガ ニ の 酵 素 は ９．３ ９ｕｎｉ ｔ ｎ ｌｇ， 比活性 １８ ／ｍｇ ｐｒｏｔｅｉｎ で あ っ て， ほ ，. 鎚. 蛋白質量 ｍｇ. 比 活 性. ｉｎ ／ｍｇ ｐｒｏ ｔ ｔ ｕｎｉ ｅ. ６ ，. ９ ，. ハ ナ サ キ ガ ニ １０ ，４ ヶ. ガ． 二. ２０ ．９. ９ ，３ －. １８ ．９. 備. 考. ６縫鰯是 １ ９ １９６８年 ９月 白糠 沖産 同. 上. ぼ同程度の活性を有するものであった． またこの. 標品はアセチルセルロース膜電気泳動及びディ スク電気泳動で共に単 一であることが示された， こ の結果は第４図， 及び第５図に示した．. セ フ ァ デ ッ ク ス Ｇ－５０ ， ＤＥＡＥ‐セ フ ァ デ ッ ク ス Ａ ２５. 及び. ＣＭ－セ フ ァ デ ッ ク ス Ｃ‐２５ の結果は. 夫々第１図， 第２図及び第３図に示 した． 第１図から第３図までに示した結果から， タラ バ ガニと ケ ガニ で は セ フ ァ デ ッ ク ス Ｇ－５０ では二成分に分かれた が酵素活性の大部分は最初に溶出される区. 分 に 認 め られ た， ハ ナ サ キ ガニ で は 一 成 分 の み で あ っ た， ＤＥＡＥ－セ フ ァ デ ッ ク ス Ａ‐２５ カ ラ ム で. ３～０ ４Ｍ で溶 出 さ は ケ ガニ はそ の ま ま 通 過 して しま っ た が， タ ラ バ ガニ では 溶 出 液 の 食 塩 濃 度 ０ ， ， Ｍ ０ ３ で溶出される区分とが認められ， れた ハナサキガニではそのまま通過する区分と食塩濃度 ，. ， ３Ｍ で溶出される両方の区分に酵素活性が認められた， 尚タラバ ガニ そのまま通過する区分と ０ ， ３Ｍ で溶出 した区分は更に二区分に分かれたので， いずれの場合も最 及びハナサキ ガニの場合 ０ ， 初の区分を Ａ． ， 後の区分を Ａ２ と した．. 以 上 の 結 果 か ら電 荷 を 替 え た ＣＭ－セ フ ァ デ ッ ク ス Ｃ－２５ では反対の現象が認められるのではな. いかと考えたが， 三種のカニの酵素は全部そのまま通過した．. カ ラ ム ク ロ マ ト グラ フ ィ ー に 供 した 試 料 の 酵 素 活 性 を １００ と した と き の各 カ ラ ム ク ロ マ ト グラ フ. （ ｕ き ｏ 鴬 ） 選 米 蒙. ハナサキガニ. ケガニ. 試験管教. 第１図 各種カニ酵素のセファデックス Ｇ‐５０， カ ラ ム ク ロ マ ト グ ラ フ ィ ー ５ｘ３０ｃｍ， Ｍ／１５ リン酸緩衝液で平衡（ ８ セ フ ァ デ ッ クス Ｇ‐５０ カ ラ ム １ ） ＰＨ ６ ． ． ， 緩衝液で藩出 －－ 蛋白質 ２８０ｍ” における吸光度の変化によって求めた） …… 酵素活性（ （６８）.
(5) . ６年２月 昭和４. 北海道教育大学紀要（第２部 Ａ）. 第２１巻 第２号. １ １. Ｖ Ｉ. １ ＝. Ｎ. Ｖ. ニ 、憎カ ′. （ Ｍ 音ｈ ｏ ｍ Ｎ ） 選 択隊. ５ ０ ，－ ー. ，. ｍ. ４ ｏ巨. ｌ ｏ ｏ. ～. ｖ. １ ５ ０. 試験管数. （ ュ． ミ 。 Ｍ Ｎ ） 型米 隊. ， ，， ５０ 試験管数 ｖ ｍ ｗ 鰹 各種カニ酵素の ＤＥＡＥ－セ フ ァ デ ッ ク ス Ａ‐２５， カ ラ ム ク ロ マ ト グラ フィ ー ２×３ ０ｃｍ， 緩衝液で溶出 ＤＥＡＥ‐セ フ ァ デ ッ ク ス Ａ‐２５ カ ラム １ ． 二 一「 蛋白質 １. 第２図. ２８０ｍ” における吸光度の変化によって求めた） …… 酵素活性（ ０ ０ ０. （ きｈ ｏ ｍ Ｎ ） 準 米豪. ２ ０ ，. タラバガニ－－－. ハナサキガニ. ケガニ. 第３図 各種カニ酵素の ＣＭ‐セフ ァ デ ッ ク ス Ｃ ２５ カ ラ ム クロ マ ト グラ フ ィ ー ２×３ ０ｃｍ， 緩衝液で溶出 ＣＭ－セ フ ァ デ ッ クス Ｃ ２５ カ ラ ム １ ，. －－ 蛋白質. ２８ ０ｍ” における吸光度の変化によって求めた） …… 酵素活性（ （６９）.
(6) . . ＶＯ １ ，２１ ．２ ， Ｎｏ. ｌｏｆ Ｈｏｋｋａ ｄｏ Ｕｎｉ Ｊｏｕｒｎａ ｉ ｉ ｉ Ｓｅｃｔ ｉ ＩＡ ｔ ｔ ｒ ｓ ｖｅ ｏｎ（ ｏｎ ｌ ） ｙ ｏｆ Ｅｄｕｃａ. ィ ー 後 の 相 対 的 活 性 は 第 ２ 表 に 示 した．. ァセチル セルロース膜電気泳動の結. Ｆｅｂｒｕａｒｙ ｌ９７１. 第２表 各クロマトグラフ 各ク ィーからの酵素の相対的活性. 対 的 活 性 セフ デ セフ クス ァデックス ァ ッ カラムに供する前 カラム Ｇ－５０ Ａ‐２５ ※ ・ ３ ７ ） ．９０（ＡＩ １００ １２７ で， 泳 動 条 件 は ０ ４１ 美 ，３１ １ ・Ａ／ｃｍ， ３０～４０ タ ラ バ ガ ニ １０８ ） ． ．３３ Ａ２ 美 １３５ ４１（ＡＩ ） ． １００ １５４ ０ ７ ｔ ／ ｖｏｌ ｃｍ ５ 分 間 で あ っ た， 染 色 は ボ ン ハナサキガニ ， 美 ４７ ） ．８５（Ａ２ ソ ー ３Ｒ‐三 塩 化 酢 酸 溶 液 を 用 い た 第 ヶ １００ ６３ ８５ ６１ ７２ ガ ニ ． ． ． ４ 図 に 示 した 結 果 か らは 三 種 と も 単 一 ※ 第２図参照 果 は 第 ４ 図 に 示 した 試 料 は セ フ ァ デ ． ５０ に 供 した の と 同 一 のも の ッ ク ス Ｇ－. 種. 相. 類. 成分から出来て いるように考え られ ， 三種間の電荷の差は タラバ ガニ ハナサキガニは類似し ケガニが多少 異なっていると考えられ ， ， る．. ディ スク電気泳動の結果は第５図に示 した 市販の Ｍｅｒｃｋ 製 ｔｒｙｐｓｉｎ を 対 照 と して用 い た こ ． ．. ・ ； . ０ ｐＨ ８ ．. ．. Ｈ ７ ０藍 叫 謝 ｐ 日６ ｐ １. ｒ. 馨 １ ゴ. ＋. Ｉ. ‘. ｆニ タ ラノミカ. 『. ｗ. で. Ｉ. ．. ハナサキガニ 第４図. ケ. 各種カニ酵素のアセチルセルロース腹電気泳動 ４ｍＡ／ ０～４ ０ｖｏ ｌ 泳動条件 ０ ／ ｔ ｃｍ，３ ｃｍ，５分間 ．. . . －. . － 一 タ ラ バ ガニ ハ ナサ キ ガ ニ. 第５図. － が. ケ ガ ニ. ト. ソ. 各種カニ酵素のディスク電気泳動 ６ ゲ ル， ８ｍＡ／ゲ ル， ２５０Ｖ，３０ 分 間 泳動条件 ｐＨ ８ ． （７０）. 、 ガ. ・.
(7) . １巻 第２号 第２. ′ ′. 北海道教育大学紀要 （第２部 Ａ ）. ６年２月 昭和４. １ ） ６ ゲル を 使 用 して， 永 井 の 記 載１ の結果 三種とも単一成分から出来ていることが認められた，ＰＨ ８． ｉｎ によく用いられる ｐＨ ４ ０ ゲルをも試みたが ゲ ｒｙｐｓ の条件と同 じに して泳動を行なった． 尚 ｔ ． ， １ ）と は 比 較 出 来 な か っ た ま た タ ラ バ ガニ と ケ ガニ を 混 合 して ル の 調 製 を 改 良 した の で 永 井 の 報 告１ ，. 試料とし同一条件で泳動を行なったが， アセチルセルロース膜の場合と異なり両者は分離せず一つ ６ ゲルは 分離用 ゲルも濃 縮用 ゲル の成分のみ しか現われなかった． ディ スク電気泳動用の ｐＨ ８． ，. も処方通りで ゲル化したが， ＰＨ ４．０ ゲルは処方通りではゲル化が進まなかった． そこで ＴＥＭＥＤ. Ｌ （Ｎ，Ｎ，Ｎ′ ，Ｎ テ トラ メ チ ル エ チ レ ン ジ ア ミ ソ） の 混 合 比 を変 えて ゲ ル を 調 製 した，. 以上の実験結果から， 三種の力二の中腸隊に含まれる蛋白質分解酵素にはほとんど差を認めるこ とは出来なかった． ただ ＤＥＡＥ－セ フ ァ デ ッ ク ス Ａ－２５ 及び Ｓｅｐａｒａｘ の 挙 動 か ら， タ ラ バ ガニ と ハ ナ サ キ ガニ の グ ル ー プと ケ ガニ の グル ー プに 分 けて 考 える こ と が 出 来 る の で は なし・か と 考 え る．. 今回の実験 に供した試料は両電気泳動的には均一であることが確かめられた， ｉｎ‐様 酵 素 で あ る か どう か 問 題 で あ る． タ ラ バ ガニに つ い て は 既 に 報 告 した これらの酵素 が ｔｒｙｐｓ ｉｎ－様 酵 素 と 考 え られ る ハ ナ サ キ ガニ ） ９ 通り ， ＳＨ－基修飾試薬により影響されなかったので ｔｒｙｐｓ ， ． ２ ） Ｓｅｒ－酵 素 ケ ガニ に つ い て も 二， 三の ＳＨ－基 修 飾試 薬 に よ っ て 影 響 さ れ な い こ と が 認 め られ たｉ ．. であるか どうかは三種の酵素について日下検討中であり， これらの事柄は後日詳細に報告する． またアミノ酸組成， 両末端残基等についてはタラバ ガニについて定性的な知見を得ているが他の 二種 に つ い て は ま だ 行 な っ て い な い，. 約. 要. １ ） 白糠沖で漁獲されたハナサキガニ， ケガニの中腸腺から， 当研究室で考案した方法で蛋白質. 分解 酵 素 を 分 離 し， そ れ を試 料 と して カ ラ ム ク ロ マ ト グラ フ ィ ー， ア セ チ ル セ ル ロ ー ス 膜 電 気 泳. 動， ディ スク電気泳動等を行なった． ２ ） 対照に当研究室で予め調製 したタラバ ガニ中腸腺の蛋白質分解酵素を用い三者を比較検討し た． そ の 結 果， カ ラ ム ク ロ マ ト グラ フ ィ ー， ア セ チル セ ル ロ ー ス 膜 電 気泳 動 の 挙 動 か ら， タ ラ バ ガ ニ ハ ナ サ キ ガ ニ の グル ー プ と ケ ガニ の グル ー プに 分 け られ る よ う に 考 え られ た．. ３ ） この実験に用いた試料は三種とも電気泳動的に均一であっ た．. 試料の採取に協 力下さった白糠漁業協同組合， 並びに釧路水産試験場 阿部 晃 治 技 師 に 深 謝 す る．. また， 本論文の御校閲を賜わった本学 （函館分校） 教授 奈良盛博士， 並びにアセチルセルロー ス膜電 気泳動の実験に協力頂いた酒井千鶴子嬢に深謝する，. ・ ・ ・ ・ ′ ・ ノ. ． ｒ ； ． ・ ： ・ ・ 〉 く 、 ● ｝ ＞ ● ● ノ ● ． く ・ ・. ± モ. ・ ・ ： ヂ ｒ ・ ．. ｝ ． ● 、 ・ 」. 献. 文 １ ） ２ ） ３ ） ４ ） ５ ）. ′ 、 ． ． 、 ． ′ く 」 ′. ４年１０月）講演， 日本水産学会（於仙台 昭和４ 松岡芳隆， 小出 醇， 同上シンポジウム講演， 新井健一， 同上， 大城善太郎， 同上， 小出 醇， ０ ９ ８（ １９６ ２ ２（ １ ９５ ２ ） ） 生化学， ３１ 矢後 純， ． ，１３ ，７ ，３. ｄ ｆ Ｃ βｉ 膨 “ ｉ ２８ １２ ５ １９６９ Ｇ Ｐ ｉ ｄ ） ｌ ｌ ｉｎｇ ６ ） Ｒ． Ｚｗｉ ， ， ，ａｎ 日．Ｓｏｎｎｅｏｍ， の“〆． の 鯛， ヴｓｏん ， ７ （ ． ． ａｅ ｅｒｅｒ ９ Ｐ ０（ １ ６ ８ ｄｊ Ｔ ｄ ２ ７ ７ ７ ｉ Ｒ ） Ｇ γ ｔ ｅ ； ｚ の ｅ ｓａ ｎ ｒ ｅ ｓ ７ ａ ｖ ） Ｂ，Ｊ ， ， ， ， ， ， ， ， ど Ｚ １９６５ ｌ ｉ ） ｇｄ 弾けｓ り ８ ｓｈ ａｋｒ ｓｈｎａ ａｎｄ Ｆ， Ｗ， Ｆｉ ） Ｒ， Ｒ， Ｂａ ， ， ， 鰯ｓ ，１１ ，９６１（ ， ノ. （７Ｚ）. ｒ ・ Ｙ ｝. ｛ ＜ ． ー ′ 、 ． ） ； ． ・. ； ． ・ ・.
(8) . ＼ｂー ．２ ，２１ ， ＮＯ. ｌ。ｆ Ｈ０ｋｋａ ｉ ｄｏ Ｕｎｉ ｉ ｆ Ｅｄｕｃａｔ ｉｏ Ｓｅｃ ｔ ｉ Ｊｏｕｒｎａ ｔ ｓ ｖｅｒ ー ー（ ｏｎ ．Ｉ Ａ） ｙｏ. Ｆｅｂｔｕａｒｙ ｌ９７１. ｉ ｌ ｉ ｔ １９６２ １９６３ ９ ｔ ６ ） ｔ ′ ） ） Ｔ，Ｓａ ａ ａｎｄ Ｙ， ＆ 奮起／ ｏ ｓｈｉｈａｒａ ， 超ゑ ， Ｓｏｃ ＆′ ， ， ， β”” ，２８ ，１０１５（ ，９４２（ ， Ｙ．Ｍａ ，２９ ， Ｙ，ｌ. ９２（昭４０ ） １０ ） 伊藤格三， 北海道科学研究成果報告， 第７集， １ ． ９６ １ ７ ） １ １ ） 永井 格， 蛋白・核酸・酵素， 別冊 ＩＸ，３（ ， １２ ） 伊藤格三， 未発表．. （７２）.
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