ミリプラチン 毒性試験の概要文 Page 1 ミリプラチン製造販売承認申請 CTD 第 2 部 2.6 非臨床試験の概要文及び概要表 毒性試験の概要文 大日本住友製薬株式会社
67
0
0
全文
(2) ミリプラチン. 2.6.6 毒性試験の概要文. Page 2. 目次 2.6.6 毒性試験の概要文 2.6.6.1 まとめ..........................................................................................................................6. 2.6.6.2 単回投与毒性試験....................................................................................................14. 2.6.6.3 反復投与毒性試験....................................................................................................20. 2.6.6.4 遺伝毒性試験............................................................................................................29. 2.6.6.5 がん原性試験............................................................................................................30. 2.6.6.6 生殖発生毒性試験....................................................................................................30. 2.6.6.7 局所刺激性試験........................................................................................................34. 2.6.6.8 その他の毒性試験....................................................................................................35. 2.6.6.9 考察及び結論............................................................................................................56. 2.6.6.10 図表..........................................................................................................................66. 2.6.6.11 参考文献 ..................................................................................................................67.
(3) ミリプラチン. 2.6.6 毒性試験の概要文. Page 3. 【本項における用語の説明】 用語. 定義、読み替えなど 化学名： (SP-4-2)-[(1R,2R)-Cyclohexane-1,2-diamine-N,N’]bis(tetradecanoato-O)platinum 化学式（分子量） ： C34H68N2O4Pt（763.99） 構造式： H3C. O. ミリプラチン O O. 懸濁用液. Pt. O. H3C. H2 H N N H2 H. 一般名： ヨード化ケシ油脂肪酸エチルエステル 担体配位子に (1R,2R)-1,2-Diaminocyclohexane を有し、脱離基が遊離した白金 2 価錯体（(1R,2R)-1,2-Diaminocyclohexane 骨格を有する白金系制癌剤の活性分 子種） 構造式： H2 H N. DACH-Pt（II）. Pt2+ N H2. DPC. H. DACH-Pt（II）に塩素イオンが配位したもの。 生体内では、アミノ酸、たん白質又は核酸などの生体分子と非可逆的に結合 する前の DACH-Pt（II）は、高濃度に存在する塩素イオンが配位した DPC と して主に存在すると考えられたことから、薬理試験、薬物動態試験及び毒性 試験には活性体として DPC を用いた。 化学名： Dichloro[(1R,2R)-1,2-cyclohexanediamine-N,N’]platinum 化学式（分子量） ： C6Cl2H14N2Pt（380.17） 構造式： Cl Cl. H2 H N Pt N H2 H.
(4) ミリプラチン. 2.6.6 毒性試験の概要文. Page 4. 【一般的略号】 略号 A/G 比 ALP ALT（GPT） APTT ASA. 省略しない表現 Albumin/Globulin ratio Alkaline phosphatase Alanine aminotransferase Activated partial thromboplastin time Active Systemic Anaphylaxis. AST（GOT）. Aspartate aminotransferase. AUC CK（CPK） CYP Cmax DMSO EA ELISA F1 FCA β-Glb GM-CSF γ-GTP HPLC IL-1β IL-2 IL-3 IL-4 IL-5 IL-6 INF-γ LAP LDH M/E 比 MCH MCHC MCV mRNA NAG O/W PCA PT Pt RANTES. 日本語 アルブミン／グロブリン比 アルカリホスファターゼ アラニン・アミノトランスフェラーゼ 活性化部分トロンボプラスチン時間 能動的全身性アナフィラキシー アスパラギン酸アミノトランスフェラ ーゼ. Area under the plasma (serum) 血漿（血清）中濃度時間曲線下面積 concentration-time curve Creatinekinase クレアチンキナーゼ Cytochrome P450 チトクローム P450 Maximum plasma (serum) 昀高血漿（血清）中濃度 concentration Dimethyl sulfoxide ジメチルスルホキシド Egg albumin 卵白アルブミン Enzyme-linked immunosorbent assay 固相酵素免疫測定法 First filial generation 第 2 世代 Freund’s complete adjuvant 完全フロインドアジュバンド β-Globulin β-グロブリン Granulocyte/Macrophage-Colony 顆粒球・マクロファージ-コロニー刺激 Stimulating Factor 因子 Gamma-glutamyl transpeptidase γ-グルタミルトランスペプチダーゼ High performance liquid 高速液体クロマトグラフィー chromatography Interleukin-1β インターロイキン-1β Interleukin-2 インターロイキン-2 Interleukin-3 インターロイキン-3 Interleukin-4 インターロイキン-4 Interleukin-5 インターロイキン-5 Interleukin-6 インターロイキン-6 Interferon-γ インターフェロン-γ Leucine aminopeptidase ロイシンアミノペプチダーゼ Lactate dehydrogenase 乳酸脱水素酵素 Myeloid/Erythroid ratio 顆粒球系細胞/赤芽球系細胞比 Mean corpuscular hemoglobin 平均赤血球血色素量 Mean corpuscular hemoglobin 平均赤血球血色素濃度 concentration Mean corpuscular volume 平均赤血球容積 Messenger RNA メッセンジャーRNA N-acetyl-β-D-glucosaminidase N アセチル-β-D グルコサミニダーゼ Oil in water 水中油 Passive Cutaneous Anaphylaxis 受身皮膚アナフィラキシー Prothrombin time プロトロンビン時間 Platinum 白金 Regulated upon activation, normal T － cells expressed and secreted.
(5) ミリプラチン. 略号 TGF-β1 TK TNF-α. 2.6.6 毒性試験の概要文. 省略しない表現 Transforming Growth Factor-β1 Toxicokinetics Tumor Necrosis Factor-α. 日本語 形質転換増殖因子-β1 トキシコキネティクス 腫瘍壊死因子-α. Page 5.
(6) ミリプラチン. 2.6.6 毒性試験の概要文. Page 6. 2.6.6.1 まとめ 2.6.6.1.1 毒性試験の概略 ミリプラチンをヨード化ケシ油脂肪酸エチルエステルに分散した懸濁液（ミリプラチン 懸濁液）は、腫瘍近傍血管（固有肝動脈の可能な限り末梢から投与）を目指した肝動脈内 投与が適用されることから、本剤の安全性評価は 1) 腫瘍周辺の正常肝細胞（非腫瘍部肝組 織）に対するミリプラチン懸濁液の影響、2) 投与液が漏洩したときのミリプラチン懸濁液 の肝動脈周辺への影響、3)ミリプラチンの全身への影響について明らかにすることが必要で あると考えた。しかし、肝動脈内投与では十分な全身曝露が期待できないので、肝動脈内 投与の実施に加えて、代替投与経路（静脈内及び皮下投与）を用いて全身に対する影響を 調べた。肝動脈内投与はミリプラチン懸濁液の評価を目的に主としてイヌを用いて実施し た。ミリプラチン懸濁液が投与局所（肝臓）へ長期間滞留する性質を持つことから、同じ 投与局所への長期間高濃度曝露を達成する評価系での安全性評価が適切であると考え、昀 長 12 ヵ月までの評価を行った。ラットにおける肝動脈内投与については、イヌと異なり開 腹を伴い侵襲性が大きいことから、一般毒性評価には必ずしも適当ではないと考え、一部 のメカニズム検討にのみ用いた。また、対象疾患である肝細胞癌では慢性肝炎又は肝硬変 を併発していることが多いことから、肝障害イヌでの検討も実施した。 代替投与経路としてはまず、静脈内投与を選択し、ミリプラチン懸濁液を油相とした O/W エマルション製剤（ミリプラチンエマルション製剤）を用いて、イヌ及びラットで毒性試 験を実施した。しかしながら、ミリプラチンエマルション製剤は溶媒の影響と考えられる 血液循環障害を発現するため、ラットにおける長期毒性評価には、より適切な第二の代替 投与経路を検索した。臨床での投与形態であるミリプラチン懸濁液を用いて、腹腔内投与 と皮下投与間での比較を行い、トキシコキネティクスの結果及び投与部位への影響を考慮 して第二の代替投与経路として皮下投与を選択し、毒性評価を実施した。 各試験における投与量の設定は、以下のとおり考えた。標的組織である肝臓の腫瘍部及 び肝動脈周辺への影響について、評価動物の正常組織への曝露が臨床における腫瘍近傍部 位の正常組織への曝露を上回ることは直接確認できない。しかし、臨床試験においては、 カテーテルを用いて固有肝動脈の可能な限り末梢から投与を行うので、標的とする腫瘍部 位以外の周辺部分（正常組織）が投与液に曝露される可能性が低いのに対し、正常動物を 用いる毒性試験においては、投与部位周辺の正常組織が投与液の全量に広く曝露されるこ とになる。従って、肝動脈内投与での評価において、臨床で想定される昀大投与液量（6 mL/man）に相当する 0.12 mL/kg か、又はそれを上回る 0.2 mL/kg を投与容量として設定す ることが妥当と考えた。また、投与液濃度は懸濁用液に懸濁可能な昀大濃度である 20 mg/mL とした。 臨床移行には、イヌ単回肝動脈内投与試験、全身への影響を検討するために 1 ヵ月間ま でのイヌ・ラット静脈内投与試験（ミリプラチンエマルション製剤） 、遺伝毒性試験並びに モルモット抗原性試験を実施して評価を行った。その後、より長期の毒性評価のためにイ ヌでは反復肝動脈内投与試験、ラットでは第二の代替投与経路（皮下投与）での毒性試験.
(7) ミリプラチン. 2.6.6 毒性試験の概要文. Page 7. を実施し、イヌ肝動脈内投与試験と同様に、TK による曝露量の確認及び安全マージンの算 出を行った。全身への影響を評価する目的で実施した皮下投与試験においては、血清中総 白金濃度を全身曝露の指標として各種動物試験系での昀大用量を適用したところ、6 ヵ月間 反復投与において前期第 II 相臨床試験で検出された昀大曝露量の約 11 倍の曝露が達成され ていることが確認された。また、抗原性試験では試験実施時の推定臨床用量の 2.5 又は 5 倍 に相当する投与量まで投与し、評価した。また、遺伝毒性試験については、それぞれガイ ドラインで示されている昀大用量まで投与（又は適用）し、評価した。 更に、活性体である DPC 投与試験（一般毒性試験及び遺伝毒性試験）を行い、DPC の毒 性の質的把握を行った。ミリプラチンの懸濁用液であるヨード化ケシ油脂肪酸エチルエス テルについては、各種毒性試験の溶媒対照群における評価と共に、抗原性試験及び遺伝毒 性試験を実施して評価した。 以下に各試験成績の概略を示した。 2.6.6.1.2 肝動脈内投与毒性試験（臨床投与経路による毒性試験） ミリプラチン懸濁液を臨床投与経路である肝動脈内に投与したときの毒性評価を目的と して、臨床投与と同様にカテーテル挿入手技が実施可能で、X 線投影も実施できるイヌで実 施した。ミリプラチンをヨード化ケシ油脂肪酸エチルエステルに懸濁して肝動脈内に単回 投与、又は 4 週間に１回の頻度で計 3 回、又は計 6 回反復投与（1 回目投与の 4 週間後に 2 回目投与を行い、この後 13 週間観察する一連の操作を 1 クールとし、これを連続して 3 ク ール繰り返す）した結果、単回投与で主として肝臓の血管内への投与液の塞栓によると考 えられる変化が見られたが、反復投与によっても、毒性の増悪化は見られず、新たな毒性 の発現も認められなかった。 適用患者の多くが肝硬変を併発していることから、肝硬変併発時に本剤の毒性に及ぼす 影響について検討するため、チオアセトアミドにより慢性肝炎や肝硬変に類似した肝障害 を誘発したイヌを用いて、ミリプラチン懸濁液を肝動脈内に単回投与した結果、正常イヌ を用いた試験と同様、主として肝臓の血管内への投与液の塞栓によると考えられる変化が 見られたが、肝障害の増悪化並びに新たな毒性所見の発現は認められなかった。 2.6.6.1.3 その他の投与経路による毒性試験 1) 静脈内投与 肝動脈内投与では、全身性の毒性評価に必要な十分に高い曝露が達成できない。従 って、投与液が漏洩した場合のミリプラチン懸濁液の全身への影響を把握するために、 静脈内投与試験を実施した。ミリプラチンは通常の溶媒には不溶のため、ミリプラチ ンエマルション製剤を用い、ラット及びイヌを用いて 1 ヵ月間までの静脈内投与試験 を実施した。 単回静脈内投与試験においては、ラット及びイヌ共ミリプラチンエマルション製剤 の血管への塞栓とそれに続発した血液循環障害に基づく変化が見られたが、これらは.
(8) ミリプラチン. 2.6.6 毒性試験の概要文. Page 8. エマルション製剤ビークル（ミリプラチンエマルション製剤と同一組成を持つ、ミリ プラチンを含まない製剤）でも同様に見られた。ミリプラチンによる影響はラット及 びイヌの骨髄の変化、並びにイヌの脾臓の変化及び肝臓の変化と考えられた。 1 ヵ月間の反復静脈内投与試験において、ラットではエマルション製剤ビークルに よる血管への塞栓に関連した血液循環障害及び唾液腺への影響が見られ、ミリプラチ ンにより血液循環障害の程度は一部増強された。また、ミリプラチンが影響している と考えられる所見として、造血器系への影響、肝酵素の上昇、腎機能パラメータの変 動（尿蛋白・潜血陽性、尿素窒素及びクレアチニン増加など） 、肝臓の障害性変化、 肺の泡沫細胞及び動脈壁肥厚、心臓への影響、腎臓の障害性変化などが認められた。 イヌでもラットとほぼ同様の所見に加えて、血小板数の減少や骨髄の M/E 比の高値 などがミリプラチンにより認められたが、これらの変化は 1 ヵ月間の休薬により回復 又は回復傾向が見られた。 2) 皮下投与 前述のミリプラチンエマルション製剤の静脈内投与では溶媒の物性の影響と考え られる血液循環障害が発現することから、臨床での投与形態であるミリプラチン懸濁 液を用いて、ラットにおける長期毒性評価にも適する第二の代替投与経路として皮下 投与を選択し、ラット皮下投与による単回及び反復投与試験を実施した。 単回皮下投与試験の結果、投与部位である頸背部皮下組織にミリプラチンに対する 異物反応と考えられる変化が認められたのみで、全身性の毒性は極めて弱く、概略の 致死量は 50 mg/kg を上回った。 1 ヵ月間の反復投与試験は、ミリプラチン懸濁液を 2 週間に 1 回の頻度で計 2 回、 4 週間にわたり皮下投与することにより実施した。その結果、単回投与試験と同様に 投与部位である頸背部皮下組織に炎症性変化、並びにそれに関連した血液生化学的検 査パラメータの変動が認められた。これらの変化は懸濁用液単独での投与でも認めら れたが、その程度はミリプラチン懸濁液投与群でより強く認められた。従って、ミリ プラチンによる全身性の毒性を示唆する変化は認められず、無毒性量は雌雄共 50 mg/kg と考えられた。 6 ヵ月間の反復投与試験は、ミリプラチン懸濁液を 4 週間に 1 回の頻度で計 7 回、 6 ヵ月（28 週）間にわたり皮下投与することにより実施した。その結果、6.25 mg/kg 群から投与部位（頸背部皮下組織）の炎症性変化が、25 mg/kg 群ではそれに関連し た血漿蛋白の変動、更に 12.5 及び 25 mg/kg 群では投与部位に悪性線維性組織球腫が 認められた。しかしながら、上記変化はいずれも代替投与経路である皮下に投与する ことによって生じた特異的な変化であると考えられた。また、25 mg/kg 群の雌では 血漿総コレステロール増加及び肝臓重量増加が認められたが、1 ヵ月間間歇皮下投与 試験と比較した場合、投与期間を延長することによって全身性の毒性が増強すること はなかった。従って、全身性の毒性に対する無毒性量は雄では 25 mg/kg、雌では 12.5.
(9) ミリプラチン. 2.6.6 毒性試験の概要文. Page 9. mg/kg と考えられた。 2.6.6.1.4 遺伝毒性試験 ミリプラチン懸濁液は復帰突然変異試験で陽性であり、突然変異誘発能があると考えら れた。培養細胞を用いた染色体異常試験（溶媒：1%カルボキシメチルセルロースナトリウ ム水溶液）及びミリプラチンエマルション製剤のマウスを用いた小核試験では陰性であっ た。 2.6.6.1.5 がん原性試験 ミリプラチン懸濁液は、細菌を用いた復帰突然変異試験で陽性を示し、突然変異誘発能 を有すると判断された。活性体である DPC もマウス小核試験では陽性を示した（2.6.6.8.3.4 参照） 。従って、ミリプラチンは遺伝毒性を有することが確認されており、別途がん原性試 験を実施する必要はないと判断した。なお、長期間にわたる全身曝露を評価するために、 代替投与経路で実施したラットにおける 6 ヵ月間間歇皮下投与試験では投与部位（皮下） に悪性線維性組織球腫が発現したが、これはミリプラチン懸濁液が長期間滞留した皮下組 織のみに限局的に発現し、その他の器官・組織には原発性の腫瘍性病変並びに皮下悪性腫 瘍の転移も認められなかったことから、 「異物性発癌」である可能性が高いと考えられた。 2.6.6.1.6 生殖発生毒性試験 肝動脈内投与では、全身性の毒性評価に必要な十分に高い曝露が達成できない。従って、 代替投与経路である皮下投与を用いて、ラットにおける受胎能及び胚・胎児発生に関する 試験、出生前及び出生後の発生並びに母動物の機能に関する試験、ウサギにおける胚・胎 児発生に関する試験を実施した。 ラットを用いた受胎能及び胚・胎児発生に関する試験では、ミリプラチン懸濁液を雌雄 SD 系ラットの交配前、交配期間中、及び雌ラットについては妊娠 17 日までの期間中、2 週 間に 1 回の頻度で皮下投与した。その結果、ミリプラチンは 50 mg/kg までの投与において、 雌雄共に生殖能への影響はなかった。また、次世代に対して催奇形作用及び胚・児致死作 用はなく、胎児の発育にも影響は認められなかった。以上の結果より、生殖に及ぼす影響 及び胚・胎児の発生に関する無毒性量はいずれも 50 mg/kg と考えられた。 ラットを用いた出生前及び出生後の発生並びに母動物の機能に関する試験では、ミリプ ラチン懸濁液を雌 SD 系ラットの胚の着床から児の離乳までの期間に 2 週間に 1 回の頻度で 皮下投与し、妊娠及び授乳期の雌動物並びに受胎産物及び出生児の発生に及ぼす影響の有 無を検討した。その結果、妊娠の維持並びに分娩への影響は認められなかったが、母動物 の機能に及ぼす影響として、25 及び 50 mg/kg 群で乳腺の発達不全及び哺育不良に伴う全児 死亡母動物の増加が認められた。次世代への影響として、25 及び 50 mg/kg 群で母動物の哺 育不良に関連した死産率の高値及び生後 4 日生存率の低値傾向が認められた。しかし、生 後 4 日以降の生存率に影響はなく、生後の発育、形態、機能発達及び生殖能にもミリプラ.
(10) ミリプラチン. 2.6.6 毒性試験の概要文. Page 10. チンの影響はなかった。以上の結果より、母動物の機能及び出生児に対する無毒性量はい ずれも 12.5 mg/kg と考えられた。 ウサギを用いた胚・胎児発生に関する試験では、ミリプラチン懸濁液を、ウサギ胎児の 器官形成期（妊娠 6～18 日）に高い血清中総白金濃度が持続するように雌 NZW 種ウサギの 妊娠 0 日に 1 回皮下投与し、妊娠動物及び胚・胎児の発生に及ぼす影響を検索した。その 結果、ミリプラチンは 12.5 mg/kg までの投与において、胚・児致死作用及び催奇形作用は なく、胎児の発育にも影響は認められなかった。以上の結果より、生殖及び次世代に対す る無毒性量は 12.5 mg/kg と考えられた。 2.6.6.1.7 抗原性試験及び好酸球数増加に関する検討 ミリプラチンエマルション製剤を用いて、モルモットの能動的全身性アナフィラキシー （ASA）試験及び受身皮膚アナフィラキシー（PCA）試験、マウス－ラットの PCA 試験並 びにウサギを用いた ASA 試験及びウサギ－モルモット PCA 試験を実施した結果、ミリプラ チンは抗原性を示さなかった。 前期及び後期第 II 相臨床試験で認められたミリプラチン肝動脈内投与後の好酸球数の増 加機序を解明する目的で実施した検討（GLP 非適用）では、ミリプラチン懸濁液又はヨー ド化ケシ油脂肪酸エチルエステル（懸濁用液）の静脈内投与により、ウサギでは投与 10 日 後、ラットでは投与 7 日後を昀大とする好酸球数の増加が確認できた。また、ウサギでは ミリプラチン懸濁液で抗ミリプラチン抗体（IgG）が認められた。また、ミリプラチン懸濁 液又はヨード化ケシ油脂肪酸エチルエステルを臨床投与経路と同様に肝動脈内投与した検 討では、非担癌及び担癌ラット（Donryu）及び正常ラット（CD（SD））において、投与 7 日後にミリプラチン懸濁液で血液中及び骨髄中の好酸球数の増加が認められ、癌の有無に 関係なく好酸球数増加が確認できた。更に、正常ラットを用いた検討では、ミリプラチン 懸濁液投与 3 日後に好酸球の肝臓への浸潤及び投与 7 日後に IL-5 陽性細胞（T 細胞）の骨 髄中での増加が確認された。一方で、担癌ラットより得た肝臓及び肺組織中 IL-5、IL-3、 GM-CSF、IL-2、IL-4、IL-6、INF-γ、TGF-β1 の mRNA の上昇、正常ラット血清中 IL-2、 RANTES、IL-1β及び TNF-αの有意な蛋白発現は認められず、抗ミリプラチン抗体も認め られなかった。また、ミリプラチンの直接的な好酸球遊走化能を確認する目的で、ヒト好 酸球を用いてミリプラチン懸濁液、ミリプラチン懸濁用液、DPC などを用いた遊走化試験 を行ったが、いずれも遊走化能は認められなかった。 以上の結果から、好酸球数増加機序解明を目的として実施したウサギの静脈内投与によ り抗ミリプラチン抗体（IgG）の上昇が認められたが、ウサギ ASA 反応、ウサギ－モルモ ット PCA 反応では同一投与経路で陰性結果を示した。また、モルモット ASA 反応、PCA 反応及びマウス－ラット PCA 反応でも陰性であったこと、好酸球増加機序解明を目的とし て実施したラットの静脈内投与又は肝動脈内投与でも好酸球数増加は認めたが抗体産生を 認めなかったことから、ミリプラチンがアナフィラキシーのような重篤な抗原性を示す可 能性は低いことが示唆された。.
(11) ミリプラチン. 2.6.6 毒性試験の概要文. Page 11. また、上記検討結果から、前期及び後期第 II 相臨床試験で認められた好酸球数の増加は、 ミリプラチンによる好酸球の肝臓への遊走化と、それに引き続いて起こる骨髄中 IL-5 陽性 細胞（T 細胞）の増加に伴う骨髄中の好酸球数増加に起因する可能性が示唆された。一方、 肝臓への好酸球浸潤は一過性であり、血液検査、血液生化学検査を含む肝毒性の所見は認 められなかったことから、重篤な肝障害を引き起こす可能性は低いことが示唆された。 2.6.6.1.8 併用投与毒性試験 臨床でミリプラチンと併用される可能性の高い薬剤との相互作用の有無について検討す るために、ラットにミリプラチン懸濁液を単回皮下投与し、ミリプラチンを全身曝露させ た条件下で、解熱鎮痛剤（フルルビプロフェン） 、制吐剤（塩酸グラニセトロン）、抗ヒス タミン剤（塩酸ジフェンヒドラミン） 、ステロイド剤（コハク酸プレドニゾロンナトリウム）、 抗生物質（塩酸セフォチアム） 、肝臓疾患用剤（強力ネオミノファーゲンシー）を昀大臨床 用量で 2 週間反復投与した。その結果、いずれの薬剤についてもミリプラチンとの併用に よる明確な相互作用は認められなかった。 2.6.6.1.9 活性体 DPC の毒性試験 1) DPC の皮下投与試験 活性体である DPC は、ミリプラチンが体内で代謝されて生じると推定されている ため、本来、全身曝露での安全性を評価するため、静脈内投与による毒性の検討が妥 当であるが、DPC の生理食塩液に対する溶解度が低く十分な投与量が確保できない ことから、静脈内投与での毒性試験は困難と考えられた。そこで、メチルセルロース を用いて DPC を水性懸濁液とし、代替投与経路である皮下投与により毒性試験を実 施した。 その結果、ラットの単回投与毒性試験では、 概略の致死量は雄で 5～10 mg/kg、 雌で 10～20 mg/kg であり、雌雄の 5 mg/kg 以上の群で一過性又は観察期間を通じた 体重減少、雄の 10 mg/kg 以上、雌の 20 mg/kg 群で主として衰弱によると考えられる 全身性の諸症状の発現が認められた。また、雌雄の 5 mg/kg 以上の群で投与部位に障 害性変化が認められ、脾臓、胸腺、精嚢、胃及び皮膚に主として DPC の細胞増殖抑 制作用に起因すると考えられる変化が認められた。イヌの単回投与毒性試験では、概 略の致死量は雌雄共に 5 mg/kg を上回るものと考えられ、脾臓、胸腺、胃、大腸及び 骨髄に DPC の細胞増殖抑制作用に起因すると考えられる変化、投与部位に障害性変 化などラットとほぼ同様な変化が認められた。全身曝露レベルと毒性発現を比較した ところ、DPC に対する感受性はイヌより、ラットの方が高いものと考えられたこと から、反復投与毒性はラットを用いて評価することとした。 4 週間反復皮下投与試験を実施するに当たり、投与量設定を目的として 1 週間反復 皮下投与した結果、昀低用量である 1 mg/kg 群から強い毒性が認められ、投与回数が 増すに従い血清中総白金濃度も上昇したことから、4 週間反復皮下投与試験は、2 日 に 1 回の間歇投与で実施した。その結果、0.125 mg/kg 以上の群で投与部位（頸背部.
(12) ミリプラチン. 2.6.6 毒性試験の概要文 . Page 12. 皮下組織）への障害性変化又は骨への影響が認められ、0.5 mg/kg 群でリンパ·造血器 系への影響並びに膵島細胞の空胞変性と、それに起因した高血糖が見られ、更に、こ の高血糖の持続に関連したと考えられる眼球への影響などを含む糖尿病様変化が全 身諸器官及び組織に認められたことから、無毒性量は雌雄共に 0.03 mg/kg と考えら れた。 2) DPC ラット肝動脈内投与による糖尿病様変化発現検討試験 先に実施した DPC のラット反復皮下投与試験（4 週間間歇）で糖尿病様変化が発 現したことから、DPC の臨床での曝露形態に昀も近い肝動脈内投与を選択し、DPC のヨード化ケシ油脂肪酸エチルエステル懸濁液をラットに投与可能な昀大量（ 0.8 mg/animal）で投与して、糖尿病様変化発現の有無を検討した。 その結果、ラットの皮下投与で糖尿病様変化が発現した 0.5 mg/kg 群と Cmax 及び AUC0-24hr においてほぼ同等の曝露が確認された。DPC 投与の影響はその投与部位で ある肝臓に認められたが、血糖値の上昇はなく、また、膵臓の病理組織学的検査にお いても、ランゲルハンス島には DPC 投与の影響は認められなかった。 3) DPC の遺伝毒性試験 DPC はマウスを用いた小核試験で陽性を示し、小核誘発能を有すると考えられた。 2.6.6.1.10 不純物毒性試験. イヌにミリプラチン不純物（類縁物質A*、類縁物質 B*）エンリッチ品 2.4 mg/kg をヨード化ケ シ油脂肪酸エチルエステルに懸濁して単回肝動脈内投与し、不純物の毒性を検討した結果、 投与液の肝臓の血管内への塞栓を示す変化、又はそれに対する反応性の変化が溶媒である 懸濁用液投与より強く認められた。このほか、血清電解質及び電解質の一日排泄量の減少 も同様に認められたが、不純物含量が低いミリプラチンと比較して差がなかった。これら のことから、不純物による新たな毒性の発現及び毒性の増強はないものと考えられた。 また、ミリプラチン不純物エンリッチ品について復帰突然変異試験（溶媒：ヨード化ケ シ油脂肪酸エチルエステル）及び染色体異常試験（溶媒：1%カルボキシメチルセルロース ナトリウム水溶液）を実施した結果、復帰突然変異試験で陽性、染色体異常試験で陰性の 結果が得られた。復帰突然変異試験においてミリプラチンとの用量反応性の比較を行った 結果、ミリプラチン不純物エンリッチ品の不純物による突然変異誘発能の増強はなかった。 従って、ミリプラチン不純物エンリッチ品の遺伝毒性試験より、不純物による新たな遺伝 毒性の発現はないと結論した。 2.6.6.1.11 ミリプラチン懸濁用液（ヨード化ケシ油脂肪酸エチルエステル）及び製剤の規. 格に関する毒性試験 項目 C*. が異なる 3 ロット（項目C*：. 、. 及び. ）の懸濁用液と 項目 B* の異 *新薬承認情報提供時に置き換えた。.
(13) ミリプラチン. なる 2 ロット（. 2.6.6 毒性試験の概要文. 項目 B*. ：. 及び. Page 13. ）のミリプラチン凍結乾燥製剤を用い、そ. れぞれの組み合わせで調製した 2.4 mg/kg のミリプラチン懸濁液をイヌに単回肝動脈内投与 し、肝臓への影響について検討した。いずれの組み合わせにおいても、肝臓に認められた 変化は投与液の肝臓の血管内への塞栓を示す変化、又はそれに対する反応性の変化のみで あった。一方、本試験で認められた胆管増生、肉芽組織や肉芽腫性炎といった投与液の肝 臓の血管内への塞栓を示す変化、又はそれに対する反応性変化などの程度については、懸 濁用液の項目 C* の違いによる差はなかったが、ミリプラチンの 項目 B* が. ほどその程. 度は強く、項目 B* の違いによる肝臓に対する影響の差が示唆された。しかしながら、肝臓の 壊死はいずれにおいても認められなかった。 実験的に. 懸濁用液(. した懸濁用液）を溶媒としてミリプラチンをイ. ヌへ肝動脈内投与した場合、肝臓の壊死が認められた動物がいたことから（ 2.3.P（製 剤）.2.2.1.2 参照） 、. した懸濁用液を用いて調製したミリプラチン懸濁液による肝臓の. 壊死の回復性について検討した。昀大投与量である 4 mg/kg のミリプラチン懸濁液をイヌに 単回肝動脈内投与した結果、投与後 2 週において 6 例中 5 例で肝臓に巣状壊死が認められ たが、投与後 13 週には同様の変化は認められず、. した懸濁用液を用いて調製したミ. リプラチン懸濁液の投与により発現する肝臓の壊死については回復性の変化であると考え られた。 以上のように、項目B* の異なるミリプラチン凍結乾燥製剤と実績範囲の項目 C*の懸濁用液 した. とのいずれの組み合わせにおいても肝臓の壊死は認められなかったことから、 懸濁用液を用いなければ肝臓の壊死の発現の可能性は低く、この 項目 B* 範囲 (. ~. ). のミリプラチン凍結乾燥製剤では 項目B* の差による肝臓への影響の差は問題とならないもの と考えられた。更に、. した懸濁用液を用いて調製したミリプラチン懸濁液により発. 現した肝臓の巣状壊死は、回復性の変化であると考えられた。 2.6.6.1.12 ミリプラチン懸濁用液（ヨード化ケシ油脂肪酸エチルエステル）の毒性試験 臨床投与経路で実施したイヌの肝動脈内投与試験において、臨床での昀大投与液量であ る 6 mL/man に相当する 0.12 mL/kg 又はそれを上回る 0.2 mL/kg の懸濁用液を投与した結果、 投与液の血管内への塞栓に起因すると考えられる変化が肝臓に認められた。また、全身性 の影響の評価を目的としたラット及びイヌの静脈内投与試験においては、懸濁用液を油相 とした O/W エマルション製剤ビークルの投与により、主として肝臓、脾臓、肺及び消化管 に投与液による血管への塞栓に関連した血液循環障害による影響が、またラットにおいて のみ、唾液腺（顎下腺及び舌下腺）の変化が認められた。同じく全身性への影響を評価す るために実施したラットにおける懸濁用液の皮下投与試験では、投与部位（頸背部皮下組 織）及び顎下腺の炎症性変化、それに関連したパラメータ変動が認められた。ラット及び イヌのいずれの毒性試験においても無毒性量は得られなかったが、認められた影響は主と して懸濁用液の性状（粘性の油液）に起因する変化であり、投与局所以外では、直接的な 細胞障害性は見られなかったため、全身性の毒性は弱いものと考えられた。なお、これら *新薬承認情報提供時に置き換えた。.
(14) ミリプラチン. 2.6.6 毒性試験の概要文. Page 14. の変化はラットにおける皮下投与試験では回復性は明らかではなかったが、イヌの静脈内 投与試験では回復性が認められている。唾液腺（顎下腺及び舌下腺）の変化については、 ヨードが唾液腺に蓄積されやすく、まれに炎症を起こすとの報告があることから文献 1)、懸濁 用液中のヨードによって惹起されたものと考えられたが、ラットの代替投与経路のみで認 められ、12 ヵ月間間歇反復投与したイヌの肝動脈内投与試験では何ら変化を認めなかった。 ラットの生殖発生毒性試験では F1 児の死産率の高値並びに生存率及び体重の低値が認め られた。ウサギの胚・胎児試験では摂餌抑制に起因した流早産の発生が認められ、胎児に 対する発育抑制作用である胎児体重の低値及び骨化進行度の遅れも認められたが、催奇形 作用及び胚・児致死作用は認められなかった。また、遺伝毒性はなく、抗原性も示さなか った。 2.6.6.2 単回投与毒性試験 2.6.6.2.1 肝動脈内投与 (1) イヌ単回肝動注毒性試験 I【表 2.6.7.5-1 参照】GLP 適用（参考資料） ビーグル犬にミリプラチン懸濁液 0.4、1.2、4 及び 12 mg/kg（投与液濃度：2～20 mg/mL、 投与容量：0.2～0.6 mL/kg）を単回肝動脈内投与し、投与後 14 日間観察した。 投与方法は臨床での投与と同様の手法により、ミリプラチン懸濁液をＸ線透視下で大腿 動脈から固有肝動脈までカテーテルを挿入して投与を実施した。4 及び 12 mg/kg 投与では 投与液が肝動脈枝で塞栓を起こしたため、所定量の投与ができなかった。 肝臓への影響として、0.4 mg/kg 以上の投与で血清中 AST（GOT） 、ALT（GPT）の増加、 1.2 mg/kg 以上の投与で ALP、γ-GTP、ビリルビンの増加、0.4 mg/kg 以上の投与で類洞・毛 細管網の拡張又は結合組織の増生などが認められた。なお、これらの変化は程度が異なる ものの、ヨード化ケシ油脂肪酸エチルエステル（懸濁用液）投与でも見られ、主として投 与液による血管の塞栓及びそれに続発する変化と考えられた。 肝動脈周辺への影響として、投与液が大量に消化管の血管へ流出した場合は、これらの 器官をはじめ全身で出血性変化を、また、胆嚢血管へ流出した場合は胆嚢の障害性変化が 見られた。 その他の影響として、0.4 mg/kg 以上の投与で血清中電解質の減少、1.2 mg/kg 以上の投与 で嘔吐、摂餌量減少、白血球数増加、血小板数減少、尿量増加、尿比重低下、尿中γ-GTP 排泄量増加及び尿潜血陽性、4 mg/kg 投与で自発運動減少、血便、体重減少、BUN 及び尿酸 の増加、尿中 NAG 排泄量増加及び骨髄有核細胞層増加が見られた。 (2) イヌ単回肝動注毒性試験 II【表 2.6.7.5-2 参照】GLP 適用 ビーグル犬にミリプラチン懸濁液 0.4、1.2 及び 4 mg/kg（投与液濃度：2～20 mg/mL、投 与容量：0.2 mL/kg）を単回肝動脈内投与し、投与後 14 日間観察した。 投与方法は臨床での投与と同様の手法により、ミリプラチン懸濁液をＸ線透視下で大腿 動脈から固有肝動脈までカテーテルを挿入して投与を実施した。イヌ単回肝動注毒性試験 I.
(15) ミリプラチン. 2.6.6 毒性試験の概要文. Page 15. では、投与液は投与当日に調製したものの、調製後投与終了までの時間を規定しなかった が、その後、投与液が高濃度の場合、調製後の時間経過と共に粘度が上昇することが判明 したため、臨床で予想される投与の時間内（調製開始後 1 時間以内に投与）で試験を実施 した。投与液は全群共肝臓に分布し、ごく少量が膵臓、胆嚢、脾臓、胃・十二指腸の血管 に分布した。 いずれの群においても死亡は認められなかった。 肝臓への影響として、ミリプラチン投与全群で血清中 AST（GOT） 、ALT（GPT）などの 上昇、類洞・毛細管網の拡張及び小葉間結合組織を主とした線維化などが認められた。懸 濁用液投与でも、ミリプラチンの高用量（4 mg/kg）投与と比較して程度がやや弱いが同様 な変化が見られており、主として投与液による血管の塞栓が原因と考えられた。4 mg/kg（20 mg/mL）投与で AST（GOT） 、ALT（GPT）などの上昇の程度が強く認められたのは、1.2 mg/kg （6 mg/mL）以下の投与群と比較して投与液の濃度が高いため、単位液量当たりに懸濁され たミリプラチン粒子数が多く、投与液の粘性が増すことにより塞栓の影響がより広範囲に 及んだためと考えられたが、これに加えてミリプラチンによる直接的な影響が加味された ことも否定できないと考えられた。 肝動脈周辺への影響として、ALP、γ-GTP の増加が 1.2 mg/kg 以上の投与で認められた。 また、ビリルビン及び脂質の増加、胆嚢の壁び爛、毛細血管拡張、線維化、肉芽腫及び出 血などが 4 mg/kg 投与で認められ、投与液の肝臓又は胆嚢の血管内への塞栓による胆道系の 影響が関連した変化と考えられた。 また、脾臓や十二指腸においても投与液の漏出に伴う毛細血管の拡張など血管内への塞 栓に関連した変化が認められた。 その他の影響として、0.4 mg/kg 以上の投与で腎臓重量増加、1.2 mg/kg 以上の投与で血小 板数減少、4 mg/kg 投与で嘔吐、自発運動減少、摂餌量及び体重減少、赤血球系パラメータ の減少、A/G 比、カリウム及びクロライドの減少、尿中γ-GTP 及び LDH 排泄量の増加な どが見られた。 (3) イヌ単回肝動注毒性試験（長期観察） 【表 2.6.7.5-3 参照】GLP 適用 本剤は肝動脈内投与により、長期間肝臓の組織内に滞留することが考えられるため、ミ リプラチン懸濁液 2.4 mg/kg（投与液濃度：20 mg/mL、投与容量：0.12 mL/kg）を単回肝動 脈内投与後、3 及び 6 ヵ月間の長期観察を行い、その毒性を検討した。 投与は、前述のイヌ単回肝動注毒性試験 II と同様の方法で行った。投与液は肝臓に分布 し、ごく少量が胆嚢の血管に分布した。 死亡は認められなかった。 肝臓への影響として、血清中の ALT（GPT） 、AST（GOT）、ALP、γ-GTP などの上昇が 見られ、変化の強く認められた例では ALT（GPT）の上昇が投与後 21 週にも続いていたが、 ほとんどの変化は投与後 8 週以内に回復する傾向にあった。ALT（GPT）及び ALP の変化 は懸濁用液投与でも見られた。.
(16) ミリプラチン. 2.6.6 毒性試験の概要文. Page 16. 剖検では、投与後 3 ヵ月、6 ヵ月共に肝臓の辺縁不整及び表面粗などが、また病理組織学 的検査では、肝臓に血管腔拡張及び微小肉芽腫、胆管増生、門脈域の結合組織肥厚及び投 与液による血管の塞栓、石灰化巣などが認められた。 その他の影響として、嘔吐、摂餌量及び体重減少、白血球数及び血小板数増加、総蛋白 の増加及び A/G 比の減少、脂質の増加、胆嚢の粘膜増生、塞栓及び石灰巣、腎臓の好塩基 性尿細管及び近位尿細管上皮細胞内硝子滴沈着などが見られた。 血漿中白金濃度は、概ね投与後 2 週に Cmax（雄で約 33 ng/mL、雌で約 34 ng/mL）を示し、 その後徐々に低下したが、投与後 6 ヵ月でも検出（1～5 ng/mL）された。 以上から、本剤を肝動脈内に単回投与した結果、2.4 mg/kg で主として肝臓の血管内への 投与液の塞栓によると考えられる変化が見られたが、全身に対する影響は極めて弱いもの であった。血漿中総白金濃度は投与後 6 ヵ月でも完全に消失しないが、投与後早期に認め られた変化は経時的に減弱し、長期曝露による新たな毒性の発現は認められなかった。 (4) 肝障害イヌ単回肝動注毒性試験【表 2.6.7.5-4 参照】GLP 適用 肝障害を誘発させたビーグル犬にミリプラチン懸濁液 2.4 mg/kg（投与液濃度：20 mg/mL、 投与容量：0.12 mL/kg）を単回肝動脈内投与し、投与後 28 日間観察して、その毒性を検討 した。 イヌへ肝障害を誘発させるため、チオアセトアミドを投与した結果、ヒトの慢性肝炎～ 肝硬変に類似した偽小葉の形成が認められた。この偽小葉の形成が明瞭に認められた時点 で肝障害が成立したものとし、ミリプラチンの安全性評価に用いた。 ミリプラチンの投与は、前述のイヌ単回肝動注毒性試験 II と同様の方法で行った。いず れの動物も投与液は肝臓に分布した。 いずれの群においてもミリプラチン投与に起因した死亡は認められなかった。 肝臓への影響として、血清中の ALT（GPT）及び AST（GOT）の上昇が見られ、病理組 織学的には類洞・血管の拡張及び肉芽腫性炎症が見られたが、これらは正常イヌを用いた これまでの試験とほぼ同様の変化であり、主として肝臓の血管内への投与液の塞栓に起因 したものと考えられた。 また、肝障害作製による変化として、偽小葉形成、褐色色素貪食細胞浸潤及び炎症性細 胞浸潤が認められたが、ミリプラチン投与によりこれらの変化に悪化は認められず、懸濁 用液又は生理食塩液投与群と大差なかった。 その他の影響として、ミリプラチン投与に起因すると考えられる変化は認められなかっ た。 血漿中総白金濃度は、投与後 14 又は 21 日に Cmax を示した後、緩やかに低下した。血漿 中白金濃度の推移は正常動物と比較して明確な差は認められなかった。 以上のとおり、チオアセトアミドにより肝障害を誘発したイヌを用いて、本剤を肝動脈 内に単回投与した結果、これまでの正常イヌを用いた試験と同様、主として肝臓の血管内 への投与液の塞栓によると考えられる変化が見られたが、肝臓及び全身への影響について、.
(17) ミリプラチン. 2.6.6 毒性試験の概要文. Page 17. 肝障害の増悪や新たな毒性所見の発現は認められなかった。なお、血漿中総白金濃度は正 常イヌの場合とほぼ同様であった。 2.6.6.2.2 静脈内投与 肝動脈内投与では、全身性の毒性評価に必要な十分に高い曝露が達成できない。従って、 投与液が漏洩した場合のミリプラチン懸濁液の全身への影響を把握するために、ミリプラ チンエマルション製剤をラット及びイヌに単回静脈内投与し、投与後 14 日間観察した。な お、対照として生理食塩液投与群及びエマルション製剤ビークル投与群を設けた。 (1) ラット単回静注毒性試験【表 2.6.7.5-5 参照】GLP 適用 雌雄の Crj:CD(SD)ラットにおけるミリプラチンエマルション製剤の単回投与毒性を 10、 20、100、200、260、320、400 mg/kg の投与量の静脈内 bolus 投与で検討した。また、エマ ルション製剤ビークル（0.5～20 mL/kg）の影響もあわせて検討した。 260 mg/kg 群で雄 2 例、320 mg/kg 群で雄 5 例、雌 1 例、400 mg/kg 群で雄 5 例、雌 4 例の 死亡が認められたことから、概略の致死量は雄で 260 mg/kg、雌で 320 mg/kg であった。 症状では、20 mg/kg 以上で四肢及び耳介の潮紅、100 mg/kg 以上で自発運動の減少、200 mg/kg 以上で失調性歩行、呼吸緩徐、呼吸不規則及び流涙などが見られた。これらの変化は 投与後 4 日以内に消失した。 体重では、100 mg/kg 以上の群で体重減少又は増加抑制が認められた。 剖検では、100 mg/kg 以上の群で脾臓の大型化及び脾臓重量の高値が、100 及び 200 mg/kg 群で肝臓の大型化及び重量の高値が、100 mg/kg から 260 mg/kg 群で肺の退色が見られた。 病理組織学的検査では、20 mg/kg 以上の群で肝臓の微小肉芽腫、肺の肺胞壁泡沫状細胞 浸潤、100 mg/kg 以上で脾臓の白脾髄辺縁帯低形成及び泡沫状細胞浸潤、200 mg/kg 以上の 群で腎臓・脾臓の毛細血管拡張などが見られた。また、100 mg/kg 以上のミリプラチン投与 で骨髄の散在性細胞壊死が見られた。 なお、エマルション製剤ビークル投与群においても肝臓、脾臓及び肺に同様の影響が認 められており、ミリプラチンエマルション製剤投与群でこれらの器官及び腎臓に認めた変 化については、いずれもビークルによる血管への塞栓とそれに続発した血液循環障害が起 こったことによると考えられた。 以上の結果から、ミリプラチンエマルション製剤をラットに単回静脈内投与した結果、 概略の致死量は雄で 260 mg/kg、雌で 320 mg/kg であり、ビークルの性状に起因する血液循 環障害に基づく変化、又はミリプラチン投与によると考えられる骨髄の変化が認められた。 (2) イヌ単回静注毒性試験【表 2.6.7.5-6 参照】GLP 適用 イヌにおけるミリプラチンエマルション製剤の単回投与毒性を 4 、12、40、120 mg/kg の 静脈内 bolus 投与で検討した。また、エマルション製剤ビークル（2 mL/kg）の影響もあわ せて検討した。.
(18) ミリプラチン. 2.6.6 毒性試験の概要文. Page 18. 症状では、120 mg/kg 投与の 1 例が投与後 2 日目にミリプラチンエマルション製剤による 全身の血管内の塞栓及びそれに続発する変化により死亡した。また、12 mg/kg 以上で、自 発運動の減少、40 mg/kg 以上で嘔吐及び粘液便などの便性状の変化が見られたが、これら の変化は投与後 3 日以内に消失した。嘔吐及び便性状の変化はビークル投与でも同様に見 られた。血液学的検査では 120 mg/kg では血小板数の減少が見られた。また、40 mg/kg 以上 で赤血球数、血色素量、ヘマトクリット値、白血球数及び好中球数の増加、リンパ球数の 減少が認められたが、ビークル投与でも同様な変化が認められた。 血液生化学的検査では、40 mg/kg 以上で AST（GOT）、ALT（GPT）及び ALP の上昇が見 られたが、同様の変化はビークル投与でも見られた。120 mg/kg 投与では LDH、γ-GTP 及 びビリルビンの増加、無機リン及びナトリウムの減少が見られた。骨髄検査では、120 mg/kg 投与でミエロクリットの有核細胞層の低値、骨髄細胞分類では M/E 比の高値が見られた。 病理学的検査では、4 mg/kg 以上で脾臓の大型化及び重量の高値、40 mg/kg 以上で肝臓重 量の高値、120 mg/kg 投与で胆嚢及び腸間膜リンパ節の赤色化などが見られた。また、組織 学的には 4 mg/kg 以上で脾臓白脾髄濾胞増生、12 mg/kg 以上で肝臓に小肉芽腫の増加、40 mg/kg 以上で肝臓の細胞浸潤、120 mg/kg で肝細胞肥大、胸骨骨髄の赤芽球数減少が見られ た。胆嚢の変化及び肝臓の細胞浸潤はビークル投与でも認められた。 以上のように、ミリプラチンエマルション製剤をイヌに単回静脈内投与した結果、ミリ プラチンエマルション製剤の血管内塞栓及びそれに続発する変化、ミリプラチン投与によ ると考えられる骨髄、脾臓及び肝臓に対する変化が認められた。 2.6.6.2.3 皮下投与 肝動脈内投与では、全身性の毒性評価に必要な十分に高い曝露が達成できない。従って、 投与液が漏洩した場合のミリプラチン懸濁液の全身への影響を把握するために、エマルシ ョン製剤を用いて静脈内投与試験を実施したが、溶媒の物性の影響と考えられる血液循環 障害が発現した。そこで、長期毒性評価にも適した第二の代替投与経路を検索するため、 臨床の投与形態であるミリプラチン懸濁液を用いた腹腔内投与と皮下投与の比較を行い、 トキシコキネティクスの結果及び投与部位への影響を考慮して皮下投与を選択し（下述、 2.6.6.2.3 (1) 参照） 、単回投与後、14 日間観察した。なお、対照として生理食塩液投与群及 びヨード化ケシ油脂肪酸エチルエステル（懸濁用液）投与群を設けた。 (1) ラット単回皮下注毒性試験【表 2.6.7.5-7 参照】GLP 適用（参考資料） 本試験に先立ち、臨床投与経路である肝動脈内投与の代替投与経路を選択するために、 予備試験において、雌雄の Crj:CD(SD)ラットにミリプラチン懸濁液を 20、100、400 mg/kg の投与量（投与液濃度：20 mg/mL、投与容量：1、5、20 mL/kg）で、腹腔内投与及び皮下 投与を実施し、全身曝露を比較した。その結果、腹腔内投与に比較し、皮下投与で投与部 位への影響が少なく、血中濃度のばらつきも少なく、かつ、性差がなかったこと、更に皮 下投与でも 100 mg/kg 以上で十分な全身曝露が得られたことから、代替投与経路としては腹.
(19) ミリプラチン. 2.6.6 毒性試験の概要文. Page 19. 腔内投与よりも皮下投与が適切であると考えられた。 代替投与経路としての皮下投与試験では、雌雄の Crj:CD(SD)ラットにミリプラチン懸濁 液を 50、100、200、400 mg/kg の投与量（投与液濃度：20 mg/mL、投与容量：2.5、5、10、 20 mL/kg）で、単回皮下投与し、投与後 14 日間観察した。なお、対照として生理食塩液投 与群（20 mL/kg）及び懸濁用液投与群（20 mL/kg）を設けた。 症状、体重、器官重量並びに病理組織学的検査においては、投与部位の障害性変化を除 き、ミリプラチンに起因した影響は認められなかった。いずれの群においても死亡は認め られず、概略の致死量は 400 mg/kg を上回った。 観察期間終了時の血液学的検査において網赤血球数、好酸球数及び血小板数、血液生化 学的検査ではβ-Glb、A/G 比及び CK（CPK）に影響が認められたほか、剖検時に投与部位 （頸背部皮下組織）に浮腫又は嚢胞が認められ、それに伴い組織学的に組織球浸潤又は肉 芽腫、線維化、血管新生、水腫、リンパ球又は形質細胞浸潤、好酸球浸潤の変化が見られ た。これら変化は懸濁用液投与群にも認められたが、その程度はミリプラチンで強かった。 血清中白金濃度測定において、白金濃度はいずれの投与群共測定期間中を通じて持続的 な推移を示した。 しかしながら、後述のとおり（2.6.6.3.3 (1) 参照） 、本試験条件下では昀大曝露条件での安 全性評価がなされていないことが判明したことから、昀高血清中総白金濃度を示す投与液 濃度を検討し、単回皮下投与毒性試験（2.6.6.2.3 (3) 参照）を追加実施した。 (2) ラット単回皮下注による血清中白金濃度検討試験【表 2.6.7.5-8 参照】GLP 適用 投与液濃度を一定にした投与容量変換法で実施したラット単回皮下注毒性試験（投与 量：50、100、200、400 mg/kg、投与液濃度：20 mg/mL、投与容量：2.5、5、10、20 mL/kg） （2.6.6.2.3 (1) 参照）では、投与量に応じた被験物質曝露量の増加が見られた。一方、投与 容量を一定にした投与液濃度変換法で実施したラット反復皮下注毒性試験（1 ヵ月間間歇） （投与量：50、100、400 mg/kg、投与液濃度：2.5、5、20 mg/mL、投与容量：20 mL/kg） （2.6.6.3.3 (1) 参照）では、投与量の増加につれて被験物質曝露量が減少する傾向が見られ、被験物質 曝露量は投与液濃度に依存するものと考えられた。よって、上記のラット単回皮下投与毒 性試験では、昀大曝露条件での安全性評価がなされていないと考えられ、昀高血清中総白 金濃度を示す投与液濃度を設定し、昀大曝露条件での追加試験の実施が必要と考えられた。 従って、 本試験においては、ミリプラチン懸濁液を Crj:CD(SD)雄ラットに投与液濃度 0.02、 0.1、0.5 及び 2.5 mg/mL、投与容量 20 mL/kg で単回皮下投与し、その後の血清中白金濃度を 経時的に測定した。その結果、血清中の総白金濃度及びメタノール抽出画分白金濃度いず れについても、Cmax は 0.5 mg/mL 群が昀も高かった。しかし、その差は顕著なものではなく、 0.5 mg/mL 以下の群では比較的速やかに白金濃度が低下するのに対して、2.5 mg/mL 群では、 持続的な推移を示し、AUC0-28day は 2.5 mg/mL 群が昀も高かった。また、別途実施したラッ ト反復皮下注毒性試験（1 ヵ月間間歇） （2.6.6.3.3 (1) 参照）では、2.5 mg/mL 以上の濃度の 投与液では、投与液濃度の上昇に伴い、血清中総白金濃度の AUC0-29day は低下した。従って、.
(20) ミリプラチン. 2.6.6 毒性試験の概要文. Page 20. これらの両試験の結果から、皮下投与において昀大曝露を示す投与液濃度は 2.5 mg/mL と考 えられた。 (3) ラット単回皮下注毒性試験（追加検討） 【表 2.6.7.5-9 参照】GLP 適用 皮下投与において、昀大の全身曝露が得られる 2.5 mg/mL 濃度のミリプラチン懸濁液を用 いて、ラットの皮下投与で技術的に投与可能な昀大投与容量（20 mL/kg）を用いて、単回投 与試験を追加実施した。すなわち、投与容量変換法で、雌雄の Crj:CD(SD)ラットにミリプ ラチン懸濁液を 12.5、25、50 mg/kg の投与量で、単回皮下投与し、投与後 14 日間観察した。 なお、対照として生理食塩液投与群（20 mL/kg）及び懸濁用液投与群（20 mL/kg）を設けた。 いずれの群においても死亡は認められなかったことから、概略の致死量は 50 mg/kg を上 回った。 症状及び体重において、ミリプラチンによる影響は認められなかった。 剖検では、投与部位（頸背部皮下組織）に浮腫又は嚢胞が懸濁用液投与群及びミリプラ チン投与群に認められた。 病理組織学的検査では、剖検で見られた投与部位の浮腫又は嚢胞に対応して嚢胞又は空 胞、若しくは線維性被膜を伴う嚢胞が見られ、更に、血管新生、組織球浸潤又は肉芽腫、 炎症性細胞浸潤、若しくは線維化が認められ、これらのうち、線維化、組織球浸潤又は肉 芽腫、若しくは炎症性細胞浸潤は投与量の増加に応じて程度が増強する傾向が認められた。 なお、これらの投与部位の変化は懸濁用液投与でも認められたが、その程度はミリプラチ ン投与で強く認められた。 血清中総白金濃度は、投与後の時間による顕著な変動は認められず、持続的な推移を示 した。なお、Cmax 及び AUC0-28day は、投与量の増加に伴って上昇し、明確な性差はなかった。 以上の結果から、本試験条件下では、投与量に応じた持続的な全身曝露が確認され、投 与部位（頸背部皮下組織）の変化が認められた以外には、全身性の毒性は極めて弱く、概 略の致死量は 50 mg/kg を上回った。 2.6.6.3 反復投与毒性試験 2.6.6.3.1 肝動脈内投与 (1) イヌ反復肝動注毒性試験（3 ヵ月間） 【表 2.6.7.7-1 参照】GLP 適用 本剤は臨床において反復（間歇）投与することが考えられることから、ミリプラチン懸 濁液 2.4 mg/kg を 4 週間に 1 回の頻度で間歇的に計 3 回反復肝動脈内投与し、初回投与後 3 及び 6 ヵ月間の観察期間を設定して、その毒性を検討した。 投与は、前述のイヌ単回肝動注毒性試験 II と同様の方法で行った。投与及び計画殺時期 を下図に示した。.
(21) ミリプラチン. 2.6.6 毒性試験の概要文. Page 21. 0. 4. 8. 13. 26（週）. ↑. ↑. ↑. ↑. ↑. 投与 1. 投与 2. 投与 3. 3 ヵ月計画殺. 6 ヵ月計画殺. 投与液は肝臓に分布し、ごく少量が胆嚢の血管に分布した。また、一部の投与液が胃・ 十二指腸動脈に流出した。 肝臓への影響として、血清中の ALT（GPT）及び ALP の増加が見られ、これらの変化が 強く認められた例ではγ-GTP の増加が見られた。ALT（GPT）及び ALP の増加はヨード化 ケシ油脂肪酸エチルエステル（懸濁用液）投与でも見られたが、程度はミリプラチン投与 に比べて弱かった。 剖検において、初回投与後 3 ヵ月及び 6 ヵ月共に、肝臓の表面粗、辺縁不整、癒着又は 黄色巣などの変化が認められた。 初回投与後 3 ヵ月での病理組織学的検査では、肝臓に血管腔拡張及び微小肉芽腫、胆管 増生、線維化巣、門脈域の塞栓、結合組織肥厚、石灰化巣、又は炎症性細胞浸潤などが、 更に胆嚢粘膜下組織の塞栓などが見られたが、初回投与後 6 ヵ月では、これらの組織学的 所見には減弱が見られ、ミリプラチンの影響は時間と共に軽減していくと考えられた。 その他の影響として、単回投与試験とほぼ同様に、嘔吐、粘血便、血便、摂餌量及び体 重の減少、赤血球系パラメータの減少、白血球数及び血小板数の増加が見られた。また、 体温の上昇が初回投与時に見られたが、その後の投与では発現しなかった。尿検査で蛋白 及び潜血陽性が見られたが、単回投与（長期観察）の試験で見られた腎臓の器質的変化は 見られず、腎臓への影響は弱いと考えられた。 血漿中総白金濃度は、投与回数の増加に伴って上昇し、Cmax は雄で 24～45 ng/mL、雌で 39～54 ng/mL となり、その後は徐々に低下した。 以上のとおり、ミリプラチン懸濁液 2.4 mg/kg を肝動脈内に 4 週間に 1 回の頻度で計 3 回 反復投与した結果、主として肝臓の血管内への投与液の塞栓によると考えられる変化が見 られ、無毒性量は得られなかったが、全身に対する影響は極めて弱いものであった。投与 回数の増加、血漿中総白金濃度の上昇に伴う毒性の増悪化は見られず、新たな毒性の発現 も認められなかった。昀終投与後の血漿中総白金濃度（Cmax）は前期第 II 相臨床試験におけ る昀大曝露量（血漿中総白金濃度：54 ng/mL、2.7.2.2.3.2 参照）とほぼ同等であった。 (2) イヌ反復肝動注毒性試験（12 ヵ月間） 【表 2.6.7.7-2 参照】GLP 適用 本剤は、臨床試験において 2 回目投与を行う場合には 1 回目投与後 4 から 12 週の間に行 っている。従って、本試験では、2 回の投与を 1 クールとし、下図の投与を行った。ミリプ ラチン懸濁液 2.4 mg/kg の 1 回目投与後に 4 週間の観察期間を設け、観察期間の終了時に 2 回目の投与を行い、更に 13 週間の観察期間を設けた。これを 1 クールとし、連続して 3 ク ール繰り返すことで、12 ヵ月の間に計 6 回の反復肝動脈内投与行い、その毒性を検討した。 投与は、前述のイヌ単回肝動注毒性試験 II と同様の方法で行った。投与時期を下図に示 した（投与クールを各々I、II、III と表記）。.
(22) ミリプラチン. 2.6.6 毒性試験の概要文. 4週. 13 週. 4週. 13 週. Page 22. 4週. 13 週 （投与間隔）. ↑ ↑. ↑ ↑. ↑ ↑. ↑. 投与 投与. 投与 投与. 投与 投与. 12 ヵ月. I-1. I-2. II-1. II-2. III-1. III-2. 計画殺. 投与液は、いずれの動物もほぼ全量が肝臓に分布した。 肝臓への影響として、活性化部分トロンボプラスチン時間の軽度な延長、並びに ALT （GPT）及び ALP の増加が認められた。これらの変動のほとんどは、各投与後一過性に認 められたものであったが、活性化部分トロンボプラスチン時間の延長については、1 例のみ で投与期間終了時まで継続していた。また、ALT（GPT）及び ALP の上昇は懸濁用液投与 でも認められたが、程度はミリプラチン投与に比べて弱かった。 剖検では、肝臓で陥凹巣、癒着、表面粗、黄色巣などが認められた。 病理組織学的検査では、肝臓の血管内への投与液の塞栓、胆汁栓、胆管増生、被膜下の 限局性の線維化及び線維化領域の褐色色素貪食細胞などが認められた。これらの肝臓で認 められた変化は、イヌの単回及び反復肝動脈内投与試験（3 ヵ月間）とほぼ同様であり、主 に投与液が肝臓の血管内に塞栓した、又はそれに対する処理過程と考えられるものであり、 投与回数の増加又は投与期間の延長による悪化はなかった。 その他の影響として、赤血球系パラメータ及び血糖の軽度な減少、血清蛋白及び脂質の 変動が認められた。このうち、赤血球系パラメータの変動については懸濁用液投与でも認 められたが、程度はミリプラチン投与に比べて弱かった。また、いずれも各投与後を中心 に一過性に認められたものであった。なお、血糖の減少は 1 例のみに認められた変化であ り、前述のイヌ単回静注毒性試験及び後述のイヌ反復静注毒性試験（1 週間）において、懸 濁用液を含むエマルション製剤ビークル群でも認められていることから、新たな毒性とは 考えなかった。血清蛋白及び脂質の変動は懸濁用液投与でも同様に認められた。 症状、摂餌量、体重、眼科学的検査、体温、心電図、尿検査及び骨髄検査には影響は認 められなかった。 血漿中総白金濃度については、観察期間が 4 週である各投与クールの 1 回目投与（Ⅰ-1、 II-1 及び III-1 回目）間での比較では、Ⅰ-1 回目投与後の個体差が比較的大きいため傾向は 明確ではなかった。一方、観察期間が 13 週である各投与クールの 2 回目投与（Ⅰ-2、II-2 及び III-2 回目） 間での比較では、 血漿中総白金濃度はⅠから II クールにかけて上昇したが、 II 及び III クールでは同程度であり、反復投与による血漿中総白金濃度の上昇は定常状態に 達したものと考えられた。なお、III-2 回目投与後、別試験として血漿中メタノール抽出画 分白金濃度を測定した。血漿中メタノール抽出画分白金濃度は血漿中総白金濃度とほぼ平 行して推移し、Cmax は雄で 6.4 ng/mL、雌で 4.9 ng/mL であった。血漿中メタノール抽出画 分白金濃度の Cmax 及び AUC は、血漿中総白金濃度のそれの 12～15%であった（2.6.4.3.4 (2) 参照） 。 以上のように、ミリプラチン懸濁液 2.4 mg/kg を肝動脈内に 12 ヵ月間で計 6 回反復投与 した結果、主として肝臓の血管内への投与液の塞栓によると考えられる変化が見られ、無.
(23) ミリプラチン. 2.6.6 毒性試験の概要文. Page 23. 毒性量は得られなかったが、全身に対する影響は極めて弱いものであった。血漿中総白金 濃度（Cmax）は、雄で 20～44 ng/mL、雌で 25～45 ng/mL であり、反復投与に伴って上昇し たが、単回投与又は反復（3 ヵ月間）投与と比較して、毒性所見の悪化は見られず、新たな 毒性の発現も認められなかった。本投与量における昀終投与後の血漿中総白金濃度（Cmax： 41～44 ng/mL）は前期第 II 相臨床試験における昀大曝露量（血漿中総白金濃度：54 ng/mL） とほぼ同等であった。 2.6.6.3.2 静脈内投与 肝動脈内投与では、全身性の毒性評価に必要な十分に高い曝露が達成できない。従って、 投与液が漏洩した場合のミリプラチン懸濁液の全身への影響を把握するために、ラット及 びイヌを用いて、ミリプラチンエマルション製剤の 1 週間及び 1 ヵ月間反復静脈内投与試 験を実施した。なお、対照として生理食塩液投与群及びエマルション製剤ビークル投与群 を設けた。 (1) ラット反復静注用量設定試験（1 週間） 【表 2.6.7.6-1 参照】GLP 適用（参考資料） 雌雄の Crj:CD(SD)ラットにおいてミリプラチンエマルション製剤を 10、20、50 mg/kg の 投与量で 7 日間反復静脈内投与し、その毒性を検討した。なお、ミリプラチンエマルショ ン製剤投与群の昀高及び昀低用量群と投与容量が等しいエマルション製剤ビークル群（0.5 及び 2.5 mL/kg）を設け、同時に陰性対照群として生理食塩液投与群（2.5 mL/kg）も設けた。 いずれの群においても死亡は認められなかったが、20 mg/kg 以上の群で四肢及び耳介の 潮紅、20 mg/kg 以上の群で摂餌量低下を伴う体重増加抑制が認められた。 10 mg/kg 以上の群で血液学的パラメータ、血漿蛋白及び脂質系パラメータの変動、並び に肝臓重量の高値、脾臓の腫大、退色及び重量高値が、病理組織学的検査では、肺の散在 性/び漫性肺胞壁肥厚、脾臓の白脾髄辺縁帯低形成、赤脾髄空胞形成及び泡沫状細胞浸潤、 骨髄で巨核球の増加が見られ、更に 20 mg/kg 以上の群では肺の小動脈壁肥厚、腎臓及び肺 の毛細血管拡張、心臓で心筋線維間の空胞形成及び単核細胞浸潤、50 mg/kg 群では肝臓の 類洞拡張及び心筋変性が認められた。 20 mg/kg 以上の群で認められた心臓の変化、50 mg/kg 群で認められた体重増加抑制及び 末梢血液成分に対する影響を除き、これらの変化はビークル投与でも見られたが、変化の 程度はミリプラチンによる増強が認められた。 以上のように、ミリプラチンエマルション製剤による影響として、10 mg/kg 以上の群で 主として被験物質による物理的な血管塞栓と、それに続発した病変と考えられる変化が認 められ、特に 50 mg/kg 群で顕著であった。 (2) ラット反復静注毒性試験（1 ヵ月間） 【表 2.6.7.7-3 参照】GLP 適用 雌雄の Crj:CD(SD)ラットにおいてミリプラチンエマルション製剤を 3、10、30 mg/kg の投 与量で 1 ヵ月間反復静脈内投与し、その毒性を検討した。なお、ミリプラチンエマルショ.
(24) ミリプラチン. 2.6.6 毒性試験の概要文. Page 24. ン製剤投与群と投与容量が等しいエマルション製剤ビークル投与群（0.15、0.5、1.5 mL/kg） をそれぞれ設け、同時に陰性対照群として生理食塩液投与群（1.5 mL/kg）も設けた。 30 mg/kg 群で活動性の低下、呼吸困難などが認められ、投与 3 週目以降に、呼吸不全に よると考えられる死亡又は瀕死例が多発（雄：8/18 例、雌：6/18 例）したため、残りの例 も投与 25～28 日に切迫殺した。 30 mg/kg 群で摂餌・摂水量低下を伴う、体重増加抑制又は減少が認められ、また、眼科 学的検査において眼底の蒼白、尿検査において尿量・尿電解質の低値、尿蛋白及び尿潜血 陽性などが認められた。 血液学的検査において、10 mg/kg 以上の群で分葉核好中球の増加、30 mg/kg 群で単球様 細胞及び好中性後骨髄球様細胞の出現、プロトロンビン時間及び活性化部分トロンボプラ スチン時間の延長が認められた。また、10 mg/kg 以上の群で骨髄への影響、肝酵素の上昇、 30 mg/kg 群で尿素窒素及びクレアチニンの増加が認められた。 器官重量では 30 mg/kg 群で心臓及び副腎重量の増加が認められた。 剖検においては、3 mg/kg 以上の群で脾臓の肥大が、10 mg/kg 以上の群で脾臓の白色斑点 が認められた。そのほか、30 mg/kg 群では全例で肺の収縮不全を認めたほか、胸水貯留や 一般状態の悪化に伴う変化を認めた。 病理組織学的検査において、3 mg/kg 以上の群で肝臓及び脾臓に泡沫細胞又は小肉芽腫、 顎下腺への影響が、10 mg/kg 以上の群で肺、脾臓、心臓、腎臓などの毛細血管の拡張、肺、 大腿骨及び胸骨骨髄に泡沫細胞、並びに投与部位（尾）の静脈周囲炎などが見られた。ま た、30 mg/kg 群では肝臓の類洞拡張及び壊死、大腿骨の骨体部緻密骨の菲薄化、胸部リン パ節の泡沫細胞、心臓の右心室壁心筋肥大、炎症性細胞浸潤及び壊死、肺動脈壁肥厚、腎 臓糸球体・尿細管の障害性変化、脳出血、脾臓の赤血球崩壊像、白脾髄辺縁帯菲薄化、顎 下腺の腺細胞細胞質好塩基性領域減少、舌下腺の導管上皮重層化、膣の炎症性変化及び粘 液円柱上皮の発現増加が認められた。ビークル投与群においても肺毛細血管拡張、脾臓白 脾髄辺縁帯菲薄化などが認められ、これら変化の程度はいずれもミリプラチンエマルショ ン製剤の方が強かった。また、顎下腺の炎症性変化、顎下腺及び舌下腺の導管の扁平上皮 化生はビークル投与群及びミリプラチンエマルション製剤投与群共に同程度に認められた。 以上の結果から、主として 3 mg/kg 以上の群で溶媒に起因すると考えられる変化、及びそ れがミリプラチンにより増強されたと考えられる変化が全身の器官・組織に認められた。 しかし、3 mg/kg 投与では溶媒の影響を除けば、機能的又は器質的にも特に重篤な変化は認 められなかったことから、無毒性量は 3 mg/kg と考えられた。 (3) イヌ反復静注毒性試験（1 週間）【表 2.6.7.6-2 参照】GLP 適用（参考資料） ビーグル犬にミリプラチンエマルション製剤の 2、6、20 mg/kg を 1 週間静脈内 bolus 投与 し、全身に対する影響を検討した。 エマルション製剤ビークル及びミリプラチンエマルション製剤投与により、嘔吐、粘液 便、血便及び消化管などの出血性変化、摂餌量及び体重の減少、白血球数増加、血糖・蛋.
関連したドキュメント
混合液について同様の凝固試験を行った．もし患者血
毒性の強いC1． tetaniは生物状試験でグルコース 分解陰性となるのがつねであるが，一面グルコース分
図2に実験装置の概略を，表1に主な実験条件を示す．実
危険有害性の要約 GHS分類 分類 物質又は混合物の分類 急性毒性 経口 急性毒性 急性毒性-吸入 吸入 粉じん 粉じん/ミスト ミスト 皮膚腐食性
(b) 肯定的な製品試験結果で認証が見込まれる場合、TRNA は試験試 料を標準試料として顧客のために TRNA
(2)
実験の概要（100字程度）
meningioma, meningothelial meningioma, fibrous (fibroblastic) meningioma, transitional (mixed) meningioma, psammomatous meningioma, angiomatous meningioma, microcystic
