創傷箇所への細胞遊走

各阻害実験において，細胞創傷後の細胞遊走を観察した（Fig. 6-38~45）．

Bryostatin負荷では創傷後1 時間，3 時間後に創傷側の細胞縁が収縮している

ことが確認された．細胞の遊走は観察されなかった．

Fig. 6-38 Bryostatin負荷時の隣接細胞創傷による細胞内PKCαトランスロケーシ

ョンと，その後の細胞遊走（A）創傷前（B）細胞創傷によるPKCαのトランス ロケーションは見られない（C）創傷後1 時間（D）創傷後3 時間．点線は創傷 前の細胞の輪郭を表す．×はマイクロピペットによる創傷箇所を示す．スケール バーは40 μm．

100

Suramin負荷では創傷後にPKCαの2次反応が見られ（B：矢印），3 時間後

に創傷側に葉状仮足が伸びていることが観察された（D：矢印）．

Fig. 6-39 Suramin負荷時の隣接細胞創傷による細胞内PKCαトランスロケーショ

ンと，その後の細胞遊走（A）創傷前（B）細胞創傷によるPKCαの2次反応（矢 印部位：差分画像）（C）創傷後1 時間（D）創傷後3 時間．点線は創傷前の細 胞の輪郭を表す．×はマイクロピペットによる創傷箇所を示す．スケールバーは 40 μm．

101

GAP27負荷では創傷後にPKCαの2次反応が見られ（B：矢印），3 時間後に

創傷側に葉状仮足が伸びていることが観察された（D：矢印）．

Fig. 6-40 GAP27負荷時の隣接細胞創傷による細胞内PKCαトランスロケーショ

ンと，その後の細胞遊走（A）創傷前（B）細胞創傷によるPKCαの2次反応（矢 印部位：差分画像）（C）創傷後1 時間（D）創傷後3 時間．点線は創傷前の細 胞の輪郭を表す．×はマイクロピペットによる創傷箇所を示す．スケールバーは 40 μm．

102

Go6976負荷では創傷後にPKCαの1次反応が見られ，1 時間，3 時間後に

創傷側の細胞縁が収縮していることが確認されたが，細胞の遊走が観察されな かった．

Fig. 6-41 Go6976負荷時の隣接細胞創傷による細胞内PKCαトランスロケーショ

ンと，その後の細胞遊走（A）創傷前（B）細胞創傷によるPKCαの1次反応（差 分画像）（C）創傷後1 時間（D）創傷後3 時間．点線は創傷前の細胞の輪郭を 表す．×はマイクロピペットによる創傷箇所を示す．スケールバーは40 μm．

103

Gd³⁺負荷では創傷後3 時間で創傷側の細胞縁が収縮したのが確認された

（Fig. 6-42 D 矢印）．

Fig. 6-42 Gd³⁺負荷時の隣接細胞創傷による細胞内PKCαトランスロケーション

と，その後の細胞遊走（A）創傷前（B）細胞創傷によるPKCαのトランスロケ ーションは見られなかった（C）創傷後1 時間（D）創傷後3 時間．点線は創 傷前の細胞の輪郭を表す．×はマイクロピペットによる創傷箇所を示す．スケ ールバーは40 μm．

104

18α-GA負荷では創傷後にPKCαの1次反応が見られ，1 時間，3 時間後に損 傷側の細胞縁が収縮していることが確認された．細胞の遊走が観察されなかっ た．

Fig. 6-43 18α-GA 負荷時の隣接細胞創傷による細胞内 PKCαトランスロケーシ

ョンと，その後の細胞遊走（A）創傷前，（B）細胞創傷による PKCα の 1 次反 応：差分画像，（C）創傷後1 時間，（D）創傷後3 時間．点線は創傷前の細胞の 輪郭を表す．×はマイクロピペットによる創傷箇所を示す．スケールバーは 40 μm．

105

細胞外液のCa²⁺を除去した時では，創傷後 1 時間で細胞全体が収縮したのが 観察された．遊走は見られなかった．

Fig. 6-44 細胞外液のCa²⁺を除去した時の隣接細胞創傷による細胞内PKCαトラ

ンスロケーションと，その後の細胞遊走（A）創傷前（B）細胞創傷によるPKCα の1次反応（差分画像）（C）創傷後1 時間（D）創傷後3 時間．点線は創傷前 の細胞の輪郭を表す．×はマイクロピペットによる創傷箇所を示す．スケールバ ーは40 μm．

106

Thapsigargin負荷時では創傷後PKCαの2次反応がみられ（B：矢印），3 時間 後に創傷領域側の縁が収縮しているのが確認できたが，細胞の遊走はみられな かった．

Fig. 6-45 Thapsigargin負荷時の隣接細胞創傷による細胞内PKCαトランスロケー

ションと，その後の細胞遊走（A）創傷前（B）細胞創傷によるPKCαの2次反 応（差分画像）（C）創傷後1 時間（D）創傷後3 時間．点線は創傷前の細胞の 輪郭を表す．×はマイクロピペットによる創傷箇所を示す．スケールバーは 40 μm．

107

6.2.7 隣接細胞創傷時の細胞内 PKC α 1 次・ 2 次反応まとめ

本実験で得られたPKCαの1次反応と2次反応の有無を表としてまとめた．

Control では1次・2次反応共に観察された．Suramin，GAP27，Thapsigargin の 条件では2次反応が観察された．Go6976，18α-GA，Gd³⁺，細胞外溶液Ca²⁺を除 去（Ca²⁺ free）の条件では1次反応が観察された．Bryostatinの条件では1次・2 次反応共に起こらなかった（Table. 6-1）．

Table. 6-1 隣接細胞創傷時の細胞内PKCα 1次・2次反応まとめ

＊Bryostatin ：PKCαのDAG結合ドメイン阻害剤 Go6976 ：PKCα阻害剤，RTK阻害剤

Suramin ：GPCR阻害剤（パラクライン作用阻害）

GAP27 ：GAP結合阻害剤 18α-GA ：ヘミチャネル阻害剤

Gd3+ ：Ca^2＋透過性MSチャネル阻害剤 Thapsigargin：小胞体内Ca²⁺阻害剤

Ca²⁺ free ：細胞外溶液Ca²⁺を除去

Initial translocation Secondary translocation

（near）

（near） （far）

Control ○ ○ ○

Bryostatin ― ― ―

Go6976 ○ ○ ―

Suramin ○ ○ ○

GAP27 ○ ○ ○

18α-GA ○ ○ ―

Gd³⁺ ○ ― ―

Ca²⁺ free ○ ― ―

Thapsigargin ○ ― ○