脳 の ア ミ ノ 窒 素
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(2) 4678. 湯. 之. さ らに 各試 料 に つ い て測 定 した ア ンモ ニア 窒 素 量を. ン モ ニア 窒 素 の 定 量. Conway微. 入 れ,. 1mlの. 従 つ た.田. 代氏指示. 塩 酸1mlをUnitの. 内室 に. 飽和 炭 酸 カ リウ ムを あ らか じめ み た. し た 外 室 に,除. 蛋 白 上 清0.5(〜1)mlを. 1時 間 後 内 室 内 容 をN/500・. 混 和 し.. 水 酸 化 バ リウ ムで 滴. 定 す る.盲. 検 は 同 じ くRinger‑三. も ち い,硫. 酸 ア ンモ ニ ウ ム液を 標 準 液 と して計 算 し. 塩 化 醋 酸 混液を. た.. incubationを. S状. ま た2時. (Ⅱ). mediumのpHの. 心 した 上 清 を50℃. 定 量 を も ち い た.カ. ,. る ホ モ ジ ネ ー トで この 傾. に しめ す 通 りpH. 7.4の. 場 合 最 大の増. 第1表. medium pH. 7.4,. pH:と. の 関 係(1時. Krebe. 間 の 増 加量). phosphate‑Ringerに. よ るhomogenate ラ ム は 強 酸 性 ポ リス チ レ ン 樹 脂. 150×0.9cm,流. Collectorで. 出 液 は東洋 濾 紙 製. 採 取,比. 光 電 比 色 計 を も ち い た.以. 色 はColeman. Junior. 下 実 験操 作 の 詳細 につ い. 記 載 す る通 りで あ る. 実. I.無. タノ. で 蒸 発 乾 固 し,. クヱ ン酸 緩 衝 液 に溶 解 した もの の上 清 一. て は 那 須10)の. た この 間 の ア. の 場 合 の 試 料 は お の お の2個. の 脳 を あ わ せ た ホ モ ジ ネ ー トを つ く り, 75%,ヱ. Fraction. pHが7.2〜. 影響. ン 酸 緩 衝 液ELよ. 加 が み られ た.. 50‑X4,. 間 に 至 る に 従 い,. ンモ ニア 量 は徐 々に で はあ るが増 加を 続けている. 向 は 第1表. Dowea. や. 間 に わ たつ て の. 度 に 変 化 す る 例 が 多 か つ た .ま. &. 2.2の. 鮮 脳/h.で,や. 2時 間 以 後3時. 間 よ り3時. 7.0程. Moore. ー ル で 振 と う,遠. 後. 後 は 停 滞 して い る.. 変 化 は 分 散 が 大 で 逆 に 減 少 す る 例 も あ り一 定 しな い,. 0.2Mリ. イオ ン 交 換 カ ラム ク ロマ ト. わ た り,以. と な つ て い る.. ア ミノ酸 お よび 関 聯物 質 の 定 量 Stein8) 9)の. 起 点 と し て ア ミノ窒 素. こ の 増 加 率 は8〜28mg/100g新. Ⅳ.各. グ ラ フ ィー に よ る.こ. pH. 化 は 少 い が,. 1時 間30〜40分)に. 量 拡 散 中 和 法7)に. 薬 を 加 え たN/2500・. 茂. 量 はい ちぢ る し く増加 の傾 向 があ り,約60分(死. 差 引 い た値 を ア ミノ窒素 量 と して 記 載 した Ⅲ.ア. 上. 験. 成. 績. 酸 素 条 件 で の 脳 ホ モ ジ ネ ー トの ア ミ ノ 窒 素. 量 (I)そ 第1図 第1図. の時 間的 変 動 の ご と く,死. 後incubation開. 脳homogenateに よ びNH3‑N(単 pH. 7.4,. 37℃.,嫌. Krebe 気的. 始 ま で は変. お け るAmino‑Nお 位mg/100g湿 重 量) phosphate‑Ringer, (Ⅲ)家. 兎 大脳 で 灰 白 質 と 白質の ホモジネー ト. に つ い て 比 較 し た と こ ろ 第2図. の ご と く,白 質 に ア. ミ ノ 窒 素 量 の 増 加 が 蓄 明 で あ つ た. (Ⅳ)阻. 害 剤 お よ び 賦.活 剤 の 影 響11)12)13). あ る 種 の 蛋 白 分 解 酵 素 の活 性 に 影響 を あ た え る と い わ れ る 数 種 の 物 質 に つ い て 検 討 した. incubationに ア.カ. 1時 間の. よ る ア ミ ノ窒 素 の 増 加 率 は0.01Mシ. リ, 0.01Mシ. 第 一 鉄+0.014Mア. ス テ イ ン, 0.03×10‑3M雌 ス コル ビ ン 酸 の い ず れ に よ る. も 有 意 の 影 響 な く, 0.01Mモ. ノ ヨー ド醋 酸 で 約90. %阻 害 された. Ⅱ.浮 遊 切 片 の ア ミ ノ窒 素 およ びア ンモ ニア量 好気 条 件 での 大脳 切 片 につ いて も同様にア ミノ窒 素量 の 増 加が み られ たが,ホ モ ジネー トの場合に比 して増 加 はや や緩 慢 で2時 間 にお よび, 3時 間以後.
(3) 脳 第2図 pH. 白 質 と灰 白 質 の 比 較(家 7.4,. 第2表. Krebe. incubation前. ア. ミ. 兎 大 脳). phosphate‑Ringerに. (pH 7.4)のhomogenate,. の. ノ. 窒. 第3図 よる. 素. 4679. 切 片 に お け るAmino‑Nお pH. 7.4,. 後 に お け る ア ミ ノ酸 お よ び 関 連 物 質Krebe 37℃.,嫌. 気 的.(単. 位mg/100g湿. 37℃,好. 気 的 にincubation. phosphate‑Ringer 重 量,. よ びNA3‑N. *はmM/〜).
(4) 4680. 湯. は一 定 しな い.ア ンモ ニ ア量 はincubation開. 之 始後. 上. 茂. み られ る.更. に 時 間 を 経 過 す る と き の変 化 は, pH. 2時 間 に わ たつ て 平 均 した増 加 を しめ し, 2時 間 よ. の 変 化 を と も な つ て,ま. り3時 間 ま で は増 加 傾 向 が や や大 とな つ て い る.ま. autolyticな. た0.2%ブ. づ か る こ と が 考 え ら れ る .こ. ドウ糖 を 付加 した場 合,ア. ミノ窒 素 増 加. た 別 の過 程一. も の で も あ ろ う し.細. いわ ゆ る. 菌 作 用 な ど もあ. れ は グ ル タ ミン酸 の 酸. は更 に ゆ るや か で,ア ンモ ニア 量 も2時 間に わ た り. 化 的 脱 ア ミノ 反 応 と,ア. ほ とん ど変 化 が な い.. 嫌 気 条 件 に お け る も の で あ る が,好. ン モ ニ ア 産 生 の 抑 制 され る 気 条件での切片. Ⅲ.個 々の ア ミノ酸 お よ び関 聯 物 質 の 消長. の 場 合 と 比 較 して 後 者 が や や 上 昇 の 緩 慢 で あ る点 は,. 前 記Iの ホ モ ジネー トで1時 間のincubation直. 河 井18)ら. 前 お よび 直 後 の 各 試料 を 比 較 した. N・ アセ チル ア スパ ラギ ン酸 はTallanら. の 記載 に従 つて 加 水 分解. 後 定 量 した もの であ る. X2は. 尿 素 とア スパ ラギ ン. 酸 の 間 に 流 出す る未 同 定物 質15), a, b,は. 第1例 で. 見 出 され た 未 同定 物 質 で,グ ル タ チオ ンに近 接 して 流 出 した もの で あ る.. ア ン モ ニ ア 量 に つ い て み れ ば,第1図. ほ と ん ど 変 化 な く, incubation. 人脳 組 織 に ゲ ラチ ナ ー ゼ,. る種 の 自家 融 解酵 素 の 存 在 を推 論. して い る. Kies, Schwimmerら. は コ ウ シ脳 に お け. る カ テプ シ ンにつ いて 報 告 し,そ の活 性 はpH で最 も大 き くpH. ミノ 窒素. 片 に お い て も同 様 の 傾 向 があ. ミ ノ 窒 素 量 の 変 化 の 少 い2時. 間 目以 後 にむ. し ろ ア ン モ ニ ア の 増 加 傾 向 が 大 で あ る.ア. 脳組 織 に 存 在 す る蛋 白 分解 酵 素 につ いて の報 告 は. ヌ クレアー ゼ,あ. 2時 間 に わ た つ て ア. ン モ ニ ア 量 の 増 加 は 徐 々 で あ る に 反 し,ア. る が,ア. 按. の 場 合 死後. 数 十 分 の 急 速 な 産 生 の み られ る間 は ア ミノ 窒 素 量 は. 量 の 増 加 は 著 しい.切. 考. 少 くな い. Takasaka16)は. の し め す 如 く グ ル タ ミ ン酸 系 の 減 少 が関. 与 す る も の で あ ろ う か.. 3.5. 7.5で は 活 性 が み られ な かつ た と. ン モ ニア. 産 生 の 源 泉 に つ い て は な お 十 分 明 らか に され て いな .いが ,塚 田19)20)ら は グ ル タ ミ ン酸 の 酸 化 的 脱 ア ミノ 反 応 に そ の 主 要 な 源 泉 を も と め, Weil‑Malherbe21) も ア ン モ ニ ア を 遊 離 す る 物 質 と し て グ ル タ ミン酸, グ ル タ ミ ン,ア. デ ニ ル 系 物 質 を あ げ て検 討 して い る. が な お 結 論 を 与 え て い な い.河. 井 も グル タ ミン酸 系. い う. Astrup17)ら は,組 織 の 自 家 融 解 に よ う非 蛋. の 減 少 と比 例 して ア ン モ ニ ア の 増 加 が み られ る と報. 白窒 素 量の 増 加 は脳 にお いて は 著 明 でな い との べ て. 告 し て い る.松. い ろ, Ansell, Richterら. の 前 にの べ た 一 連 の実 験 に. お い て,こ の ア ミノ窒 素 の 増 加 はPH. 7.4で 最 大 で. 田22)は. ア ン モ ニ ア の 発生 は グル タ. ミ ン と ア デ ニ ル 系 物 質 の 急 速 な 減 少 と比 例 して い る と の ベ,主. と して グ ル タ ミ ンの 破 壊 と,グ. ル タ ミン. あ る こ と,灰 白 質 よ り も白 質 に 著 明 であ り, SHグ. よ り グ ル タ ミ ン酸 の 生 成 の 過 程 に 遊 離 す る もの で あ. ル ー プ お よ びSH阻. ろ う と い う.私. 害 剤 に 対 す ろ態 度 の こ とな る. の 実 験 で は グル タ ミン の 減 少 は 左程. こ と,き わ め て不 安 定 で抽 出不 可能 な る ことお よ び. 著 明 な も の で は な か つ た が,や. 遊 離 ア ミノ窒 素 の 増 加 に か かわ らず,ペ プ チ ド結 合. モ ニ ア の 一 部 を な す も の で あ ろ う.ま. 窒 素 量に 減 少の み られ な い点 な どよ り,こ れ が従 来. Malherbeは,. 論ぜ られ て来 たペ プ チ ダー ゼや カテ プ シ ン類 とは こ. プ ロ テ イ ナ ー ゼ に よ つ て ア ン モ ニ ア が 遊 離 され るの. とな つ た 一 種 のintracellular. か も 知 れ な い と の べ て い る が,第1図,第3図. neutral proteinase. Anseliら. は り これ も産 生 ア ン たWeil. の 報 告 に 言 及 して この種 の. の結果. で あ ろ う と推 論 し,そ の 結 果 の概 略 を 報 告 して い る. か ら判 断 し て そ の 活 性 は 死 後 約2時. が,私 の 実 験 で もほ ぼ これ を 裏 書す ろ結 果 を得 た.. い え ば ア ン モ エ ア の 増 加 と何 ら関 係 が な い 様 であ る.. 間 まで に つ い て. 2時 間 目 か ら3時. 間 目 に わ た る ア ンモ ニ ア の む しろ. こで は単 に 死 後. 著 明 な 増 加 は,河. 井 は グル タ ミ ン酸 系 か らは 説 明 し. に お け る遊 離 ア ミノ窒 素 の 増 加な ろ事 実を 種 々の 条. 難 い と い う が,あ. る い は こ のProteolysisの. 件 下 に お い て 吟味 し,各 ア ミノ酸 お よ び関 聯 物 質 が. 離 し た ア ミ ノ 酸 の 由 来 す る も の か も知 れ な い.ブ. いか に 消 長 し,ま た何 等 か の相 互 聯 関 が 見 出 され る. ー 糖 を 付 加 し た 切 片 の 場 合 ,ア. か とい う点 につ い て 考 察 したわ けで,そ の 酵 素 化学. い の は か よ う な 条 件 で はProteolyaisが. 的 本 態 に つ い て は こ こで 断ず る こ とは 出来 な い が, 一作 業 仮説 と して この酵 素 作 用 を 考 え る と き,第1. も の と考 え ら れ る 一 方,ア. も ち ろん,こ の プ ロテ イナ ー ゼ につ いて は 十分 確 認 され つ くした もの で はな い の で,こ. 図 の結 果 はす で に報 告 され たProteolysieの. 活性 を. は るか に 上 廻 るもの で,ま た 非常 に不 安 定 な もの と. 結 果遊 ド. ミ ノ窒 素 の 変 化 の 少 抑 制 され る. ン モ ニ ア 発生 の 少 い の も. グ ル タ ミ ン 酸 の 酸 化 が 抑 制 され る た め と解 せ られ る. 第2表. に つ い て,. incubationの. の は ア ス パ ラ ギ ン 酸,セ. リン,グ. 後 に 増 加 して い る リ シ ン,ア. ラニ ン.
(5) 脳. 等で, γ‑ア ミ ノ酪 酸,イ. ソ ロ イ シ ン,ロ. 増加 の 傾 向 が み ら れ る が,こ. の. ア. イ シ ン等 も. の条 件 で は グル タ ミン. 酸 は 少 く と も 定 量値 と し て は 変 動 が な い.ま. た グル. タ ミンは この 方 法 で は 定 量 的 な 値 で は な い.な 量な が らincubation後. る もの もみ られ,特. にN・. また セ リン,グ. リ シ ン,ア. 値 と比 べ て み る と,す. 逆 に 減 少 して い. ア セ チ ル ーア パ ラ ギ ン 酸. (加 水 分 解 後 発 色 し た もの)の. 減 少 が 注 目 に 値 す る.. ラニ ンの 量を 断 頭直 後 の. で にincubation前. ノ 窒. 素. 4681. 約1時 間に わ た り著明 な ア ミノ窒 素 量の 増 加傾 向が み られ,そ の 後停 滞 し, 2時 間 以 後 は一 定 しな い . 家 兎 に お い て この 増 加 は 白質 に 著明 であ つ た.. お少. に お い て 増 加 して い る 不 明. の ニ ン ヒ ド リン 陽 性 物 質 が あ り,又. ミ. (2)全 脳切 片の 場 合,増 加 は や や緩 慢 で約2時 間 にわ た り,ブ. ドー 糖 付加 に よ り著 し く抑 制 され る.. ア ンモ ニア最 は この 間 徐 々に 増加 す るが,む しろ2 時 間 よ り3時. 間 目 に わ た り 著 しい.ま. た死 後. incubation開 始 まで は ア ンモ ニ アの 増加 に か かわ ら ず,ア. すなわ ち. ミノ窒 素 量 は 変化 が 少 い.. (3). 1時 間 のincubationに. よ り増 加 の み られ る. 死後 約30分 の 間 に す で に 増 加 し て い る 様 で あ る,一. の は,セ リン,グ. 般に これ ら諸 物 質 の 増 減 に はProteolysisの. 酸, γ‑アミ ノ酸等 で,グ ル タ ミン酸 は嫌 気 条 件 で変. ず,種. みな ら. リシ ン,ア ラニ ン,ア スパ ラギ ン. 化 な く,グ ル タ チオ ン, N‑ア セ チ ル ア スパ ラギ ン. 々 複雑 な 機 転 の 介 在 が 考 え られ る.. 酸 が 減 少 して い る. 結. 論. (4)死 後短 時 間 にみ られ る この ア ミノ酸 量の変 化. 主 と して ダ イ コ ク ネ ズ ミを も ち い,全 ネー トお よ び 切 片 をincubateし,こ 窒素 量,ア. 脳のホモジ. の 間 の ア ミノ. ンモ エ ア 量 の 消 長 を 観 察 し,ま. 交換 カ ラ ム を も ち い てincubation前. ンモ ニア の 定 量. に よ り,ア ミ ノ 窒 素 はMoore. &. 稿 を 終 るに の ぞ み,御 指 導,御 校 閲 をい た だい た. Stein. 奥 村 教授,直 接 の御 指 導 を受 けた 大 月講 師 お よび 教. の方 法 に よ つ た. (1)嫌. られ,ま た この 間 各 ア ミノ酸 パ ター ン もか な り不 安 定 な消 長 を しめす.. 後 の ア ミ ノ酸. お よび 関 聯 物 質 を 分 別 定 量 し た.ア はConway法. た イオ ン. は,あ る種 の プ ロテ イ ナー ゼ の関 与 す る もの と考 え. 気 条 件 で の ホ モ ジ ネ ー トで はincubation. 室 員 各 位 の御助 力 に深 く感 謝 申 し上 げ ます.. 文 1). 湯 之 上 茂:岡. 山 医 学 会 雑 誌,. 2). Abderhalden,. E. , Cesar,. 16 3). (1940). Kies., 145. 13. B.,. (1945). 7). Conway, Moore, 211. S.,. (1954). J.Biol.. J.. D.. Biol.. Chem.,. Biochim.. 13). 赤 堀 四 郎 編. 14). Tallan,. H.. Chem.,. 219. 15). for. the. techniques. study. of. tissue. and meta. , W.. 16). J.. 那 須 弘 之:生. 11). Krimeky. , L,. Bergmann,. (1948). M.. 231.. Stein,. T.:. 倉 書 店.. W.. H... J.. Biol.. 257.. 月 三 郎,那. Tabasaka,. Biol.. Chem.,. 17). Astrup,. T.,. 須 弘 之,青 47巻,. Bioch.. 達 也,本. 8.. Zeitsch.,. 河 井 清,岡 塚 田 裕 三:神. 20). Takagaki,. 21). Weil‑Malherbe,. H.. J.. Biol.. Chem.. S., (1954). Stein,. W.. H.. J.,. 927. 22). 205. F.. J.. Biol.. Chem.. 61. Carlstrom,. Scand.,. 19). Racker,. lioore,. 学 と 生 物 学,. 18). , 30,. 138. (1956). 奥 村 二 吉,大. 量 拡 散 分 析 法 及 び 誤 差 論.. 211. 化 学. G. W.,. 酵 素 研 究 法(I)〜(Ⅲ),朝 H.,. W.. Moore,. Chem.. 10). Chem.. Physiol.. Stein,. H.,. Biol.. Irving,. 184. (1827). 390. H.:. 893. H.. J. S.,. 郷 亮:医. 191 .. Stein. 903.. Fruton.. Biphys.. 92. Manometric. E. G.:微. (1954). (1999). 12). 907.. S.,. Tallan,. 89, W.:. methods. 8). 9). W.. boliam.. 211. S.;. Richter,. (1954). related. Noore,. 179. 685.. G.. 5)Ilmbreit,. 6). 2673. J. Schwimmer,. (1942). Acta. 70巻,. Fermentforschung,. 255.. M. W.,. 4)Ansell,. G,:. 献. 24. 山 医 学 会 雑 誌,. (1955). J.. Bioch.,. H.,. Green,. 210.. 化 学,. 29,. 494.. Stage,. A... Acta. 202. 69巻,. 経 研 究 の 進 歩, G.:. 松 田 誠:生. G., (1951). 2477.. 2巻, 42 R.. 1号, (1955) H.. 126. 131. Bioch..
(6) 4682. 湯. Free Part. 2:. 之. 上. Amino-Nitrogen. Postmortem. 茂. of the. Changes in the. Brain. of the. Rat. Tissue.. Free. Amino. Acids. Brain. By Shigeru Department. Quantative acids. the. or. Conway's. Contents before for. of. and this. In. further. increase. individual were. 2). amino-nitrogen,. brain. were. were. the. ammonia. tissue. brains by. incubated. modified. and. individual. amino. investigated. at. ninhydrin. 37•Ž,. pH. 7.4.. colorimetric. method,. and. am. analysis.. amino. acids. also. determined.. In. anaerobically. ceased during. in. more. suspensions. increase. rapid. and. the. related. Ion. compounds. exchange. the. the. white. cases. prepared. the. at. O•Ž.,. in. slices,. a. hour. of. the. brain. chromatography. The the. suspensions was. ammonia. in. showed. the. the. employed. amino-nitrogen. incubation,. a. relatively. the. period. was. recognized. was. slow when while. no. found. to. be. brain.. amino-nitrogen of. was showing. was. rabbit. addition. During. formation. of. the. amino-nitrogen. of. increase. incubation. amino-nitrogen.. of. of. matter. by. increase. start. liberation. grey. the. rapid. after. disturbed. during of. rapid. than. remarkably. contents increase. one. hour.. brain. being. ammonia with. the. about. second. matter. of. incubated,. within the. protracted,. The. almost. fresh. estimated. incubation. the. this. lleling. the. of rat. Medical School.. purpose.. 1). and. contents fresh. micro-diffusion. the. after. found;. more. of. was. the. the of. slices. Amino-nitrogen by. in. incubation. Suspensions. monia. of Neuro.Psychiatry Okayama University (Director: Prof. Nikichi Okumura). changes. during. Yunoue. a. little. slower. glucose. increase the. tissue. without. para. samples. were. amino-nitrogen. remained. constant. 3). acid. Several. amino. increased. after. acids. such. incubation. as. serine,. of. one. hour,. glycine,. the. effect. alanine. glutathione. aspartic and. acid. and ƒÁ-aminobutylic. N-acetylaspartic. acid. rather. decreased. 4) hours &. Richter.. It. appears. after. death. that might. this be. remarkable due. to. increase. in of. amino-nitrogen. "neutral. proteinase". observed as. during reported. a by. few. Ansell.
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