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脳 の 遊 離 ア ミ ノ 酸 に つ い て

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Academic year: 2022

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(1)612.. 脳. の. 遊. 離. ア. ミ. ノ. 酸. に. 822.. 1:612.. つ. 398.. い. 192. て. (Ⅵ) イ オ. ン 交. ク. ロ マ. ト グ ラ フ イ ー に よ る. ト 脳. 遊. 離. ミ ノ 酸. ヒ. 換. ア. の 定. 量. 岡山大学医学部神経精神医学教室(主 任:奥 村 二吉教授) 湯. 之. 上. 茂. 〔 昭和34年1月19日. 受稿〕. カ ラ ム に 加 え た.. 緒. 言. 2). 脳 の窒 素代 謝 の生 化 学 的 研究 は,最 近 の ア ミノ酸. イ オ ン 交 換 ク ロ マ ト グ ラフ イー. Moore. & Stein1)の. 分析 の進 歩 と相 俟つ て活 溌 な ものが み られ,脳 遊 離. チ レ ン樹 脂Dowex. 方 法 に し た が い,強. 酸性 ポ リス. 50‑X4(200〜400mesh),. ア ミノ酸 の代 謝 特異 性 の 種 々相 が 次 第 に明 らか に な. 0.9cmの. つ て きた.わ れ われ の教 室で は,種 々の動 物 脳 につ. 2.2, 0.2N,. いて 遊離 ア ミノ酸 およ び その 関聯 物質 の定 量を行 つ. ク エ ン酸 ナ ト リ ウ ム 液 を 使 用 し た.流. 150×. カ ラ ム を も ち い,展 開 用 緩 衝 液 に は(1) pH (2) pH. 3.1, 0.2N,. (3) pH. 5.1, 2Nの 出 速 度 は1. て い る.も ち ろん この 研究 は,そ の結 果を もつて 直. 時 間4〜8ml,流. ちに 精神 現 象 と の関 聯 を もとめ よ うとす る もので は. Collector. (柳 本 製 作 所)で2ml分. な いが,精 神機 能 に影響 をお よ ぼす 種 々の 薬 物が 提. 1mlをMoore. & Steinの. 供 され関 心 を ひ いて い る今 日,脳 代 謝 の あ らゆ る観. に よ つ て 比 色 し,ロ. 点か らの 基 礎的 な 研究,そ の組 織 特 異性 の検 索 は 更. 準 曲 線 を 基 準 と し,そ. に重要 な課 題 とな りつ つ あ る.本 編 で は新 鮮 ヒ ト脳. ノ酸 量 を 算 出 し た3).な. につ いて イオ ン交 換 クロマ トグ ラフ イーに よ り これ. 型 分 光 光 度 計 を も ち い た.. を定 量 した結 果,既 報 の諸 動 物 の 場 合 とか な り こと. ギ ン酸 は そ の 流 出 部 位 の 残 液 を 塩 酸 加 水 分 解 中 和 し. なつ た パ タ ー ンを得 た ので 報 告 し,比 較 生化 学 上 の. た も の に つ き,同. 考 察 を加 え た.. タ ウ リ ン と ボ ス ホ ヱ タ ノ ラ ミ ン は こ の カ ラ ム条 件 で. 出 液 はPhotoelectric. 1). ニ ン ヒ ド リ ン 改 良 反 応2). イ シ ン溶 液 に つ い て 作 製 し た 標 れ ぞ れ 呈 色 比 を 乗 じて 各 ア ミ お,比 色 はColeman. N・. アセ チル ー ア スパ ラ. チ ル セ ロ ソ ル ブ を 溶 媒 と して. ペ ー パ ー ク ロ マ ト グ ラ フ イ ー を 行 い,そ. 試 料 の調 製. り概 略 値 を 算 出 し た5).ま. 被 検脳 は 下記 の3例 で,当 大 学 陣 内外 科 よ り脳 手 術 に さい して 切 除 した 大脳 皮 質 の 一部 を分 け て い た だ いた もの で あ る.. の量比によ. た グル タ ミンの 回 収率 は. 展 間 溶 媒 の 流 出 速 度 に よ つ て 左 右 さ れ る の で,定. ア ミノ窒 素 の定 量. 試 料1m1を50〜100倍. に う す め,そ. の1m1に. (2) 17才 ♂,脳 腫 瘍,前 頭 葉. 前 記 改 良 ニ ン ヒ ド リ ン 試 薬 を 加 え て 加 温 発 色,ロ. (3) 35才 ♀,真 性 て ん か ん,右 側 頭 葉. シ ン の 標 準 曲 線 に よ り定 量 し た.. 切 除 され た脳(1g前. 後)は た だ ち に ドラ イア イ. ス ・アセ トン中 に浸 し凍 結,秤 量 し, 90%ヱ. タ ノー. ルに よ る ホ モ ジ ネー トと し,全 量35〜40mlと る. 20分 間 遠 心,上 清 を 約50℃ 乾固 し, 0.2N. 液5mlに. pH. す. の 湯 浴上 で 蒸 発. 2.2ク エ ン 酸 ナ トリウ ム緩 衝. 溶 解 し,さ らに 遠 心 した上 清2〜3mlを. 量. 的 な 値 が 得 られ て い な い. 3). (1) 3才 ♀,脳 腫 瘍,左 側 頭 葉. Junior. 様 に 比 色 定 量 し た も の で あ る4).. は 分 離 しな い の で,メ. 実験 材料 及 び 方法. Fraction 画 で 採 取,各. 4). ア ミノ 酸 の 定 性. 第1報3)に 行 つ た.シ pleが. イ. 記 載 し た 通 りStein6)の. 方 法 に 従 つて. ス タ チ オ ニ ン の 定 性 は, authentic. 得 ら れ な か つ た が, Tallan7)ら. る 溶 出 位 置 と 符 合 す る こ と,お 濃 縮 液 に つ い て,. Sam. の報 告 に お け. よ び相 当分 画 の脱 塩. n‑ブ タ ノ ー ル:酢. 酸:水=4..

(2) 1592. 湯. 1・1お. よ び75%含. 水 フ ェ ノ ー ル を 溶 媒 と して ペ ー. パ ー ク ロ マ ト グ ラ フ イ ー を 行 い, 第1図. Dowex. 之. 50‑X4. Berg8)が. 150×0.9cmカ. 同物 質. 上. 茂 につ いて 報 告 したRf値. と ほ ぼ 一 致 す ることを確. め た. 実. ラ ム に よ る ヒ ト脳 の ニ. ン ヒ ドリン陽 性 物 質 溶 出 曲線. 1). 験. 第1図. 成. 績. は ヒ ト脳 遊 離 ア. ミノ 酸 の 溶 出 曲 線 の1例 で あ る. X29) 10)は 他 の 哺 乳 動 物 に も み い だ され た 未 同 定 物 質, ま た リ ジ ン,ヒ. ス チ ジ ン,ア. ル ギ ニ ン等 は微 量で 明瞭な ピ ー クが 得 ら れ な か つ た た め. ,. ア ン モ ニ ア 以 下 は 省 略 した. 2). 3例 の ヒ ト大 脳 皮 質遊. 離 ア ミノ 酸 お よ び そ の 関聯 物 質 を 定 量 し た 結 果 を 第1表 示 す.な. お 比 較 に 便 な ら しめ. る た め,ナ ズ ミ,イ. マ ズ,ダ. イ コ クネ. ヌ の 実 測 値10)11)を. あ わ せ 記 載 した 。. 第1表. (1) 単 位mg/100g湿 (2). 脳 遊 離 ア ミ ノ酸 お よ び そ の 関 連 物 質. 重 量,た. ダ イ コ ク ネ ズ ミ,イ. ヌ,ナ. ゞ し 未 同 定 物 質X1,. X2はmmole/100g湿. マ ズ の 値 は 文 献5)お. よ び8)所. 載 の も の.. に. 重 量 に て 記 載..

(3) 脳 の 遊 離 ア ミ ノ 酸 に つ い て 3). 一 見 して い ち ぢ る し い 所 見 は,か. シス タチ オ ニ ン の 存 在 で あ る.こ さ れ て い る が は る か に 少 い.ま. な り大 量 の. れ は イ ヌに も見 出 た γ‑ア ミ ノ 酪 酸 お. よ び タ ウ リ ンが 他 動 物 に 比 し て 少 量 で あ る.. Horowitz17),. 1593. duVigneaud18),. に よ る 研 究 が あ る.す. Hess19),. な わ ち,メ. チ オ ニ ン〓 シ ス チ. ン の 代 謝 系 列 に お け る 中 間 物 質 で あ り,そ 分 解 と合 成 に は,ピ. 按. の 動 物 組 織 や 体 液 の ア ミ ノ酸 含 量 がTallan12)ら. 可 能 な る点 で,こ. 位 元 素S35で. ラ ベ ル さ れ た メ チ オ ニ ン を ネ ズ ミに あ た え,肝. イ オ ン交 換 樹 脂 ク ロ マ トグ ラ フ ィ ー を 用 い て 種 々. よ つ て 呈 示 さ れ,多. の酵 素 的. リ ドキ シ ン燐 酸 が 関 与 す る と い. わ れ て い る20)21).こ の 代 謝 関 係 は,同 考. Berg8)ら. に. 種 類 の ア ミノ酸 が定 量 的 に分 離 の方 法 は所 要 時 間 と操 作 の煩 雑 さ. い て シ ス タ オ ニ ン,シ. ス テ イ ン 酸,タ. S35の 移 行 が 証 明 さ れ て い る22).ま Richter23)は, し,脳. S35)メ. にお. ウ リンへ の. たGaitonde. &. チ オ ニ ン を 槽 穿 刺 に よ り注 入. 蛋 白 にお い て そ の一 部 が シス チ ン に移 行 す る. に もか か わ ら ず 極 め て 有 用 な ア ミ ノ 酸 分 析 法 と み と. こ と を 見 出 した.し. め られ る に 至 つ た.ヒ. チ オ ニ ンは正 常 哺 乳 動 物組 織 中 には 発見 さ れな か つ. ト脳 の ア ミ ノ酸 パ タ ー ン に つ. いて は,最. 近Tallan6)ら. る ほ か,多. 種 の ア ミ ノ酸 に つ い て 定 量 的 な 結 果 を 示. し た 文 献 は な い.脳. の死 体 脳 に よ る ものが あ. 組 織 の 遊 離 ア ミ ノ 酸 構 成 は,死. た.Tallan6)ら %の. か し最 近 に い た る ま で,シ. ス タ. は ヒ トの 死 体 脳 よ り22.5〜56.6mg. シ ス タ チ オ ニ ン を 分 離 し て い る が,こ. の 実験 で. は 死 後 の 時 間 経 過 中 に お け る酵 素 活 性 の 変 化 に よ り,. 後 か な り速 や か な 変 化 を こ う む る と 考 え ら れ て い る. シ ス タ チ オ ニ ンが 蓄 積 さ れ る 可 能 性 が 否 定 出 来 な い. が13)14),切 除 後 直 ち に 凍 結 し た 私 の 実 験 結 果 で は,. と の べ て い る.こ. ほ ぼinvivoの か ろ う.た. 化 学 的 構 成 に 近 い も の と考 え て よ だ し一 応 考 慮 しな け れ ば な ら ぬ 点 は,. 例 と も何 ら か の 疾 患 脳 で あ る こ と,す 脳 腫 瘍,. 1例 は 真 性 て ん か ん で,い. な わ ち2例. で,死. は. ダ イ コ ク ネ ズ ミで は,シ. く病 態. 後 の 蓄 積 と い う こ と は 一 応 否 定 出 来 る.ま. 量 に お い て み と め 得 な か つ た に 反 し,タ 49mg%と. 多 く,ヒ. あ る 点 は 興 味 深 い.脳. と い う材 料 取 得 の 制 限 上 や む を 得 な か つ た .ま. た年. 機 序 は い ま だ 詳 か で な い が,こ. Roberts15)ら. イ. あ る と 報 告 して い る. イ コ ク ネ ズ ミ,イ. ヌ等. の 脊 椎 動 物 と比 較 す る と き. の 特 異 な 相 異 が み ら れ る .す. な わ ち比 較 的 大. 量 の シ ス タ チ オ ニ ン の 存 在 と,γ‑ア. ミノ酪酸 およ び. タ ウ リ ン の 少 い こ と で あ る.γ‑ア は, Awapara16)ら. な り高 値 を 示 して お り,ま. の 成 績 よ り も一 般 に か. た ヒ トと 他 の 動 物 と の 差. の 成 績 で は ヒ トで10.1mg%と. く低 く な つ て い る.タ 49mg%に. ミノ 酪 酸 に つ い て. が ヒ トお よ び 種 々 の 哺 乳 動 物 脳 に. つ い て 定 量 した も の で は,私. も 少 い が,私. 対 し,ヒ. 類 と は こ と な つ た も の が あ る と 考 え ら れ る. 結. は ヒ トの 値 に か な り 近 い.そ. 低 い が,イ. の 他,グ. 量 のN‑ア. ギ ン酸 の 存 在 に つ い て も,イ 同様 で あ る,総. 著 し. か ん1)の. 腫 瘍2,真. 新 鮮 ヒ ト大 脳 皮 質 に つ い て,そ. 性て ん の遊 離 ア. ミ ノ酸 お よ び 関 聯 物 質 を イ オ ン 交 換 ク ロ マ トグ ラ フ イ ー を 用 い て 定 量 し た. 1). か な り 大 量 の シ ス タ チ オ ニ ン が 存 在 し,γ‑ア. ミ ノ 酪 酸 お よ び タ ウ リ ン は イ ヌ,ダ の 哺 乳 動 物 お よ び 他 の 二,三. イ コ ク ネ ズ ミ等. の 脊 椎 動 物 と比 較 して. い ち ぢ る し く少 い, 2). こ れ ら の 脊 椎 動 物 を 比 較 す れ ば,ヒ. ト脳 の 遊. 離 ア ミ ノ 酸 パ タ ー ン は イ ヌ の そ れ に 最 も近 い.. ヌで. ル タ ミン酸 量. セ チ ル ・ア ス パ ラ. ヌ,ダ. イ コク ネズ ミと. ア ミ ノ 酸 窒 素 量 は ダ イ コ ク ネ ズ ミの. 場 合 と大 差 は な い.シ. 論. ウ リ ン は ダ イ コク ネズ ミ. ト13.3mg%と. は イ ヌ の 値 に 近 く,大. の 点 ヒ トと 他 の 哺 乳. 脳 手 術 に よ り切 除 し た3例(脳. の 哺 乳 動 物 お よ び 二,三 二,三. にお け る含硫 ア ミノ酸 の代 謝. は幼 若 な もので は. タ ウ リ ンが 多 く,ジ カ ル ボ ン酸 群 の 量 が 少 い 傾 向 が. こ こ で 得 ら れ た 成 績 を,ダ. ウ リンは. トの 場 合 と比 較 して 逆 の 関 係 に. ト脳. コ ク ネ ズ ミの 場 合,. た. ス タ チ オ ニ ンを 測 定 可 能 な. 生 理 学 的 に 健 常 で あ る と は い い 切 れ な い が,ヒ. 令 差 に つ い て も 一 応 考 慮 を 要 す る こ とで あ り,ダ. 除 後直 ち に処. 理 した 私 の 実 験 で も ほ ぼ 同 程 度 の 量 に 証 明 さ れ た の. 3. づ れ も肉 眼 的 に. は 健 常 と思 わ れ る部 位 を 用 い て は い る が,全. の 点 に つ い て は,切. ス タチ オ ニ ンの存 在 お よび そ. の含 硫 ア ミノ酸 代 謝 に お け る態 度 につ い ては. 稿 を 終 る に の ぞ み 御 指 導,御. 核 関 を た まわ つ た. 奥村 二 吉教 授 に感 謝 の 意 を 捧 げ る と共 に 実験 に 当 り 終 始 御 援 助 を た ま わ つ た 大 月 三 郎 講 師,亀 感 謝 の 意 を 表 し ま す.. 山彰氏に.

(4) 1594. 湯. 之. 上. 茂. 文 1). Moore,. S.,. 211, 2). 893 S.,. 211,. 4). Tallan,. 6). Stein,. 7). Tallan,. W.. H.: H.. Chem., P.:. 9). 奥 村 二 吉,大. 10). 奥 村 二 吉,大. Acta,. Chem.,. Biol.. (1956). 30,. 264. Biol.. S., 707. Biol.. 8. W.. H.:. Stein,. 45 W.. H.. 145. 也,本. G.. B.,. Biochem. Biophys., 40,. 127 (1952). (1953). 郷 亮:. 医 学. 井 延 浩,西. 109. 20) Blaschko,. 医 学. 21) Binkley,. と 生 物 学,. 岡 博 輔. 医. H.,. Hope,. D. B.: Biochem. J.,. Richter,. Stein,. W.. H... 23) Gaitonde,. J.. Biochim.. Studies. on. Free. of Free by. M., Tarver, H.:. Arch. Biochem.. the. M. K., Richter,. D.: Proc. Roy.. Biophys.. Amino. Acids. Part Estimation. G. M., Jensen, W.. Soc. London, Series B, 145, 83 (1956). (1954) D.. F., Christensen,. Biol. Chem., 194, 109 (1952). Biophys., 56, 115 (1955). S, 927. J.. 22) Tabachnick,. (1958). Moore, 211,. R.,. 63, 7P (1956) 山 達 也:. 月 三 郎,深. Chem.,. Fuerst,. N. H.: J. Biol. Chem., 171, 255. 19) Hess, W. C.. Arch. 205,. (1958). 48,. A. J.,. Metabolism, 509 (1955). J.. (1958). 山 達. Landua,. J. Biol. Chem., 187, 35 (1950). 18) Stekol, J. A.: A Symposium on Amino Acid. (1953). N... H.,. S.: J. Biol. Chem.,. (1947). 201,. (1958). H.. J.,. 17) Horowitz,. Chem.,. 月 三 郎,青. と 生 物 学,. E., Frankel,. Seale, B... J.. (1958). Chem.,. 月 三 郎,青. 奥 村 二 吉,大. (1954). 岡 山 医 学 会 雑 誌 投 稿 中.. 16) Awapara,. Stein,. 257. 230,. 47,. 160. 13, 92. 湯 之 上 茂:. 15) Roberts,. Chem.,. (1958). S.,. Moore. J.. と 生 物 学,. Ansell,. J.. H.,. Berg,. 13). J.. 205. Moore,. 219,. Biol.. Biol.. H.:. 30,. 生 化 学,. 8). Tallan,. Biol.. 187, 55 (1950). H.,. Chem,. 那 須 弘 之. 学. W.. 生 化 学, H.. 5). 12). J.. (1954). 那 須 弘 之. 11). H.:. 14). Stein,. 907. 3). Biol.. W.. (1954). Moore,. 47,. Stein,. 献. Amino. in the. Brain. VII Acids. Ion-Exchange. in the. Human. Brain. Chromatography. By. Shigeru Department. Yunoue. of Neuropsychiatry Okayama University (Director: Prof. Nikichi Okumura). Medical School. By means of the ion-exchange chromatography free amino acids and their related compounds in the fresh brain tissue have been estimated. As for the test material, pieces of the cerebral cortex sectioned at the time of the surgical operation in the patients with cerebral tumor or with epilepsy are used. As the result we have obtained the following notworthy differences when compared with the results previously reported by us concerning several species of mammalians. They are: (1) In the human brain there is a conciderable amount of cystathionine. Namely, 19.4 to 43.2 mg/100g wet weight, and this substance is far smaller or not recognizable in other animals; and (2) the amounts of T-aminobutric acid and taurine are a good deal smaller than animals. Moreover, in general the pattern of the free amino acids in the human cerebral cortex may be said to resemble closely that in dog..

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